土木香內酯在制備防治肝臟損傷藥物中的應用的制作方法

本發明涉及醫藥領域，具體涉及土木香內酯在制備防治肝臟損傷藥物中的應用。

背景技術：

引起肝臟損傷的因素有多種，如：病毒、藥物、化學毒物及代謝紊亂等，臨床發病率逐年增加。早期多表現為轉氨酶增高，之后隨病情發展，肝臟損傷進一步加重，最終可出現凝血機制障礙、黃疸、肝性腦病和腹水等癥狀。目前認為機體免疫應答和氧化應激反應是發病的重要原因，但我們對于肝臟損傷的確切發病機制尚不清楚，目前尚無有效的治療措施。由于我國的肝病患者眾多，因此如何有效的防治肝臟損傷已成為一個重要課題。

土木香內酯（alantolactone）是提取于土木香根莖的活性物質，其分子式為c15h20o2，分子量為232.32，結構如式i所示：

式i

研究證明，土木香內酯具有抗炎、抗真菌、驅蟲及抗腫瘤等作用。體外實驗表明，土木香內酯能夠促進小鼠肝癌細胞株hepa1c1c7抗氧化酶如血紅素單加氧酶-1，谷胱甘肽巰基轉移酶，γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶的表達。土木香內酯還能夠抑制巨噬細胞raw264.7產生誘導型一氧化氮合成酶（inos），一氧化氮（no），環氧合酶-2（cox-2），從而發揮抗炎效果。體內實驗發現，土木香內酯能緩解東莨菪堿引起的小鼠認知障礙。但目前尚無研究土木香內酯與肝臟損傷的關系，本發明由此而來。

技術實現要素：

本發明的目的旨在提供一種土木香內酯的新的藥物用途，特別是治療痤瘡丙酸桿菌(propionibacteriumacnes，p.acnes)/lps引起的小鼠肝臟損傷及d-氨基半乳糖胺（d-galn）引起的小鼠肝臟損傷的藥物用途，為防治肝臟損傷提供了一種新途徑。

技術方案：本發明提供了一種防治肝臟損傷的藥物制劑，由土木香內酯和藥學上可接受的輔料組成。

優選的，所述土木香內酯的重量百分比為40~90%。

進一步的，將所述土木香內酯直接或間接加入制備不同劑型時所需的藥學上可接受的各種常用輔料，如輔助物質、穩定劑、潤濕劑、增溶劑和其它常用的添加劑等。

進一步的，本發明所述藥物制劑為片劑或者膠囊劑的一種。

進一步的，本發明所述藥物制劑為控釋或者緩釋制劑的一種。

進一步的，本發明所述藥物制劑為適用于胃腸道的藥物制劑。

進一步的，將含有土木香內酯的提取物制備防治肝臟損傷藥物。

有益效果：在p.acnes/lps引起的小鼠肝臟損傷中，低劑量土木香內酯即可有效緩解炎性細胞浸潤和肉芽腫形成，高劑量組效果更加明顯。血清檢測谷丙轉氨酶（alt）和谷草轉氨酶（ast）結果發現，和對照組相比，p.acnes/lps組小鼠alt和ast水平明顯提高（p＜0.01）；和p.acnes/lps組相比，土木香內酯有效降低了血清alt和ast水平（p＜0.01）。實時定量pcr結果顯示，和對照組相比，p.acnes/lps組小鼠肝臟組織inos表達明顯增高，土木香內酯有效降低了肝臟inos表達（p＜0.01）。

在d-galn誘導的小鼠肝臟損傷中，和對照組相比，d-galn組小鼠肝臟組織結構紊亂，可見細胞氣球樣變及壞死。和d-galn組相比，土木香內酯有效降低了肝臟組織損傷，肝臟組織完整，肝細胞變性和壞死明顯好轉，其中高劑量土木香內酯組未見明顯肝細胞變性和壞死。血清檢測alt和ast結果發現，和對照組相比，d-galn組小鼠alt和ast水平明顯提高（p＜0.01）。和d-galn組相比，土木香內酯有效降低了血清alt和ast水平（p＜0.01）。實時定量pcr結果顯示，和對照組相比，d-galn組小鼠肝臟組織inos表達明顯增高，土木香內酯有效降低了肝臟inos表達（p＜0.01）。

通過動物實驗證實，土木香內酯對p.acnes/lps和d-galn誘導的肝臟急性損傷有一定的防治作用，可使肝臟組織損傷減輕，有效降低血清alt和ast水平，可作為肝臟損傷藥物干預的一種新手段。

相對于現有技術中的方案，本發明的優點是：本發明分別通過應用p.acnes/lps誘導的小鼠肝臟損傷模型和d-galn誘導的小鼠肝臟損傷模型，觀察土木香內酯對肝臟損傷的治療作用，分析了血清谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶的水平，并評估了inos的表達變化，從而闡明了土木香內酯干預肝臟損傷的作用機制—即土木香內酯通過抑制肝臟inos的表達來緩解肝臟損傷。

附圖說明

圖1p.acnes/lps誘導的小鼠模型實驗中各組小鼠肝臟組織進行he染色分析，a為對照組，b為p.acnes/lps組，c為土木香內酯低劑量組，d為土木香內酯高劑量組。

圖2p.acnes/lps誘導的小鼠模型實驗中各組小鼠血清谷草轉氨酶（a）和谷丙轉氨酶（b）檢測值。**p＜0.01和對照組相比，^##p＜0.01和p.acnes/lps組相比。

圖3p.acnes/lps誘導的小鼠模型實驗中各組小鼠肝臟組織inos基因表達分析。**p＜0.01和對照組相比，^##p＜0.01和p.acnes/lps組相比。

圖4d-galn誘導的小鼠模型實驗中各組小鼠肝臟組織進行he染色分析，a為對照組，b為d-galn組，c為土木香內酯低劑量組，d為土木香內酯高劑量組。

圖5d-galn誘導的小鼠模型實驗中各組小鼠血清谷草轉氨酶（a）和谷丙轉氨酶（b）檢測值。**p＜0.01和對照組相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01和d-galn組相比。

圖6d-galn誘導的小鼠模型實驗中各組小鼠肝臟組織inos基因表達分析。**p＜0.01和對照組相比，^##p＜0.01和d-galn組相比。

具體實施方式

本發明公開了一種土木香內酯在制備防治肝臟損傷藥物中的應用。本領域技術人員可以參考本文內容實現其應用，特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明內。本發明的方法和應用已經通過較佳的實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和范圍內對本文的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。

本發明提供的一種土木香內酯在制備防治肝臟損傷藥物中的應用中所用到的試劑及原料均可由市場購得。

為了使本技術領域的技術人員能夠更好地理解本發明的技術方案，下面結合實施例，進一步闡述本發明：

實驗例1：土木香內酯對p.acnes/lps誘導的小鼠肝臟損傷的防護作用

雄性c57bl/6小鼠（18-20g）分4組：

（1）對照組：5只，小鼠每天腹腔注射生理鹽水0.15ml，連續9天，其中第3天小鼠尾靜脈注射生理鹽水100μl，第9天小鼠尾靜脈注射生理鹽水100μl。

（2）p.acnes/lps組：9只，小鼠每天腹腔注射生理鹽水0.15ml，連續9天，其中第3天小鼠尾靜脈注射p.acnes1mg/100μl，第9天小鼠尾靜脈注射lps1μg/100μl。

（3）土木香內酯低劑量組：9只，小鼠每天腹腔注射土木香內酯（0.15ml，0.75mg/kg），連續9天。其中，第3天小鼠尾靜脈注射p.acnes1mg/100μl，第9天小鼠尾靜脈注射lps1μg/100μl。

（4）土木香內酯高劑量組：9只，小鼠每天腹腔注射土木香內酯（0.15ml，1.5mg/kg），連續9天。其中第3天小鼠尾靜脈注射p.acnes1mg/100μl，第9天小鼠尾靜脈注射lps1μg/100μl。

lps注射2小時后處死小鼠，采集血清檢測ast和alt活力。取肝臟標本，一部分固定后石蠟包埋進行組織學檢測，一部分進行實時定量pcr檢測，測定inos的表達水平。

實驗結果：

（1）從圖1中的he染色圖得知，光鏡下，與對照組小鼠肝臟結構相比，p.acnes/lps組小鼠肝組織結構紊亂，可見大量炎癥細胞浸潤以及肉芽組織形成。土木香內酯治療組僅可見少量炎癥細胞浸潤，肝細胞排列整齊。

（2）ast及alt活力

從圖2中得知，和對照組小鼠相比，p.acnes/lps組小鼠血清ast及alt表達明顯升高，土木香內酯治療組明顯降低了血清ast及alt表達水平，土木香內酯能有效抑制p.acnes/lps引起的小鼠肝臟損傷及ast及alt活力。

（3）inos表達

從圖3得知，和對照組小鼠相比，p.acnes/lps組小鼠肝臟inos表達明顯升高，土木香內酯治療組明顯降低了inos表達。

實驗例2：土木香內酯對d-galn誘導的小鼠急性肝損傷的防護作用

雄性c57bl/6小鼠（18-20g）分4組：

（1）對照組：5只，小鼠每天腹腔注射生理鹽水0.15ml，連續7天，第7天腹腔額外注射生理鹽水0.15ml。

（2）d-galn組：9只，小鼠每天腹腔注射生理鹽水0.15ml，連續7天，第7天腹腔注射d-galn（0.15ml，800mg/kg）。

（3）土木香內酯低劑量組：9只，小鼠每天腹腔注射土木香內酯（0.15ml，0.75mg/kg），連續7天。第7天腹腔注射d-galn（0.15ml，800mg/kg）。

（4）土木香內酯高劑量組：9只，小鼠每天腹腔注射土木香內酯（0.15ml，1.5mg/kg），連續7天。第7天腹腔注射d-galn（0.15ml，800mg/kg）。

d-galn注射16小時后處死小鼠，采集血清檢測ast和alt活力，取肝臟標本，一部分固定后石蠟包埋進行組織學檢測，一部分進行實時定量pcr檢測，測定inos的表達水平。

實驗結果：

（1）從圖4得知，和對照組相比，d-galn組小鼠肝臟組織結構紊亂，可見細胞氣球樣變及壞死。和d-galn組相比，土木香內酯有效降低了肝臟組織損傷，肝臟組織完整，肝細胞變性和壞死明顯好轉，其中高劑量土木香內酯組未見明顯肝細胞變性和壞死。

（2）ast及alt活力

從圖5得知，和對照組小鼠相比，d-galn組小鼠血清ast及alt表達明顯升高，土木香內酯治療組明顯降低了血清ast及alt表達。

（3）inos表達

從圖6得知，和對照組相比，d-galn組小鼠肝臟組織inos表達明顯增高，土木香內酯有效降低了肝臟inos表達（p＜0.01）。

結論:土木香內酯能有效抑制p.acnes/lps和d-galn引起的小鼠肝臟損傷，可以用來制備抗肝臟損傷藥物。