專利名稱：一種提高脂質體包封率的制備方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種提高脂質體包封率的制備方法。
背景技術：
難溶性化合物體內生物利用度的提高一直是藥劑學的研究熱點。但是很多難溶性 化合物不只不溶于水，還不溶于生理耐受和藥劑學常用的溶劑，即脂水不溶性，給劑型設計 和應用帶來了阻礙。脂質體在輸送至腫瘤血管時，可通過毛細管上皮組織間隙進入腫瘤組織，從而達 到一定的腫瘤組織靶向作用。脂質體載藥系統的被動靶向作用，因其改變了藥物的體內分 布，所以可在提高療效的同時降低毒性，作為提高藥物載藥量的良好載體。通過脂質體的應 用，解決了難溶性藥物溶解度低的問題，起到了降低毒性反應，消除副反應的作用，有較高 靶向分布特性。脂質體雖然提高了難溶性化合物溶解度，但大部分包封率不能達到85%的注射液 上市標準。為了進一步提高包封率，出現了一些在制備方法和處方上的改進方案，比如改 進制備方法，制備前體脂質體；或者改進處方，加入表面活性劑制備囊泡，加入表面活性劑 和骨架材料制備脂質體固體納米粒。但以上改進方案還存在著對某些脂水不溶性化合物包 封率很難提高，或者在處方中加入表面活性劑，毒副作用較大的問題。
發明內容
本發明提供了一種提高脂質體包封率的制備方法。本發明的技術效果是適用于溶解度有酸堿依賴性的難溶性化合物。考慮到大部分難溶性化合物的溶解性有酸堿依賴性，酸性化合物易溶于堿性溶液 中，而堿性化合物易溶于酸性溶液中。本發明利用這樣酸堿差異導致溶解度改變的特性制 備脂質體。先將酸性化合物溶于堿性溶液中，或將堿性化合物溶于酸性溶液中，再水化，讓 藥物分布于脂質體的內外水相。但是水溶性藥物制備脂質體十分不穩定，很容易發生滲漏， 導致溶解度的降低，所以考慮凍干后用藥物不溶于的酸性或堿性溶液復溶，使藥物隨PH梯 度進入脂質體的脂質雙層，可以大幅度提高此類化合物的在脂質體中的包封率和穩定性， 為難溶性化合物脂質體的制備提供了新的思路。本發明是通過如下詳細技術方案制備而成的其制備工藝如下(1)當主藥為酸性化合物時，將磷脂，膽固醇，抗氧劑加入有機溶劑中，轉移有機溶 劑，制備脂質干膜。將凍干保護劑加入堿性緩沖鹽溶液，在水化溫度下加入堿性緩沖鹽溶液 水化，水化完全后真空凍干，取酸性緩沖鹽溶液復溶即得。 (2)當主藥為堿性化合物時，將磷脂，膽固醇，抗氧劑加入有機溶劑中，轉移有機溶 劑，制備脂質干膜。將凍干保護劑加入酸性緩沖鹽溶液，在水化溫度下加入酸性緩沖鹽溶液 水化，水化完全后真空凍干，取堿性緩沖鹽溶液復溶即得。
其中，磷脂膽固醇比值范圍在1 1 1 6，磷脂含量范圍在3% 5% (W V), 抗氧劑含量范圍在0.5% (W W)。
以下以7-乙基-10-羥基喜樹堿脂質體的制備為具體實例, 7-乙基-10-羥基喜樹堿脂質體的處方及用量如下 7-乙基-10-羥基喜樹堿 1-10克，
30-60 克， 5-60 克， 2-8 克，
2000-8000 毫升， 1000-4000 毫升， 1000-4000 毫升
磷脂 膽固醇 VE
有機溶劑 堿性緩沖鹽溶液 酸性緩沖鹽溶液 制備工藝如下
(1)將磷脂，膽固醇，抗氧劑溶于有機溶劑中，真空旋轉轉移有機溶劑，真空恒溫干 燥箱中放置過夜揮干殘余有機溶劑，制備脂質干膜，以上操作均在無菌條件下完成。(2)將7-乙基-10-羥基喜樹堿，凍干保護劑溶于堿性緩沖鹽溶液(pH = 9. 9)中， 在水化溫度下用上述堿性緩沖鹽溶液水化脂質干膜，水化完全后用乳勻機降低粒徑，即得 含藥脂質體，上操作均在無菌條件下完成。(3)真空冷凍干燥得到的含藥脂質體凍干粉，用酸性緩沖鹽溶液(pH = 3. 8)復溶 制得的脂質體溶液，孵育后即得。實驗證明，經酸溶液孵育一定時間后，藥物轉化為親脂的活性形式，通過孵育向脂 質雙層轉移，最后包裹于脂質雙層。包裹于脂質雙層的藥物由于受到了保護，在很大程度上 提高了藥物穩定性同時也提高了藥物的體內穩定性。進入靶區前，藥物包裹在脂質體內部， 減輕了靜注對血管的刺激，也避免了機體的分解；進入靶區后，脂質體與細胞相互作用或被 細胞內吞，經溶酶體的作用，使脂質體解體并釋放藥物。通過此特性制備的脂質體。良好的 解決了 7-乙基-10-羥基喜樹堿溶解度低，體內代謝快的問題，起到了降低毒性反應，消除 副反應的作用，有較高靶向分布特性，延長代謝時間，提高溶解度和生物利用度。薄膜-超聲法制備7-乙基-10-羥基喜樹堿脂質體的過程如下將7-乙基-10-羥基喜樹堿，磷脂，膽固醇，抗氧劑溶于有機溶劑中，真空旋轉轉移 有機溶劑，真空恒溫干燥箱中放置過夜揮干殘余有機溶劑，制備脂質干膜，在相變溫度下， 加PBS緩沖溶液(pH = 6. 6)水化得脂質體，以上操作均在無菌條件下完成。根據以上制備過程，考察如下內容1分別用常規薄膜_超聲法制備脂質體與本發明方法制備7-乙基-10-羥基喜樹 堿脂質體，分別進行質量評價，有結果可知本發明方法制備7-乙基-10-羥基喜樹堿脂質體 包封率，粒徑，穩定性等質量評價指標均優于常規薄膜_超聲方法制備的脂質體。比較常規薄膜_超聲方法制備的脂質體和本發明方法制備的脂質體的包封率，結 果如下表 2考察脂質體凍干前的12小時穩定性和脂質體凍干后的6個月穩定性，結果顯示 穩定性均良好試驗結果表明應用本發明制備的脂質體凍干前后穩定性均良好，在外觀，包封率， 粒徑，磷脂氧化指數和安全性，均符合規定。以下以替加氟脂質體的制備為具體實例。
替加氟脂質體的處方及用量如下
替加氟3-20 克，
磷脂30-60 克，
膽固醇5-60 克，
抗氧劑2-8 克，
凍干保護劑100-300 克，
有機溶劑2000-8000 _E升，
堿性緩沖鹽溶液1000-4000 _E升，
酸性緩沖鹽溶液1000-4000 _E升
制備工藝如下
(1)將磷脂，膽固醇，抗氧劑溶于有機奔？劑中，真空旋轉轉移有機溶劑，真空恒溫干
燥箱中放置過夜揮干殘余有機溶劑，制備脂質干膜，以上操作均在無菌條件下完成。(2)將替加氟，凍干保護劑溶于堿性緩沖鹽溶液(pH = 10. 0)中，在水化溫度下用 上述堿性緩沖鹽溶液水化脂質干膜，水化完全后用乳勻機降低粒徑，即得含藥脂質體，上操 作均在無菌條件下完成。(3)真空冷凍干燥得到的含藥脂質體凍干粉，用酸性緩沖鹽溶液(pH = 5. 0)復溶 制得的脂質體溶液，孵育后即得。替加氟為氟尿嘧啶衍生物，在體外無抗腫瘤作用，在體內主要經肝臟轉變為氟尿 嘧啶而起作用。其作用與氟尿嘧啶相同，化療指數為氟尿嘧啶的2倍，本品可通過血腦屏 障。主要用于胃癌、膽道癌、直腸癌、結腸癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、肺癌及頭頸部癌。臨床 主要應用其注射劑。本藥毒副作用小，安全性好，已越來越受到臨床的重視和觀注。替加氟的溶解度也具有酸堿依賴。在堿性溶液中的溶解度較大。根據本發明方法 制備替加氟脂質體在制備過程中用堿性溶液(pH= 10)水化脂質干膜，而凍干后用酸性 溶液(pH= 5)復溶。通過此特性制備的脂質體良好的解決了替加氟對光和熱敏感，穩定 性差的問題，起到了降低毒性反應，消除副反應的作用，有較高靶向分布特性，延長代謝時 間，提高藥物穩定性，提高溶解度和生物利用度。薄膜-超聲法制備脂質體的過程如下將替加氟，磷脂，膽固醇，抗氧劑溶于有機 溶劑中，真空旋轉轉移有機溶劑，真空恒溫干燥箱中放置過夜揮干殘余有機溶劑，制備脂質干膜，在相變溫度下，加PBS緩沖溶液(pH = 6. 6)水化得脂質體，以上操作均在無菌條件下 完成。根據以上制備過程，考察如下內容1分別用常規薄膜_超聲方法制備脂質體與本發明方法制備替加氟脂質體，分別 進行質量評價，有結果可知本發明方法制備替加氟脂質體和替加氟脂質體的包封率，粒徑， 穩定性等質量評價指標均優于常規薄膜_超聲方法制備的脂質體。比較常規薄膜_超聲方 法制備的脂質體和本發明方法制備的脂質體的包封率，結果如下表 2考察脂質體凍干前的12小時穩定性和脂質體凍干后的6個月穩定性，結果顯示 穩定性均良好試驗結果表明應用本發明制備的脂質體凍干前后穩定性均良好，在外觀，包封率， 粒徑，磷脂氧化指數和安全性，均符合規定。以下以10-羥基1f樹堿脂質體的制備為具體實例。
10-羥基喜樹堿脂質體的處方及用量如下
10-羥基喜樹堿2-4 克，
磷脂30-60 克，
膽固醇5-60 克，
VE2-8 克，
有機溶劑2000-8000 ■S升，
堿性緩沖鹽溶液1000-4000羣S升，
酸性緩沖鹽溶液1000-4000羣S升
制備工藝如下
(1)將磷脂，膽固醇，抗氧劑溶于有機名_劑中，真空旋轉轉移有機溶劑，真空恒溫干
燥箱中放置過夜揮干殘余有機溶劑，制備脂質干膜，以上操作均在無菌條件下完成。(2)將10-羥基喜樹堿，凍干保護劑溶于堿性緩沖鹽溶液(pH = 10. 0)中，在水化 溫度下用上述堿性緩沖鹽溶液水化脂質干膜，水化完全后用乳勻機降低粒徑，即得含藥脂 質體，上操作均在無菌條件下完成。(3)真空冷凍干燥得到的含藥脂質體凍干粉，用酸性緩沖鹽溶液(pH = 4. 0)復溶 制得的脂質體溶液，孵育后即得。通過此特性制備的脂質體。良好的解決10-羥基喜樹堿溶解度低，毒副作用大，體 內代謝快的問題，起到了降低毒性反應，消除副反應的作用，有較高靶向分布特性，延長代 謝時間，提高溶解度和生物利用度。薄膜-超聲法制備10-羥基喜樹堿脂質體的過程如下將10-羥基喜樹堿，磷脂，膽固醇，抗氧劑溶于有機溶劑中，真空旋轉轉移有機溶齊 ，真空恒溫干燥箱中放置過夜揮干殘余有機溶劑，制備脂質干膜，在相變溫度下，加PBS 緩沖溶液(PH = 6. 6)水化得脂質體，以上操作均在無菌條件下完成。根據以上制備過程，考察如下內容1分別用常規薄膜_超聲法制備脂質體與本發明方法制備、10-羥基喜樹堿脂質 體，分別進行質量評價，有結果可知本發明方法制備10-羥基喜樹堿脂質體包封率，粒徑， 穩定性等質量評價指標均優于常規薄膜-超聲方法制備的脂質體。比較常規薄膜-超聲方 法制備的脂質體和本發明方法制備的脂質體的包封率，結果如下表 2考察脂質體凍干前的12小時穩定性和脂質體凍干后的6個月穩定性，結果顯示 穩定性均良好試驗結果表明應用本發明制備的脂質體凍干前后穩定性均良好，在外觀，包封率， 粒徑，磷脂氧化指數和安全性，均符合規定。以下以五氟尿嘧啶脂質體的制備為具體實例。五氟尿嘧啶脂質體的處方及用量如下五氟尿嘧啶3-6克，磷脂30-60 克，膽固醇5-60克，VE2-8 克，有機溶劑2000-8000毫升，堿性緩沖鹽溶液1000-4000毫升，酸性緩沖鹽溶液1000-4000毫升制備工藝如下(1)將磷脂，膽固醇，抗氧劑溶于有機溶劑中，真空旋轉轉移有機溶劑，真空恒溫干 燥箱中放置過夜揮干殘余有機溶劑，制備脂質干膜，以上操作均在無菌條件下完成。(2)將五氟尿嘧啶，凍干保護劑溶于堿性緩沖鹽溶液(ρΗ = 8. 9)中，在水化溫度下 用上述堿性緩沖鹽溶液水化脂質干膜，水化完全后用乳勻機降低粒徑，即得含藥脂質體，上 操作均在無菌條件下完成。(3)真空冷凍干燥得到的含藥脂質體凍干粉，用酸性緩沖鹽溶液(ρΗ = 2. 8)復溶 制得的脂質體溶液，孵育后即得。通過此特性制備的脂質體良好的解決了五氟尿嘧啶溶解度低，穩定性差，毒副作 用大的問題，起到了降低毒性反應，消除副反應的作用，有較高靶向分布特性，延長代謝時 間，提高溶解度和生物利用度。薄膜-超聲法制備五氟尿嘧啶脂質體的過程如下將五氟尿嘧啶，磷脂，膽固醇，抗氧劑溶于有機溶劑中，真空旋轉轉移有機溶劑，真空恒溫干燥箱中放置過夜揮干殘余有機溶劑，制備脂質干膜，在相變溫度下，加PBS緩沖溶 液(pH = 6. 6)水化得脂質體，以上操作均在無菌條件下完成。根據以上制備過程，考察如下內容1分別用常規薄膜-超聲法制備脂質體與本發明方法制備五氟尿嘧啶脂質體，分 別進行質量評價，有結果可知本發明方法制備五氟尿嘧啶脂質體包封率，粒徑，穩定性等質 量評價指標均優于常規薄膜_超聲方法制備的脂質體。比較常規薄膜_超聲方法制備的脂質體和本發明方法制備的脂質體的包封率，結 果如下表 2考察脂質體凍干前的12小時穩定性和脂質體凍干后的6個月穩定性，結果顯示 穩定性均良好試驗結果表明應用本發明制備的脂質體凍干前后穩定性均良好，在外觀，包封率， 粒徑，磷脂氧化指數和安全性，均符合規定。
圖1為本發明酸性化合物脂質體的工藝流程2為本發明堿性化合物脂質體的工藝流程圖
具體實施例方式實施例17-乙基-10-羥基喜樹堿脂質體(1)將大豆磷脂(注射級)30克，膽固醇(注射級)5克，a-生育酚2克溶于2000ml 乙醇(分析純)中，真空旋轉轉移有機溶劑，真空恒溫干燥箱中放置過夜揮干殘余有機溶 劑，制備得脂質干膜，以上操作均在無菌條件下完成。(2)將7-乙基-10-羥基喜樹堿1. 67克，蔗糖(注射級)100克溶于碳酸鈉-碳酸 氫鈉緩沖鹽溶液(PH = 9. 9) 1000ml中，在45°C水化溫度下用上述堿性緩沖鹽溶液水化脂質 干膜，待水化完全后用乳勻機降低粒徑至100-200nm，即得含藥脂質體。以上操作均在無菌 條件下完成。(3)真空冷凍干燥含藥脂質體溶液，得到黃色無定型含藥凍干粉，用乙酸_乙酸鈉 緩沖鹽溶液(pH = 3. 8) 1000ml復溶，孵育24小時，即得。實施例210-羥基喜樹堿脂質體(1)將神經鞘磷脂(注射級)40克，膽固醇(注射級)10克，a-生育酚4克溶于 6000ml乙醇(分析純)中，真空旋轉轉移有機溶劑，真空恒溫干燥箱中放置過夜揮干殘余有機溶劑，制備得脂質干膜，以上操作均在無菌條件下完成。(2)將10-羥基喜樹堿2克，海藻糖(注射級)100克溶于磷酸二氫鉀-氫氧化鈉 緩沖液(pH= 10. 0) 3000ml中，在45°C水化溫度下用上述堿性緩沖鹽溶液水化脂質干膜，待 水化完全后用乳勻機降低粒徑至100-200nm，即得含藥脂質體。以上操作均在無菌條件下完 成。(3)真空冷凍干燥含藥脂質體溶液，得到黃色無定型含藥凍干粉，用磷酸氫二 鈉_檸檬酸緩沖液(PH = 4. 0) 3000ml復溶，孵育24小時，即得。實施例3替加氟脂質體(1)將磷脂酰絲氨酸(注射級)50克，膽固醇(注射級)30克，a-生育酚6克溶 于8000ml乙醇(分析純)中，真空旋轉轉移有機溶劑，真空恒溫干燥箱中放置過夜揮干殘 余有機溶劑，制備得脂質干膜，以上操作均在無菌條件下完成。(2)將替加氟1.67克，氨基乙酸(注射級)300克溶于碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖鹽溶 液(pH= 10. 0)4000ml中，在45°C水化溫度下用上述堿性緩沖鹽溶液水化脂質干膜，待水化 完全后用乳勻機降低粒徑至100-200nm，即得含藥脂質體。上操作均在無菌條件下完成。(3)真空冷凍干燥含藥脂質體溶液，得到黃色無定型含藥凍干粉，用檸檬酸_檸檬 酸鈉(pH = 5. 0) 4000ml復溶，孵育24小時，即得。實施例4五氟尿嘧啶脂質體(1)將大豆磷脂(注射級)60克，膽固醇(注射級)60克，a-生育酚8克溶于 2000ml乙醇(分析純)中，真空旋轉轉移有機溶劑，真空恒溫干燥箱中放置過夜揮干殘余有 機溶劑，制備得脂質干膜，以上操作均在無菌條件下完成。(2)將替加氟1.67克，蔗糖和海藻糖(注射級)(1 1)300克溶于碳酸鈉-碳酸 氫鈉緩沖鹽溶液(PH = 8. 9) 1000ml中，在45°C水化溫度下用上述堿性緩沖鹽溶液水化脂質 干膜，待水化完全后用乳勻機降低粒徑至100-200nm，即得含藥脂質體。上操作均在無菌條 件下完成。(3)真空冷凍干燥含藥脂質體溶液，得到黃色無定型含藥凍干粉，用乙酸_乙酸鈉 緩沖鹽溶液(pH = 2. 8) 1000ml復溶，孵育24小時，即得。
權利要求
一種提高脂質體包封率的制備方法，其特征在于，先將酸性化合物溶于堿性溶液中，或將堿性化合物溶于酸性溶液中，再水化，讓藥物分布于脂質體的內外水相。
2.根據權利要求1所述的一種提高脂質體包封率的制備方法，其特征在于，當主藥為 酸性化合物時，將磷脂，膽固醇，抗氧劑加入有機溶劑中，轉移有機溶劑，制備脂質干膜；將 凍干保護劑加入堿性緩沖鹽溶液，在水化溫度下加入堿性緩沖鹽溶液水化，水化完全后真 空凍干，取酸性緩沖鹽溶液復溶即得。
3.根據權利要求1所述的一種提高脂質體包封率的制備方法，其特征在于，當主藥為 堿性化合物時，將磷脂，膽固醇，抗氧劑加入有機溶劑中，轉移有機溶劑，制備脂質干膜；將 凍干保護劑加入酸性緩沖鹽溶液，在水化溫度下加入酸性緩沖鹽溶液水化，水化完全后真 空凍干，取堿性緩沖鹽溶液復溶即得。
4.根據權利要求2或3中所述的一種提高脂質體包封率的制備方法，其特征在于，所述 的磷脂為神經鞘磷脂，磷脂酰膽堿，磷脂酰絲氨酸，心磷脂或它們的混合物，或以上單一磷 脂衍生物。
5.根據權利要求2或3中所述的一種提高脂質體包封率的制備方法，其特征在于，所述 的凍干保護劑為乳糖，海藻糖，蔗糖，氨基乙酸或它們的混合物。
6.根據權利要求2或3中所述的一種提高脂質體包封率的制備方法，其特征在于，所述 的堿性緩沖鹽溶液選自磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液，巴比妥鈉-鹽酸緩沖液，碳酸鈉-碳 酸氫鈉緩沖液。
7.根據權利要求2或3中所述的一種提高脂質體包封率的制備方法，其特征在于，所述 的酸性緩沖鹽溶液選自磷酸氫二鈉_檸檬酸緩沖液，檸檬酸_氫氧化鈉_鹽酸，檸檬酸_檸 檬酸鈉，乙酸-乙酸鈉緩沖液。
8.根據權利要求2或3中所述的一種提高脂質體包封率的制備方法，其特征在于，所述 的有機溶劑為氯仿，乙醚，乙醇或任意兩種的混合物。
9.根據權利要求1所述的一種提高脂質體包封率的制備方法，其特征在于磷脂膽固醇 比值范圍在1 1 1 6，磷脂含量范圍在3% 5% (W V)，抗氧劑含量范圍在0.5% 1% (W W)。
全文摘要
本發明的目的是提供一種提高脂質體包封率的制備方法。本發明的制備方法如下將脂溶性成分溶于有機溶劑，水溶性成分溶于有偏酸或偏堿緩沖鹽，轉移有機溶劑后加入緩沖鹽溶液水化，真空冷凍干燥后，用偏堿或偏酸緩沖鹽復溶，孵化后即得含藥脂質體。酸性化合物易溶于堿性溶液中，而堿性化合物易溶于酸性溶液中。本發明利用這樣酸堿差異導致溶解度改變的特性制備脂質體，可以大幅度提高此類化合物的在脂質體中的包封率，為難溶性化合物脂質體的制備提供了新的思路。
文檔編號A61K9/127GK101874780SQ20101018678
公開日2010年11月3日 申請日期2010年5月31日 優先權日2010年5月31日
發明者葉田田, 王淑君 申請人:沈陽藥科大學