專利名稱：一種制備脫細胞真皮基質醫用組織補片的方法
技術領域：
本發明涉及一種制備脫細胞真皮基質醫用組織補片的方法。
背景技術：
脫細胞真皮基質醫用組織補片是在組織工程學基礎上發展起來的組織工程項目， 目的就是利用真皮的細胞外基質來進行組織修復。取材于天然的皮膚組織，經過特殊的理化處理，將組織中可能引起人體植入后的免疫排異反應的成分去除，同時保留了原有組織的立體支架結構，因此它具有誘導組織再生的作用。已有的脫細胞真皮基質生產工藝存在以下不足操作較復雜，周期較長，效率較低；容易造成基質的損壞。因此，需要提供一種新的技術方案來解決上述問題。
發明內容
本發明的目的是提供一種生產周期短、效率高、對真皮細胞外基質天然結構損害輕的制備脫細胞真皮基質醫用組織補片的方法。本發明采用的技術方案是
一種制備脫細胞真皮基質醫用組織補片的方法，該組織補片由豬皮、牛皮或羊皮制備而成，包括以下步驟
a、制備斷層皮片工藝用取皮機將動物皮膚制成厚度為O. 1-2. Omm的斷層皮片，用打孔器將斷層皮片制成不同形狀的斷層皮片。b、病毒滅活工藝將斷層皮片用質量濃度O. 1%-2. 0%的過氧乙酸和質量濃度 I. 0%-5. 0%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進行滅活30-60分鐘，皮片與病毒滅活溶液的質量比為I: 4-7 ；
C、脫脂工藝采用質量濃度I. 0%-4. 0%純堿、質量濃度I. 0%-4. 0%燒堿和質量濃度
O.1%-1. 0%表面活性劑組成的混合脫脂劑進行脫脂30-60分鐘，所述表面活性劑為平平加、 十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚、曲拉酮中的一種，皮片與混合脫脂劑的質量比為 I: 4-7 ；
d、脫細胞工藝采用質量濃度O.1%-0. 5%胰酶、質量濃度O. 1%-0. 3%激活劑、質量濃度O. 2%-0. 5%脫脂劑組成的脫細胞液進行脫細胞30-60分鐘，所述激活劑為質量濃度 O. 1%-0. 3%硫酸銨，所述脫脂劑為質量濃度O. 2%-0. 5%平平加，質量濃度O. 2%-0. 5%十二烷基硫酸鈉中的一種，皮片與脫細胞液的質量比為1:4-7 ;
e、凍干、裁剪、定型工藝將經脫細胞工藝后制備好的斷層皮片，放入冷凍干燥機凍干后，根據臨床不同的適應癥的需要，將脫細胞真皮基質分別裁剪定型成片狀型、網孔型、圓孔型、微粒型，網孔型由片狀型經網孔扎皮機制備而成，網孔型的網孔孔徑為O. 1-0. 5cm,網孔密度1-5個/c m%圓孔型由片狀型經打孔機制備而成，圓孔型的孔徑為O. 1-0. 5cm,圓孔密度1-5個/c Hl2，微粒型由片狀型經微粒粉碎機制備而成，微粒的直徑為O. 01-0. 3cm ；
f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經Y射線輻照滅菌，即為成品。
本發明的有益效果(l)b步驟采用過氧乙酸和氯化鈉溶液組成的病毒滅活溶液進行滅活，既達到了病毒滅活的效果，又避免了過氧乙酸溶液滅活病毒而產生的斷層皮片腫脹的問題；(2) c步驟中由純堿、燒堿、表面活性劑組成的混合脫脂劑具有脫脂時間短、效率高、對皮片組織結構的保護作用強的優點；(3) d步驟中采用酶、激活劑和脫脂劑組成的脫細胞液進行脫細胞工藝，具有脫細胞徹底、時間短、效率高，對真皮細胞外基質天然結構損害輕的優點。
具體實施例方式以下實施例旨在說明本發明而不是對本方明的進一步限定。實施例I
一種制備脫細胞真皮基質醫用組織補片的方法，該組織補片由豬皮、牛皮或羊皮制備而成，包括以下步驟
a、制備斷層皮片工藝用取皮機將動物皮膚制成厚度為O.Imm的斷層皮片，用打孔器將斷層皮片制成不同形狀的斷層皮片；
b、病毒滅活工藝將斷層皮片用質量濃度O.1%的過氧乙酸和質量濃度I. 0%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進行滅活30分鐘,皮片與病毒滅活溶液的質量比為1:4;
C、脫脂工藝采用質量濃度I. 0%純堿、質量濃度I. 0%燒堿和質量濃度O. 1%平平加組成的混合脫脂劑進行脫脂30分鐘，皮片與混合脫脂劑的質量比為1:4;
d、脫細胞工藝采用質量濃度O.1%胰酶、質量濃度O. 1%激活劑硫酸銨、質量濃度O. 2% 脫脂劑平平加組成的脫細胞液進行脫細胞30分鐘，皮片與脫細胞液的質量比為1:4;
e、凍干、裁剪、定型工藝將經脫細胞工藝后制備好的斷層皮片，放入冷凍干燥機凍干后，根據臨床不同的適應癥的需要，將脫細胞真皮基質分別裁剪定型成片狀型、網孔型、圓孔型、微粒型，網孔型由片狀型經網孔扎皮機制備而成，網孔型的網孔孔徑為O. Icm,網孔密度I個/c m%圓孔型由片狀型經打孔機制備而成，圓孔型的孔徑為O. Icm,圓孔密度I個/c m2，微粒型由片狀型經微粒粉碎機制備而成，微粒的直徑為O. Olcm ；
f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經Y射線輻照滅菌，即為成品。實施例2
一種制備脫細胞真皮基質醫用組織補片的方法，該組織補片由豬皮、牛皮或羊皮制備而成，包括以下步驟
a、制備斷層皮片工藝用取皮機將動物皮膚制成厚度為O.Imm的斷層皮片，用打孔器將斷層皮片制成不同形狀的斷層皮片；
b、病毒滅活工藝將斷層皮片用質量濃度O.1%的過氧乙酸和質量濃度I. 0%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進行滅活30分鐘,皮片與病毒滅活溶液的質量比為1:4;
C、脫脂工藝采用質量濃度I. 0%純堿、質量濃度I. 0%燒堿和質量濃度O. 1%平平加組成的混合脫脂劑進行脫脂30分鐘，皮片與混合脫脂劑的質量比為1:4;
d、脫細胞工藝采用質量濃度O.1%胰酶、質量濃度O. 1%激活劑硫酸銨、質量濃度O. 2% 脫脂劑十二烷基氨基丙酸鈉組成的脫細胞液進行脫細胞30分鐘，皮片與脫細胞液的質量比為1:4;
e、凍干、裁剪、定型工藝將經脫細胞工藝后制備好的斷層皮片，放入冷凍干燥機凍干后，根據臨床不同的適應癥的需要，將脫細胞真皮基質分別裁剪定型成片狀型、網孔型、圓孔型、微粒型，網孔型由片狀型經網孔扎皮機制備而成，網孔型的網孔孔徑為O. Icm,網孔密度I個/c m%圓孔型由片狀型經打孔機制備而成，圓孔型的孔徑為O. Icm,圓孔密度I個/c m2，微粒型由片狀型經微粒粉碎機制備而成，微粒的直徑為O. Olcm ；
f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經Y射線輻照滅菌，即為成品。實施例3
一種制備脫細胞真皮基質醫用組織補片的方法，該組織補片由豬皮、牛皮或羊皮制備而成，包括以下步驟
a、制備斷層皮片工藝用取皮機將動物皮膚制成厚度為I.Omm的斷層皮片，用打孔器將斷層皮片制成不同形狀的斷層皮片；
b、病毒滅活工藝將斷層皮片用質量濃度I.0%的過氧乙酸和質量濃度3. 0%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進行滅活45分鐘,皮片與病毒滅活溶液的質量比為1:5. 5 ;
C、脫脂工藝采用質量濃度2. 5%純堿、質量濃度2. 5%燒堿和質量濃度O. 5%十二烷基氨基丙酸鈉組成的混合脫脂劑進行脫脂45分鐘，皮片與混合脫脂劑的質量比為1:5. 5 ;
d、脫細胞工藝采用質量濃度O.3%胰酶、質量濃度O. 2%激活劑硫酸銨、質量濃度O. 3% 脫脂劑平平加組成的脫細胞液進行脫細胞45分鐘，皮片與脫細胞液的質量比為1:5. 5 ;
e、凍干、裁剪、定型工藝將經脫細胞工藝后制備好的斷層皮片，放入冷凍干燥機凍干后，根據臨床不同的適應癥的需要，將脫細胞真皮基質分別裁剪定型成片狀型、網孔型、圓孔型、微粒型，網孔型由片狀型經網孔扎皮機制備而成，網孔型的網孔孔徑為O. 3cm,網孔密度3個/c m%圓孔型由片狀型經打孔機制備而成，圓孔型的孔徑為O. 3cm,圓孔密度3個/c in2，微粒型由片狀型經微粒粉碎機制備而成，微粒的直徑為O. Icm ；
f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經Y射線輻照滅菌，即為成品。實施例4
一種制備脫細胞真皮基質醫用組織補片的方法，該組織補片由動物皮膚如豬、牛、羊制備而成，包括以下步驟
a、制備斷層皮片工藝用取皮機將動物皮膚制成厚度為I.Omm的斷層皮片，用打孔器將斷層皮片制成不同形狀的斷層皮片；
b、病毒滅活工藝將斷層皮片用質量濃度I.0%的過氧乙酸和質量濃度3. 0%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進行滅活45分鐘,皮片與病毒滅活溶液的質量比為1:5. 5 ;
C、脫脂工藝采用質量濃度2. 5%純堿、質量濃度2. 5%燒堿和質量濃度O. 5%十二烷基氨基丙酸鈉組成的混合脫脂劑進行脫脂45分鐘，皮片與混合脫脂劑的質量比為1:5. 5 ;
d、脫細胞工藝采用質量濃度O.3%胰酶、質量濃度O. 2%激活劑硫酸銨、質量濃度O. 3% 脫脂劑十二烷基硫酸鈉組成的脫細胞液進行脫細胞45分鐘，皮片與脫細胞液的質量比為 1:5. 5 ；
e、凍干、裁剪、定型工藝將經脫細胞工藝后制備好的斷層皮片，放入冷凍干燥機凍干后，根據臨床不同的適應癥的需要，將脫細胞真皮基質分別裁剪定型成片狀型、網孔型、圓孔型、微粒型，網孔型由片狀型經網孔扎皮機制備而成，網孔型的網孔孔徑為O. 3cm,網孔密度3個/c m%圓孔型由片狀型經打孔機制備而成，圓孔型的孔徑為O. 3cm,圓孔密度3個/c m2，微粒型由片狀型經微粒粉碎機制備而成，微粒的直徑為O. Icm ；f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經Y射線輻照滅菌，即為成品。實施例5
一種制備脫細胞真皮基質醫用組織補片的方法，該組織補片由豬皮、牛皮或羊皮制備而成，包括以下步驟
a、制備斷層皮片工藝用取皮機將動物皮膚制成厚度為2.Omm的斷層皮片，用打孔器將斷層皮片制成不同形狀的斷層皮片；
b、病毒滅活工藝將斷層皮片用質量濃度2.0%的過氧乙酸和質量濃度5. 0%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進行滅活60分鐘,皮片與病毒滅活溶液的質量比為1:7;
C、脫脂工藝采用質量濃度4. 0%純堿、質量濃度4. 0%燒堿和質量濃度I. 0%脂肪醇聚氧乙烯醚組成的混合脫脂劑進行脫脂60分鐘，皮片與混合脫脂劑的質量比為1:7;
d、脫細胞工藝采用質量濃度O.5%胰酶、質量濃度O. 3%激活劑硫酸銨、質量濃度O. 5% 脫脂劑平平加組成的脫細胞液進行脫細胞60分鐘，皮片與脫細胞液的質量比為1:7;
e、凍干、裁剪、定型工藝將經脫細胞工藝后制備好的斷層皮片，放入冷凍干燥機凍干后，根據臨床不同的適應癥的需要，將脫細胞真皮基質分別裁剪定型成片狀型、網孔型、圓孔型、微粒型，網孔型由片狀型經網孔扎皮機制備而成，網孔型的網孔孔徑為O. 5cm,網孔密度5個/c m%圓孔型由片狀型經打孔機制備而成，圓孔型的孔徑為O. 5cm,圓孔密度5個/c m2，微粒型由片狀型經微粒粉碎機制備而成，微粒的直徑為O. 3cm ；
f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經Y射線輻照滅菌，即為成品。實施例6
一種制備脫細胞真皮基質醫用組織補片的方法，該組織補片由動物皮膚如豬、牛、羊制備而成，包括以下步驟
a、制備斷層皮片工藝用取皮機將動物皮膚制成厚度為2.Omm的斷層皮片，用打孔器將斷層皮片制成不同形狀的斷層皮片；
b、病毒滅活工藝將斷層皮片用質量濃度2.0%的過氧乙酸和質量濃度5. 0%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進行滅活60分鐘,皮片與病毒滅活溶液的質量比為1:7;
C、脫脂工藝采用質量濃度4. 0%純堿、質量濃度4. 0%燒堿和質量濃度I. 0%脂肪醇聚氧乙烯醚組成的混合脫脂劑進行脫脂60分鐘，皮片與混合脫脂劑的質量比為1:7;
d、脫細胞工藝采用質量濃度O.5%胰酶、質量濃度O. 3%激活劑硫酸銨、質量濃度O. 5% 脫脂劑十二烷基硫酸鈉組成的脫細胞液進行脫細胞60分鐘，皮片與脫細胞液的質量比為 I 7 ；
e、凍干、裁剪、定型工藝將經脫細胞工藝后制備好的斷層皮片，放入冷凍干燥機凍干后，根據臨床不同的適應癥的需要，將脫細胞真皮基質分別裁剪定型成片狀型、網孔型、圓孔型、微粒型，網孔型由片狀型經網孔扎皮機制備而成，網孔型的網孔孔徑為O. 5cm,網孔密度5個/c m%圓孔型由片狀型經打孔機制備而成，圓孔型的孔徑為O. 5cm,圓孔密度5個/c m2，微粒型由片狀型經微粒粉碎機制備而成，微粒的直徑為O. 3cm ；
f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經Y射線輻照滅菌，即為成品。c步驟脫脂工藝中，表面活性劑還可以為曲拉酮。本發明的有益效果(l)b步驟采用過氧乙酸和氯化鈉溶液組成的病毒滅活溶液進行滅活，既達到了病毒滅活的效果，又避免了過氧乙酸溶液滅活病毒而產生的斷層皮片
6腫脹的問題；(2) c步驟中由純堿、燒堿、表面活性劑組成的混合脫脂劑具有脫脂時間短、效率高、對皮片組織結構的保護作用強的優點；(3) d步驟中采用酶、激活劑和脫脂劑組成的脫細胞液進行脫細胞工藝，具有脫細胞徹底、時間短、效率高，對真皮細胞外基質天然結構損害輕的優點。該脫細胞真皮基質醫用組織補片的應用，該脫細胞真皮基質組織補片供醫療機構用于各種原因引起的軟組織缺損和薄弱的修復治療，例如1、各種原因引起的創面覆蓋治療；2、各種原因引起的真皮缺損和皮下軟組織缺損的修復治療；3、各種原因引起的疝的修復治療；4、各種原因引起的硬腦膜缺損的修復治療；5、各種原因引起的粘膜和粘膜下組織缺損的修復治療；6、各種原因引起的軟組織缺損和薄弱的整形美容修復治療；7、各種原因引起的神經、肌腱、血管、粘連的修復治療；8、各種原因引起的泌尿道損傷的修復治療等等。
權利要求
1. 一種制備脫細胞真皮基質醫用組織補片的方法，該組織補片由豬皮、牛皮或羊皮制備而成，其特征在于，包括以下步驟a、制備斷層皮片工藝用取皮機將動物皮膚制成厚度為O.1-2. Omm的斷層皮片，用打孔器將斷層皮片制成不同形狀的斷層皮片；b、病毒滅活工藝將斷層皮片用質量濃度O.1%-2. 0%的過氧乙酸和質量濃度 I. 0%-5. 0%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進行滅活30-60分鐘，皮片與病毒滅活溶液的質量比為1:4-7 ；C、脫脂工藝采用質量濃度I. 0%-4. 0%純堿、質量濃度I. 0%-4. 0%燒堿和質量濃度O.1%-1. 0%表面活性劑組成的混合脫脂劑進行脫脂30-60分鐘，所述表面活性劑為平平加、 十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚、曲拉酮中的一種，皮片與混合脫脂劑的質量比為 I: 4-7 ；d、脫細胞工藝采用質量濃度O.1%-0. 5%胰酶、質量濃度O. 1%-0. 3%激活劑、質量濃度O. 2%-0. 5%脫脂劑組成的脫細胞液進行脫細胞30-60分鐘，所述激活劑為質量濃度O.1%-0. 3%硫酸銨，所述脫脂劑為質量濃度O. 2%-0. 5%平平加，質量濃度O. 2%-0. 5%十二烷基硫酸鈉中的一種，皮片與脫細胞液的質量比為1:4-7 ;e、凍干、裁剪、定型工藝將經脫細胞工藝后制備好的斷層皮片，放入冷凍干燥機凍干后，根據臨床不同的適應癥的需要，將脫細胞真皮基質分別裁剪定型成片狀型、網孔型、圓孔型、微粒型，網孔型由片狀型經網孔扎皮機制備而成，網孔型的網孔孔徑為O. 1-0. 5cm,網孔密度1-5個/c m%圓孔型由片狀型經打孔機制備而成，圓孔型的孔徑為O. 1-0. 5cm,圓孔密度1-5個/c Hl2，微粒型由片狀型經微粒粉碎機制備而成，微粒的直徑為O. 01-0. 3cm ；f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經Y射線輻照滅菌，即為成品。
全文摘要
本發明公開了一種制備脫細胞真皮基質醫用組織補片的方法，將動物皮膚通過制備斷層皮片、病毒滅活、脫脂、脫細胞、凍干、裁剪、成型、包裝和輻照消毒工藝后得到脫細胞真皮基質醫用組織補片。本發明的優點脫脂時間短，效率高，脫細胞徹底，對真皮細胞外基質天然結構損害輕的優點。
文檔編號A61L27/60GK102580153SQ20121006067
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月9日 優先權日2012年3月9日
發明者潘華倩, 潘銀根 申請人:潘銀根