專利名稱：一種含有膽固醇的peg修飾物的脂質體藥物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種脂質體藥物，具體地說，涉及一種含有膽固醇的PEG修飾物的脂 質體藥物及其制備方法，及其在制備治療腫瘤疾病的藥物中的用途。
背景技術：
脂質體可以作為許多藥物的載體。作為抗腫瘤藥物(尤其是化療藥物)的載體， 它可以減少藥物在正常組織的分布，增加藥物在腫瘤組織的蓄積量，從而改善藥物的治療 指數。傳統的脂質體在體內很容易被免疫系統識別和吞噬，因此脂質體可能還沒有到達 靶區，就已經被機體清除掉了而無法發揮其靶向作用。長循環脂質體又稱隱形脂質體，能 夠阻止巨噬細胞對脂質體的識別和攝取，從而延長脂質體在血中的循環時間，進而借助EPR 效應富集到腫瘤組織中，最終實現腫瘤的被動靶向。此外，長循環脂質體由于表面覆蓋了 聚乙二醇親水保護層，能夠避免脂質體聚集，可以提高其在儲存期內的穩定性。所以長循環 脂質體技術一經發明，即成為國際抗腫瘤脂質體制劑研究的熱點和化療藥物劑型的最佳選 擇。制備長循環脂質體常用的長循環材料為親水聚合物修飾的磷脂，如聚乙二 醇修飾的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG)、聚乙二醇修飾的二硬脂酰磷脂酰甘油 (DSPG-PEG)、聚乙二醇修飾的膽固醇(cho 1-PEG)、聚維酮修飾的二硬脂酰磷脂酰乙醇 胺(DSPE-PVP)、聚維酮修飾的二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG-PVP)、聚維酮修飾的膽固醇 (chol-PVP)。其中甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酸磷脂酰乙醇銨(mPEG2000-DSPE)的應用 最為廣泛。傳統的mPEG-DSPE加入方式是在脂質體形成初期將其與磷脂和膽固醇一起加入， 這種操作的結果就是在磷脂雙分子層形成后，mPEG-DSPE均勻分布在磷脂雙層膜的內、外表 面。該方法適用于大多數藥物，如鹽酸多柔比星，以此技術制備的長循環脂質體已于1995 年在美國成功上市，商品名為楷萊。但是我們在制備長春瑞濱長循環脂質體的過程中發現，mPEG-DSPE的加入，會阻礙 長春瑞濱的裝載，當藥脂比較高時，mPEG-DSPE對長春瑞濱載藥影響更為顯著，包封率不足 10%。分析認為有兩個原因①在傳統的主動載藥技術中，藥物通過與內水相陰離子(如 硫酸根、檸檬酸根)結合形成沉淀，獲得較高的包封率，而弱堿性藥物分子，如長春堿類和 拓撲異構酶抑制劑類化合物，與脂質體內水相陰離子形成沉淀能力差，因而藥物在內水相 中的滯留能力差，影響藥物的裝載；②帶正電荷的長春瑞濱在陰離子梯度及PH梯度等載 藥動力驅使下進行跨膜載藥時，與嵌在磷脂雙層膜外表面上大量的帶負電荷的mPEG-DSPE 優先結合，載藥初期時，載藥動力足以克服藥物與mPEG-DSPE的結合力，使其能夠跨膜進入 脂質體內水相；但是隨著藥物的裝載，載藥動力逐漸減弱，剩余的藥物便結合在mPEG-DSPE 上，不能進入脂質體內水相，從而降低了載藥的效率。并且，分布在磷脂雙層膜內表面的 mPEG-DSPE會通過電荷引力與已經載入內水相的藥物結合，進而促使藥物從脂質體中滲漏出來，而達不到緩釋、靶向的目的。由以上分析可知，mPEG-DSPE的加入既影響了藥物的裝載，還促進了藥物在體內的 滲漏，其作用弊大于利。但是若不加又無法延長脂質體在血液中的循環時間，無法達到緩釋 增效的目的。所以如何消除由mPEG-DSPE的加入帶來的負面作用成為研究的難點和重點。 經過分析發現，mPEG-DSPE之所以影響藥物的裝載是因為其帶有負電荷，所以解決問題的關 鍵是尋找一種不帶電荷的長循環材料。
發明內容
本發 明使用 Poly (oxy-Ι，2-ethanediol)，Alpha-(3，beta) cholest-5-en-3-yl-omega-hydroxy,(簡稱膽固醇-PEG)來制備上述藥物的脂質體，能夠 很好的解決這一問題。發明人在試驗中發現，膽固醇-PEG同樣可以插入磷脂膜，覆蓋在脂質體表面，形 成空間位阻和親水保護層，能阻止巨噬細胞對脂質體的識別和攝取，延長脂質體的血循環 時間，最終實現腫瘤的被動靶向。膽固醇-PEG不同于mPEG2000-DSPE之處在于其表面不帶 電荷，所以可以實現對長春堿類抗腫瘤藥脂質體的高效包封，并且延長了藥物在體內的滯 留時間。為了得到具有上述特征的脂質體制劑，需要采用合適的方法制備脂質體。本申請 采用的方法包括如下步驟將所用的脂類輔料溶解于有機溶劑中，凍干除去有機溶劑，得到 疏松的脂質粉末，之后使用含有反離子的溶液水化脂相粉末以形成空白脂質體。所述含有 反離子的溶液指溶液中的離子帶有與藥物相反的電荷。空白脂質體用微射流設備或者高壓 擠出設備降低脂質體的粒度，之后采用透析、或者柱層析等手段除去脂質體外的反離子。從 而使脂膜內外形成反離子梯度。然后再將藥物和脂質體孵育，得到脂質體藥物。
具體實施例方式下面所述實施例的目的是為了更好的說明本發明，但不應對本發明的范圍構成限定。下文中所述“藥脂比”指藥物與氫化大豆卵磷脂的質量比，“mPEG2000_DSPE的含 量”或“膽固醇-PEG的含量”指其在脂質體雙分子層中磷脂成分總摩爾數的百分率。實施例1脂質體制備方法將磷脂，如氫化大豆卵磷脂(或雙軟脂酸卵磷脂或雙肉豆蔻酸卵磷脂)、膽固醇按 重量比3 1，和適量的膽固醇的PEG修飾物混勻，溶解于95%叔丁醇中，凍干除去有機溶 齊U，得到疏松的脂質粉末，之后使用含有反離子的內相溶液水化脂質粉末以形成空白脂質 體。用高壓擠出設備或微射流設備降低空白脂質體的粒度，之后采用柱層析或透析手段以 蔗糖/組氨酸溶液替換脂質體外的反離子，從而使脂膜內外形成離子梯度。將藥物水溶液 與脂質體混懸液混合孵育，既得。實施例2磺基水楊酸三乙胺內相，不同長循環材料，不同藥脂比長春瑞濱載藥包 封率比較內相300mM磺基水楊酸三乙胺溶液脂相mPEG2000-DSPE或膽固醇-PEG 的含量8. 3%。
制備方法與實施例1相同。表1不同脂藥比，不同長循環材料長春瑞濱脂質體的包封率
權利要求
1.一種脂質體藥物，含有作為活性成分的藥物和脂質體的雙分子層，其特征在于脂質 體雙分子層中包含磷脂、膽固醇和膽固醇的PEG修飾物，藥物為長春堿類衍生物。
2.根據權利要求1所述的脂質體藥物，其中所述長春堿類衍生物為長春瑞濱或長春新堿。
3.根據權利要求1所述的脂質體藥物，其中膽固醇的PEG修飾物的含量為脂質體雙 分子層中磷脂成分含量的 0. l-20mol/mol %，例如 0. 3-18mol/mol %,0. 5-15mol/mol %, 0. 8-12mol/mol %、1-lOmol/mol %,2-8mol/mol %,2. 5-7mol/mol % 或者 3-6mol/mol %。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的脂質體藥物的制備方法，其包括如下步驟(1)利 用磷脂、膽固醇和膽固醇的PEG修飾物為脂質體雙分子層材料，制備空白脂質體；和⑵將 作為活性成分的藥物包封在脂質體內。
5.一種脂質體藥物制劑，其中含有根據權利要求1-3中任一項所述的脂質體藥物，和/ 或藥學上可接受的載體和/或賦型劑。
6.根據權利要求5所述的脂質體藥物制劑，其中還含有改變滲透壓的鹽、緩沖物質和/ 或抗氧劑等。
7.一種治療患者中疾病、特別是腫瘤的方法，所述方法包括給需要該治療的患者施用 根據權利要求1-3中任一項所述的脂質體藥物或者權利要求5-6中任一項所述的脂質體藥 物制劑。
8.權利要求1-3中任一項所述的脂質體藥物或者權利要求5-6中任一項所述的脂質體 藥物制劑在制備用于治療腫瘤患者的藥物中的用途。
全文摘要
本發明涉及一種脂質體藥物，含有作為活性成分的藥物和脂質體的雙分子層，脂質體雙分子層中包含磷脂、膽固醇和膽固醇的PEG修飾物，藥物為長春堿類衍生物。所屬脂質體實現了藥物的高包封率，延長了體內滯留時間。
文檔編號A61P35/00GK102038640SQ20091007578
公開日2011年5月4日 申請日期2009年10月26日 優先權日2009年10月26日
發明者修憲, 張蘭, 張莉, 李彥輝, 李春雷, 李永豐, 梁敏, 王世霞, 王彩霞, 王金戌 申請人:石藥集團中奇制藥技術(石家莊)有限公司