一種總生物堿的制備方法

專利名稱：：一種總生物堿的制備方法
技術領域：
：本發明屬于生物堿分離純化
技術領域：
，具體涉及一種總生物堿的制備方法。技術背景生物堿一般是指植物中的含氮的有機化合物(蛋白質、肽類、氨基酸除外)。生物堿是人類研究最早的一類天然產物。生物堿大都具有較強的活性。生物堿是天然產物中最為復雜和最為龐大的一類化合物，現在已經發現的生物堿單體化合物有ioooo個以上，該類化合物廣泛分布于紅豆衫屬、爭>屬、云杉屬、油衫屬、麻黃屬、三尖衫屬以及百合科、石蒜科和百部科、毛茛科、木蘭科、小檗科、防己科、馬兜鈴科、罌粟科、番茄枝科、蕓香科、龍膽科、夾竹桃科、馬錢科、萏草科、茄科、紫草科和菊科植物中。對生物堿的研究仍然是天然產物研究的熱點之一。生物堿在藥物中的應用分為2種形式一是分離得到生物堿單體化合物作為藥物，據不完全統計，在天然產物來源的藥物中有42.8%來源于生物堿；但是單體生物堿的活性雖然較強，但是其毒副作用也較大，這種用藥方法也無法與中醫理論相契合，無法發揮植物提取物中的多種生物M揮協同的作用，因而具有一定的局限性。另外一種是從植物提取分離總生物堿作為藥物，但是在目前的分離提取技術中，尚不能得到較高純度的總生物堿。雖然當前的生物堿的提取和分離技術已經有很多ii^，但現在中藥以及中成藥領域中的對于植物中的總生物堿仍然只能含量達到50%,目前較為成熟和通用的總生物堿準備方法。不能滿足中藥現代化進程中的安全、有效、可控的要求。當前生物堿制備方法主要有1.有機溶劑萃取有機溶劑萃取是利用提取物中各成分在兩種互不相溶的溶刑中分配系數不同達到分離的方法，萃取時組分在兩相溶劑中的分配系數越大分離效率越高，分離效果越好。對于親脂性生物堿，利用非極性和低極性有機溶劑如苯、乙瞇、氯仿等與水進行液液萃取；對于水溶性生物堿，利用極性較大的有機溶劑如乙酸乙酯、丁醇等與水溶液萃取。有時可用多種溶劑配置成兩相互不相溶的溶劑進行萃取。2.色譜法，也稱層析法，是一種物理分離方法，可以用于分離純化和鑒定中藥有效成分。色鐠法包括紙色譜、薄層色譜和柱色譜，其中常用吸附柱色謙純化生物堿成分，一般使用吸附劑為硅膠和氧化鋁。2.1硅膠柱色傳利用硅膠作為吸附劑，約90%以上的分離純化工作均可使用此法。硅膠是中性無色顆粒，性能穩定，分離效率與其粒度、孔徑及表面積等因素有關。皿柱色諱i用范圍廣，可作為極性和非極性生物堿的純化，成本低、操作方便。2.2氧化鋁柱色謙以氧化鋁作為吸附劑的層析分離法，才艮據氧化鋁制備和處理方法差異，分為堿性、中性和酸性3種，其中堿性和中性的氧化鋁適用于分離酸性較大、活化溫度較高的生物堿類成分。2.3離子交換樹脂離子交換樹脂主要通過靜電引力和范德華力選擇吸附，根據本身特性分為多種類型。針對生物堿的性質選用強酸型陽離子交換樹脂，將酸化的生物堿提取液通過樹脂，使生物堿鹽的陽離子交換到樹脂上而與其他成分和雜質分離。經過離子交換后的樹脂用氨水堿化得到游離態生物堿，等樹脂晾干后根據生物堿的親脂或親水性質用相應的溶劑進行提取得到總生物堿。現有的這些總生物堿制備的最常規方法，存在一個問題就是產物得率低，雜質含量高，往往不能通過本方法直接得到可以藥用的總生物堿。有機溶劑萃取是生物堿純化的經典技術，應用廣泛，具有操作簡單、容易放大的優點，但分離效率和純度較低，使用大量有機溶劑，操作安全性不佳。離子交換樹脂法是近來常用的總生物堿的制備方法，但是這種方法不能單獨用于總生物堿的制備效果不佳，而必須與其它方法結合才能應用。相關的總生物堿的制備方法的專利文獻有很多CN02148608.5、CN03159674.6、CN02123967.3、CN200310103945.8、CN03118261.5、CN200310109641.2、CN200410018658.1、CN200310122686.3、CN2004100卯205.X、CN200410013988.1、CN200410065893.4、CN2O0510122258.X、CN200510077440.8、CN200510040909.0、CN200510037754.5、CN200510044345.8、CN200510032062.1、CN200510015970.X、CN200510095455.7、CN20041006147l.X。這些專利都是針對某一種或幾種植物的總生物堿的制備方法，沒有一種通用的總生物堿的制備方法。歸結到一點，目前還沒有一種廣泛適用的通用的總生物堿的制備方法。而且，雖然目前的方法可以使總生物堿的含量高于50%，但是得率低，純度也較難提髙。這都對植物中總生物堿的制備方法提出更高的要求。對于總生物堿這類成藥幾率最大，國內資源最為豐富的藥用資源，需要一種通用而廣泛，開發一種具有標桿意義的總生物堿的制備方法非常重要。
發明內容本發明的目的在于針對目前還沒有一種廣泛適用的通用的總生物堿的制備方法而提供一種提高總生物堿含量，能夠對生物堿的提取具有通用意義的制備方法。具體而言，發明所述的總生物堿的制備方法為將植物提取物依次用弱酸型陽離子交換樹脂、強酸型陽離子交換樹脂和中性氧化鋁純化得到總生物堿。上述優選的制備方法為將植物提取物加至弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A，再用氨水洗脫得組分B,將組分A加至強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化得到總生物堿。上述更優選的制備方法為將植物提取物加至弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A,再用氨水洗脫得組分B,將組分A調pH值為1-3后加至強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化得到總生物堿。上述的氨水的濃度為3-9%。上述的弱酸型陽離子交換樹脂柱選自南開D151、南開101型弱酸型陽離子交換樹脂柱上述的強酸型陽離子交換樹脂柱選自南開001x1、南開001x2、南開001x3、南開001x14.5、D151、D018、D019、D020、YWD12V和核亞東732型強酸型陽離子交換樹脂。上述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的強酸型陽離子交換樹脂柱選自南開OOlxl、南開001x2、南開001x3、南開001x14.5、D151和核亞東732型強酸型陽離子交換樹脂。上述的植物提取物是由益母草、延胡索、百部、顛茄、北豆根、石斛、雷公藤、金果欖、天仙子、一葉萩、黃連、麻黃、防己、黃柏、鉤藤、貝母、浙貝母、喜樹果、吳茱萸、金雞納皮、檳榔、長春花、苦參、山豆根、秦艽、蘿芙木、烏藥、川烏、附子、半邊蓮和白鮮皮之一用溶劑提取得到的。本發明方法針對益母草中總生物堿制備方法的摸索過程擴展得到的。通過實驗我們發現將植物提取物依次用弱酸型陽離子交換樹脂、強酸型陽離子交換樹脂和中性氧化鋁柱純化得到總生物堿的這種總生物堿的制備方法具有對生物堿制備的普遍意義，對其它植物中所含的總生物堿的制備也優于現有技術。以下是針對益母草總生物堿制備方法的摸索過程1.強酸性陽離子交換樹脂的分離效果將益母草提取物上強酸性陽離子交換樹脂，通過薄層檢驗發現強酸性陽離子交換樹脂能將益母草所有的生物堿吸附在樹脂柱上，水蘇堿在吸附后用稀氨水就能解吸附，益母草堿用氨水、氫氧化鈉均不能解吸附。結論強酸性陽離子交換樹脂不能用來富集純化益母草堿這類生物堿，這種死吸附是藥物有效成分的不可逆的損失，這也是當前現有公開技術的最大缺陷。2.弱酸性陽離子交換樹脂的分離效果將益母草提取物上弱酸性陽離子交換樹脂，通過薄層檢驗發現弱酸性陽離子交換樹脂能將益母草堿吸附在樹脂柱上，水蘇堿直接通過樹脂柱，益母草堿能較好的吸附在樹脂柱上，用氨水洗脫就能解吸附。因而使用弱酸性陽離子交換樹脂能解決的益母草堿類生物堿的死吸附問題；但又不能富集水蘇堿這類生物堿。3.中性氧化鋁柱的分離效果將益母草提取用中性氧化鋁柱柱純化。實驗結果通過薄層檢驗和外觀觀察發現中性氧化鋁柱對益母草堿和水蘇堿均沒有吸附，但是可以去除色素和非生物堿的雜質。4.將益母革提取液依次用弱酸型陽離子交換樹脂、強酸型陽離子交換樹脂和中性氧化鋁柱純化得到總生物堿。通過薄層檢驗發現所得益母草總生物堿中含有益母草堿和水蘇堿兩類生物堿，避免了兩類生物堿在制備過程中的損失，總生物堿的含量也提高到80%以上。研究中通過采用水、酸水、有機溶劑提取法和離子交換樹脂法等方法與本發明提供方法對比發現，本發明的技術方案推廣到其它植物的總生物堿的制備時，具有大大提高生物堿含量的作用，優于目前的總生物堿的準備方法。因而本發明是一種具有普遍意義的總生物堿的制備方法。這對目前研究最為活躍，而制備方法尚存在不足的總生物堿的制備具有重要的現實意義。具體實施方式下面用實施例進一步描述本發明，有利于對本發明及其優點、效果更好的了解，但所述實驗例和實施例僅用于說明本發明而不是限制本發明。實施例1-益母萆總生物械的制備取益母草300g,加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至輛骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液加至南開D151弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A，再用4-5%氨水洗脫得組分B。將組分A調pH值為3后加至D151強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到益母草總生物堿。實施例2-益母草總生物堿的制備取益母草300g，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液加至GDX104型大孔樹脂柱上，用水洗脫得組分A，再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調pH值為1后加至D018強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到益母草總生物堿。實施例3-益母草總生物械的制備取益母草300g,加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠奮狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液加至南開D151弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A,再用4-5。/o氨水洗脫得組分B。將組分A調pH值為2.5后加至南開001x1型強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到益母草總生物堿。實施例4-益母草總生物械的制備取益母革300g,加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液加至GDX104型大孔樹脂柱上，用水洗脫得組分A，再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調pH值為3后加至南開001x2型強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到益母草總生物堿。實施例5-益母草總生物械的制備取益母草300g,加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時，濾過，將濾液加至南開D151弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A,再用4-5乂氨水洗脫得組分B。將組分A調pH值為3后加至D151強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到益母草總生物堿。實施例6~白鮮皮總生物堿的制備取白鮮皮300g，加1%石克酸煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，笫三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的水，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收溶劑并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液加至南開101弱酸型陽離手交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A，再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調pH值為1后加至D018強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氣化鋁柱純化后揮去溶劑即得到白鮮皮總生物堿。實施例7-顛茄總生物械的制備取顛茄300g,加95%乙醇煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的2%硫酸，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠奮狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液加至南開101型弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A，再用4-5%氨水洗脫得組分B。將組分A調pH值為2.6后加至D019強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑得到總生物堿備用。實施例8-黃連總生物堿的制備將300g黃連加水浸泡30分鐘后，煎煮2次，每次2小時，合并煎液濾過得澄清液I,將澄清液I加至南開D151弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A,再用4-5%氨水洗脫得組分B。將組分A調pH值為3.0后加至YWD12V強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑得到總生物堿。實施例9-苦參總生物械的制備將300g苦參加水浸泡30分鐘后，加95%甲醇煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的水，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加7jc^釋至500ml,冷藏24小時，濾過，濾液加至南開D151弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A,再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調pH值為1.8后加至YWD12V強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑得到總生物堿。實施例10-黃柏總生物堿的制備取黃柏300g，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液加至南開101弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A，再用4-5%氨水洗脫得組分B。將組分A調pH值為2.5后加至南開001x1型強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到黃柏總生物堿。實施例U—雷^S藤總生物械的制備取雷公藤300g，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收&酵并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時，濾過，將濾液加至南開D15i弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A，再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調pH值為3后加至南開001x2型強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到雷公藤總生物堿。實施例12-延胡索總生物械的制備取延胡索300g，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液加至南開101弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A,再用4-5%氨水洗脫得組分B。將組分A調pH值為1后加至南開001x14.5型強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到延胡索總生物堿。實施例13~~防己總生物堿的制備取防己300g,加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時，濾過，將濾液加至南開D151弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A,再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調pH值為2后加至核亞東732型強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到防己總生物堿。實施例l"吳茱萸總生物堿的制備取吳茱萸300g,加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時，濾過，將濾液加至南開101弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A,再用50%乙醇洗脫得組分B。將組分A調pH值為2后加至核亞東732型強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到吳茱萸總生物堿。對比例1-益母草總生物堿的制備取益母草300g，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時，濾過，將濾液調pH值為l-3后加至D151強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分得到益母草總生物堿。對比例2-益母革總生物堿的制備取益母草300g,加水煎煮三次，第一次2小時，第二次3小時，第三次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時，濾過，將濾液調pH值為1-3后加至D018強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分得到益母草總生物堿。對比例3-益母草總生物械的制備取益母草300g，加水煎煮三次，笫一次2小時，第二次1.5小時，第三次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇升濃縮至稠骨狀，加水彿釋至500ml，冷藏24小時，濾過，將濾液調pH值為1-3后加至南開001x1強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分得到益母草總生物堿。對比例4-益母草總生物堿的制備取益母草300g，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次3小時，第三次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，力n等量的乙醇，攪勾，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液調pH值為1-3后加至南開001x2強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分得到益母草總生物械。對比例5-益母草總生物堿的制備取益母草300g,加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時，濾過，將濾液加至D151強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到益母草總生物堿。對比例6"白鮮皮總生物堿的制備取白鮮皮300g，加1。/U克酸煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的水，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收溶劑并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時，濾過，將濾液加至D018強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得白鮮皮總生物堿。對比例7-顛茄總生物堿的制備取顛茄300g，加95%乙醇煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的2%>琉酸，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液加至D019強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑得到總生物堿備用。對比例8-黃連總生物堿的制備將300g黃連加水浸泡30分鐘后，煎煮2次，每次2小時，合并煎液濾過得濾液，將濾液加至YWD12V強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得到總生物堿。對比例9-苦參總生物堿的制備將300g苦參加水浸泡30分鐘后，加95%曱醇煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的水，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，濾液加至YWD12V強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑得到總生物堿。對比例10-黃柏總生物堿的制備取黃柏300g，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液pH值為2.5后加至南開001x1型強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C，將組分c用中性氧化鋁柱純化后揮去溶刑即得到黃柏總生物堿。對比例11—雷公藤總生物堿的制備取雷公藤300g,加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml，冷藏24小時，濾過，將濾液pH值為3后加至南開001x2型強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分C用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到雷公藤總生物堿。對比例12-延胡索總生物堿的制備取延胡索300g,加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠骨狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液調pH值為1后加至南開001x14.5型強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分C用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到延胡索總生物堿。對比例13_防己總生物堿的制備取防己300g，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml,冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液調pH值為2后加至核亞東732型強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分C用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到防己總生物堿。對比例14~吳茱萸總生物堿的制備取吳茱萸300g,加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次l小時，濾過，合并濾液，濃縮至約250ml，冷卻，加等量的乙醇，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠青狀，加水稀釋至500ml,冷藏24小時，濾過，將濾液調pH值為2后加至核亞東732型強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分C用中性氧化鋁柱純化后揮去溶劑即得到吳茱萸總生物堿。實驗例1-本發明中實施例和對比例的益母草堿的薄層對比1-樣品實施例1-4、對比例1-4。2.實驗方法將實施例1-4、對比例1-4和各取10g,粉碎后，裝入索氏提取器，用甲醇回流1小時后，過濾，待用。將益母草堿、水蘇堿樣品和實施例1-6曱醇溶液各自點在薄層板上，用乙酸乙酯-正丁醇-鹽酸(3:2:1)系統展開，用珙化鉍鉀顯色。3.實驗結果發現市售的對比例1-4無益母草威險出。而實施例1-4中含有益母草堿。4.結論本實驗說明，通過本發明實現的生物械制備方法可以避免益母草堿的損失，優于現有技術和市售的產品。實賒例2-本發明中實施例與對比例的益母革堿含量的液相色謙對比1.樣品實施例1-4、對比例1-4。2.實驗方法將實施例l-4和對比例l-4所得總生物堿，各取10g,粉碎后，裝入索氏提取器，用甲醇回流l小時后，過濾，轉入100ml容量瓶中，用甲醇定容后，待測。益母草堿檢測色鐠糾為液相色i瞽儀島津LC-20AB,檢測器SPD-M20A,色語柱Cis4.6x250mm5,，柱溫30°C，流動相乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液14:86，檢測波長276nm。3.實驗結果，樣品益母草堿含量(在總生物堿中的含量，％)實施例17.24%實施例25.63%實施例33.69%實施例45.89%對比例10.17%對比例20.05%對比例30.13%對比例40.25%4.結論對比例l-4是當前對于益母草總生物堿提取分離的代表方法，通過與本發明的對比實驗說明，本發明實現的生物堿制備方法可以避免益母草堿的損失，大大保存益母草中的重要有效成分益母草堿，從而更加有效得保證藥物得質量，是一種更加新穎和優于現有技術的總生物堿制備方法。實驗例3-總生物堿的與現有技術的對照樣品實施例5-14,對比例5-14。用下述方法測定兩種各2批的總生物堿的含量。對照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的單體生物堿(各植物的代表生物堿)5mg,至于25ml容量瓶中，力口0.1mol/L的鹽酸液使溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得。標準曲線的制備精密量取對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml，分別至于25ml的容量瓶中，均用0.1mol/L的鹽酸液稀釋至10ml,放置1小時，減壓濾過，在特定波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。測定法精密稱取樣品適量，至于100ml容量瓶中，加0.1mol/L鹽酸液稀釋至刻度，搖勻，再精密量取稀釋液7.0ml，置25ml燒杯中，加0.1mol/L鹽酸液稀釋至10ml，照標準曲線的制備項下的方法，自"置冰浴中"起，測定吸收度，從標準曲線中讀出供試品溶液中的含量，計算，即得。含量測定結果見表l。表1總生物堿含量測定比較<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>備具有優于常規技術的純度，顯著提高生物堿制備在安全、可控和有效方面的需求，是一種具有普遍意義的具有創新意義的制備方法。權利要求1.一種總生物堿的制備方法，其特征在于所述的制備方法為將植物提取物依次用弱酸型陽離子交換樹脂、強酸型陽離子交換樹脂和中性氧化鋁純化得到總生物堿。2.根據權利要求1所述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的制備方法為將植物提取物加至弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A,再用氨水洗脫得組分B,將組分A加至強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C，將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化得到總生物堿。3.根據權利要求2所述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的制備方法為將植物提取物加至弱酸型陽離子交換樹脂柱上，用水洗脫得組分A，再用氨水洗脫得組分B,將組分A調pH值為l-3后加至強酸型陽離子交換樹脂柱上洗脫得組分C,將組分B和C合并用中性氧化鋁柱純化得到總生物堿。4.根據權利要求2或3所述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的氨水的濃度為3-9%。5.根據權利要求1-3任一所述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的弱酸型陽離子交換樹脂柱選自南開D151、南開101型弱酸型陽離子交換樹脂柱。6.根據權利要求1-3任一所述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的強酸型陽離子交換樹脂柱選自南開001x1、南開001x2、南開001x3、南開001x14.5、D151、D018、D019、D020、YWD12V或核亞東732型強酸型陽離子交換樹脂。7.根據權利要求1-3所述的總生物堿的制備方法，其特征在于所述的植物提取物是由益母草、延胡索、百部、顛茄、北豆根、石斛、雷公藤、金果欖、天仙子、一葉萩、黃連、麻黃、防己、黃柏、鉤藤、貝母、浙貝母、喜樹果、吳茱萸、金雞納皮、檳榔、長春花、苦參、山豆根、秦艽、蘿芙木、烏藥、川烏、附子、半邊蓮和白鮮皮之一提取得到的。全文摘要本發明公開了一種總生物堿的制備方法。本發明將植物提取物依次用弱酸型陽離子交換樹脂、強酸型陽離子交換樹脂和中性氧化鋁純化得到總生物堿。通過基礎實驗的摸索，確認本發明的制備方法對于提高總生物堿含量非常有效，是一種通用有效的總生物堿制備方法。文檔編號A61K36/489GK101244096SQ200710080239公開日2008年8月20日申請日期2007年2月15日優先權日2007年2月15日發明者魏海關申請人:北京天新園醫藥科技開發有限公司