一種microRNA在制備治療流感的藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物技術領域，具體的，涉及一種microRNA在制備治療流感的藥物中 的應用。
【背景技術】
[0002] microRNA(小RNA)是一段由20-24個堿基組成的微小RNA，其在植物、動物、微生 物以及部分病毒中廣泛存在。microRNA在體內的作用主要是通過轉錄后調節的方式對靶 mRNA的翻譯過程進行調節。調節模式在不同物種中有所差異，在植物中microRNA主要和靶 標mRNA完全互補來調控mRNA翻譯，與此不同的是在動物體內microRNA只需要種子區序列 與靶基因mRNA序列互補配對即有可能對該基因進行調控。
[0003] 甲型流感病毒（Influenza A)是一類嚴重威脅人類健康的RNA病毒，甲型流感病 毒為常見流感病毒，最容易發生變異，甲型流感病毒的亞型則被人們稱為"禽流感"，禽流感 (Bird Flu)是由禽流感病毒引起的一種急性傳染病，病毒基因變異后能夠感染人類，感染 后的癥狀主要表現為高熱、咳嗽、流涕、肌痛等，多數伴有嚴重的肺炎，嚴重者心、腎等多種 臟器衰竭導致死亡，病死率很高。此病可通過消化道、呼吸道、皮膚損傷和眼結膜等多種途 徑傳播，人員和車輛往來是傳播本病的重要因素。
[0004] miR_23a位于人體第19號染色體上，與miR-24和miR_27a構成一個microRNA基 因簇。該microRNA基因簇擁有單獨的啟動子序列，能夠獨立進行轉錄。目前對于miR-23a 的研宄有報道認為其可以通過抑制轉錄因子PU. 1來抑制B淋巴細胞的發育和成熟。也證據 表明miR-23a可以靶向SHP2基因，通過降低SHP2表達來促進紅細胞的的生成。c-Myc作為 轉錄因子能夠和miR-23a基因簇上的啟動子區結合從而抑制該microRNA基因簇的轉錄達 到基因調節的功能。例如在腫瘤細胞中c-Myc抑制miR-23a的表達使得其祀標分子谷氨酰 胺酶上調最終影響癌細胞代謝。除了c-Myc信號通路之外，NFkb信號通路中的p65蛋白也 可以與miR-23a基因簇上的啟動子區結合抑制miR-23a的表達。近期也有研宄表明在激活 的⑶8陽性T細胞中miR-23a表達下調，而抑制miR-23a的表達能夠提高T細胞對腫瘤細胞 的殺傷能力。在人血管內皮細胞中miR_23a能夠通過革E1向Caspase7和STK4降低Caspase3 的水平從而抵抗由TNFa引起的凋亡作用。但是目前還沒有用miR_23a抑制流感病毒的相 關報道。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供一種抑制流感病毒的含有miRNA的藥物組合物，從而為治 療流感病毒提供一種有效途徑。
[0006] 流感病毒具有突變能力強的特點，因此特異性的靶向作用不足以應對流感病毒突 變。microRNA是一段小片段RNA其主要通過非完全匹配的方式來調芐基因表達，因此可以 有效避免由于病毒突變引發的脫靶作用。
[0007] 本發明的發明人在研宄抑制流感病毒的治療方法的過程中發現miR-23a具有抗 流感作用。
[0008] 因此，本發明提供了 miR_23a在制備治療流感的藥物中的應用。
[0009] 可選的，所述應用包括制備抗流感病毒的藥物。
[0010] 可選的，所述流感病毒為甲型流感病毒。
[0011] 可選的，包括將miR-23a與藥學可接受的載體復配制成藥物組合物。
[0012] 可選的，所述藥物組合物以mir-23a為活性成分。
[0013] 可選的，所述藥物組合物含有miR-23a和藥學可接受的載體。
[0014] 可選的，所述組合物還含有治療和/或預防流感的其它活性成分。
[0015] 可選的，所述載體為inviv〇-jetPEI〇
[0016] 本發明所提供的藥物組合物能夠通過miR_23a來抑制流感病毒以減輕流感病毒 的致死率，可以降低由病毒突變帶來的負面影響。
【附圖說明】
[0017] 圖1為miR_23a的激動劑和拮抗劑對C57小鼠體重的影響。
[0018] 圖2為miR-23a的激動劑和拮抗劑對C57小鼠體溫的影響。
[0019] 圖3為miR-23a的激動劑和拮抗劑對C57小鼠生存率的影響。
【具體實施方式】
[0020] 下面將通過【具體實施方式】對本發明進行詳細說明。
[0021] 在本發明中，術語"miR-23a "是指包含miR-23a的RNA序列或其同源序列的微 小RNA。本領域中已知各種來源的miR-23a，例如，人、鼠、兔等，這些同源序列均包含在本 發明的術語miR-23a中。本發明的術語中還包含上述天然存在的miR-23a序列經取代、缺 失或添加一個或幾個核苷酸，或經過生物學化學修飾后仍具有miR-23a生物活性的衍生 RNA。本發明中，人工合成的以及可以通過購買市售商品方式獲得的具有miR-23a生物學活 性的miR-23a模擬物也屬于本發明的保護范圍。例如，一種本領域公知的miR-23a模擬物 miR-23aagomir 的序列如 SEQ ID No. 1 所示（吉瑪基因，目錄號：B06001) :AUCACAUUGCCAGG GAUUUCCAAAUCCCUGGCAAUGUGAUUU
[0022] 此外，本發明所述的miR-23a也可以為前體形式，miR-23a前體是指在被施用對象 的細胞內或體內可以被加工成為miR-23a的前體。獲得天然存在的miR-23a前體的方法為 本領域技術人員所公知。
[0023] 本領域技術人員公知，miR-23a的編碼基因位于人體第19號染色體上，與miR-24 和miR-27a構成一個microRNA基因簇。其初始轉錄產物經過一系列的加工后，形成成熟的 miR-23a。miR-23a前體只有在加工成成熟的miR-23a后才具有相應的生物學功能。
[0024] 本發明所提供的組合物可以用于預防和/或治療流感病毒感染、以及由流感病毒 感染引起的相關癥狀和疾病。所述組合物中含有有效量的本發明的miR-23a。
[0025] 在本發明中，所述藥物可接受的載體包括各種賦形劑、稀釋劑和佐劑。載體其本身 并不是必要的活性成分，且使用后沒有過分的毒性。這類載體包括但不限于：生理鹽水、緩 沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇等。
[0026] 在本發明的一種實施方式中，所述載體為inviv〇-jetPEI，miR_23a與該載體的混 合比例范圍為1 y g :〇. 15-0. 2 y 1，優選的比例為1 y g:0. 2 y 1.
[0027] 在本發明的一種實施方式中，所述組合物的形式適合于：直接裸RNA注射法、脂質 體包裹RNA直接注射法、繁殖缺陷細菌攜帶質粒DNA法或復制缺陷腺病毒攜帶目的DNA法 等。
[0028] 本發明的miR_23a的有效劑量可以隨給藥的模式和待治療的疾病的嚴重程度等 進行相應的調整。優選的有效量的選擇可以由本領域普通技術人員綜合各因素來確定。所 述因素包括但不限于：miR-23a的藥代動力學參數、被治療的患者的健康狀況、體重、給藥 途徑等。
[0029] 在本發明的一種實施方式中，該藥物組合物主要劑型為等滲葡萄糖水溶液，大致 在疾病發展中期階段給藥，每兩天給藥一次，每次給藥按照miR-23a核酸劑量38-42 y g進 行。
[0030] 本發明中，所述藥物組合物的給藥途徑為靜脈內、動脈內灌注或局部注射等，也可 以采用本領域技術人員所熟知的給藥技術進行給藥。
[0031] 本發明的藥物組合物可以與其它治療手段聯合，用于流感病毒的預防和治療。
[0032] 實施例1
[0033] (1)實驗材料：所用C57小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司；miR_23a 激動劑（miR_23a agomir，目錄號：B06001)和詰抗劑（miR_23a antagomir，目錄號： B05001)均購自吉瑪基因。
[0034] (2)共3組實驗，每組10只小鼠分別于病毒感染流感病毒A/WSN/33(H1N1)前1天 以及感染后第1、3、5、7天注射agomir和antagomir，注射劑量為20D/只/次（200微升尾 靜脈注射），流感病毒通過滴鼻方式接種，接種劑量為2500pfu/只
[0035] (3)每日監測小鼠體重體溫變化情況，統計流感病毒對小鼠體重變化和體溫變化 的影響（結果如圖1和2)以及致死率的影響（結果如圖3)。
[0036] 雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述，但在 本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因 此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發明要求保護的范圍。
【主權項】
1. miR-23a在制備治療流感的藥物中的應用。2. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述應用包括制備抗流感病毒的藥物。3. 根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述流感病毒為甲型流感病毒。4. 根據權利要求1或3所述的應用，其特征在于，包括將miR-23a與藥學可接受的載體 復配制成藥物組合物。5. -種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物以miR-23a為活性成分。6. 根據權利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物含有miR-23a和藥 學可接受的載體。7. 根據權利要求5或6所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物還含有治療和/或 預防流感的其它活性成分。8. 根據權利要求5或6所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物可接受的載體為in viv〇-jetPEI〇
【專利摘要】本發明涉及miR-23a在制備治療流感的藥物中的應用。以及一種以miR-23a為活性成分的藥物組合物，本發明所提供的藥物組合物能夠通過miR-23a來抑制流感病毒致病的過程。
【IPC分類】A61K31/7088, A61K31/7105, A61K48/00, A61P31/16
【公開號】CN104940955
【申請號】CN201510425041
【發明人】李向東, 劉原伍
【申請人】中國農業大學
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2015年7月17日