專利名稱：疫苗效力促進物和效力擴增食物的制作方法
技術領域：
本發明涉及疫苗效力增強劑，包括作為有效成分的IgA生產促進物，如屬于雙歧桿菌屬的細菌，具有良好的IgA生產增強效力，另外還涉及效力增強食物。
每年，不僅在發展中國家，而且在發達國家，都有許多患者患有由病原病毒引起的傳染性疾病。而且，這種疾病是嬰幼兒和兒童死亡的主要原因。
例如，每年有數百萬包括嬰幼兒在內的受害者傳染上輪狀病毒傳染的疾病。在日本，每隔幾年，流感便大規模流行。為了治療這些傳染性疾病，已用病毒抗原研制了各種類型的抗病毒藥物和疫苗。
然而，對于特定類型的病原病毒，任何適當的抗病毒藥物或疫苗的研制都從未成功過。
使用集合淋巴結細胞，本發明人已研制出一種檢測物質的方法，該物質促進在生物防御中有用的分泌性IgA的生產。用該方法，已發現一種IgA生產促進物。它含有作為其有效成分的，具有良好IgA生產促進作用的雙歧桿菌屬細菌(日本公告專利申請No.280059/1990)。
本文所用的術語“具有良好IgA生產促進作用的IgA生產促進物”指在上文提到的檢測方法中，在培養7天以上的培養溶液中，從IgA產生性細胞分泌的分泌性IgA量與未加被檢測物質(培養前)組的分泌性IgA量的指數比例不小于12。
為了進一步增強IgA生產促進物的IgA生產促進效能，進行了一種使雙岐桿菌原生質體化的嘗試，即將其細胞質膜去掉，(日本公告專利申請No.139469/1991)。
本發明人發現，當屬于雙岐桿菌屬并具有良好IgA生產促進作用的細菌與疫菌(病原病毒抗原)一起服用，可顯著地增加與病毒抗原相對應的特異性抗體的生產量，由此增強預防傳染的效果。
本發明目的是提供一種疫菌效力增強劑，其中，當病原病毒疫苗與增強劑一起給藥時，可以增強疫苗的效力，同時也提供含所述增強劑的效力增強的食物。
根據本發明的一方面，特別是如權利要求1中所述的，疫苗效力增強劑含有作為有效成分，具有IgA生產促進作用的IgA生產促進物，以便當其與疫苗一起給藥時，可增強與疫苗中抗原相對應的抗體的生產，從而增加疫苗的效力。它也極可能抑制疫苗的副作用。
如已知的，疫苗含細菌或病毒抗原，并用于誘導抗傳染性疾病的免疫力。當具有IgA生產促進作用的IgA生產促進物與疫苗一起給藥時，該促進物刺激IgA生產細胞如集合淋巴結細胞(PP細胞)，促進分泌性IgA的生產。同時，也增加了與疫苗中所含抗原相當的抗體的生產，由此，誘導預防免疫性，并提高了疫苗的效力。
特異性IgA生產促進是具有良好IgA生產促進作用并用前述日本公告專利申請No.280059/1990公開的方法得到的那些，所述方法用于檢測具有良好的誘導IgA能力的物質。該方法包括無菌培養含大量IgA生產細胞的PP細胞，將被檢測物質的溶液或懸浮液加到培養溶液中，將所得的混合物培養已給定的一段時間，測量溶液中從IgA生產細胞分泌的分泌性IgA的數量，然后根據加有物質組的分泌性IgA的數量與未加物質組分泌性IgA數量的比例，選擇性地收集具有IgA誘導能力的物質。
根據本發明優選的實施方案，IgA生產促進物表現出上述所說IgA生產促進作用，在培養7天以上后，在培養溶液中從IgA生產分泌的分泌性IgA數量與未加被測物質(培養前)組的分泌性IgA數量的指數比率(增加率)，例如，不小于12。上述促進物有顯著的效果。
根據本發明另一優選的實施方案，特異性的疫苗效力促進物含有作為其有效組分的具有良好IgA生產促進效力的雙岐桿菌屬細菌。
具體的實例包括來自人的菌株，如青春雙岐桿菌，角雙岐桿菌(Bifidobacteriumangulatum)，雙岐雙岐桿菌，短雙岐桿菌，鏈形雙岐桿菌(Bifidobacteriumcatenulatum)，Bifidobacteriumgallicum，幼兒雙岐桿菌，長雙岐桿菌，假鏈形雙岐桿菌(Bifidobacteriumpseudocatenulatum)，等。
此外，實例還包括來自動物的菌株，如動物雙岐桿菌(Bifidobacteriumanimalis)，Bifidobacteriumboum，Bifidobacteriumchoerinum，Bifidobacteriumcuniculi，牙雙岐桿菌(Bifidobacteriumdentium)，Bifidobacteriumgallinarum，Bifidobacteriummagnum，Bifidobacteriummerycicum，微小雙岐桿菌(Bifidobacteriumminimum)，假長雙岐桿菌假長亞種，假長雙岐桿菌渾園亞種，Bifidobacteriumpullorum，反芻雙岐桿菌(bifidobacteriumruminantium)，Bifidobacteriumsaeculare，豬雙岐桿菌，嗜熱雙岐桿菌，等。
除此以外，還可以是來自昆蟲的菌株，如星狀雙岐桿菌，Bifidobacteriumcoryneforme，Bifidobacteriumindicum，Bifidobacteriumsubtile等。不用說，可用的菌株并不限于上文提及的那些。
雙岐桿菌屬優選的菌株包括來自人的，其中長雙岐桿菌YIT4062菌株(寄存于1989，4，19，FERMNo.2822)，短雙岐桿菌YIT4063菌株(以FERMNo.2823于1989，4，19寄存)，短雙岐桿菌YIT4064菌株(以FERMNo.2824于1989，4，19寄存)是更優選的。這些菌株對疫苗表現出良好的增效作用。
認為根據本發明的疫苗效力的增強劑表現出如下的增強作用即IgA生產促進物如一種雙岐桿菌菌株按這樣的方式主要在腸內表現出其作用，即促進物的有效成分可作用于PP細胞。同時認為，所得的IgA被轉移至身體各部位，特別是可表現其作用的系統粘膜組織。從這種意義上說，疫苗的運作機制并不是僅限于腸。
然而，由于有關分泌性IgA的生產細胞不僅存在于PP細胞，而且在粘膜細胞中也有，認為對于由粘膜的口腔，呼吸系統和消化系統進入而引起的粘液傳染性疾病表現出現好的疫苗增效作用。
由于借助本發明促進物生產的IgA可系統性地表現出其功能，所以從直接刺激PP細胞及便于給藥觀點看，認為將其與口服型疫苗一起給藥，對于施用傳染性疾病的疫苗包括經皮接種，皮下注射，口服是非常有效的。
若使用經皮和皮下疫苗，要極其注意安全性，如對高純度的要求。從有效性的立場出發，還未進入實用階段的口服疫苗，若將其與本發明的增效劑結合起來，則可能提供易于處理且安全性高的口服疫苗。
此外，由于還未研制出任何供臨床應用的針對傳染性疾病疫苗，若與本發明的增效劑結合使用；極可能研制出抗這類疾病的有效疫苗。從這種意義上說，不應將可與本發明增效劑結合使用的疫苗限于目前正研制的那些。
可用本發明的效力增強劑抵抗的傳染性疾病包括由輪狀病毒，脊髓灰質炎病毒，流感病毒，甲型和乙型肝炎病毒引起的疾病，和經粘膜感染的愛滋病病毒。尤其是，對于輪狀病毒和流感病毒的作用極其顯著。可以將各種類型的疫苗結合使用，包括殺死的疫苗(失活疫苗)，使用減毒菌株的疫苗(活疫苗)，使用部分細菌結構的疫苗(組分疫苗)等。
屬于雙岐桿菌的菌株，作為本發明增效劑的有效組分，可以是活的或殺死的。另外，如通過形成原生質體，除去細胞膜(日本公告專利申請No.139469/1991)，自溶處理(日本公告專利申請No.46094/1993)及其它不失去增效作用的處理方法對其進行處理，以增強其IgA生產促進作用。
可將作為本發明增效劑主要成分的雙岐桿菌菌株用于食品如普通發酵奶，并且沒有安全問題。因此，數量并不重要，且一般從每劑，10mg到10g，一天可數劑。口服劑是最佳的。
根據本發明的其它實施方案，以發酵奶或飲料的形式使用雙岐桿菌菌株，可以在施用疫苗之前或之后施用它們的利用其作為一種食物增強疫苗的效力。
圖1.圖解表示由不同天數大的乳鼠感染后，腹瀉發生率與天數變化的關系。
圖2.圖解說明活體內的粘液免疫機制；圖3.圖解表示小鼠血清中的免疫球蛋白量與小鼠年齡變化的關系；圖4.圖解說明本發明實施例中所用的檢測程序；圖5.圖解說明另一實施例中所用的檢測程序；和圖6.圖解說明在本發明其它實施例中所用的其它檢測程序。
實施例A(輪狀病毒感染抑制作用)1.制備已感染的小鼠模型系統使用可在MA-104細胞中生長良好的輪狀病毒，用該病毒很容易感染的其它動物種，并使用表現出短雙岐桿菌(下文縮寫為B.breve)YIT4064(FERM保藏號No.2824)最高IgA誘導活性的BALB/C小鼠制備輪狀病毒感染的模型小鼠。
所用的輪狀病毒是一種來自猴的SA-11菌株(A類Ⅲ型)。用輪狀病毒感染的小鼠由經11至19周齡的雌性BALB/C小鼠和7至15周齡的雄性BALB/C小鼠雜交并生出的乳鼠組成。
以下列方式給乳鼠施用輪狀病毒，以每20微升2×106PFu的量，分別給4天齡、5天齡，8天齡和12天齡的每頭乳鼠口服輪狀病毒SA-11，然后每天觀察這些小鼠是否患有腹瀉。
圖1是當給不同天齡的乳鼠施用輪狀病毒后，表示腹瀉發生率的圖。如圖中所示，當以2×106PFu分別給4天齡；5天齡和8天齡小鼠施用輪狀病毒SA-11后，在第三天，均觀察到所有小鼠腹瀉。對于12天齡小鼠，腹瀉的發生率僅為30%。在第5或第6天，完全治愈了小鼠的腹瀉，表明腹瀉是暫時性的。
從上述看出，甚至對于8天齡的乳鼠，以2×106PFU口服SA-11會100%發生腹瀉。因此，通過用輪狀病毒感染8天齡或更小的乳鼠，可以提供輪狀病毒感染的模型小鼠。
2.乳鼠產生抗體的能力圖2是一個說明性的圖，圖解說明體內的粘液免疫機制。如在圖中特別說明的，不同的粘液組織相互有關聯。在腸內被刺激并分化成IgA生產細胞的細胞被轉移至粘液組織如乳腺，上呼吸道，腸固有層粘膜，由此分泌分泌性IgA。
因此，認為僅在成年小鼠中，發現了(具有IgA生產促進作用的)短雙岐桿菌YIT4064的IgA抗體生產增強作用。通過測量血清中的免疫球蛋白，已經實驗確定(可作為感染模型小鼠的)8天齡或更小小鼠的抗體生產能力的成熟值。
按ELISA方法測量抗體值，其中測量抗-SA-11，IgA，IgM和IgG抗體和總IgA，總IgM和總IgG抗體的量。更具體地說，以0.1μg的濃度，用碳酸鹽緩沖液(PH9.6)，將用氯化銫純化的SA-11包被在ELISA平板，加入樣品和超免疫血清，接著加入不同類型的酶抗體。根據底物的顯色程度確定抗-S-11，IgA，IgM和IgG抗體的量。以u數表示抗-SA-11抗體，其中，取超免疫血清稀釋液的某一值為一個單位，用絕對值表示抗體的總量。
圖3是表示血清中免疫球蛋白量與(以天計)年齡變化的關系圖。如圖3中所示，若在雌親的血清中，分別檢測到高水平IgA和IgM，但在甚至15天齡的乳鼠中，均未檢測到它們。在出生時，即檢測到與雌親量相等的IgG。其中，3天齡到15天齡小鼠的IgG量超過其雌親。認為其原因是經胎盤和乳汁轉移了雌親的IgG。
從上述看出，通過直接給乳鼠施用短雙岐桿菌YIT4064，不可能檢測感染抑制作用。因此，考慮到疫苗和作為疫苗效果增效劑的雙岐桿菌菌株的施用效果，將作為疫苗的抗原施用給用作感染模型的乳鼠的雌親。然后，給乳鼠哺乳，確認與施用疫苗有相同的效果，由此提供保護乳鼠免于輪狀病毒感染的系統。
實施例B(疫苗增效作用)1.短雙岐桿菌YIT4064的被動免疫增效作用；借助短雙岐桿菌YIT4064，通過活化雌親的免疫機制，確定乳鼠的抗輪狀病毒感染的保護系統。更具體地說，按幾種方法，接種輪狀病毒SA-11(用uV照射滅菌活細胞)免疫雌親，短雙岐桿菌YIT4064的施用引起免疫活化作用，并檢測由用SA-11免疫的雌親哺乳的乳鼠，在腹瀉發展中有怎樣的致變。
圖4是表示本實施例中檢測程序的說明圖。在該圖中，特別表示了特定的方式，包括施用短雙岐桿菌YIT4064，免疫，飼養，交配，分娩，給乳鼠施用SA-11，取奶和血清樣。
將0.5%熱殺死的細菌短雙岐桿菌YIT4064加到飼料(MM-3)中，并允許雌親自由攝取該飼料，而實現短雙岐桿菌YIT4064的口服給藥。可用下列三種方法免疫雌親，包括一種對雌親沒有進行免疫方法(組1和2)，一種是接種一次1×106PFu SA-11活細胞(組3.4)，接種三次由uv照射滅菌的1×106PFu SA-11細胞(組5.6)。
應注意，在組1到4分娩前，13個星期以上，持續口服短雙岐桿菌YIT4064(0.05%)。對于組5，6，分娩前，服用短雙岐桿菌YIT4064 10個星期以上，分娩后，繼續服用。給5天齡的乳鼠施用SA-11(2×106PFu)，然后每天觀察腹瀉的發展情況。
表1說明給乳鼠施用SA-11的結果。如表1中所示，在所有免疫情況下，均表現出由口服短雙岐桿菌YIT4064的雌親乳汁而產生的被動保護作用。對于組4，表現出很高的被動保護作用。
表1在由口服短雙岐桿菌YIT4064的雌親雜交并哺育的乳鼠中，抗SA-11誘導的腹瀉的被動保護作用
*1)未免疫接種*2)1×106PFU，一次，活細菌*3)1×106PFU，三次，由uv照射殺死的細菌從上述結果明顯看出，由攝取短雙岐桿菌YIT4064的雌親的奶哺育的小鼠比由未攝取任何短雙岐桿菌YIT4064的雌親喂養的小鼠有更強的抗輪狀病毒感染的抗性。
2.施用短雙岐桿菌YIT4064，增加奶和血液中的抗體按ELISA方法測量雌親奶和血液中抗體值和抗體的總量。
表2中表示雌親奶中的抗體值和SA-11的抗體總量(分娩前9到12天前口服106PFu SA-11，一次免疫接種的雌親分娩后9天)。如表2所示，施用短雙岐桿菌YIT4064，只明顯提高了SA-11的IgA抗體值。
表2在哺養來自口服SA-11免疫并飼喂短雙岐桿菌YIT4064的雌親的乳鼠的奶中的抗體滴定度。
*P＜0.05，n=5
表3中列出了雌親血液中的抗體值(在分娩前9到12天前，通過口服1×106PFu SA-11，而免疫一次的雌親分娩后的9天)。如表3所示，對于不同類型(IgA，IgM，IgG)沒有看出通過施用短雙岐桿菌YIT4064，明顯提高了SA-11的抗體值。
表3用SA-11免疫并飼喂短雙岐桿菌YIT4064的雌親繁殖并哺育的乳鼠血清中的抗體滴定度
從上述看出，給雌親口服短雙岐桿菌YIT4064，會導致奶中SA-11的IgA抗體值的增加。
實施例C(對流感病毒的影響)用鼠集合淋巴結(PP)細胞的體外檢測系統測量抗流感病毒的抗體增加率。
將短雙岐桿菌YIT4064(100μg/mL)加至帶流感病毒HA抗原(0，0.34，或3.4μg蛋白質/ml)的PP細胞(2.5×106mL)培養物中，第二天離心分離，以除去加入的流感病毒HA抗原，將PP細胞再培養6天。
用ELISA方法測量培養6天后，得到的上清液中IgA，IgG和IgM的量。結果列于表4。
由含鼠短雙岐桿菌YIT4064的鼠PP細胞產生的抗流感病毒HA抗體的增強作用
*P＜0.001
如表4中所示，從中可以看出，若將短雙岐桿菌YIT4064加至PP細胞培養物，明顯生產了抗流感病毒HA抗原的IgA。
實施例D(對流感口服疫苗的增強作用，體內)為了證明短雙岐桿菌YIT4064的流感口服疫苗增效作用，口服流感HA抗體(對照)或HA抗原和短雙岐桿菌YIT4064(4064服用組)以測量血清，唾液和鼻及肺洗液中的抗流感抗體值，由此比較彼此的測量結果。
實驗過程如下所用的實驗動物是5周齡的BALB/C雌性小鼠。
以下列方式口服短雙岐桿菌YIT4064，即使小鼠隨意攝取其中加有0.5%熱殺死的短雙岐桿菌YIT4064細胞的MM-3飼料。用MM-3飼料作對照。
所用的抗原是流感病毒血細胞凝集素(HA)疫苗(由MicroorganismResearchLab.ofOsakaUniversity，Japan生產)。在下面表5中列出了疫苗的病毒菌株及1mL的各疫苗中HA的含量。應注意蛋白質的含量是0.3mg/mL。
表5A/Yamagata/32/89(H1NA)菌株*:300CCA/ml效價A/Beiging/352/89(H3N2)菌株*:250CCA/mlB/Bangkok/163/90菌株:250CCA/ml總和:800CCA/ml*蘇聯型A
**香港型A用胃探針口服抗原。抗原的經鼻施用是這樣實現的，腹膜內施用2.5mg異戊巴比妥鈉(由NipponShinyakuCo.，Ltd.，kyoto，Japan生產)進行麻醉，接著將10μL1.5μg抗原和10μg霍亂毒素B(CTB)(輔劑)的混合溶液滴入鼻孔。
按如下完成取樣腹膜內施用4μg氨甲酰膽堿(WakoJunyakuCo.，Ltd.，Japan)，收集所得的唾液作為樣品。此外，完全麻醉后，收集心臟血液，同樣收集鼻和肺洗液。
按實驗1(短雙岐桿菌YIT4064的流感口服疫苗增效作用)中的方法，口服150μg的HA抗原，從中檢測通過口服短雙岐桿菌是否提高了抗體的生產。
更具體地，如圖5所示，在5周齡時，開始給小鼠口服短雙岐桿菌YIT4064，然后在9星期，15星期，18星期，21星期，25星期和28星期大小時，口服HA抗原。另一方面，在13星期，17星期，20星期和30星期大小時，對小鼠血清進行取樣，并在23星期，24星期，26星期，27星期和29星期大小時，收集唾液。另外，在30星期大小時，對鼻和肺洗液進行取樣。
在實驗2(短雙岐桿菌的流感經鼻疫苗增效作用)，經鼻施用1.5μgHA抗原和5μgCTB，產生了抗體。以此為基礎，檢測經口服施用的短雙岐桿菌YIT4064是否能增強經鼻的接種。
更具體地說，如圖6所示，從給5周齡小鼠口服短雙岐桿菌YIT4064開始，接著在9星期和16星期大小時，經鼻施用HA抗原和CTB的混合溶液，然后單獨給22周齡小鼠口服HA抗原。另一方面，在13星期，18星期和30星期大小時，取血清樣，在13星期和18星期大小時，取糞便樣。此外，在24星期和28星期大小時，取唾液樣。
應注意，按ELISA方法測量血清，糞便和唾液中的抗體值。
用1∶200的超免疫血清稀釋液的測量值為1u，用u單位表示IgA抗-HA抗體值。類似地，用1∶200000的超免疫血清稀釋液的測量值為1u，將IgG抗-HA抗體表示為u單位。
通過設定上述所測量血細胞凝集抑制作用的條件，用含0.1%牛血清蛋白(BSA)和0.002%明膠的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)以1∶2逐步稀釋25μLHA疫苗，將25μL緩沖溶液與50μL0.2%人O型紅血細胞震蕩并混合，接著在室溫反應3小時，以確定血細胞凝集作用，從而確定血細胞凝集抑制作用。在可識別出血細胞凝集作用的終稀釋液的稀釋度為1∶256000，并取為1HAu。對于血細胞凝集抑制作用實驗，使用4HAu(稀釋度為1∶64000)的HA抗原。將HA疫苗(4HAu)加到25μ1以1∶2逐步稀釋的樣品中，然后在37℃反應1小時，再加入50μL0.2%人O型血紅細胞，在室溫過夜反應，以判斷血細胞凝集抑制作用。
表6列出了結果，表明短雙岐桿菌對抗-流感HA抗體生產的影響。如表6所示，施用3和6次后，短雙岐桿菌YIT4064-施用組的血清中，IgG抗-HA抗體值比對照組的該值明顯提高。但是，甚至在施用6次后，都未在各組之間發現施用6次后，血清中的IgA抗-HA抗體值有差異。
表6抗體施用次數抗體滴定度(u/ml)對照(n=10)YIT4064(n=10)18.9±710.5±7.6IgA210.1±9.612.8±4.4332.0±21.048.0±33.06178.0±195.0260.0±189.0153.0±157.032.0±52.0IgG2132.0±309.0305.0±348.03560.0±754.01651.0±1342.0*6754.0±622.03876.0±2983.0****P＜0.02，*P＜0.05表7列出了短雙岐桿菌YIT4064對唾液中抗-流感抗體生產的影響。如表7所示，短雙岐桿菌YIT4064施用組唾液中的IgA抗-HA抗體值似乎比對照組高，但未看出有顯著差異的大變化。
表7抗體類型施用抗體滴定度(u/mL)對照(n)YIT4064(n)4-10.2±0.5(9)0.7±0.9(9)-20.8±0.4(10)2.5±3.2(10)IgA5-10.7±0.6(10)2.0±1.9(9)-21.1±0.8(10)2.4±2.3(10)60.6±0.6(10)1.2±1.0(10)另外，表8列出了在施用抗原6次后，短雙岐桿菌YIT4064對不同樣品抗-流感HA抗體生產的影響。如表8中所示，施用6次HA抗原后，短雙岐桿菌YIT4064-施用組鼻洗液中的IgA抗-HA抗體值比對照組明顯提高。在肺洗液中的IgA抗-HA抗體值，短雙岐桿菌YIT4064一施用組趨于提高，但未看到有顯著的差異。對于血清中的IgG抗-HA抗體，施用短雙岐桿菌YIT4064發現有顯著的提高。
表8樣品,抗體類型抗體滴定度(u/mL)對照(n)YIT4064(n)血清IgA178±195(10)260±189(10)IgG754±622(7)3876±2983**(9)肺洗液IgA2.08±1.17(9)3.25±1.57(10)鼻洗液IgA0.14±0.13(8)1.35±1.37*(10)**P＜0.02，*P＜0.05如上文說明的，短雙岐桿菌YIT4064能提高同時口服的抗HA抗原抗體的生產，同時增加上呼吸道的IgA及血清中的IgG抗-HA抗體。短雙岐桿菌甚至能在自然發生口腔感染時，改善抗體的生產，從中可推斷，短雙岐桿菌YIT4064能提高抗后來感染的保護能力。
實施例E(增強疫苗作用的食物)1.培養短雙岐桿菌YIT4064菌株并收集培養的細菌及制備殺死的細胞產物的方法將YIT4064菌株接種于由乳糖(5.5wt%)，酵母提取物(1.0wt%)及脫脂奶粉(1.0wt%)組成的培養基中，于37℃厭氧培養18小時，同時將PH調到5.5-6.0，然后離心分離，洗滌并收集所得的細菌。將由此收集的細菌在40℃到55℃，PH8.0處理1小時或更長并自溶，然后在100℃加熱30分鐘，然后凍干以得到殺死的細菌粉。
2烤一條(塊)面包的方法將300g小麥粉，4.5g食鹽，3g糖，3g豬油，9g面包酵母，10g殺死的細菌產品和180g水混合，并放在模子中，然后烘烤以制成摻有雙岐菌的面包。
3制餅干的方法將100g小麥粉，10g糖，18g起酥油，1g食鹽，1.2g焙烤粉，5g轉化糖和5g熱殺死的細菌均勻地摻和，確定模型，并在烤箱中烘烤，以得到摻有雙岐菌的餅干。
4生產巧克力的方法在熱槽上，將180g巧克力塊，165g可可黃油，430g糖粉，220g非脫脂奶粉，5g卵磷脂，少量香料，15g熱致死的細菌攙合，接著冷卻定形以得到含雙岐菌的巧克力。
5生產透明的果味糖果的方法將180g糖，120g淀粉糖漿，3g有機酸，10g熱致死的細菌，和少量香料及著色劑攙和在約150℃煮沸，然后傾入模子，冷卻定型得到含雙岐菌的透明的果味糖果。
6生產調控奶粉的方法將脫脂奶加到原料乳中并標準化，然后以合適量加入糖，礦物質和維生素，滅菌，過濾并噴霧干燥以得到奶粉。將5%熱致死的細菌加到奶粉中以得到含雙岐菌的奶粉。
7發酵奶將短雙岐桿菌YIT4064菌株接種到熱奶培養基(15wt%脫脂奶，0.1wt%酵母提取物)中，在37℃培養直到培養基的PH達到4.6，然后冷卻并用勻漿器勻漿。另一方面，將嗜熱鏈球菌(streptococcusthermofiles)接種于熱滅菌的奶培養基(12′wt%脫脂奶)中并于37℃培養直到培養基的PH達到4.3用冰冷卻，用勻漿器勻漿。將兩種培養基和糖漿以1∶3∶1的比例混合以得到酸牛奶飲料。
權利要求
1.一種疫苗效力增強劑，含有作為其有效成分的具有IgA生產促進作用的IgA生產促進物，以增強致病毒疫苗的效力。
2.根據權利要求1的疫苗效力增強劑，其特征在于所述IgA生產促進物具有IgA生產促進作用，使得與集合淋巴結細胞一起培養的上清液中IgA的數量與培養前或沒有加入促進物的培養系統中IgA數量的比率提高。
3.根據權利要求1的疫苗效力增強劑，其中所述細菌選自長雙岐桿菌YIT4062菌株(FERM寄存號2822)，短雙岐桿菌YIT4063菌株(FERM寄存號2823)和短雙岐桿菌YIT4064(FERM寄存號2824)。
4.根據權利要求1的疫苗效力增強劑，其特征在于所述疫苗針對的傳染性疾病是粘液傳染性，病毒感染的疾病。
5.根據權利要求1的疫苗效力增強劑，其特征在于所述疫苗針對的傳染性疾病是輪狀病毒感染的疾病。
6.根據權利要求1的疫苗效力增強劑，其特征在于所述疫苗針對的傳染性疾病是流感病毒感染的疾病。
7.一種疫苗效力-增強食物，含有權利要求3中提到的雙岐桿菌屬的細菌。
8.一種疫苗效力增強劑，含有作為其有效成分的，具有IgA生產促進作用的雙岐桿菌屬細菌，以增強致病病毒疫苗的效力。
9.根據權利要求8的疫苗效力增強劑，其中所述細菌選自長雙岐桿菌YIT4062菌株(FERM寄存號2822)，短雙歧桿菌YIT4063菌株(FERM寄存號2823)和短雙岐桿菌YIT4064(FERM寄存號2824)。
10.根據權利要求8的疫苗效力增強劑，其特征在于所述疫苗針對的傳染性疾病是粘液傳染性，病毒感染的疾病。
11.根據權利要求8的疫苗效力增強劑，其特征在于所述疫苗針對的傳染性疾病是輪狀病毒傳染的疾病。
12.根據權利要求8的疫苗效力增強劑，其特征在于所述疫苗針對的傳染性疾病是流感病毒傳染的疾病。
13.一種疫苗效力-增強的食物，含有權利要求9中提到的雙岐桿菌屬細菌。
全文摘要
一種疫苗效力增強劑，含有作為其有效成分的具有IgA生產促進作用的IgA生產促進物。該促進物能夠增強致病病毒疫苗的效力。若施用含細菌或桿菌或病毒抗原并且具有誘導抗傳染疾病免疫性作用的疫苗時，IgA生產促進物剌激IgA生產細胞如集合淋巴結細胞以促進分泌性IgA的生產。總之，增強了抗疫苗中抗原抗體的生產，成功地誘導了保護性免疫并增強了疫苗的效力。另外，該增強劑能夠抑制疫苗的副作用。同時描述了含有促進物的效力增強食物。
文檔編號A61P31/12GK1109763SQ9411682
公開日1995年10月11日 申請日期1994年8月25日 優先權日1993年8月25日
發明者保井久子, 清島潤子, 牛島廣治 申請人:株式會社雅庫路特本社