新的病毒增殖抑制劑/殺病毒方法,以及新的吡嗪核苷酸/吡嗪核苷類似物的制作方法

專利名稱：新的病毒增殖抑制劑/殺病毒方法,以及新的吡嗪核苷酸/吡嗪核苷類似物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種病毒生長抑制和/或殺病毒方法，其特征在于它使用通過激酶產生的吡嗪核苷酸或吡嗪核苷類似物或其鹽；一種新的吡嗪核苷酸或吡嗪核苷類似物或其鹽和一種使用它們治療病毒感染的方法。
背景技術：
已認識到感染性病毒疾病(例如流感感染、皰疹病毒感染、獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)、病毒性肝炎、病毒性出血熱等)是重要的醫學問題，并已對其治療進了大量的研究，例如使用疫苗進行的疾病預防或使用藥物進行治療的方法。迄今已研制出許多具有嘌呤堿基和嘧啶堿基的核酸及其衍生物作為用于藥物治療病毒感染的試劑。這些試劑的作用機理是它們在細胞中三磷酸化并抑制病毒聚合酶。這些試劑的實例包括疊氮基胸腺嘧啶和阿昔洛韋[Proceedings of the NationalAcademy of Science of the United States of America(Proc.Natl.Acad.Sd.USA)，第83卷，第8333-8337頁(1986)；相同的出版物，第74卷，第5716-5720頁(1977)]。
而且，已報道在對應于核酸堿基的部分轉化成非天然的化學結構時表現出抗病毒作用的化合物的活性形式是通過在細胞內轉化化合物得到的一磷酸化形式，而且它抑制肌苷一磷酸脫氫酶(IMPDH)，從而表現出作用。這種化合物實例包括利巴韋林和EICAR[Proceedings ofthe National Academy of Science of the United States of America(Proc.Natl.Aced.Sci.USA)，第70卷，第1174-1178(1973)；TheJournal of Biological Chemistry(J.Biol.Chem.)，第268卷，第24591-24598頁(1993)]。
而且作為含有吡嗪作為堿基的核苷和核苷酸類似物的實例，已知以下的通式化合物 其中R16代表氫原子、甲基或癸基。但是這種化合物表現出無抗病毒活性(無抗綿羊脫髓鞘性腦蛋白質炎病毒活性)[Nucleosides &Nucleotides，第15卷，第11和12期，第1849-1861頁(1996)]。另一方面，具有被氨基甲酰基取代的吡嗪環的核苷和核苷酸類似物是未知的。

發明內容
本發明的一個目的是提供一種高度安全的低毒性抗病毒劑，所述抗病毒劑在對應于核酸的堿基部分具有非天然化學結構；本發明還提供一種使用所述抗病毒劑的新的病毒生長抑制和/或殺病毒方法。
本發明者已發現，以下通式[1]代表的吡嗪核苷酸或吡嗪核苷類似物或其鹽
其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；A代表氧原子或亞甲基；Y代表氧原子或亞氨基；而n代表0-3的整數。特別地，一種三磷酸化吡嗪核苷酸類似物或其鹽表現出高度安全的、優越的病毒生長抑制和/或殺病毒作用并具有低毒性，它抑制病毒聚合酶，特別是直接抑制RNA聚合酶或抑制其在體內轉化的物質的形式。
而且，本發明者已發現一種在體內或細胞內水解或分解以下通式[2]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽的新方法 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、A和Y中的每一個具有與上述相同的含義；而磷酸或膦酸中的R7和R8各自獨立地代表保護或未保護的、取代或未取代的的羥基，所述羥基在生理條件下分解，然后通過激酶如核苷酸激酶的作用誘導如此得到的產物成為通式[1]代表的吡嗪核苷酸或吡嗪核苷類似物代表或其鹽，以使其表現出病毒生長抑制作用和/或殺病毒作用。
而且，本發明者已發現以下通式[1z]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽
其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中每一個相同或不同地代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；R代表可以被在生理條件下分解的基團保護或取代的羥基；A代表氧原子或亞甲基；而n代表1-3的整數；它是這樣的一種化合物它生理條件下轉化，并以與通式[1]相同的方式抑制病毒RNA聚合酶，從而表現出病毒生長抑制作用和/或殺病毒作用。
任何上述的化合物在體內或細胞內轉化為以下通式[1y]代表的吡嗪三磷酸核苷酸(pyrazine triphosphate nucleotide)類似物 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；而Z10、Z11、Z12和Z13中每一個相同或不同地代表氫原子或羥基，且它表現出RNA聚合酶抑制作用。此外，以下所示的通式[1x]代表的化合物是一種在體內或細胞內轉化為通式[1y]代表的化合物的RNA聚合酶抑制劑前體
其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中每一個相同或不同地代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；A代表氧原子或亞甲基；Y代表氧原子或亞氨基；而m代表0-2的整數。
本發明的RNA聚合酶抑制劑前體抑制來源于病毒的RNA聚合酶，且其選擇性大于對來源于宿主的RNA聚合酶的選擇性。本發明的RNA聚合酶抑制劑前體可以這樣的選擇性抑制來源于病毒的RNA聚合酶所述選擇性優選比對來源于宿主的RNA聚合酶的選擇性高出200倍或更大，更優選1,000倍或更大，進一步更優選2,000倍或更大。而且，本發明的RNA聚合酶抑制劑前體幾乎不抑制肌苷一磷酸脫氫酶，并且它在體內轉化成為三磷酸化形式之后抑制病毒聚合酶。因此，本發明的RNA聚合酶抑制劑前體的特征是它在體內轉化之后具有極強的病毒聚合酶抑制作用，且它還具有高度選擇性，同時由抑制肌苷一磷酸脫氫酶導致的細胞毒性大大降低。利用這種高度選擇性可以獲得高度安全的試劑。
本發明的RNA聚合酶抑制劑前體對RNA聚合酶和肌苷一磷酸脫氫酶具有非常高的選擇性。在由以下通式[1w]代表的吡嗪核苷或吡嗪一核苷酸類似物結構中
其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中每一個相同或不同地代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；Y代表氧原子或亞氨基；而p代表0或1；所述前體在體內轉化之后對來源于病毒的RNA聚合酶的抑制作用與所述前體對來源于宿主細胞的肌苷一磷酸脫氫酶的抑制作用的比率優選為900∶1或更大，更優選為5,000∶1或更大，進一步更優選10,000∶1或更大。
本發明者已證明，當R1、R3和R5中的每一個為氫原子而R4z、R6z和Rz中的每一個為羥基時，例如在以下通式[3z]代表的吡嗪核苷酸衍生物中 其中R1、R2、R3、R5和Y中的每一個具有與上述相同的含義；Rz代表在生理條件下分解的保護或未保護的、取代或未取代的羥基；R4z和R6z中的每一個相同或不同地代表氫原子或可以被取代或保護的羥基，或者R4z和R6z一起代表可以被取代的表示為-O-亞烷基-O-的基團；并且在給動物施用這種化合物時，在動物的血漿中產生4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺(代替命名3，4-二氫-3-氧代-4-β-D-呋喃核糖基-2-吡嗪甲酰胺)。
而且，本發明者已證明，當給動物施用通式[3z]代表的吡嗪核苷類似物或其鹽如4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基-甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺時，在動物器官內產生{(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基三磷酸酯。
因此，本發明者已發現給哺乳動物施用通式[3z]代表的化合物或其鹽或給哺乳動物施用通式[2]代表的化合物或其鹽以在體內誘導通式[1]代表的吡嗪核苷酸或吡嗪核苷類似物的方法，表現出新的病毒生長抑制作用和/或新的殺病毒作用，從而完成本發明。
本發明的方法用作一種治療感染病毒的患者的方法，所述方法包括給感染病毒的患者施用上述吡嗪核苷酸或吡嗪核苷類似物或其鹽如通式[3z]代表的化合物或其鹽的步驟。更為具體地，本發明的方法還包括將以上的化合物或其鹽轉化為通式[1y]代表的吡嗪三磷酸核苷酸類似物的步驟。
而且，優選在感染病毒的患者的體內通式[3z]至通式[1y]代表的吡嗪三磷酸核苷酸類似物的轉化經過以下通式[1v]代表的吡嗪核苷酸類似物
其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；而Z10、Z11、Z12和Z13中的每一個相同或不同地代表氫原子或羥基。通式[1v]代表的吡嗪核苷酸類似物的特征是它基本上不抑制肌苷來源于宿主細胞的一磷酸酯脫氫酶。而且，通式[1y]代表的吡嗪三磷酸核苷酸類似物的特征是它抑制來源于病毒的RNA聚合酶的選擇性大于抑制來源于宿主的RNA聚合酶的選擇性。
而且，作為本發明者對本發明的代表性化合物4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺進行深入研究的結果，他們發現4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺一水合物在制藥過程中具有良好的穩定性。此水合物是一種在用常規方法進行制藥的過程中穩定存在的結晶，并且它的飛散性小，且與酐相比不粘附在設備上。因此它能夠良好地混合和制粒。
濕法制粒一般用作制藥過程中的制粒。在這種濕法制粒過程中，一般使用水和含有粘合的水溶液。但是，已知在使用酐的時候，部分酐依賴于條件地轉化成水合物。而且，在此過程中產生的無定形物質造成制藥或穩定性方面的問題。因此，當水合物作為結晶多晶形物存在時，由酐制備藥劑需要嚴格的條件。但是，一水合物是一種在常規的制藥過程中穩定的結晶，因而它是一種不造成上述問題的優秀的化合物。
此外，這種一水合物在最終的制備過程中不需要有機溶劑，但它可以用水結晶。因此，最終得到的結晶中殘留有機溶劑的風險是低的。而且，由于一水合物不需要有機溶劑，它不需要防爆裝置。因此，可以說這種化合物在制備工藝方面具有極大的優點。
以下將詳細描述本發明的化合物。
本發明的最佳實施方式分別地，在本說明書中，除非另外指出，鹵原子意指氟原子、氯原子和碘原子；烷基意指低級烷基，例如C1-5烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基和戊基；烷氧基意指低級烷氧基，例如C1-5烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基和戊氧基；烷氧基羰基意指低級烷氧基羰基，例如C1-5烷氧基羰基，如甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、異丙氧基羰基、正丁氧基羰基、異丁氧基羰基、仲丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、4-羥基丁氧基羰基和戊氧基羰基；烷基氨基意指，例如一-或二-C1-5烷基氨基，如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基和甲基乙基氨基；鹵代烷基意指，例如鹵代C1-5烷基如氟甲基、氯甲基、溴甲基、二氯甲基、三氟甲基、三氯甲基、氯乙基、二氯乙基、三氯乙基和氯丙基；氨基甲酰基烷基意指，例如C1-5氨基甲酰基烷基，如氨基甲酰基甲基、氨基甲酰基乙基、氨基甲酰基-正丙基、氨基甲酰基異丙基、氨基甲酰基-正丁基、氨基甲酰基異丁基和氨基甲酰基戊基；羧基烷基意指，例如C1-5羧基烷基，如羧基甲基、羧基乙基、羧基-正丙基、羧基異丙基、羧基-正丁基、羧基異丁基和羧基戊基；鏈烯基意指，例如C2-5鏈烯基如乙烯基和烯丙基；環烷基意指，例如C3-6環烷基如環丙基、環丁基、環戊基和環己基；環烷氧基意指，例如C3-6環烷氧基如環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基和環己氧基；芳基意指，例如基團如苯基和萘基；雜環基意指，例如含有至少一個選自氧原子、氮原子和硫原子的雜原子的4至6元或縮合雜環基如氮雜環丁烷基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、呋咱基、吡咯烷基、吡咯啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、1，3，4-噁二唑基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、噻三唑基基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吡喃基、嗎啉基、1，2，4-三嗪基、苯并噻吩基、萘并噻吩基、苯并呋喃基、異苯并呋喃基、色烯基、吲嗪基、異吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、喹啉基、異喹啉基、2，3二氮雜萘基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、異色滿基、苯并二氫吡喃基、吲哚啉基、異吲哚啉基、苯并噁唑基、三唑并吡啶基、四唑并噠嗪基、四唑并嘧啶基、噻唑并噠嗪基、噻二唑并噠嗪基、三唑并噠嗪基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、1，2，3，4-四氫喹啉基、咪唑并[1，2-b][1-2，4]三嗪基和奎寧環基；亞烷基意指，例如直鏈或支鏈C1-5亞烷基如亞甲基、亞乙基和亞丙基；烷硫基意指，例如直鏈或支鏈C1-5烷硫基如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、異丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基和戊硫基；芳氧基意指，例如芳基-O-代表的基團，如苯氧基和萘氧基；芳硫基意指，例如芳基-S-代表的基團，如苯硫基和萘硫基；芳基氨基意指，例如苯基氨基和萘基氨基；環烷基氨基意指，例如C3-6環烷基氨基如環丙基氨基、環丁基氨基、環戊基氨基和環己基氨基；酰基意指，例如C2-6烷酰基如甲酰基、乙酰基或丙酰基，芳酰基如苯甲酰基或萘甲酰基和雜環羰基如煙酰基、噻吩甲酰基、吡咯烷羰基或呋喃甲酰基；酰氧基意指，例如C2-6烷酰氧基如乙酰氧基或丙酰氧基，芳酰氧基如苯甲酰氧基或萘甲酰氧基和雜環羰氧基如煙酰氧基、噻吩甲酰氧基、吡咯烷羰氧基或呋喃甲酰氧基；芳基磺酰氧基意指，例如基團如苯基磺酰氧基和對甲苯磺酰氧基；烷基磺酰氧基意指，例如直鏈或支鏈C1-5烷基磺酰氧基如甲基磺酰氧基、乙基磺酰氧基、正丙基磺酰氧基、異丙基磺酰氧基、正丁基磺酰氧基、異丁基磺酰氧基、仲丁基磺酰氧基、叔丁基磺酰氧基和戊基磺酰氧基。
在說明書所述的通式中，R1的吡嗪環取代基包括選自以下的基團鹵原子；可以被羥基、烷氧基、烷硫基、芳基、氨基或烷基氨基取代的烷基；可以被鹵原子取代的烷基或鏈烯基；環烷基；羥基；烷氧基；環烷氧基；烷氧基羰基；巰基；可以被芳基取代的烷硫基；芳基；芳氧基；芳硫基；芳基氨基；氰基；硝基；可以被酰基取代的氨基；烷基氨基；環烷基氨基；酰基；羧基；氨基甲酰基；硫代氨基甲酰基；烷基氨基甲酰基；和雜環基。而且一個或多個這樣的基團可以被取代。
Rz的羥基的保護基和取代基包括，例如可以被取代的酰基、低級烷氧基羰基和酰氧基烷基，更具體地為可以被取代的酰基，例如乙酰基、丙酰基、戊酰基、苯甲酰基、新戊酰基、2-氨基乙酰基、2-氨基丙酰基、2-氨基戊酰基和2-氨基己酰基；低級烷氧基羰基如甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、異丙氧基羰基、正丁氧基羰基、異丁氧基羰基、仲丁氧基羰基、叔丁氧基羰基和4-羥基丁氧基羰基；和酰氧基烷基如乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基、異丙酰氧基甲基、丁酰氧基甲基、異丁酰氧基甲基、戊酰氧基甲基、異戊酰氧基甲基、新戊酰氧基甲基和1-新戊酰氧基乙基。
R7和R8各自獨立地為在磷酸酯或膦酸酯上的在生理條件下分解的羥基的保護基或取代基，而在這種條件下可以分解的R基團是，例如在Progress in Medicinal Chemistry，第34卷，第111-147頁(1997)，Elsevier Science B.V.和Current Medicinal Chemistry，第7卷，第995-1039頁(2000)中所述的磷酸酯或膦酸酯的保護基或取代基。特定的實例包括芳基如苯基、氯苯基、硝基苯基、氰基苯基、萘基；環水楊基(Saligenyl)如環水楊基(Saligenyl)、5-甲基環水楊基(Saligenyl)；酰胺化基團如甲氧基丙氨酸基和苯氧基丙氨酸基；鹵代乙基如三氯乙基；酰氧基烷基如乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基、異丙酰氧基甲基、丁酰氧基甲基、異丁酰氧基甲基、戊酰氧基甲基、異戊酰氧基甲基、新戊酰氧基甲基和1-新戊酰氧基乙基；酰氧基芐基如乙酰氧基芐基、丙酰氧基芐基、異丙酰氧基芐基、丁酰氧基芐基、異丁酰氧基芐基、戊酰氧基芐基、異戊酰氧基芐基、新戊酰氧基芐基；順式低級酰硫基烷基如乙酰硫基乙基、丙酰硫基乙基、異丙酰硫基乙基、丁酰硫基乙基、異丁酰硫基乙基、戊酰硫基乙基、異戊酰硫基乙基、新戊酰硫基乙基和新戊酰硫基丁基；順式高級酰硫基烷基如月桂酰硫基乙基；5-芳酰硫基烷基如苯甲酰硫基乙基和萘甲酰硫基乙基；和二硫代二乙基。
短語“在生理條件下分解”意指通過酶如酯酶、磷酸二酯酶、磷酸酰胺酶、水解酶、氨基水解酶、轉氨酶或還原酶進行的分解，以及生理氧化、水解和/或還原反應。
激酶的實例包括核苷酸激酶、核苷激酶、核苷磷酸轉移酶和5’-核苷酸酶。
前體意指一種本身通過在體內轉化/分解而產生藥理學活性物質的物質。
羧基保護基的實例包括所有可以用作常規的羧基保護基的基團，例如低級烷基如甲基、乙基、正丙基、異丙基、1，1-二甲基丙基、正丁基和叔丁基；芳基如苯基和萘基；芳基-低級烷基如芐基、聯苯甲基、三苯甲基、對硝基芐基、對甲氧基芐基和雙(對甲氧基苯基)甲基；酰基-低級烷基如乙酰基甲基、苯甲酰基甲基、對硝基苯甲酰基甲基、對溴苯甲酰基甲基和對甲磺酰基苯甲酰基甲基；含氧雜環基如2-四氫吡喃基和2-四氫呋喃基；鹵代低級烷基如2，2，2-三氯乙基；低級烷基甲硅烷基烷基如2-(三甲基甲硅烷基)乙基；酰氧基烷基如乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基和新戊酰氧基甲基；含氮雜環-低級烷基如鄰苯二甲酰亞胺甲基和琥珀酰亞胺甲基；環烷基如環己基；低級烷氧基-低級烷基如甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基和2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基；芳基-低級烷氧基低級烷基如芐氧基甲基；低級烷硫基-低級烷基如甲硫基甲基和2-甲硫基乙基；芳硫基-低級烷基如苯硫基甲基；低級鏈烯基如1，1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁炔基和芳基；和取代的甲硅烷基如三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三異丙基甲硅烷基、二乙基異丙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基聯苯甲硅烷基、聯苯甲基甲硅烷基和叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基。
氨基和亞氨基的保護基的實例包括所有可以用作常規氨基保護基的基團，例如酰基如三氯乙氧基羰基、三溴乙氧基羰基、芐氧基羰基、對硝基芐氧基羰基、鄰溴芐氧基羰基、(一、二、三)氯乙酰基、三氟乙酰基、苯基乙酰基、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、叔戊氧基羰基、叔丁氧基羰基、對甲氧基芐氧基羰基、3，4-二甲氧基芐氧基羰基、4-(苯基偶氮)芐氧基羰基、2-糠氧基羰基、聯苯甲氧基羰基、1，1-二甲基丙氧基羰基、異丙氧基羰基、鄰苯二甲酰基、琥珀酰基、丙氨酰基、亮氨酰基、1-金剛烷氧基羰基和8-喹啉氧基羰基；芳基-低級烷基如芐基、聯苯甲基和三苯甲基；芳硫基如2-硝基苯硫基和2，4-二硝基苯硫基；烷烴-或芳烴-磺酰基如甲磺酰基和對甲苯磺酰基；二低級烷基氨基-低級亞烷基如N，N-二甲基氨基亞甲基；芳基-低級亞烷基如亞芐基、2-羥基亞芐基、2-羥基-5-氯亞芐基和2-羥基-1-萘基亞甲基；含氮雜環亞烷基如3-羥基-4-吡啶基亞甲基；環亞烷基如亞環己基、2-乙氧基羰基亞環己基、2-乙氧基羰基亞環戊基、2-乙酰基亞環己基和3，3-二甲基-5-氧亞環己基；二芳基-或二芳基-低級烷基磷酰基如聯苯磷酰基和二芐基磷酰基；含氧雜環烷基如5-甲基-2-氧代-2H-1，3-二氧環戊烯-4-基-甲基；和低級烷基取代的甲硅烷基如三甲基甲硅烷基。
羥基保護基的實例包括所有可以用作羥基保護基的基團，例如酰基如芐氧基羰基、4-硝基芐氧基羰基、4-溴芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、3，4-二甲氧基芐氧基羰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、1，1-二甲基丙氧基羰基、異丙氧基羰基、異丁氧基羰基、聯苯甲氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、2，2，2-三溴乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、2-(苯基磺酰基)乙氧基羰基、2-(三苯基磷鎓基)乙氧基羰基、2-糠氧基羰基、1-金剛烷氧基羰基、乙烯氧基羰基、烯丙氧基羰基、順式芐硫基羰基、4-乙氧基-1-萘氧基羰基、8-喹啉氧基羰基、乙酰基、甲酰基、氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、新戊酰基和苯甲酰基；低級烷基如甲基、叔丁基、2，2，2-三氯乙基和2-三甲基甲硅烷基乙基；低級鏈烯基如烯丙基；芳基-低級烷基如芐基、對甲氧基芐基、3-4-二甲氧基芐基、聯苯甲基和三苯甲基；含氧和硫雜環基如四氫呋喃基、四氫吡喃基和四氫硫代吡喃基；低級烷氧基-和低級烷硫基-低級烷基如甲氧基甲基、甲硫基甲基、芐氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基、2，2，2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基和1-乙氧基乙基；烷基-和芳基-磺酰基如甲磺酰基和對甲苯磺酰基；和取代的甲硅烷基如三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三異丙基甲硅烷基、二乙基異丙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、二苯基甲基甲硅烷基和叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基，且在二羥基的情況下還包括低級亞烷基如亞甲基、亞芐基和亞異丙基、低級烷氧基-低級亞烷基如甲氧基亞甲基和低級烷基取代的甲硅烷基如1，1，3，3-四異丙基二亞硅氧烷基。
R2的氨基甲酰基烷基和羧基烷基可以被一個或多個選自以下的取代基取代鹵原子；可以被羥基、烷氧基、烷硫基、芳基、氨基或烷基氨基取代的烷基；鹵代烷基；鏈烯基；環烷基；羥基；烷氧基；環烷氧基；烷氧基羰基；巰基；可以被芳基取代的烷硫基；芳基；芳氧基；芳硫基；芳基氨基；氰基；硝基；可以被酰基取代的氨基；烷基氨基；環烷基氨基；酰基；羧基；氨基甲酰基；硫代氨基甲酰基；烷基氨基甲酰基和雜環基。
R3、R4、R5和R6的羥基可以被一個或多個選自以下取代基取代可以被保護的羧基、烷基、烷氧基羰基、芳基、環烷基、鏈烯基、鹵代烷基和雜環基。
通式[1]和通式[2]的實例包括已知的堿性基團如氨基或酸性基團如羥基、磷酰基、膦酰基或羧基的鹽。堿性基團的鹽包括，例如與無機酸如鹽酸、氫溴酸和硫酸形成的鹽；與有機羧酸形成的鹽如酒石酸、甲酸和檸檬酸形成的鹽；和與磺酸如甲磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、均三甲苯基磺酸和萘磺酸形成的鹽。酸性基團的鹽包括，例如與堿金屬如鈉和鉀形成的鹽；與堿土金屬鈣和鎂形成的鹽；銨鹽；以及與諸如以下的含氮有機堿形成的鹽三甲基胺、三乙基胺、三丁基胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二乙基胺、二環己基胺、普魯卡因、二芐基胺、N-芐基-β-苯乙基胺、1-ephenamine和N，N’-二芐基亞乙基二胺。
而且，當通式[1]、[1v]、[1w]、[1x]、[1y]、[1z]、[2]和[3z]代表的化合物及其鹽具有異構體(例如光學異構體、幾何異構體、互變異構體等)時，本發明包括這些異構體、溶劑化物、水合物和各種結晶形式。
本發明的病毒生長抑制和/或殺病毒方法適用的病毒的實例可以包括流感病毒、RS病毒、AIDS病毒、乳頭瘤病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、脊髓灰質炎病毒、艾柯病毒、柯薩奇病毒、腸病毒、鼻病毒、輪狀病毒、新城病病毒、流行性腮腺炎病毒、水皰性口炎病毒、狂犬病病毒、拉薩熱病毒、麻疹病毒、絲狀病毒、日本腦炎病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒或西尼羅河病毒。優選這些實例可以包括流感病毒、RS病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、脊髓灰質炎病毒、艾柯病毒、柯薩奇病毒、腸病毒、鼻病毒、輪狀病毒、新城病病毒、流行性腮腺炎病毒、水皰性口炎病毒、狂犬病病毒、拉薩熱病毒、麻疹病毒、絲狀病毒、日本腦炎病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒或西尼羅河病毒。特別優選這些實例可以包括流感病毒和丙型肝炎病毒。
優選本發明的化合物可以包括具有下述取代基的化合物。
在本發明所述的各通式中，優選的R1取代基的實例包括氫原子、鹵原子、低級烷基和羥基，更優選氫原子、氟原子和氯原子，進一步更優選氫原子。
優選的R2取代基的實例可以包括氫原子、乙酰基、苯甲酰基、新戊酰基、氨基甲酰基甲基和羧基甲基，更優選氫原子、乙酰基和羧基甲基，進一步更優選氫原子。
R3、R4、R5和R6中的每一個優選的取代基的實例可以包括氫原子和可以被低級烷氧基羰基、乙酰基、苯甲酰基或新戊酰氧基甲基取代的羥基，更優選氫原子和可以被乙酰基或苯甲酰基取代的羥基，進一步更優選氫原子和羥基。
R4z和R6z中的每一個優選的取代基的實例可以包括如關于R4和R6所述的相同的取代基和亞甲基，其中R4z和R6z都可以被取代。
優選的Rz取代基的實例可以包括可以被可被取代的酰基、低級烷氧基羰基或酰氧基烷基取代的羥基，更優選可以被異戊酰基，乙酰基或丙酰基(所述的取代基可以被可被保護的氨基取代)、苯甲酰基，新戊酰基、乙氧基羰基、異丙氧基羰基或新戊酰氧基甲基取代的羥基，進一步更優選可以被可被氨基取代的異戊酰基、乙酰基或苯甲酰基取代的羥基。
R7和R9中的每一個優選的取代基的實例可以包括可以被環水楊基(Saligenyl)、新戊酰氧基甲基、1-新戊酰氧基乙基或S-新戊酰基-2-硫代乙基取代的羥基。
優選的Y取代基的實例可以是氧原子。優選的A取代基的實例可以是氧原子。
具體地，優選的通式[3z]代表的化合物的實例是通式[3z’]代表的化合物 其中Ra代表氫或鹵原子；而Rb和Rc中的每一個相同或不同地代表氫原子或羥基保護基，或者Rb和Rc一起代表可以被取代的亞烷基。通式[3z’]中的Ra、Rb和Rc中的每一個代表氫原子的化合物為更優選。
以下所示的化合物是本發明的代表性化合物。式中的代碼具有以下含義。
Ac乙酰基，Bz苯甲酰基，Me甲基和Et乙基此外，以下代表性化合物的式中的糖鏈以通常采用的表達來描述。例如下式代表的化合物的構型
意指下式代表的各化合物


下一步將解釋用于生產本發明的化合物的方法。
通式[2]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽可以由已知方法、其等同方法或聯合使用這些方法來生產。描述生產方法的出版物的實例包括Antiviral Research，第24卷，第69-77頁(1994)；AntiviralChemi stry，第9卷，第389-402頁(1998)；Journal of ChemicalSociety Perkin Transaction(J.Chem.Soc.PERKIN TRANS.)第1卷，第1239-1245頁(1993)；和美國專利5770725。而且，本發明的化合物還可以根據以下所示的生產方法的路線生產。
其中R1、R2、R7和R8中的每一個具有上述的含義；且Z1、Z2、Z3和Z4相同或不同地代表氫原子或保護羥基，但是當Z1、Z2、Z3和Z4具有與二個或更多個不同的碳原子結合的羥基時，各羥基的氧原子和與各羥基結合的碳原子與保護基一起形成環，從而使它們得到保護。
(a)通式[2a]代表的化合物或其鹽可以通過以下方法獲得(1)使通式[3a]代表的化合物或其鹽與磷酸化試劑在存在或不存在添加劑的情況下反應，或者(2)使相同的以上化合物或其鹽與亞磷酸化試劑在存在或不存在添加劑的情況下反應，然后與氧化劑反應，例如根據the4th Jikken Kagaku Koza，第22卷，第313-438頁(1992)所述的方法。
在根據以上(1)的方法中，在此反應中所用的溶劑沒有特別限定，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；醚如二噁烷、四氫呋喃，茴香醚，二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；亞砜如二甲亞砜；磷酸酯如磷酸三甲酯；和吡啶。可以例用一類或多類這些溶劑的組合。
可以在此反應中使用任何磷酸化試劑，只要它通常用于羥基的磷酸化。這種試劑的實例可以包括磷酸二乙酯如磷酸二芐基酯；磷酸二硫代酸酯如S，S’-二苯基二硫代酸酯一環己基銨；和磷酰氯如磷酰氯或甲基氯苯基磷酰基P→N-L-丙氨酸酯。對于通式[3a]代表的化合物或其鹽，這種磷酸化試劑可以等摩爾或更大的量使用，更優選以1.0∶1.0-5.0∶1.0的摩爾比使用。
用于此反應的添加劑的實例可以包括偶氮化合物如偶氮二甲酸二乙酯或偶氮二甲酸二異丙酯，膦如三苯基膦，丙二烯磺酰氯如2，4，6-三異丙基苯磺酰氯和堿如吡啶或叔丁基氯化鎂。這些可以組合使用。對于通式[3a]代表的化合物或其鹽，這種添加劑可以等摩爾或更大的量使用，并更優選以1.0∶1.0-5.0∶1.0的摩爾比使用。
此反應一般可以在-50℃至170℃，優選在0℃至100℃下進行1分鐘至72小時，優選5分鐘至24小時。
在以上(2)的方法中，此反應中所用的溶劑沒有特別限定，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；亞砜如二甲亞砜；和吡啶。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
可以在此反應中使用任何亞磷酸化試劑，只要它通常用于羥基的亞磷酸化。這種試劑的實例可以包括亞磷酰胺如二烯丙基二異丙基亞磷酰胺或雙(S-新戊酰基-2-硫代乙基)N，N-二異丙基亞磷酰胺和氯化亞磷如二烯丙基氯化偶磷(diallyl phosphorochloridite)。對于通式[3a]代表的化合物或其鹽，這種亞磷酸化試劑可以等摩爾或更大的量使用，并更優選以1.0∶1.0-3.0∶1.0的摩爾比使用。
此反應所用的添加劑的實例包括含氮雜環如1H-四唑、4-二甲基氨基吡啶、吡啶或可力丁，且這些可以組合使用。對于通式[3a]代表的化合物或其鹽，這種添加劑可以等摩爾或更大的量使用，并更優選以1.0∶1.0-5.0∶1.0的摩爾比使用。
此反應中所用的氧化劑的實例可以包括過氧化物如間氯過苯甲酸或叔丁基氫過氧化物和鹵化化合物如碘。對于通式[3a]代表的化合物或其鹽，這種氧化劑可以等摩爾或更大的量使用，并更優選以1.0∶1.0-5.0∶1.0的摩爾比使用。
此反應一般可以在-78℃至100℃，優選在-50℃至50℃下進行，并持續1分鐘至24小時，優選持續5分鐘至6小時。
其中R1、R2、Z1、Z2、Z3和Z4中的每一個具有與上述相同的含義；R10和R11中的每一個相同或不同地代表在生理條件下分解的磷酸保護基；而X代表鹵原子。
通式[2b]代表的化合物或其鹽可以通過根據諸如Journal ofMedicinal Chemistry，第37卷，第3902-3909頁(1994)所述的方法，使通式[3b]代表的化合物或其鹽與通式[6a]代表的化合物反應而獲得。
此反應中所用的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；鹵代烴如二氯甲烷或氯仿；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基乙酰胺；醇如甲醇、乙醇或丙醇；亞砜如二甲亞砜；和水。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
對于通式[3b]代表的化合物或其鹽，通式[6a]代表的化合物以等摩爾或更大的量使用，更優選以1.0∶1.0-3.0∶1.0的摩爾比使用。
這種反應一般可以在0℃-170℃下，優選在20℃-120℃下進行，并持續5分鐘至24小時，優選持續1至10小時。
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、Z1、Z2、Z3和Z4中的每一個具有與上述相同的含義。
通式[2c]代表的化合物或其鹽可以通過使通式[2a]代表的化合物或其鹽進行脫保護反應而獲得。
此反應中所用的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基乙酰胺；醇如甲醇、乙醇或丙醇；亞砜如二甲亞砜；和水。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
在此反應中可以使用任何通常用于羥基的脫保護的脫保護劑，且這種試劑的優選的實例可以包括堿如甲醇鈉、氨氣、氨水、丁基胺或肼；酸如甲酸、乙酸水溶液、三氟乙酸水溶液、氫氯酸、溴三甲基硅烷、Dowex 50WX4-200離子交換樹脂或Amberlite IR-120離子交換樹脂；鈀催化劑如四三苯基膦鈀(O)；和膦三苯基膦。這些試劑可以組合使用，或者可以在反應體系中生產。對于通式[2a]代表的化合物或其鹽，這種脫保護劑可以0.01∶1或更在的摩爾比使用，且該脫保護劑也可以用作溶劑。
此脫保護反應一般可以在-50℃至170℃下，優選在-20℃至100℃下進行，并持續1分鐘至100小時，優選持續5分鐘至50小時。
其中R1、R7、R8、Z1、Z2、Z3和Z4中的每一個具有與上述相同的含義；且R2a代表酰基。
通式[2d]代表的化合物或其鹽可以根據例如Jikken Kagaku Koza，第4版，第22卷，第137-151頁和第166-169頁(1992)；Journal ofMedicinal Chemistry，第44卷，第777-786頁(2001)或JP-A-10-195075所述的方法，使通式[2a’]代表的化合物或其鹽在脫酸試劑存在下，在存在或不存在添加劑的情況下進行酰基化反應而獲得。
此反應中所用的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；芳烴如苯、甲苯或二甲苯；鹵代烴如二氯甲烷、氯仿或二氯乙烷；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；和水。這些溶劑也可以組合使用。
此反應中所用的酰基化試劑的實例可以包括羧酸如乙酸；受保護的氨基酸如N-(叔丁氧基羰基)-L-纈氨酸；酸鹵化物如新戊酸氯化物；酸酐如乙酸酐；咪唑如1，1’-羰基二咪唑；羧酸酯如乙酸甲酯；和酰胺縮醛如N，N-二甲基乙酰胺二甲基縮醛。這些試劑可以在反應體系中生產。對于通式[2a’]代表的化合物，這種酰基化試劑可以等摩爾或更大的量使用，并優選以1.0∶1.0-2.0∶1.0的摩爾比使用。
此反應中所用的脫酸試劑的實例可以包括吡啶、三乙基胺、氫化鈉、叔丁醇鉀、碳酸鉀和碳酸氫鈉。對于通式[2a’]代表的化合物，這種脫酸試劑可以等摩爾或更大量使用，并優選以1.0∶1.0-2.0∶1.0的摩爾比使用。
此反應中所用的添加劑的實例可以包括1，3-二環己基碳化二亞胺、偶氮二甲酸二乙酯和三苯基膦。對于通式[2a’]代表的化合物，這種添加劑可以等摩爾或更大的量使用，并優選以1.0∶1.0-2.0∶1.0的摩爾比使用。
此反應一般可以在0℃-100℃下，優選在20℃-60℃下進行，并持續5分鐘至24小時，優選持續30分鐘至10小時。
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8具有與上述相同的含義。
通式[2e]代表的化合物或其鹽可以通過根據例如Jikken KagakuKoza，第4版，第22卷，第371-424頁(1992)；和Journal ofMedicinal Chemistry(J.Med.Chem)，第38卷，第1372-1379頁(1995)所述的方法，使通式[7b]代表的化合物或其鹽與反應試劑在存在或不存在添加劑的情況下反應而獲得。
此反應中所用的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；脲如N，N’-二甲基亞丙基脲；亞砜如-二甲基亞砜；和吡啶。也可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
在此反應中可以使用任何在磷酸酯基團的取代反應中常規使用的反應試劑。用于此反應的反應試劑的實例可以包括鹵代烷基化合物如新戊酰氧基甲基氯化物或1-(新戊酰氧基)乙基氯化物；醇和苯酚如4-溴苯酚、4-氯苯酚、S-(2-羥基乙基)硫代新戊酸酯或S-(4-羥基丁基)硫代異丁酸酯；和胺如丙氨酸甲酯。對于通式[7b]代表的化合物或其鹽，這種反應試劑可以等摩爾或更大的量使用，并優選以1.0∶1.0-5.0∶1.0的摩爾比使用。
在此反應中所用的添加劑的實例可以包括鹵化化合物如五氯化磷或碘化鈉；含氮雜環化合物如1-甲基咪唑或1，1’-羰基二咪唑；偶氮化合物如偶氮二甲酸二乙酯或偶氮二甲酸二異丙酯；膦如三苯基膦；丙二烯磺酰氯如2，4，6-三異丙基苯磺酰氯；和堿如三乙基胺、吡啶或叔丁基氯化鎂。這些添加劑可以組合使用。對于通式[7b]代表的化合物或其鹽，這種添加劑可以0.01∶1-10∶1的摩爾比使用，優選以0.05∶1-5.0∶1的摩爾比使用。
反應一般可以在-50℃至170℃，優選在0℃-100℃下進行，并持續1分鐘至72小時，優選持續5分鐘至24小時。
其中R1、R2、R7、R8、Z1、Z2、Z3、Z4和Y中的每一個具有與上述相同的含義。
式[2i]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3i]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法1而獲得。
其中R1、R2、Z1、Z2、Z3、Z4、R10、R11、X和Y中的每一個具有與上述相同的含義。
通式[2j]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3j]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法2的方法而獲得。
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、Z1、Z2、Z3、Z4和Y中的每一個具有與上述相同的含義。
通式[2k]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[2i]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法3的反應而獲得。
其中R1、R2a、R7、R8，Z1、Z2、Z3、Z4和Y中的每一個具有與上述相同的含義。
通式[2m]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[2l]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法4的反應而獲得。
接著將解釋用于生產通式[3a]、[3e]和[3f]代表的化合物或其鹽的方法。
其中R1、R2、Z1、Z2、Z3和Z4中的每一個具有上述的含義；R12代表低級烷基或芳基；R13代表鹵原子、酰氧基、烷基磺酰氧基或芳基磺酰氧基；Z5、Z6、Z7和Z8中的每一個相同或不同地代表氫原子或被保護的羥基；Z9代表氫原子或羥基保護基；而Z10、Z11、Z12和Z13中的每一個相同或不同地代表氫原子或羥基。
(a)通式[3f]代表的化合物或其鹽可以通過以下方法獲得(1)根據常用的甲硅烷基化方法在存在或不存在添加劑的情況下誘導通式[4b]代表的化合物或其鹽成為通式[4a]代表的化合物或其鹽，然后(2)使所得的通式[4a]代表的化合物或其鹽與通式[6b]代表的化合物或其鹽在存在或不存在路易斯酸的情況下反應。
在這些反應中所用的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；亞砜如二甲亞砜；和鹵代烴如二氯甲烷、氯仿或二氯乙烷。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
在以上反應(1)中可以使用任何甲硅烷基化試劑，只要它通常用于將羰基轉化為甲硅烷基烯醇醚。這種甲硅烷基化試劑的實例包括1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷、N，O-雙(三甲基甲硅烷基)乙酰胺和三甲基甲硅烷基氯。對于通式[4b]代表的化合物或其鹽，這種甲硅烷基化試劑可以等摩爾或更大量使用，并優選以1.0∶1.0-10.0∶1.0的摩爾比使用。
硫酸銨是此反應中必需使用的添加劑。對于通式[4b]代表的化合物或其鹽，這種添加劑可以0.01∶1.0-10.0∶1.0的摩爾比使用，優選以0.05∶1.0-5.0∶1.0的摩爾比使用。
此反應一般可以在0℃-200℃下，優選在0℃-150℃下進行，并持續5分鐘至24小時，優選持續5分鐘至12小時。
對于通式[4a]代表的化合物或其鹽，在以上的反應(2)中所用的通式[6b]代表的化合物或其鹽可以0.5∶1-10∶1的摩爾比使用，優選以0.5∶1-5∶1的摩爾比使用。
在此反應中必需使用的路易斯酸的實例可以包括三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯、氯化錫(IV)、氯化鈦(IV)和氯化鋅。對于通式[4a]代表的化合物或其鹽，這種路易斯酸可以0.5mole或更大的量使用，優選以0.5∶1-10∶1的摩爾比使用。
此反應一般可以在0℃-100℃下，優選在0℃-50℃下進行，并持續1分鐘至72小時，優選持續5分鐘至24小時。
(b)通式[3e]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3f]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法3的反應而獲得。
(c)通式[3a]代表的化合物或其鹽可以通過在存在或不存在酸催化劑或堿的情況下使用試劑保護通式[3e]代表的化合物或其鹽而獲得。
在此反應中所用的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基乙酰胺；醇如甲醇、乙醇或丙醇；亞砜如二甲亞砜；酮如丙酮；和水。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
可以在此反應中使用任何常用于羥基保護的試劑。優選的實例包括2，2-二甲氧基丙烷、乙酰氯和苯甲酰氯。這些試劑還可以在反應體系中生產。對于通式[3e]代表的化合物或其鹽，這種試劑可以等摩爾或更大的量使用，并優選以1.0∶1.0-10∶1.0的摩爾比使用。
此反應中所用的酸催化劑或堿的實例可以包括吡啶鎓對甲苯磺酸鹽、對甲苯磺酸和三乙基胺。對于通式[3e]代表的化合物或其鹽，這種酸催化劑或堿可以0.01∶1-10∶1的摩爾比使用，優選以0.05∶1-10∶1的摩爾比使用。
此反應一般可以在-50℃至170℃下，優選在0℃至150℃下進行，并持續1分鐘至24小時，優選持續5分鐘至10小時。
通式[4b]代表的化合物或其鹽可以通過購買可商購的產品而獲得，或者可以通過已知的方法、其等同方法或它們的組合應用而生產。所述的生產物方法描述在諸如以下的出版物中Journal of AmericanChemical Society(J.Am.Chem.Soc.)，第71卷，第78頁(1949)；相同的出版物，第78卷，第242-244頁(1956)；Journal ofHeterocyclic Chemistry(J.Heterocyd.Chem.)，第15卷，第4期，第665-670頁(1978)；Journal of Chemical Society(J.Chem.Soc.)，第1379頁(1955)；美國專利5597823；或國際專利公開WO00/10569。
下面，將解釋用于生產通式[3b]代表的化合物或其鹽的方法。
其中R9代表烷基；而R1、R2、R12、R13、Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9、Z10、Z11、Z12、Z13和X中的每一個具有與上述相同的含義。
(a)通式[3h]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[4d]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法A(a)的反應而獲得。
(b)通式[3g]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3h]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法3的反應而獲得。
(c)通式[3d]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3g]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法A(c)的反應而獲得。
(d)通式[3c]代表的化合物或其鹽可以通過以下方法獲得根據例如Jikken Kagaku Koza，第4版，第19卷，第416-482頁(1992)所述的方法，(1)在存在或不存在添加劑的情況下使通式[3d]代表的化合物或其鹽與鹵化劑反應，或者(2)在存在脫酸試劑的情況下使相同的化合物或其鹽與磺化劑反應，然后與鹵化劑反應。
在根據以上(1)的方法中，用于此反應的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；鹵代烴如二氯甲烷、氯仿；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；醇如甲醇、乙醇或丙醇；亞砜如二甲亞砜；和水。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
在此反應中所用的鹵化劑沒有特別限制，只要它是常用于羥基的鹵化反應的試劑。這種鹵化劑的優選的實例可以包括碘、溴、氯、氫碘酸、氫溴酸、溴化鈉、溴化鉀、磺酰氯、N-溴琥珀酰亞胺、N-氯琥珀酰亞胺、四溴化碳或磷化合物如三苯基碘膦酸酯。對于通式[3d]代表的化合物或其鹽，這種鹵化劑可以1∶1-50∶1的摩爾比使用，優選以1∶1-20∶1的摩爾比使用。
用于此反應的必需的添加劑沒有特別限制，只要它是常用于羥基的鹵化反應的試劑。這種添加劑的優選的實例可以包括膦如三苯基膦；偶氮化合物如偶氮二甲酸二乙酯；和甲硅烷如三甲基甲硅烷基氯化物或六甲基二甲硅烷。可以使用一類或多類這些添加劑的組合。對于通式[3d]代表的化合物或其鹽，這種添加劑可以0.01∶1-10∶1的摩爾比使用，優選以0.1∶1-10∶1的摩爾比使用。
此反應一般可以在-80℃至170℃下，優選在-80℃至100℃下進行，并持續1分鐘至72小時，優選持續5分鐘至48小時。
在根據以上(2)的方法中，在磺化反應中所用的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；鹵代烴如二氯甲烷或氯仿；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；醇如甲醇、乙醇或丙醇；亞砜如二甲亞砜；和水。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
在此反應中所用的磺化劑沒有特別限制，只要它是常用于羥基的磺化反應的試劑。這種磺化劑的優選的實例可以包括鹵代磺酰基如甲磺酰氯或對甲苯磺酰氯；磺酸酐如三氟甲烷磺酸酐；和磺酸如三氟甲磺酸。對于通式[3d]代表的化合物或其鹽，這種磺化劑可以1∶1-20∶1的摩爾比使用，優選以1.0∶1.0-5.0∶1.0的摩爾比使用。
用于此反應的必需脫酸試劑沒有特別限制，只要它是常用于羥基的磺化反應的試劑。這種脫酸試劑的優選的實例可以包括堿如吡啶、2，6-二甲基吡啶、三乙基胺或甲醇鈉，并可以使用一類或多類這些脫酸試劑的組合。對于通式[3d]代表的化合物或其鹽，這種脫酸試劑可以0.01∶1-20∶1的摩爾比使用，并優選以0.1∶1-10∶1的摩爾比使用。
此反應一般可以在-80℃至100℃下，優選在-20℃至50℃下進行，并持續1分鐘至24小時，優選持續5分鐘至12小時。
用于鹵化反應的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；鹵代烴如二氯甲烷或氯仿；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；酮如丙酮；醇如甲醇、乙醇或丙醇；亞砜如二甲亞砜；和水。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
用于此反應的鹵化劑沒有特別限制，只要它是常用于磺酸酯基的鹵化反應的試劑。這種鹵代劑的優選的實例可以包括溴化鈉、碘化鈉、碘化鉀和碘化鎂。對于通式[3d]代表的化合物或其鹽，這種鹵化劑可以1∶1-50∶1的摩爾比使用，并優選以1∶1-20∶1的摩爾比使用。
此反應一般可以在-80℃至170℃下，優選在-80℃至100℃下進行，并持續1分鐘至72小時，優選持續5分鐘至12小時。
(e)通式[3b]代表的化合物或其鹽可以通過在存在或不存在催化劑的情況下使通式[3c]代表的化合物或其鹽進行羧酸酯的氨解反應而獲得。
此反應中所用的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；鹵代烴如二氯甲烷或氯仿；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；醇如甲醇、乙醇或丙醇；亞砜如二甲亞砜；和水。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。此反應可以使用在芳香羧酸酯的氨解反應中常用的試劑和條件完成。可以優選使用氨氣、液體氨或氨水。對于通式[3c]代表的化合物或其鹽，這種試劑可以等摩爾或更大量使用。此外，所述試劑還可以用作溶劑。用于此反應的必需催化劑的實例可以包括酸性銨鹽如氯化銨；堿如甲醇鈉或丁基鋰；和堿金屬酰胺如酰胺鈉。對于通式[3c]代表的化合物或其鹽，這種催化劑可以0.01∶1-100∶1的摩爾比使用，優選以0.01∶1-20∶1的摩爾比使用。
此反應一般可以在-100℃至250℃下，優選在-78℃至100℃下進行，并持續1分鐘至72小時，優選持續30分鐘至50小時。
通式[4d]代表的化合物或其鹽可以通過購買可商購的產品而獲得，或者可以通過已知的方法、等同的方法或它們的聯合應用生產。以上關于通式[4b]代表的化合物的生產方法所述的出版物是描述通式[4d]代表的化合物或其鹽的生產方法的出版物的實例。
接著將解釋用于生產通式[7b]代表的化合物或其鹽的方法。
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R9、Z1、Z2、Z3和Z4中的每一個具有與上述相同的含義。
(a)通式[8d]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[8a]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法3的反應而獲得。
(b)通式[7b]代表的化合物或其鹽可以通過以下方法獲得(1)根據生產方法3將通式[8d]代表的化合物或其鹽脫保護，然后根據生產方法B(e)將所得的化合物酰胺化；或者(2)根據生產方法B(e)將以上的化合物或其鹽酰胺化，然后根據生產方法3將所得的產物脫保護。
(c)通式[8b]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[8c]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法4的反應而獲得。
(d)通式[8f]代表的化合物或其鹽可以通過根據生產方法3將通式[8b]代表的化合物脫保護而獲得。
下面，將解釋用于生產通式[8a]和[8b’]代表的化合物或其鹽的方法。
其中R1、R2、R1、R9、R12、R13、Z1、Z2、Z3和Z4中的每一個具有與上述相同的含義。
(a)通式[8a]代表的化合物或其鹽可以通過根據生產方法B(a)，使通式[9a]代表的化合物或其鹽與通式[10a]代表的化合物或其鹽反應而獲得。
(b)通式[8b’]代表的化合物或其鹽可以通過根據生產方法B(a)，使通式[9c]代表的化合物或其鹽與通式[10a]代表的化合物或其鹽反應而獲得。
下面，將解釋用于生產通式[10a]代表的化合物或其鹽的方法。
其中R9、R13、Z1、Z2、Z3、Z4、Z10、Z11、Z12和Z13中的每一個具有與上述相同的含義。
(a)通式[10c]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[10b]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法A(c)的反應而獲得。
(b)通式[10a]代表的化合物或其鹽可以通過根據如Journal ofOrganic Chemistry(J.Org.Chem.)第55卷，第3853-3857頁(1990)所述的方法，使通式[10c]代表的化合物或其鹽進行取代反應而獲得。
用于此反應的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；鹵代烴如二氯甲烷或氯仿；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基乙酰胺；醇如甲醇、乙醇或丙醇；亞砜如二甲亞砜；和水。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
用于此反應的反應試劑可以是常用于酸性條件下的內半縮醛的取代反應的反應試劑。這種反應試劑的實例可以包括有機酸和酸酐如乙酸或乙酸酐；無機酸如氯化氫氣體、鹽酸、氫溴酸、硫酸或氫氟酸；鹵素化合物如氯或溴；路易斯酸如四溴化鈦或氯三甲基甲硅烷；和硫代化合物如硫代苯酚或甲硫基三甲基甲硅烷。對于通式[10c]代表的化合物或其鹽，這種反應試劑可以1∶1-20∶1的摩爾比使用，優選以1∶1-10∶1的摩爾比使用，并可以用作溶劑。
此反應一般可以在0℃-200℃下，優選在0℃-100℃下進行，并持續5分鐘至48小時，優選持續30分鐘至24小時。
通式[10b]代表的化合物可以根據Journal of Chemical SocietyChemical Communication(J.Chem.Soc.，Chem.Commun.)第40-41頁(1989)所述的方法獲得。
下面，將解釋用于化學合成其中的A為氧原子的通式[1]代表的吡嗪核苷酸類似物的方法。
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、Z1、Z2、Z3和Z4具有與上述相同的含義；R14代表可以被保護的一磷酸酯基或一磷氯化物；而R15代表可以被保護的二磷酸酯酸或三磷酸酯基。
(a)通式[5c]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3v]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法3的反應而獲得。
(b)通式[5b]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[5c]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法1的反應而獲得。
(c)通式[5a]代表的化合物或其鹽可以通過根據如ChemicalReview(Chem.Rev.)，第100卷，第2047-2059頁(2000)；Journal of有機Chemistry(J.Org Chem.)，第55卷，第1834-1841頁(1990)；或Acta Biochimica Biophysica AcademiaScientiarum Hungaricae(Acta Biochim.et Biophys.Acad.Sci.Hung.)，第16卷，第131-133頁(1981)所述的方法，在存在或不存在縮合劑的情況下，使通式[5b]代表的化合物與磷酸化試劑反應而獲得。
用于此反應的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；亞砜如二甲基亞砜；磷酸酯如磷酸三甲酯；和吡啶。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
用于此反應的磷酸化試劑可以是常用于一磷酸酯基的磷酸化的磷酸化試劑。這種磷酸化試劑的實例可以包括磷酸鹽如三正丁基磷酸銨或三正丁基焦磷酸銨。這些試劑也可以在反應體系中生產。對于通式[5b]代表的化合物或其鹽，這種磷酸化試劑可以等摩爾或更大的量使用，優選以1∶1-10∶1的摩爾比使用。縮合試劑的實例可以包括咪唑如1，1’-羰基二咪唑或N-甲基咪唑以及胺如嗎啉或二異丙基胺。也可以使用這些試劑的組合。對于通式[5b]代表的化合物或其鹽，這種縮合試劑可以等摩爾或更大的量使用，并優選以1∶1-5∶1的摩爾比使用。
此反應一般可以在-50℃至100℃下，優選在0℃至50℃下進行，并持續1分鐘至72小時，優選持續5分鐘至24小時。
(d)通式[5a]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[5c]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法F(c)的反應而獲得。
(e)通式[5a]代表的化合物或其鹽可以通過以下方法獲得根據生產方法1使通式[3v]代表的化合物或其鹽進行反應以誘導成為通式[5c]代表的化合物或其鹽，然后根據生產方法F(d)使所得到化合物或其鹽在相同的體系中反應。
其中R1、R2、R12、R13、Rz、Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9、Z10、Z11、Z12、Z13和Y中的每一個具有與上述相同的含義。
(a)通式[3l]、[3m]和[3i]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[4f]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法A的反應而獲得。
(b)通式[3n]代表的化合物可以通過使用通式[3i]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法4的反應而獲得；或者它可以通過根據如Shin Jikken Kagaku Koza，第14卷，第567-587頁(The ChemicalSociety of Japan編，1977)所述的方法，在存在或不存在酸或堿的情況下使通式[3i]代表的化合物或其鹽發生烷基化而獲得。
用于此反應的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；芳烴如苯、甲苯或二甲苯；鹵代烴如二氯甲烷、氯仿或二氯乙烷；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；亞砜如二甲基亞砜；和水。可以使用這些試劑的組合。
用于此反應的烷基化試劑的實例可以包括鹵代烷基如芐基溴；酯如硫酸二乙酯；二偶氮化合物如聯苯二偶氮甲烷；烯烴如2-甲基丙烯；和酰胺縮醛如N，N二甲基乙酰胺二甲基縮醛。對于通式[3i]代表的化合物，這種烷基化試劑可以等摩爾或更大的量使用，優選以1.0∶1.0-2.0∶1.0的量使用。
用于此反應的酸的實例可以包括對甲苯磺酸和硫酸。用于此反應的堿的實例可以包括三乙基胺、甲醇鈉、氫化鈉、叔丁醇鉀、碳酸鉀和金屬鈉。對于通式[3i]代表的化合物或其鹽，這種酸或堿可以等摩爾或更大的量使用，優選以1.0∶1.0-2.0∶1.0的摩爾比使用。
此反應一般可以在0℃至100℃下，優選在20℃至60℃下進行，并持續5分鐘至24小時，優選持續30分鐘至10小時。
(c)通式[3o]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3n]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法3的反應而獲得。
(d)通式[3j’]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3m]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法B(d)的反應而獲得。
其中R1、R2、Z5、Z6、Z7、Z8、Z10、Z11、Z12、Z13和Y中的每一個具有與上述相同的含義；R14代表氨基保護基；而R18代表可以被保護的氨基酸殘基。
(a)通式[3p]代表的化合物或其鹽可以通過根據常規方法，如Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，Theodora W.Greene，第494-653頁(1999)所述的方法，使通式[3n’]代表的化合物或其鹽與脫保護劑在存在或不存在催化劑的情況下反應而獲得。
用于此反應的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括水；醇如甲醇、乙醇或丙醇；硫醇如乙烷硫醇或硫代苯酚；芳烴如苯，甲苯或二甲苯；鹵代烴如二氯甲烷、氯仿或1，2-二氯乙烷；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；硫醚如二甲基硫醚；酮如丙酮或甲基乙基酮；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；亞砜如二甲基亞砜；無機酸如硫酸或鹽酸；羧酸如乙酸或三氟乙酸；磺酸如三氟甲磺酸；硝基鏈烷如硝基甲烷；和有機堿如吡啶或三乙基胺。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
用于此反應的脫保護劑沒有特別限制，且這里可以使用在受保護的氨基的脫保護中常用的脫保護劑。這種脫保護劑的優選的實例可以包括氫氣體；甲酸銨；鋅；鈉；酸性氯化物如氯甲酸乙烯酯或乙酰氯；有機甲硅烷如三乙基硅烷或三甲基甲硅烷基碘；三丁基氫化錫；堿金屬醇鹽如叔丁醇鉀；堿金屬硫醇鹽如硫代甲醇鈉；2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌；硼氫化鈉；堿金屬鹽如氟化鉀或碘化鈉；路易斯酸如三溴化硼、氯化鋁、氯化釕或氯化鋅；無機酸如鹽酸、氫溴酸或硫酸；有機酸如三氟乙酸、甲磺酸或對甲苯磺酸；無機堿如碳酸鉀、碳酸氫鈉或氫氧化鈉；有機堿如哌啶；胺如氨或肼；有機鋰如甲基鋰；硝酸銫二銨；和過氧化物如過氧化氫、臭氧或高錳酸。對于通式[3n’]代表的化合物或其鹽，這種脫保護劑可以0.01∶1-1000∶1的摩爾比使用，優選以0.1∶1-100∶1的摩爾比使用。
用于此反應的的必需催化劑沒有特別限制，只要它常用于受保護的氨基的脫保護。這種催化劑的優選的實例可以包括鈀催化劑如鈀-碳；銠；阮內鎳；和氧化鉑(IV)。對于通式[3n’]代表的化合物，可以使用重量比0.01∶1-10∶1，優選0.01∶1-5∶1的催化劑如鈀-碳或阮內鎳。對于通式[3n’]代表的化合物或其鹽，可以使用摩爾比為0.01∶1-10∶1，優選0.01∶1-5∶1的除了鈀-碳和阮內鎳之外的催化劑。
此反應一般可在以-80℃至200℃下，優選在0℃至160℃下完成，并持續1分鐘至48小時，優選持續5分鐘至12小時。
(b)通式[3o’]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3p]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法3的反應而獲得。
(c)通式[3q]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3n’]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法3的反應而獲得。
(d)通式[3o’]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3q]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法H(a)的反應而獲得。
(e)通式[3o’]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3n’]代表的化合物或其鹽，進行根據生產方法3或生產方法H(a)的反應而獲得。
其中R1、R2a、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9、Z10、Z11、Z12、Z13和Y中的每一個具有與上述相同的含義。
(a)通式[3l’]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3r]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法4的反應而獲得。
(b)通式[3m’]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3l’]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法3的反應而獲得。
其中R1、R2和R12中的每一個具有與上述相同的含義。
(a)通式[4h]代表的化合物或其鹽可以通過根據如Shin JlkkenKagaku Koza，第14卷，第1599-1602頁(1978)所述的方法，在存在或不存在酸催化劑的情況下使通式[4g]代表的化合物或其鹽與醇反應而獲得。
此反應中所用的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；鹵代烴如二氯甲烷、氯仿或二氯乙烷；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；和亞砜如二甲基亞砜。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
用于此反應的醇的實例可以包括甲醇、乙醇和苯酚。對于通式[4g]代表的化合物或其鹽，這種醇可以等摩爾或更大的量使用。而且，醇還可以用作溶劑。
常用于腈的亞胺基化的試劑可以用作此反應中所用的酸催化劑。氯化氫是這種酸催化劑的一個實例。對于通式[4g]代表的化合物或其鹽，這種酸催化劑可以0.1∶1或更大的摩爾比使用。
用于此反應的堿的實例可以包括金屬醇鹽如甲醇鈉、乙醇鈉或酚鈉。這些堿也可以在反應體系中生產。對于通式[4g]代表的化合物或鹽，這種堿可以0.01∶1或更大的摩爾比使用，優選以1.0∶1.0-5.0∶1.0的摩爾比使用。
此反應一般可以在-78℃至170℃下，優選在-40℃至120℃下進行，并持續1分鐘至72小時，優選持續5分鐘至24小時。
(b)[4f’]代表的化合物或其鹽可以通過根據如Shin JikkenKagaku Koza，第14卷，第1614-1617頁(1978)所述的方法使通式[4h]代表的化合物或其鹽與試劑反應而獲得。
用于此反應的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；鹵代烴如二氯甲烷、氯仿或二氯乙烷；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；和亞砜如二甲亞砜。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。
可以在此反應中使用常用于imidate的脒化的試劑。這種試劑的實例可以包括氨氣體、氨醇溶液、氨水或酸性銨鹽如氯化銨；和可以被保護的氨基酸，如甘氨酸乙酯或其鹽。對于通式[4h]代表的化合物或其鹽，這種試劑可以等摩爾或更大的量在此反應中使用，而且它還可以用作溶劑。
此反應一般可以在-78℃至170℃下，優選在0℃-120℃進行，并持續1分鐘至72小時，優選持續5分鐘至24小時。
其中R1、R2和R9中的每一個具有與上述相同的含義。
通式[4b]代表的化合物或其鹽可以通過在存在或不存在催化劑的情況下使通式[4i]代表的化合物或其鹽發生縮合反應而獲得。
用于此反應的溶劑沒有特別限制，只要它不影響反應。這種溶劑的實例可以包括芳烴如苯、甲苯或二甲苯；鹵代烴如二氯甲烷或氯仿；醚如二噁烷、四氫呋喃、茴香醚、二甘醇二乙基醚或二甲基溶纖劑；腈如乙腈；酰胺如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺；醇如甲醇、乙醇或丙醇；亞砜如二甲基亞砜；和水。可以使用一類或多類這些溶劑的組合。此反應可以使用在使用芬香羧酸酯和胺的縮合反應中所用的試劑和條件。這里優選使用的胺的實例可以包括氨如氨氣體、液體氨或氨水和伯胺如L-天門冬氨酸二乙酯。對于通式[4i]代表的化合物或其鹽，這種胺可以等摩爾或更大的量使用。本發明中所用的必需催化劑的實例可以包括酸性銨鹽如氯化銨；堿如三乙基胺、甲醇鈉或丁基鋰；和堿金屬酰胺如酰胺鈉。對于通式[4i]代表的化合物或其鹽，這種催化劑可以0.01∶1-100∶1的摩爾比使用，優選以0.01∶1-20∶1的摩爾比使用。
此反應一般可以在-100℃至250℃，優選在-78℃至100℃的溫度下進行，并持續1分鐘至72小時，優選持續30分鐘至50小時。
其中R1、R2a和Y中的每一個具有與上述相同的含義。
通式[4f”]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[4j]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法4的反應而獲得。
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R9、Rz、Z1、Z2、Z3和Z4中的每一個具有與上述相同的含義。
(a)通式[3t]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3d]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法G(b)的反應而獲得。
(b)通式[3s]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3t]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法3的反應而獲得。
(c)通式[3a’]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3s]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法K的反應而獲得。
其中R1、R2、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13和Y中的每一個具有與上述相同的含義。
通式[3u]代表的化合物或其鹽可以通過使用通式[3l]代表的化合物或其鹽進行根據生產方法3的反應而獲得。
當由以上的生產方法獲得的化合物具有異構體(例如光學異構體、幾何異構體、互變異構體等)時，也可以使用這些異構體。此外，也可以使用溶劑化物、水合物和多種結晶形式。而且在完成本發明之后，可以將有用的反應產物直接用于以下的反應而不將它分離。
如果以上生產方法獲得的化合物具有氨基、羥基或羧基，則這些基團還可以事先用常規的保護基保護，并在完成反應之后通過常規方法除去保護基。
通式[1]代表的化合物或其鹽可以根據常規方法如萃取、結晶或柱色譜法分離、純化或重結晶。
當本發明的化合物用作藥物時，它可以由常規方法，使用常規藥劑中所用的藥物載體制備成為藥物組合物。這里可以使用多種類型的常用于普通制藥的載體，如賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、著色劑、矯味劑、調味劑或表面活性劑。
本發明化合物的給藥沒有特別限制，但它可以根據治療目的而適宜地選擇。更為具體地，這種給藥形式的實例可以包括腸胃外試劑如注射液、栓劑或外部制劑(軟膏、熱敷劑等)；氣溶膠；和口服藥如片劑、散劑、細顆粒、粒劑、膠囊、液體、丸劑、懸浮液、糖漿或乳劑。
可以由常規方法將上述的多種類型的試劑制成藥物。
當將本發明的化合物制成用于口服的固體藥劑如片劑、散劑、細顆粒或粒劑時，這里所用的載體的實例可以包括賦形劑(乳糖、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、淀粉、碳酸鈣、高齡土、結晶纖維素、磷酸氫鈣酸酐、海藻酸等)；粘合劑(單糖漿、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明膠溶液、聚乙二醇、聚乙烯基醚、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素、蟲膠、甲基纖維素、乙基纖維素、藻酸鈉、阿拉伯膠、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、它們的水和/或乙醇溶液等)；崩解劑(淀粉、海藻酸、交聯聚乙烯吡咯烷酮、交聯羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、羥乙酸淀粉鈉等)；釋放控制劑(高級脂肪酸、高級脂肪醇、可可油、氫化油、水溶液性聚合物、溶于胃液的聚合物、溶于腸液的聚合物等)；和潤滑劑(純化的滑石、硬脂酸鹽、硅酸、聚乙二醇等)。
如果需要的話，可以將片劑轉化成包有常規包衣的片劑，例如糖包衣片、明膠包衣片、包有溶于胃液的包衣的片劑、包有溶于腸液的包衣的片劑或包有水溶性薄膜的片劑。
可以通過以下方法制備膠囊將化合物與上述的多種類型的載體混合，然后將所得的混合物填充到硬明膠膠囊、軟膠囊等。
液體藥物可以是水或油懸浮液、溶液、糖漿或酏劑，而且這些藥物可以通過常規方法使用常規添加劑制備。
當將本發明的化合物制備成為注射劑時，這里所用的載體的實例可以包括稀釋劑(水、乙醇、聚乙二醇(Macrogol)、丙二醇等)；pH控制劑或緩沖劑(檸檬酸、乙酸、磷酸、乳酸和它們的鹽、硫酸、氫氧化鈉等)；和穩定劑(焦亞硫酸鈉、亞乙基二胺四乙酸、巰基乙酸、硫代乳酸等)。在這種情況下，在藥物組合物中可以包含足量的常規的鹽、葡萄糖、甘露糖醇或甘油以制備等滲溶液。此外，可以往其中加入常規的增溶劑、緩和劑或局部麻醉劑。
可以根據患者的年齡、體重和癥狀來適宜地選擇給藥方法、劑量和服藥次數。當患者為成人時，本發明的化合物可以0.1-1000mg/kg的劑量，每天一次或分成多次進行口服或腸胃外給藥(例如注射、輸注、對直腸給藥等)本發明的病毒生長抑制和/或殺病毒方法的特征在于它包括以下步驟。
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、Rz、A和Y中的每一個具有與上述相同的含義。
步驟A通式[2]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽在體內轉化成為通式[2a]代表的化合物或其鹽。
步驟B通式[3z]代表的吡嗪核苷類似物或其鹽在體內轉化成為通式[2a]代表的化合物或其鹽。
步驟C(1)通式[3z]代表的吡嗪核苷類似物或其鹽在體內通過酶如核苷酶轉化成為通式[4f]代表的化合物，然后(2)所得的化合物在體內通過酶如磷酸核糖基轉移酶轉化成為通式[2a]代表的化合物或其鹽。
關于步驟B、C(1)和C(2)，也可以在體內發生逆轉化。
作為以上步驟的結果產生的通式[2a]代表的化合物或其鹽進一步在體內通過酶如核苷酸激酶[Advances in Antiviral Drug Design，第2卷，167-172頁(1996)]轉化成為通式[1b]代表的化合物(吡嗪核苷酸三磷酸酯)或其鹽。這種化合物或其鹽通過抑制病毒聚合酶而表現出病毒生長抑制和/或殺病毒作用。而且，也可以在體內發生這種逆轉化。
而且，其中的Y為亞氨基的化合物在以上步驟中轉化成為化合物如氧原子，從而表現出藥理學作用。
實施例將在以下的試驗實施例中描述本發明。但是，本發明不限于此。在以下的試驗實施例中，化合物A代表在實施例29中得到的化合物4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺；化合物B代表在參考實施例7中得到的化合物6-氯-4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺；而在表示試驗結果的表中所示的化合物指代在參考實施例和實施例中得到的產物。
試驗實施例1[檢測細胞中的磷酸酯化合物]將5ml含有已在吡嗪環的2位標記14C的化合物6-氟-3-羥基-2-[2-14C]吡嗪甲酰胺的E’-MEM培養基(含有1％牛血清白蛋白和3％維生素溶液)加到已在55cm2培養皿中進行單層培養MDCK細胞。在35℃和5％CO2的條件下完成培養20小時之后，用66.6％乙腈溶液從細胞部分萃取6-氟-3-羥基-2-[2-14C]吡嗪甲酰胺和轉化的化合物。將萃取物凍干并濃縮，然后在以下所示的HPLC分析條件下完成分析。
結果是檢測一磷酸酯(參考實施例15中的化合物；回收時間23.3分鐘)和三磷酸酯(參考實施例16中的化合物；回收時間34.0分鐘)。
HPLC分析條件儀器泵HITACHI L-6200檢測器HITACHI L-4000放射性檢測器Packard FLO-ONE500
分析條件分離柱Develosil ODS-MG-5(4.6×250mm)流動相A0.2M TEAA，pH6.6流動相B10％乙腈，0.2M TEAA，pH6.6混合比0-10分鐘；B 5％10-35分鐘；B 5％-75％(線性)35-50分鐘；B 75％試驗實施例2[檢測細胞中脫保護的化合物]將實施例2中的化合物加到懸浮在Hank平衡鹽溶液中的MDCK細胞，并將混合物于37℃下培養1小時。然后將所得的產物層鋪至硅油(KF-99)，然后在4℃下離心。將來自沉淀的細胞部分懸浮并在凍冷-融化在下述的流動相中，并在以下所示的HPLC分析條件下分析所得的溶液。
結果是，檢測一磷酸酯(回收時間14.3分鐘)為脫保護化合物。
HPLC分析條件儀器泵HITACHI L-6000檢測器HITACHI L-7500分析條件分離柱Develosil ODS-MG-5(4.6×250mm)流動相0.02M磷酸鹽緩沖溶液，pH3.0試驗實施例3-1[聚合酶抑制試驗(流感病毒)]用溶解的溶液(100mM Tris-HCl(pH8)，100mM KCl，5mM MgCl2，1.5mM DTT，5％甘油，1.5％ Triton N101，1％ LPC)處理流感病毒顆粒，并將這些顆粒用作聚合酶粗酶。將不同的濃度的每種試驗化合物加到反應緩沖液(100mM Tris-HCl(pH8.0)，100mM KCl，5mM MgCl2，1-DTT，0.25％ Triton N101，0.25mM ApG，0.1mM ATP，0.05mM CTP，0.05mM UTP，0.0005mM GTP，32P-GTP，粗酶)，然后在30℃下培養60分鐘。隨后，往其中加入10％三氯乙酸(TCA)并在冰上保持混合物60分鐘。然后將其滴到GF/C過濾器，接著用5％TCA洗滌過濾器。將過濾器干燥，并向其中加入閃爍雞尾酒。使用液體閃爍計數器測定放射性。給出測定值作為50％抑制濃度，條件是其中沒有加入試驗化合物的組定義為100％。結果如表1所示。
化合物 50％抑制濃度(μM)參考實施例160.14參考實施例170.33參考實施例220.076參考實施例230.25參考實施例2528試驗實施例3-2[聚合酶抑制試驗(丙型肝炎病毒(HCV))]在大腸桿菌中生產丙型肝炎病毒的NS5B區，并將其用作試驗用HCV聚合酶。通過體外轉錄方法制備HCV的3’-區的序列，并將其用作試驗用RNA模板。
將不同濃度的每種試驗化合物加到反應緩沖液(20mM Tris-HCl(pH8.0)，0.05mM MnCl2，1mM DTT，20單位RNase抑制劑，[α-32P]GTP，0.05mM的每種ATP，CTP和UTP和2μg/mL RNA模板)，然后在30℃下培養2小時。然后加入10％ TCA以終止反應。然后將反應溶液滴加到DE81過濾器，然后用5％ TCA洗滌過濾器。將過濾器干燥，并向其中加入閃爍雞尾酒。用液體閃爍計數器測定放射性。給出測定值作為50％抑制濃度，條件是沒有加入試驗化合物的組定義為100％。結果如表1-2所示。
化合物 50％抑制濃度(μM)參考實施例160.75參考實施例172.7參考實施例220.088參考實施例232.2參考實施例251.6試驗實施例3-3[人RNA聚合酶抑制試驗]將Hela細胞核萃取物(Promega)用作試驗用人RNA聚合酶。用限制酶切割pCMP原本，然后純化，并將其用作試驗用DNA模板。
將不同濃度的各種試驗化合物加到反應緩沖液(Hela細胞核萃取物，3mM MgCl2，0.4mM的各種ATP，UTP和CTP，0.016mM GTP，16μg/mL DNA模板，0.4mCi/mL[α-32P]GTP)，然后在30℃下培養1小時。在反應完成后，將反應溶液滴到DE81過濾器，然后用5％ Na2HPO4溶液將過濾器洗滌3次，持續30分鐘，然后用蒸餾水洗滌1次，持續1分鐘。將過濾器干燥并向其中加入閃爍雞尾酒。用液體閃爍計數器測定放射性。給出測定值作為50％抑制濃度，條件是沒有加入試驗化合物的組定義為100％。結果如表1-3所示。
化合物 50％抑制濃度(μM)參考實施例16＞200參考實施例17＞200參考實施例22＞200
參考實施例23＞200參考實施例25＞200試驗實施例4[抗流感作用]用70 PFU/孔的流感病毒A/PR/8/34感染已在6孔培養皿中完全生長的MDCK細胞。60分鐘后移出感染溶液并往其中加入含有純化瓊脂、1％牛血清白蛋白和3μg/mL乙酰基胰蛋白酶的并含有100μg/mL試驗化合物的E’-MEM培養基。使混合物完全固化，然后將其上下翻動。在35℃，100％濕度和5％ CO2的條件下將其培養3天。除去培養基后，用1％中性紅將存活的細胞染色，并用10％福爾馬林固定。然后用流動的水移出瓊脂培養基，然后計算空斑數。通過與沒有加入試驗化合物的對照組比較所得的百分率來表示斑(plaque)抑制率。結果如表2所示。
化合物 抑制率(％)參考實施例742參考實施例12 78實施例2100實施例6100實施例11 24實施例22 33實施例29 100實施例31 44實施例32 100試驗實施例5[抗BVDV作用]
用70 PEU/孔的牛腹瀉病毒(BVDV)NADL感染在6孔培養皿中完全生長的MDBK細胞。60分鐘后，移出感染溶液并往其中加入含有5％馬血清和1％瓊脂(SeaPlaque瓊脂)并含有100μg/mL試驗化合物的試驗培養溶液(E’-MEM)。將混合物完全固化，然后在37℃，100％的濕度和5％CO2的條件下培養3天。完成培養后，用3％甲醛溶液固定試驗平板，并用流動的水移出瓊脂培養基，然后用1％結晶紫溶液染色用以計數斑數。通過與沒有加入試驗化合物的對照物比較所得的百分率來表示斑抑制率。結果如表3所示。
化合物 抑制率(％)實施例2100實施例468實施例657實施例29 100實施例32 100試驗實施例6[證明施用化合物A的小鼠的肝臟中存在磷酸酯形式的試驗]以300mg/kg的劑量給小鼠的尾靜脈施用化合物A。施用后30分鐘，切除1.6g肝臟，然后在冰冷條件下研磨，同時向其中加入22.5mL已冷卻至-20℃的70％甲醇，以萃取化合物A和磷酸酯形式。使用用12mL甲醇和12mL的每一種1.0M和0.005M KCl預處理的固體萃取筒(Varian BONDS ELUT SAX HF 2g/12mL；用0.01M-1.0M KCl洗脫)將在4℃下離心10分鐘的10mL的萃取的上清液于以下所示的條件下純化。
在5mL 3號0.05M KCl洗脫物和合成一磷酸酯化合物(參考實施例30得到的化合物)中所含的磷酸酯形式在HPLC條件中所述的HPLC分析(HPLC-1)的HPLC保留時間和UV光譜方面相同。此外，在5mL 1號0.5M KCl洗脫物和合成二磷酸酯化合物(參考實施例31得到的化合物)中所含的磷酸酯形式在HPLC條件中所述的HPLC分析(HPLC-2)的HPLC保留時間方面相同。而且，在5mL 2號0.5M KCl洗脫物和合成三磷酸酯化合物(參考實施例22得到的化合物)中所含的磷酸酯形式在HPLC條件中所述的HPLC分析(HPLC-3)的HPLC保留時間方面相同。
將0.5mL 0.5M Tris-HCl(pH8.0)和0.5mL 0.1M MgCl2加到4mL以上3號0.05M KCl洗脫物，然后進一步向其中加入0.5mL由小牛腸制備的堿性磷酸酶(EC3.1.3.1.，20U/mL)，隨后在37℃下培養1小時。同樣地，將0.5mL 0.5M Tris-HCl(pH8.0)和0.5mL 0.1MMgCl2加到4mL以上1號0.5M KCl洗脫物，然后進下向其中加入0.5mL由小牛腸制備的堿性磷酸酶(EC3.1.3.1.，20U/mL)，隨后在37℃下培養1小時。同樣地，將0.2mL 0.5M Tris-HCl(pH8.0)和0.1mL 0.1M MgCl2加到1.6mL以上2號0.5M KCl洗脫物，然后進下向其中加入0.5mL由小牛腸制備的堿性磷酸酶(EC3.1.3.1.，20U/mL)，隨后在37℃下培養1小時。
通過在HPLC條件中所述的HPLC分析(HPLC-4)，證實3號的0.05M KCl洗脫物中一磷酸酯消失，而新產生的化合物和化合物A在HPLC保留時間和UV光譜方面相同。同樣地，通過HPLC條件中所述的HPLC分析(HPLC-4)，證實1號的0.5M KCl洗脫物中二磷酸酯形式消失，而新產生的化合物和化合物A在HPLC保留時間和UV光譜方面相同。同樣地，通過HPLC條件中所述的HPLC分析(HPLC-4)，證實2號的0.5M KCl洗脫物中三磷酸酯消失，而新產生的化合物和化合物A在HPLC保留時間和UV光譜方面相同。
根據這些結果，證實化合物A在體內轉化成為一磷酸酯，然后轉化成為二磷酸酯，然后轉化成為三磷酸酯。
使用固體萃取筒的純化條件洗滌按照以下的順序使用溶劑完成洗滌。
水(用冰冷卻)12mL
60％甲醇(用冰冷卻)12mL水(用冰冷卻)12mL洗脫在以下的濃度條件下連續地進行洗脫。以5mL為單位進行洗脫。“×2”和″×3″意指5ml的洗脫分別用每種濃度進行二次和三次。餾分依次定義為1號洗脫物，2號洗脫物和3號洗脫物)。
0.01M KCl(5mL×2)0.05M KCl(5mL×3)0.1M KCl(5mL×3)0.5M KCl(SmL×2)1.0M KCl(SmL×2)HPLC分析條件HPLC-1柱4.6×250mm，Nomura Chemical Co.，Ltd.，DevelosilODS-MG-5流動相0.02M磷酸鹽緩沖溶液(pH7.0)檢測UV 200-400nmHPLC-2柱4.6×250mm，Whatman Partisil 10-SAX流動相0.2M磷酸鹽緩沖溶液(pH3.5)檢測UV200 to 400nmHPLC-3柱4.6×250mm，Whatman Partisil 10-SAX流動相0.6M磷酸鹽緩沖溶液(pH3.5)檢測UV200-400nm
HPLC-4柱4.6×250mm，Nomura Chemical Co.，Ltd.，DevelosilODS-MG-5流動相2％乙腈 0.02M磷酸鹽緩沖溶液(pH5.0)檢測UV 200-400nm所用的測定儀器二極管陣列檢測器Agilent 1100系列四元(Quatemary)泵Agilent 1100系列自動進樣器Agilent 1100系列ChemStation Agilent 1100系列試驗實施例7[檢測口服給藥的試驗化合物的小鼠的血漿中化合物A的濃度]給試驗組中的2只小鼠(ICR)一次性口服試驗化合物。給藥后30分鐘收集血液。將400μL乙腈加到200μL離心的血漿中。將混合物離心并除去離心的蛋白。將所得的上清液在減壓下濃縮，然后在以下HPLC條件下測定血漿中化合物A的濃度。結果如表4所示。
HPLC條件柱Develosil 005-MG-S，4.6×250mm(Nomura ChemicalCo.，Ltd.)Guard柱Develosil 005-MG-S，4.6×10mm(NomuraChemical Co.，Ltd.)檢測UV 350nm流動相2％乙腈0.02M磷酸鹽緩沖溶液(pH5.0)測定儀器檢測器Shimadzu SPD-6A泵HITACHI L-6000[表4]試驗化合物 劑量mg/mL 血漿中化合物A的濃度μg/mL參考實施例42000.2實施例17 50 1.6實施例19 50 3.5實施例21 50 0.4實施例22 50 3.1實施例28 50 0.3實施例34 50 12.5實施例36 41 5.7試驗實施例8[測定口服給藥的試驗化合物的小鼠的血漿中化合物B的濃度]給試驗組中的2只ICR小鼠一次性口服200mg/kg參考實施例6中的化合物。給藥后30分鐘和60分鐘收集血液。完成與試驗實施例7相同的操作，并通過HPLC測定血漿中化合物B的濃度。結果如表5所示。
HPLC條件柱Develosil ODS-MG-S，4.6×250mm(Nomura ChemicalCo.，Ltd.)Guard柱Develosil ODS-MG-5，4.6×10mm(NomuraChemical Co.，Ltd.)檢測波長UV 350nm流動相5％乙腈0.04M 磷酸鹽緩沖溶液(pH6.0) 試驗化合物血漿中化合物B的濃度(μg/mL)30分鐘后 60分鐘后參考實施例6 1.64.6試驗實施例9[通過加入3-羥基-2-吡嗪甲酰胺來檢測細胞中的磷酸酯化合物]將5ml含有3-羥基-2-吡嗪甲酰胺(最終濃度5000μM)的E’-MEM培養基(含有1％牛血清白蛋白和3％維生素溶液)加到已在55cm2的培養皿上進行單層培養的MDCK細胞，并在37℃和5％ CO2的條件下培養24小時。在冰冷條件下將已冷卻至-20℃的1mL 70％甲醇加到細胞部分，并萃取其中的化合物A和磷酸酯。使用用1mL甲醇和1mL的每種1.0M和0.005 M KCl預處理的固體萃取藥筒(Varian BOND ELUT SAXHF 100mg/1mL；用0.01M-1.0M KCl洗脫)，將0.7mL在4℃下離心10分鐘的萃取物的上清液在以下所示的條件下純化。
在1mL 0.05M KCl洗脫物和合成一磷酸酯化合物(參考實施例30所得的化合物)中的磷酸酯形式在HPLC分析(HPLC-5)的HPLC保留時間和UV光譜方面相同。此外，在1mL 0.25M KCl洗脫物和合成二磷酸酯化合物(參考實施例31所含的化合物)中的磷酸酯形式在HPLC分析(HPLC-6)的HPLC保留時間方面相同。而且，在1mL 0.5M KCl洗脫物和合成三磷酸酯化合物(參考實施例22所得的化合物)中的磷酸酯形式在HPLC分析(HPLC-6)的HPLC保留時間方面相同。
向0.8mL的每一種以上的KCl洗脫物中加入0.1mL 0.5M Tris-HCl(pH8.0)和0.1mL MgCl2。然后取出0.8mL混合物，往其中加入0.08mL由小牛腸制備的堿性磷酸酶(EC3.1.3.1.，20U/mL)，然后在37℃下培養1小時。
通過HPLC分析(HPLC-7)，證實0.05M KCl洗脫物中一磷酸酯消失，而新產生的化合物和化合物A在HPLC保留時間方面相同。而且，通過HPLC分析(HPLC 8)，證實新產生的化合物和化合物A在UV光譜方面相同。同樣地，通過HPLC分析(HPLC-7)，證實0.25M KCl洗脫物中的二磷酸酯消失，而新產生的化合物和化合物A在HPLC保留時間方面相同。而且，通過HPLC分析(HPLC-8)，證實新產生的化合物和化合物A在UV光譜方面相同。同樣地，通過HPLC分析(HPLC-7)，證實0.5M KCl洗脫物中三磷酸酯消失，而新產生的化合物和化合物A在HPLC保留時間方面相同。
根據這些結果，證實3-羥基-2-吡嗪甲酰胺在細胞內轉化為化合物A，一磷酸酯(參考實施例30所得的化合物)，然后轉化為二磷酸酯形式(參考實施例31所得的化合物)，然后轉化為三磷酸酯(參考實施例22所得的化合物)。
使用固體萃取筒的純化條件洗滌按照以下順序使用溶劑進行洗滌。
水(用冰冷卻)1mL60％甲醇(用冰冷卻)1mL水(用冰冷卻)1mL洗脫洗脫在以下的濃度下連續地進行。(洗脫以1mL為單位進行)。
0.01M KCl (1mL)0.05M KCl (1mL)0.1M KCl (1mL)0.25M KCl (1mL)0.5M KCl (1mL)1.0M KCl (1mL)HPLC分析條件HPLC-5柱4.6×250mm，Nomura Chemical Co.，Ltd.，DevelosilODS-MG-5流動相0.02M磷酸鹽緩沖液(pH7.0)
檢測UV 200 to 400nm所用的測定儀器二極管陣列檢測器Agilent 1100系列四元泵Agilent 1100系列自動進樣器Agilent 1100系列ChemStation Agilent 1100系列HPLC-6柱4.6×250mm，Whatman Partisil 10-SAX流動相0.75M磷酸鹽緩沖液(pH3.5)檢測UV 350nm所用的測定儀器Shimadzu SPD-6A UV分光光度檢測器HITACHI L-6000泵HPLC-7柱4.6×250mm，Nomura Chemical Co.，Ltd.，DevelosilODS-MG-5流動相5％乙腈0.02M磷酸鹽緩沖溶液(pH5.0)檢測UV 350nm所用的測定儀器Shimadzu SPD-6A UV分光光度檢測器HITACHI L-6000泵HPLC-8柱4.6×250mm，Nomura Chemical Co.，Ltd.，DevelosilODS-MG-5流動相2％乙腈0.02M磷酸鹽緩沖溶液(pH5.0)檢測UV 200-400nm
所用的測定儀器二極管陣列檢測器Agilent 1100系列四元泵Agilent 1100系列自動進樣器Agilent 1100系列ChemStation Agilent 1100系列試驗實施例10[通過加入化合物A檢測細胞中的三磷酸酯化合物]將10ml含有化合物A的E’-MEM培養基(含5％牛胎兒血清)加到已在55cm2培養皿上進行單層培養的MDBK細胞。在37℃和5％ CO2的條件下完成24小時的培養之后，用細胞刮刀移出培養物，并通過離心移出培養基。然后將5％三氯乙酸加到所得的細胞部分，從而萃取轉化的化合物。將含有等量20％三辛基胺的戊烷加到萃取物，然后用離心濃縮器將所得的水層濃縮。在以上濃縮物中，檢測HPLC保留時間與合成的化合物三磷酸酯(參考實施例22所得的化合物)匹配的組分。
HPLC條件儀器泵HITACHI L-6000檢測器HITACHI L-4000分析條件分離柱Develosil ODS-MG-S(4.6×250nm)流動相7％乙腈，5mM四丁基溴化銨，0.1M磷酸鹽緩沖溶液(pH7.0)測定波長350nm試驗實施例11[通過加入化合物A而檢測細胞中的一磷酸酯和二磷酸酯化合物]
將5ml含有化合物A(最終濃度5000μM)的E’-MEM培養基(含有1％牛血清白蛋白和3％維生素溶液)加到已在55cm2培養皿上進行單層培養的MDCK細胞，并在37℃和5％CO2的條件下完成24小時的培養。在冰冷卻下將已冷卻至-20℃的1mL 70％甲醇加到細胞部分，并從中萃取化合物A和磷酸酯。使用用1mL甲醇和1mL的每一種1.0M和0.005M KCl預處理的固體萃取筒(Varian BOND ELUT SAX HF 100mg/imL；用0.01M-1.0M KCl洗脫)，將0.7mL在4℃下離心10分鐘的萃取物的上清液于下述條件下純化。
在1mL 0.05M 1號KCl洗脫物和合成一磷酸酯化合物(參考實施例30所得的化合物)中的磷酸酯形式在HPLC分析(HPLC-9)的HPLC保留時間和UV光譜方面相同。此外，在1mL 0.5M KCl洗脫物和合成二磷酸酯化合物(參考實施例31所含的化合物)中的磷酸酯形式在HPLC分析(HPLC-10)的HPLC保留時間方面相同。
向0.8mL以上0.05M KCl一號洗脫物中加入0.1mL 0.5MTris-HCl(pH8.0)和0.1mL 0.1M MgCl2。然后取出0.5mL混合物，向其中加入0.06mL由小牛腸制備的堿性磷酸酶(EC3.1.3.1.，20U/mL)，然后在37℃下培養1小時。通過HPLC分析(HPLC-11)，證實0.05M KCl洗脫物中一磷酸酯消失，而新產生的化合物和化合物A在HPLC保留時間和UV光譜方面相同。
根據這些結果，證實化合物A在細胞中轉化為一磷酸酯(參考實施例30所得的化合物)和二磷酸酯形式(參考實施例31所得的化合物)。
使用固體萃取筒的純化條件洗滌按照以下的順序使用3種溶劑進行洗滌。
水(用冰冷卻)1mL60％甲醇(用冰冷卻)1mL水(用冰冷卻)1mL洗脫在以下的濃度條件下連續地進行洗脫。(以1mL為單位進行洗脫。“×2”意指每種濃度的1mL的洗脫進行二次。餾分依次定義為1號洗脫物和2號洗脫物)
0.01M KCl (1mL)0.05M KCl (1mL×2)0.1M KCl (1mL)0.5M KCl (1mL)1.0M KCl (1mL)HPLC分析條件HPLC-9柱4.6×250mm，Nomura Chemical Co.，Ltd.，DevelosilODS-MG-5流動相0.02M磷酸鹽緩沖液(pH7.0)檢測UV 200 to 400nm所用的測定儀器二極管陣列檢測器Agilent 1100系列四元泵Agilent 1100系列自動進樣器Agilent 1100系列ChemStation Agilent 1100系列HPLC-10柱4.6×250mm，Whatman Partisil 10-SAX流動相0.2M磷酸鹽緩沖溶液(pH3.5)檢測UV 350nm所用的測定儀器Shimadzu SPD-6A UV分光光度檢測器HITACHI L-6000泵HPLC-11柱4.6×250mm，Nomura Chemical Co.，Ltd.，DevelosilODS-MG-5流動相2％乙腈0.02M磷酸鹽緩沖溶液(pH5.0)檢測UV 200-400nm所用的測定儀器二極管陣列檢測器Agilent 1100系列四元泵Agilent 1100系列自動進樣器Agilent 1100系列ChemStation Agilent 1100系列試驗實施例12[肌苷一磷酸脫氫酶(IMPDH)抑制試驗]將培養皿上的MDCK細胞懸浮在0.05M Tris-HCl(pH8.0)中，并用Downs均化器將懸浮液均化以得到細胞勻漿。將細胞勻漿在16000×g下離心，并將如此得到上清液用作IMPDH酶溶液。
作為反應組合物，使用0.1M Tris-HCl(pH8.0)，0.1M KCl，30mM EDTA，5mM NAD，5mg/mL牛血清白蛋白和0.04mM[8-14C]-肌苷5’-一磷酸酯。在37℃下反應1小時完成后，加入2體積的乙腈以終止反應，并濃縮反應產物。在以下所述的HPLC條件下對所得的濃縮物進行分析，得到反應底物([14C]-肌苷5’-一磷酸酯)和反應產物([14C]-黃嘌呤核苷5’-一磷酸酯)之間的比率，并計算反應率。一磷酸利巴韋林用作對照化合物。結果如表6所示。
HPLC分析條件分離柱Develosil ODS-MG-5(4.6×250mm)流動相20％乙腈，5mM丁基氯化銨，0.02M磷酸鹽緩沖溶液(pH7.0)放射檢測器Packard FLO-ONE500[表6]
試驗化合物 50％抑制濃度(μM)參考實施例30 980實施例37 740對照化合物 1.9接著將在參考實施例和實施例中解釋本發明的化合物。但是，本發明不限于這些。
洗脫物中的混合物都表示為體積比。硅膠BW-127ZH(Fuji SilysiaChemical Ltd.)用作柱色譜法的介質；YMC GEL ODS-AM 120-S50(YMCCo.，Ltd.)用作逆相硅膠柱色譜法的載體；而DEAE纖維素(Wako PureChemical Industries，Ltd.)用作離子交換柱色譜法的載體。用于對照實施例和實施例的符號含義如下DMSO-d6氘化二甲亞砜，Ms甲烷磺酰基，Ph苯基，而Et乙基。
參考實施例1 將1.52g 3-羥基-2-吡嗪甲酸甲酯懸浮在12.2mL 1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷，并將懸浮液加熱回流1小時。靜置至冷卻后，在減壓下除去溶劑，并在氮氣氛下將所得的殘余物溶于30mL二氯乙烷。連續地往其中加入4.98g β-D-呋喃核糖-1-乙酸酯-2，3，5-三苯甲酸酯和1.73mL氯化錫(IV)，并將混合物于室溫下再攪拌14小時。用30mL氯仿和30mL碳酸氫鈉水溶液稀釋反應混合物，并過濾除去沉淀，從而得到有機層。用水將所得的有機層連續洗滌，然后用飽和鹽水溶液洗滌。隨后，用無水硫酸鎂干燥層，并在減壓下除去溶劑。通過硅膠柱色譜法[洗脫劑；正己烷∶乙酸乙酯1∶1]純化所得的殘余物，得到3.4g白色固體，4-{(2R，3R，4R，5R)-3，4-雙(苯甲酰氧基)-5-[(苯甲酰氧基)甲基]四氫-2-呋喃基}-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯。
IR(KBr)cm-11734，16601H-NMR(CDCl3)δ3.96(3H，s)，4.71(1H，dd，J＝4.0，12.4Hz)，4.8-4.9(2H，m)，5.8-5.9(2H，m)，6.45(1H，d，J-4.0Hz)，7.34(1H，d，J＝4.2Hz)，7.3-7.6(9H，m)，7.70(1H，d，J＝4.2Hz)，7.9-8.0(4H，m)，8.0-8.1(2H，m)參考實施例2 將36.3g 4-{(2R，3R，4R，5R)-3，4-雙(苯甲酰氧基)-5-[(苯甲酰氧基)甲基]四氫-2-呋喃基}-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯懸浮在400mL甲醇，并在冰冷卻下向其中加入11.7g 28％甲醇鈉甲醇溶液。將混合物于相同的溫度下攪拌1小時，使用2M鹽酸將反應溶液調節至pH4，然后在減壓下除去溶劑。用反相硅膠柱色譜法[洗脫劑；乙腈∶水1∶4]純化所得的殘余物，得到12.6g淺黃固體，4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯。
IR(KBr)cm-117401H-NMR(DMSO-d6)δ3.6-3.65(1H，m)，3.75-3.8(1H，m)，3.33(3H，s)，3.9-4.0(3H，m)，5.13(1H，d，J＝5.2Hz)，5.29(1H，t，J＝5.2Hz)，5.64(1H，d，J＝2.4Hz)，5.91(1H，d，J＝2.4Hz)，7.48(1H，d，J＝4.4Hz)，8.31(1H，d，J＝4.4Hz)
參考實施例3 0.5g 4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯懸浮在5mL丙酮和1mL原甲酸三酯，并向其中連續地加入33mg對甲苯磺酸一水合物。將混合物加熱回流1小時，然后在減壓下除去溶劑。通過柱色譜法[洗脫劑乙酸乙酯]純化所得的殘余物，得到0.49g白色固體，4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯。
IR(KBr)cm-117281H-NMR(CDCl3)δ1.35(3H，s)，1.60(3H，s)，2.55(1H，t，J＝4.6Hz)，3.8-3.9(1H，m)，3.97(3H，s)，3.95-4.0(1H，m)，4.4-4.5(1H，m)，4.97(1H，dd，J＝3.2，6.3Hz)，5.01(1H，dd，J＝2.4，6.3Hz)，5.80(1H，d，J＝2.4Hz)，7.49(1H，d，J＝4.3Hz)，7.69(1H，d，J＝4.3HZ)參考實施例4
將6.78g 4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d]-吡嗪甲酸甲酯溶于68mL甲醇，然后在冰冷卻下向其中加入氨氣體以飽和。在相同的溫度下反應1.5小時后，過濾收集沉淀的固體，得到2.34g淺黃色固體，4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺。濃縮濾液，以進一步得到2.54g以上的化合物。
IR(KBr)cm-11701，16541H-NMR(DMSO-d6)δ1.29(3H，s)，1.51(3H，s)，3.5-3.6(1H，m)，3.6-3.7(1H，m)，4.3-4.4(1H，m)，4.7-4.8(1H，m)，4.8-4.9(1H，m)，5.22(1H，t，J＝4.7Hz)，5.98(1H，s)，7.55(1H，d，J＝4.0Hz)，7.76(1H，brs)，8.04(1H，d，J＝4.0HZ)，8.36(1H，brs)參考實施例5 在80℃至90℃下將15mL磺酰氯滴到含有20g 3-羥基-2-吡嗪甲酰胺的80mL N，N-二甲基甲酰胺懸浮液。將混合物在95℃至100℃的溫度下攪拌10小時，然后將其傾入200mL冰水和200mL乙酸乙酯的混合溶液。分離有機層。用100mL乙酸乙酯將水層萃取5次，然后將其與有機層合并。用飽和鹽水溶液洗滌混合物。然后用活性碳處理混合物，并在減壓下除去溶劑。將所得的殘余物懸浮在50mL水中，向其中加入3.2g碳酸氫鈉并溶解。然后向其中加入濃鹽酸以調節溶液至pH2。過濾收集沉淀，得到4.8g白色固體，6-氯-3-羥基-2-吡嗪甲酰胺。
IR(KBr)cm-116601H-NMR(DMSO-d6)δ8.51(2H，brs)，8.73(1H，s)，13.60(1H，brs)參考實施例6 將含有1.5g 6-氯-3-羥基-2-吡嗪甲酰胺的7.5mL 1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷懸浮液加熱回流30分鐘。冷卻后，減壓濃縮。向其中加入5mL甲苯，并在減壓下除去溶劑。然后向其中加入5mL甲苯并再次在減壓下除去溶劑。將15mL乙腈加到所得的殘余物并溶解，并在冰冷卻下向其中連續地加入β-D-呋喃核糖1，2，3，5-四乙酸酯和氯化錫(IV)，然后在室溫下攪拌5小時。用30mL乙酸乙酯和20mL水稀釋反應混合物，然后通過加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至pH7。接著，過濾除去沉淀，并分離有機層。用10mL乙酸乙酯將水層萃取3次，然后與有機層合并。用飽和鹽水溶液洗滌所得的混合物，然后用無水硫酸鎂干燥，在減壓下除去溶劑，將二乙基醚加到所得的殘余物，并過濾收集混合物，得到2.8g淺黃色固體，(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[(乙酰氧基)甲基]-5-[3-(氨基羰基)-5-氯-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]四氫-3-呋喃基乙酸酯。
IR(KBr)cm-11756，1733，1701，16481H-NMR(CDCl3)δ2.09(3H，s)，2.18(3H，s)，2.23(3H，s)，4.45(2H，s)，4.5-4.6(1H，m)，5.2-5.3(1H，m)，5.45-5.5(1H，m)，6.14(1H，d，J＝2.0Hz)，6.22(1H，brs)，8.06(1H，s)，8.84(1H，s)。
參考實施例7 將1.8g(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[(乙酰氧基)甲基]-5-[3-(氨基羰基)-5-氯-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]四氫-3-呋喃基乙酸酯懸浮在27mL甲醇中，并在冰冷卻下向其中加入2.4g 28％甲醇鈉甲醇溶液，然后在相同的溫度下攪拌30分鐘。向其中加入0.95mL乙酸并在減壓下除去溶劑。用硅膠柱色譜法[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝3∶1]純化所得的殘余物，得到0.73g淺黃色固體，6-氯-4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺。
IR(KBr)cm-116931H-NMR(DMSO-d6)δ3.35(3H，brs)，3.65(1H，d，J＝12.0Hz)，3.8-3.9(1H，m)，3.9-4.0(3H，m)，5.81(1H，s)，7.92(1H，brs)，8.44(1H，brs)，8.70(1H，s)。
參考實施例8
將0.3g 6-氯-4-{(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺溶于0.6mL丙酮和1.5mLN，N二甲基甲酰胺的混合溶劑，然后向其中連續地加入3mL 2，2-二甲氧基丙烷和0.12g對甲苯磺酸吡啶鎓鹽，隨后在50℃下攪拌5小時。冷卻后，向其中加入5mL乙酸乙酯和5mL水的混合物溶劑，并分離有機層。用水洗滌層，然后用飽和鹽水溶液洗滌，隨后用無水硫酸鎂干燥，接著在減壓下除去溶劑。通過硅膠柱色譜法[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝10∶1]，得到0.18g淺黃色固體，4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-6-氯-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺。
IR(KBr)cm-117001H-NMR(DMSO-d6)δ1.29(3H，s)，1.50(3H，s)，3.5-3.6(1H，m)，3.7-3.8(1H，m)，4.3-4.4(1H，m)，4.74(1H，dd，J＝2.9，6.1Hz)，4.88(1H，dd，J＝2.0，6.1Hz)，5.37(1H，t，J＝4.6Hz)，5.95(1H，d，J＝1.7Hz)，7.93(1H，brs)，8.32(1H，s)，8.41(1H，brs)參考實施例9
將1.0g 4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯溶解于5.0mL吡啶，并在10℃下向其中加入0.36mL甲磺酰氯，然后在室溫下攪拌0.5小時。將反應混合物傾入20mL乙酸乙酯和20mL水的混合溶液。分離有機層，并用20mL乙酸乙酯將水層萃取3次。隨后將其與有機層合并。用飽和鹽水溶液洗滌混合物，并用無水硫酸鎂干燥。然后，在減壓下除去溶劑，得到1.2g無色油產物，4-[(3aR，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-[[(甲基磺酰基)氧基]甲基]四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯。
IR(KBr)cm-11734，16691H-NMR(CDCl3)δ1.35(3H，s)，1.58(3H，s)，3.02(3H，s)，3.98(3H，s)，4.51(2H，s)，4.8-5.2(3H，m)，5.73(1H，brs)，7.43(2H，brs)參考實施例10 將1.2g 4-[(3aR，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-[[(甲基磺酰基)氧基]甲基]四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯溶于12mL丙酮。向其中加入2.3g碘化鈉，然后將混合物加熱回流2小時。將反應混合物冷卻至室溫，隨后將其傾入20mL乙酸乙酯和20mL水的混合溶液。分離有機層，分離有機層并用20mL乙酸萃取水層。然后將其與有機層合并。用硫代硫酸鈉水溶液連續地洗滌混合物，然后用飽和鹽水溶液洗滌，隨后用無水硫酸鎂干燥。接著在減壓下除去溶劑。用硅膠柱色譜法[洗脫劑；甲苯∶乙酸乙酯＝2∶1]純化所得的殘余物，得到1.0g黃色油產物，4-[(3aR，4R，6S，6aR)-6-(碘甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸酯。
IR(KBr)cm-11734，1670，16541H-NMR(CDCl3)δ1.36(3H，s)，1.59(3H，s)，3.3-3.7(2H，m)，3.98(3H，s)，4.3-4.5(1H，m)，4.9-5.1(2H，m)，5.76(1H，d，J＝1.7Hz)，7.5-7.6(2H，m)參考實施例11 將0.55g 4-[(3aR，4R，6S，6aR)-6-(碘甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯溶于5mL甲醇，并在冰冷條件下向其中加入氨氣體至飽和。在相同的溫度下攪拌1小時后，在減壓下除去溶劑。將二丙基醚加到所得的殘余物，并過濾收集沉淀，得到0.45g黃色固體，4-[(3aR，4R，6S，6aR)-6-(碘甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺。
IR(KBr)cm-11684，16541H-NMR(DMSO-d6)δ1.30(3H，s)，1.51(3H，s)，3.3-3.5(2H，m)，4.3-4.4(1H，m)，4.79(1H，dd，J＝3.6，6.4Hz)，5.13(1H，dd，J＝1.2，6.0Hz)，6.00(1H，d，J＝1.6Hz)，7.53(1H，d，J＝4.4Hz)，7.76(1H，brs)，7.90(1H，d，J＝4.4Hz)，8.20(1H，brs)參考實施例12 在氮氣流下將5.3g 6-氟-3-羥基-2-吡嗪甲酰胺懸浮在53mL乙腈中，并在冰冷卻下向其中加入8.4mL N，O-雙(三甲基甲硅烷基)乙酰胺，然后在室溫下攪拌1.5小時。在冰冷下連續地將含有已用Carbohydrate Research(Carbohydr.Res.)，第203卷，第9期，第324-329頁(1990)所述的方法單獨制備的9.4g(2R，3R，4R)-4，5-雙(乙酰氧基)-2-(羥基甲基)四氫-3-呋喃基乙酸酯的53mL乙腈溶液以及7.2mL氯化錫(IV)加到反應混合物，將如此得到的混合物于室溫下攪拌20分鐘。將反應混合物傾入100mL乙酸乙酯和300mL飽和碳酸氫鈉水溶液的混合溶液。分離有機層，然后用700mL乙酸乙酯萃取水層。合并這種有機層，然后用無水硫酸鎂干燥有機層。接著在減壓下除去溶劑。將所得的殘余物溶于200mL甲醇，并向其中加入100mL 80％乙酸水溶液，然后在室溫下攪拌2小時。在減壓下除去溶劑，并用硅膠柱色譜法純化所得的殘余物[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝40∶1]。隨后向其中加入氯仿和二異丙醚，并過濾收集混合物以得到9.3g淺黃色固體，(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-5-(羥基甲基)四氫-3-呋喃基乙酸酯。
IR(KBr)cm-11752，16861H-NMR(DNSO-d6)δ2.04(3H，s)，2.10(3H，s)，3.64(1H，ddd，J＝2.5，5.0，13Hz)，3.86(1H，ddd，J＝2.5，5.0，13Hz)，4.29(1H，d，J＝6.0Hz)，5.35(1H，t，J＝6.0Hz)，5.49(1H，dd，J＝3.0，5.0Hz)，5.65(1H，t，J＝5.0Hz)，6.11(1H，d，J＝3.0Hz)，7.96(1H，brs)，8.42(1H，d，J＝5.0Hz)，8.49(1H，brs)參考實施例13 在氮氣流下將1.5g(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-5-(羥基甲基)四氫-3-呋喃基乙酸酯和0.84g 1H-四唑溶于30mL乙腈。然后在冰冷卻下向其中加入含有1.4mL二烯丙基二異丙基亞磷酰胺(phosphoramidite)的20mL乙腈溶液，并將混合物攪拌20分鐘。將含有1.4g間氯過苯甲酸的10mL乙腈溶液加到反應混合物，然后攪拌10分鐘。將60mL乙酸乙酯加到反應混合物，然后將所得的混合物傾入60mL水。分離有機層，并用90mL乙酸乙酯萃取水層。將有機層合并，并向其中加入30mL水。通過加入飽和碳酸氫鈉水溶液而將混合物調節至pH8，然后分離水層。用飽和鹽水沉溶液洗滌有機層，然后用無水硫酸鎂干燥，接著在減壓下除去溶劑。用硅膠柱色譜法[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝40∶1]純化所得的殘余物，得到1.3g黃色固體，(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-5-([[雙(烯丙氧基)磷酰基]氧基]甲基)-四氫-3-呋喃基乙酸酯。
IR(KBr)cm-11753，1694，1H-NMR(CDCl3)δ2.11(3H，s)，2.15(3H，s)，4.32-4.35(1H，m)，4.47-4.52(2H，m)，4.58-4.64(4H，m)，5.27(2H，dt，J＝1.0，10.5Hz)，5.37-5.44(4H，m)，5.90-5 6.00(2H，m)，6.28(1H，d，J＝4.0Hz)，6.32(1H，brs)，7.99(1H，d，J＝6.0Hz)，9.02(1H，brs)
參考實施例14 將0.23g(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-5-([[雙(烯丙氧基)磷酰基]氧基]甲基)四氫-3-呋喃基乙酸酯溶于4.0mL甲醇，并在冰冷卻下向其中加入0.17g28％甲醇鈉甲醇溶液，然后攪拌5分鐘。向其中加入0.15mL乙酸并在減壓下除去溶劑。使1.0g(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-5-([[雙(烯丙氧基)磷酰基]氧基]甲基)四氫-3-呋喃基乙酸酯進行與上述相同的反應。合并反應混合物，并用硅膠柱色譜法[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝40∶1]純化所得的混合物，得到0.35g黃色固體，[(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基]甲基二烯丙基磷酸酯。
IR(KBr)cm-116841H-NMR(DMSO-d6)δ3.1-4.7(9H，m)，5.1-5.5(4H，m)，5.7-6.2(3H，m)，7.94(1H，d，J＝6.0Hz)參考實施例15
在氮氣流下將0.82g[(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基]甲基二烯丙基磷酸酯溶于8.2mL甲醇和8.2mL四氫呋喃的混合溶液。向其中連續地加入0.11g四三苯基膦鈀(O)和0.28g三苯基膦，并將混合物于室溫下攪拌30分鐘。在水冷卻下將含有0.68mL甲酸的1.9mL四氫呋喃溶液和含有1.1mL正丁基胺的8.2mL四氫呋喃溶液連續地加到反應混合物，并將所得的混合物于30℃-50℃的溫度下攪拌1小時，并在40℃-45℃的溫度下攪拌2小時。用10mL水稀釋反應混合物，然后在減壓下除去有機溶劑。用20mL氯仿洗滌所得的水溶液，并用30mL水萃取洗滌液。合并所有的水層，并在減壓下除去溶劑。通過反相硅膠柱色譜法[洗脫劑；水]純化所得的殘余物，得到0.29g[(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基]甲基二氫磷酸酯的正丁基銨鹽黃色固體。
IR(KBr)cm-116851H-NMR(DNSO-d6)δ0.75-0.90(3H，m)，1.25-1.40(2H，m)，1.45-1.70(2H，m)，2.70-2.80(2H，m)，3.3-4.7(8H，m)，5.33(1H，d，J＝10Hz)，5.42(1H，d，J＝17Hz)，5.90(2H，brs)，7.95(1H，brs)，8.34(1H，d，J＝5.0Hz)，8.63(1H，brs)參考實施例16 將0.21g[(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基]甲基二氫磷酸酯的正丁基銨鹽懸浮在4.2mL乙腈和8.4mL N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液，然后向其中加入0.15g 1，1’-羰基二咪唑，隨后在室溫下攪拌2小時。接著將19μL甲醇加到反應混合物，然后攪拌30分鐘。隨后將含有0.86g三正丁基焦磷酸銨的2.0mL N，N-二甲基甲酰胺溶液加到反應混合物，并將所得的混合物進一步攪拌14小時。在減壓下除去溶劑，并連續地用離子交換柱色譜法[洗脫劑；0.10mol/L三乙基碳酸氫銨溶液]和反相柱色譜法[洗脫劑；水]純化所得的殘余物。將0.90mL甲醇加到所得的固體，并向其中加入含有0.17g高氯酸鈉的4.5mL丙酮溶液。將沉淀離心，然后用丙酮洗滌，得到60mg淺黃色固體的鈉鹽，[[2R，3S，4R，5R]-5-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基]甲基三磷酸酯。
IR(KBr)cm-13422，1686，1252，11081H-NMR(D2O)δ4.3-4.5(5H，m)，6.09(1H，s)，8.41(1H，d，J＝5.1Hz)參考實施例17 將0.12g 6-氯-4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺懸浮在1.2mL磷酸三甲酯，并在冰冷卻下向其中加入38μL氧氯化磷，然后在相同的溫度下攪拌1小時。在冰冷卻下將反應混合物傾入含有0.30mL正三丁基胺和0.72g正三丁基焦磷酸銨的3.0mL二甲基甲酰胺溶液，并將所得的溶液于相同的溫度下攪拌5分鐘。將10mL 0.1mol/L三乙基碳酸氫銨溶液和10mL水連續地加到反應混合物，并通過離子交換柱色譜法[洗脫劑；0.07mol/L三乙基碳酸氫銨溶液]和反相硅膠柱色譜法[洗脫劑；水]純化所得的混合物，得到41mg由{(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-氯-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基三磷酸酯的三乙基銨鹽組成的固體。將41mg所得的{(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-氯-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基三磷酸酯的三乙基銨鹽溶于0.43mL甲醇，然后向其中加入含有78mg高氯酸鈉的2.2mL丙酮溶液。將所得的固體離心，然后用2.2mL丙酮洗滌，得到26mg(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-氯-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基三磷酸酯的鈉鹽白色固體。
IR(kBr)cm-11700，16541H-NMR(D2O)δ4.25-4.5(5H，m)，6.08(1H，s)，8.44(1H，s)參考實施例18 43mg已由Journal of Chemical Society ChemicalCommunication(J.Chem.Soc.，Chem.Commun.)，第40-41頁(1989)所述的方法制備的2-[(2R，3S，4R，5R)-3，4-二羥基-5-甲氧基四氫-2-呋喃基]乙基膦酸二乙酯和82μL三乙基胺溶于1mL二氯甲烷。然后向其中連續地加入0.21mL苯甲酰氯和10mg 4-二甲基氨基吡啶，并將混合物在室溫下攪拌1小時。以與上述相同的方式處理0.80g2-[(2R，3S，4R，5R)-3，4-二羥基-5-甲氧基四氫-2-呋喃基]乙基膦酸乙酯。然后將10mL水加到所得的反應混合物，分離有機層，并用20mL氯仿萃取水層二次。合并有機層，然后連續地用水和飽和鹽水溶液洗滌。接著用無水硫酸鎂干燥，并在減壓下除去溶劑。用硅膠柱色譜法純化所得的殘余物[洗脫劑；氯仿]，得到1.38g(2R，3R，4R，5R)-4-(苯甲酰氧基)-5-[2-(二乙氧基磷酰基)乙基]-2-甲氧基四氫-3-呋喃基苯甲酸酯，其為無色油產物。
IR(neat)cm-117291H-NMR(CDCl3)δ1.3-1.35(6H，m)，1.8-2.2(4H，m)，3.46(3H，s)，4.0-4.2(4H，m)，4.3-4.45(1H，m)，5.10(1H，s)，5.52(1H，t，J＝5.1Hz)，5.59(1H，d，J＝5.1Hz)，7.33(2H，t，J＝7.8Hz)，7.41(2H，t，J＝7.8Hz)，7.5-7.6(2H，m)，7.90(2H，d，J＝7.3Hz)，7.99(2H，d，J＝7.3Hz)參考實施例19 將1.34g(2R，3R，4R，5R)-4-(苯甲酰氧基)-5-[2-(二乙氧基磷酰基)乙基]-2-甲氧基四氫-3-呋喃基苯甲酸酯和1.30mL乙酸酐溶于20mL乙酸，然后在冰冷卻下向其中加入0.13mL濃硫酸。升溫后，將混合物在室溫下靜置16小時。將反應混合物傾入50mL乙酸乙酯、50mL冰和100mL飽和碳酸氫鈉水溶液的混合溶液。分離有機層，并用50mL乙酸乙酯萃取水層二次。合并有機層，然后用飽和鹽水溶液洗滌。接著用無水硫酸鎂干燥，并在減壓下除去溶劑。用硅膠柱色譜法[洗脫劑；甲苯∶乙酸乙酯＝1∶1]純化所得的殘余物，以得到1.19g無色油產物，(2S，3R，4R，5R)-2-(乙酰氧基)-4-(苯甲酰氧基)-5-[2-(二乙氧基磷酰基)乙基]四氫-3-呋喃基苯甲酸酯。
IR(neat)cm-11729
1H-NMR(CDCl3)δ1.3-1.35(6H，m)，1.8-2.2(4H，m)，2.11，2.16(3H，2s)，4.05-4.2(4H，m)，4.45-4.5(1H，m)，5.45-5.7(2H，m)，6.37，6.62(1H，2d，J＝1.0，3.9Hz)，7.3-7.5(4H，m)，7.5-7.6(2H，m)，7.85-7.9(2H，m)，7.95-8.05(2H，m)參考實施例20 將50mg 3-羥基-2-吡嗪甲酸甲酯懸浮在1.6mL 1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷，并在氮氣氛下將溶液加熱回流1小時。靜置冷卻后，在減壓下除去溶劑并向其中加入含有0.17g(2S，3R，4R，5R)-2-(乙酰氧基)-4-(苯甲酰氧基)-5-[2-(二乙氧基磷酰基)乙基]四氫-3-呋喃基苯甲酸酯的乙腈溶液。然后在減壓下除去溶劑。在氮氣氛下將所得的殘余物懸浮在2.00mL乙腈，然后在冰冷卻下向其中加入67μL氯化錫(IV)，接著使其在室溫下靜置24小時。以與上述相同的方式處理300mg3-羥基-2-吡嗪甲酸甲酯，并將所得的反應混合物傾入50mL乙酸乙酯、50mL冰和100mL飽和碳酸氫鈉水溶液的混合溶液。過濾除去沉淀，分離有機層，并用50mL乙酸乙酯萃取水層。合并有機層，并用飽和鹽水溶液洗滌所得的有機層，然后用無水硫酸鎂干燥。接著在減壓下除去溶劑。用硅膠柱色譜法[洗脫劑；乙酸乙酯∶甲醇＝100∶1]純化所得的殘余物，得到0.76g無色油產物，4-{(2R，3R，4R，5R)-3，4-雙(苯甲酰氧基)-5-[2-(二乙氧基磷酰基)乙基]四氫-2-呋喃基}-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯。
IR(neat)cm-11734，1670
1H-NMR(CDCl3)δ13-1.35(6H，m)，1.85-2.3(4H，m)，3.97(3H，s)，4.05-4.2(4H，m)，4.45-4.S5(1H，m)，5.65(1H，t，J＝6.SHz)，5.74(1H，dd，J＝3.6，5.9Hz)，6.24(1H，d，J＝3.6Hz)，7.3-7.4(4H，m)，7.5-7.6(4H，m)，7.85-7.95(4H，m)參考實施例21通過已知的方法、其等同的方法或它們的聯合應用，以[2-14C]丙二酸二乙酯為原料生產6-氟-3-羥基-2-[2-14C]吡嗪甲酰胺(放射化學純度99.0％)。例如，國際專利公開WO00/10569描述了這種生產方法。
參考實施例22 以與參考實施例17相同的方式，由136mg4-[(2R，3R，4S，SR)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺得到140mg(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基三磷酸酯的鈉鹽白色固體。
1H-NMR(D2O)δ4.30-4.39(4H，m)，4.45-4.48(1H，m)，6.14(1H，s)，7.86(1H，d，J＝3.6Hz)，8.34(1H，d，J＝3.6Hz)參考實施例23
以與參考實施例17相同的方式，由0.1g 4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-6-甲基-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺得到0.06g(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-甲基-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基甲基三磷酸酯的鈉鹽白色固體。
IR(KBr)cm-11684，16541H-NMR(D2O)δ2.44(3H，s)，4.31-4.47(5H，m)，6.12(1H，s)，8.20(1H，s)參考實施例24 以與參考實施例17相同的方式，由0.06g4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-6-苯基-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺得到0.02g鈉鹽黃色固體，(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-5-苯基-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基三磷酸酯。
IR(KBr)cm-11684，1654
1H-NMR(D2O)δ4.07-4.41(5H，m)，6.22(1H，s)，7.47-7.60(3H，m)，7.99(2H，d，J＝7.8Hz)，8.58(1H，s)參考實施例25 以與參考實施例17相同的方式，由128mg 4-[(2R，3R，5S)-3-羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺得到146mg{(2S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-4-羥基四氫-2-呋喃基}甲基三磷酸酯的鈉鹽白色固體。
1H-NMR(D2O)δ2.04-2.18(2H，m)，4.23-4.29(1H，m)，4.50-104.58(2H，m)，4.78-4.88(1H，m)，6.03(1H，s)，7.86(1H，d，J＝3.8Hz)，8.41(1H，d，J＝3.8Hz)參考實施例26 將0.9g 4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯懸浮在9mL N，N-二甲基乙酰胺。向其中加入2.3mL苯甲醛二甲基縮醛和160mg吡啶鎓對甲苯磺酸鹽，并將混合物于65℃下攪拌7小時。然后，將反應溶液傾入10mL乙酸乙酯和5mL水的混合溶液。過濾收集沉淀的固體，得到0.24g白色固體，4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2-苯基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯。然后分離濾液，并連續地用5mL水和5mL飽和氯化鈉水溶液洗滌，并用無水硫酸鎂干燥。在減壓下除去溶劑，并用乙酸乙酯洗滌殘余物，得到0.40g白色固體，4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2-苯基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯IR(KBr)cm-13440，17311H-NMR(DMSO-d6)δ3.61-3.71(2H，m)，3.83(3H，s)，4.50-4.53(1H，m)，4.86(1H，dd，J＝2.2，6.6Hz)，5.01(1H，dd，J＝2.0，6.3Hz)，5.23(1H，t，J＝4.9Hz)，5.95(1H，s)，6.07(1H，d，J＝2.0Hz)，7.45-7.47(3H，m)，7.49(1H，d，J＝4.4Hz)，7.54-7.57(2H，m)，8.09(1H，d，J＝4.4Hz)參考實施例27 將0.30g 3-羥基-2-吡嗪甲酸甲酯溶于1.5mL二甲亞砜，然后連續地向其中加入0.70mL三乙基胺和0.54gL-天門冬氨酸二乙酯鹽酸鹽，接著在室溫下攪拌8小時。在將氯仿和水加到反應溶液之后，用2mol/L鹽酸調節混合物至pH2，并分離有機層。用水洗滌所得的有機層，然后用無水硫酸鎂干燥，并在減壓下除去溶劑。將甲苯和正己烷加到所得的殘余物，并過濾收集沉淀，得到0.18g(2S)-2-{[(3-羥基-2-吡嗪基)羰基]氨基}丁二酸二乙酯。
1H-NMR(CDCl3)δ1.27(3H，t，J＝7.2Hz)，1.30(3H，t，J＝7Hz)，2.94(1H，dd，J＝4.4，17.2Hz)，3.15(1H，dd，J＝4.8，17.2Hz)，4.14-4.23(2H，m)，4.24-4.32(2H，m)，4.99-5.02(1H，m)，8.15(1H，d，J＝2.6Hz)，8.40(1H，d，J＝1.5Hz)，8.78(1H，d，J＝5.9Hz)，12.4(1H，brs)參考實施例28 將2.0g 3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲腈溶于20mL甲醇，然后在冰冷卻下向其中加入氯化氫氣體至飽和。在相同的溫度下攪拌6小時后，向其中加入乙酸乙酯，并過濾收集沉淀，得到2.3g黃色固體，3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪亞甲氨酸(carboximidate)甲酯鹽酸鹽。
1H-NMR(DNSO-d6)δ4.27(3H，s)，7.88(1H，d，J＝3.4Hz)，7.91(1H，brs)，8.07(1H，brs)，8.15(1H，d，J＝3.4Hz)，8.71(1H，brs)參考實施例29 將0.40g 3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪亞甲氨酸甲酯鹽酸鹽溶于4mL25％氨水，然后在室溫下攪拌2小時。向其中加入甲醇，并過濾收集沉淀，得到0.21g淺黃色固體，3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪亞甲酰胺(carboximidamide)。
1H-NMR(DMSO-d6，D2O)δ7.60(1H，s)，8.19(1H，s)參考實施例30 將0.2g 4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺懸浮在4mL乙腈，然后在冰冷卻下向其中加入0.2mL二磷酰氯，隨后在相同的溫度下攪拌20分鐘。用1mol/L三乙基碳酸氫銨溶液將反應溶液調節至pH7，然后在減壓下濃縮。用反相硅膠柱色譜法[洗脫劑；水]純化所得的殘余物，得到0.29g(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基磷酸酯的三乙基銨鹽固體。
1H-NMR(D2O)δ1.28(9H，t，J＝7.3Hz)，3.20(6H，q，J＝7.3Hz)，4.15-4.20(1H，m)，4.28-4.40(4H，m)，6.11(1H，d，J＝2.0Hz)，7.80(1H，d，J＝4.2Hz)，8.34(1H，d，J＝4.2Hz)室溫下將含有0.35g高氯酸鈉的7ml丙酮溶液加到含有0.28g以上的一磷酸的三乙基銨鹽的1.4mL甲醇懸浮液，并將混合物在相同的溫度下攪拌1小時。過濾收集沉淀，然后用丙酮洗滌，得到0.19g鈉鹽白色固體，(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基磷酸酯。
IR(KBr)cm-116621H-NMR(D2O)δ4.15-4.19(1H，m)，4.29-4.38(4H，m)，6.12(1H，s)，7.80(1H，d，J＝3.8Hz)，8.35(1H，d，J＝3.8Hz)參考實施例31
將0.11g 4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-S-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺懸浮在2.0mL磷酸三甲酯，然后在冰冷卻下向其中加入0.11mL氧氯化磷，隨后在相同的溫度下攪拌2小時。將含有1.2mL三丁基胺和1.12g三丁基磷酸銨的6.0mL二甲基甲酰胺溶液加到反應混合物，并將所得的混合物于相同的溫度下攪拌1小時。將0.1mol/L三乙基碳酸氫銨溶液加到反應混合物，并所得的混合物于室溫下靜置12小時。在減壓下除去溶劑。用離子交換柱色譜法[洗脫劑；0.07mol/L三乙基碳酸氫銨溶液]純化所得的殘余物，以收集含有{(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基甲基二磷酸酯的三乙基銨鹽的餾分和含有{(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基三磷酸酯的三乙基銨鹽的餾分。結果是得到143mg固體和113mg另一種固體。將143mg所得的{(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基二磷酸酯的乙基銨鹽中的110mg溶于3.0mL甲醇，然后向其中加入含有0.28g高氯酸鈉的7.5mL丙酮溶液。將固體離心，然后用丙酮洗滌，得到64mg鈉鹽白色固體，{(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基二磷酸酯。
IR(KBr)cm-13418，1682，1236，983，9051H-NMR(D2O)δ4.2-4.5(5H，m)，6.12(1M，s)，7.83(1H，d，J＝3.7Hz)，8.35(1H，d，J＝3.7Hz)
實施例1 將65mg 4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺、44mg 1H-四唑和10mg分子篩4A懸浮在2.0mL乙腈。在冰冷卻下向其中分部分加入含有0.16g已通過Journal of MedicinalChemistry(J.Med.Chem.)第38卷，第20期，第3941-3950期(1995)所述的方法單獨制備的雙(S-新戊酰基-2-硫乙基)-N，N-二異丙基亞磷酰胺(phosphoramidite)的3.0mL乙腈溶液，并將所得的混合物于相同的溫度下攪拌40分鐘。將含有78mg間氯過苯甲酸的1.0mL乙腈溶液加到反應混合物，并將所得的混合物在相同的溫度下再攪拌10分鐘。將10mL乙酸乙酯和10mL加到反應混合物。分離有機層，并用20mL乙酸萃取水層。合并所有的有機層，并用飽和碳酸氫鈉洗滌合并的層，然后用無水硫酸鎂干燥。在減壓下除去溶劑。用硅膠柱色譜法[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝50∶1]純化所得的殘余物得到68mg黃色油產物，2，2-二甲基-硫代丙酸S-(2-{[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(3-氨基甲酰基-2-氧代-2H-吡嗪-1-基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基甲氧基]-[2-(2，2-二甲基-丙酰基硫烷基)-乙氧基]-磷酰氧基}-乙基)-酯。
IR(neat)cm-116841H-NMR(CDCl3)δ1.22(9H，s)，1.23(9H，s)，1.40(3H，s)，1.65(3H，s)，3.08(2H，t，J＝，6.9Hz)，3.10(2H，t，J＝6.8Hz)，4.04-4.12(4H，m)，4.29-4.36(1H，m)，4.39-4.45(1H，m)，4.59-4.64(1H，m)，4.86-4.88(2H，m)，6.02(1H，brs)，6.05(1H，d，J＝1.SHz)，7.84(1H，d，J＝4.3Hz)，7.87(1H，d，J＝4.3Hz)，9.17(1H，brs)實施例2 將60mg 2，2-二甲基-硫代丙酸S-(2-{[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(3-氨基甲酰基-2-氧代-2H-吡嗪-1-基)-2，2-二甲基-四氫呋喃并[3，4-d][1-3]間二氧雜環戊烯-4-基甲氧基]-[2-(2，2-二甲基-丙酰基硫烷基)-乙氧基]-磷酰氧基}-乙基)-酯溶于2.4mL水和2.4mL甲醇的混合溶劑，然后向其中分部分加入1.2g Dowex 50WX4-200離子交換樹脂(H+形式)，并將混合物于室溫下攪拌3小時。將反應混合物過濾，用甲醇洗滌移出的樹脂，并合并濾液和洗滌液。然后在減壓下除去有機溶劑。過濾收集沉淀，得到36mg白色固體，2，2-二甲基-硫代丙酸S-(2-[[(2R，3S，4R，5R)-5-(3-氨基甲酰基-2-氧代-2H-吡嗪-1-基)-3，4-二羥基-四氫呋喃-2-基甲氧基]-[2-(2，2-二甲基-丙酰基硫烷基)-乙氧基]-磷酰氧基]-乙基)酯。
IR(KBr)cm-11677，16601H-NMR(CDCl3)δ1.22(9H，s)，1,23(9H，s)，3.11(4H，t，J＝7.0Hz)，3.67(1H，brs)，4.05-4.15(4H，m)，4.25-4.38(3H，m)，4.44-4.52(2H，m)，4.67(1H，brs)，6.04(1H，d，J＝3.7Hz)，6.10(1H，brs)，7.90(1H，d，J＝4.1Hz)，8.08(1H，d，J＝4.1Hz)，8.95(1H，brs)
實施例3 以與實施例1相同的方式，由40mg 4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-6-氯-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺得到12mg黃色油產物，2，2-二甲基-硫代丙酸S-(2-{[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(3-氨基甲酰基-5-氯-2-氧代-2H-吡嗪-1-基)-2，2-二甲基-四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基甲氧基]-[2-(2，2-二甲基-丙酰基硫烷基)-乙氧基]-磷酰氧基}-乙基)酯。
IR(neat)cm-116871H-NMR(CDCl3)δ1.21(9H，s)，1.22(9H，s)，1.40(3H，s)，1.64(3H，s)，3.07(2H，dt，J＝7.0，1.SHz)，3.14(2H，t，J＝6.8Hz)，4.06-4.16(4H，m)，4.34-4.39(1H，m)，4.42-4.47(1H，m)，4.63-4.65(1H，m)，4.85(1H，dd，J＝6.4，2.2Hz)，4.89(1H，dd，J＝6.2，2.8Hz)，6.04(1H，d，J＝2.2Hz)，6.17(1H，brs)，7.98(1H，s)，9.07(1H，brs)實施例4
以與實施例2相同的方式，由12mg 2，2-二甲基-硫代丙酸S-(2-{[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(3-氨基甲酰基-5-氯-2-氧代-2H-吡嗪-1-基)-2，2-二甲基-四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基甲氧基]-[2-(2，2-二甲基-丙酰基硫烷基)-乙氧基]-磷酰氧基}-乙基)酯得到7mg黃色油產物，2，2-二甲基-硫代丙酸S-(2-{[(2R，3S，4R，5R)-5-(3-氨基甲酰基-5-氯-2-氧代-2H-吡嗪-1-基)-3，4-二甲基-四氫-呋喃-2-基甲氧基]-[2-(2，2-二甲基-丙酰基硫烷基)-乙氧基]-磷酰氧基}-乙基)酯。
IR(neat)cm-11686，16541H-NMR(CDCl3)δ1.21(9H，s)，1.23(9H，s)，3.00(1H，brs)，3.10-3.16(4H，m)，3.83(1H，brs)，4.05-4.20(4H，m)，4.25-4.55(5H，m)，6.02(1H，d，J＝2.4Hz)，6.40(1H，brs)，8.15(1H，s)，8.81(1H，brs)實施例5 將0.05g 4-[(3aR，4R，6S，6aR)-6-(碘甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺懸浮在2mL甲苯。向其中加入70mg已通過Journal ofMedicinal Chemistry(J.Med.Chem.)第37卷，第3902-3909頁(1994)所述的方法單獨制備的雙(2，2-二甲基-丙酰氧基甲基)磷酸酯的銀鹽，將混合物在60℃下攪拌2小時。以與以上相同的方式處理0.15g4-[(3aR，4R，6S，6aR)-6-(碘甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1.3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺。以所得的反應混合物合并，并在減壓下除去溶劑.用硅膠柱色譜法[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝10∶1]純化所得的殘余物，得到0.12g黃色固體，2，2-二甲基-丙酸[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(3-氨基甲酰基-2-氧代-2H-吡嗪-1-基)-2，2-二甲基-四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基甲氧基]-(2，2-二甲基-丙酰氧基甲氧基)-磷酰氧基甲酯。
IR(KBr)cm-11750，1684，16541H-NMR(DMSO-d6)δ1.14(18H，s)，1.29(3H，s)，1.51(3H，s)，3.5-3.7(2H，m)，4.34(1H，dd，J＝4.0，7.2Hz)，4.75(1H，dd，J＝2.8，6.0Hz)，4.86(1H，dd，J＝2.0，6.0Hz)，5.23(1H，t，J＝4.8Hz)，5.31(2H，s)，5.34(2H，s)，5.97(1H，d，J＝2.0Hz)，7.56(1H，d，J＝4.4Hz)，7.83(1H，brs)，8.06(1H，d，J＝4.4Hz)，8.43(1H，brs)實施例6 將0.1g 2，2-二甲基-丙酸[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(3-氨基甲酰基-2-氧代-2H-吡嗪-1-基)-2，2-二甲基-四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基甲氧基]-(2，2-二甲基-丙酰氧基甲氧基)-磷酰氧基甲酯溶于1.5mL甲醇和1.5mL水的混合溶液，然后向其中加入5mLDowex 50WX4-200離子交換樹脂(H+形式)，隨后在室溫下攪拌1.5小時。然后過濾除去樹脂，接著用2.5mL乙腈和2.5mL水的混合溶液洗滌。將所得的洗滌液和濾液合并，并在減壓下除去溶劑。將所得殘余物凍干，得到0.07g淺黃色固體，2，2-二甲基-丙酸[(2R，3S，4R，5R)-5-(3-氨基甲酰基-2-氧代-2H-吡嗪-1-基)-3，4-二羥基-四氫-呋喃-2-基甲氧基]-(2，2-二甲基-丙酰氧基甲氧基)-磷酰氧基甲酯。
IR(KBr)cm-11751，16701H-NMR(DMSO-d6)δ1.16(18H，s)，3.64(1H，dd，J＝2.0，12.4Hz)，3.81(1H，dd，J＝2.0，12.4Hz)，3.9-4.0(3H，m)，5.46(2H，s)，5.49(2H，s)，5.92(1H，d，J＝2.4Hz)，7.54(1H，d，J＝4.4Hz)，7.75(1H，brs)，8.29(1H，d，J＝4.4Hz)，8.35(1H，brs)實施例7 將0.50g 4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺懸浮在50mL吡啶。然后連續地向此懸浮液加入含有2.2g已通過Antiviral Research，第43卷，第37-53頁(1999)所述的方法單獨制備的氯苯基磷酰基P→N-1-丙氨酸甲酯的43mL四氫呋喃溶液和1.3mL N-甲基咪唑，并將混合物于室溫下攪拌3小時。在減壓下從反應混合物中除去溶劑。用硅膠柱色譜法[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝40∶1]純化所得的殘余物，得到0.43g淺黃色固體，(2S)-[[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(3-氨基甲酰基-2-氧代-2H-吡嗪-1-基)-2，2-二甲基-四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基甲氧基]-苯氧基-磷酰基氨基]-丙酸甲酯。
IR(KBr)cm-11749，16841H-NMR(DMSO-d6)δ1.22，1.23(3H，d，J＝7.1Hz)，1.28，1.30(3H，s)，1.50，1.51(3H，s)，3.58，3.60(3H，s)，3.80-3.88(1H，m)，4.1S-4.34(2H，m)，4.42-4.45，4.50-4.54(1H，m)，4.74，4.81(1H，dd，J＝2.0，6.3Hz)，4.67，4.93(1H，dd，J＝3.0，6.1Hz)，5.94-5.97(1H，m)，6.09-6.15(1H，m)，7.08-7.20(3H，m)，7.32-7.39(2H，m)，7.46，7.51(1H，d，J＝4.0Hz)，7.75-7.80(1H，brs)，7.84-7.87(1H，m)，8.26-8.32(1H，m)。
實施例8 以與實施例2相同的方式，由190mg(2S)-{[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(3-氨基甲酰基-2-氧代-2H-吡嗪-1-基)-2，2-二甲基-四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基甲氧基]-苯氧基-磷酰基氨基)-丙酸甲酯得到49mg白色固體，(2S)-{[(2R，3S，4R，5R)-5-(3-氨基甲酰基-2-氧代-2H-吡嗪-1-基)-3，4-二羥基-四氫-呋喃-2-基甲氧基]-苯氧基-磷酰基氨基]-丙酸甲酯。
IR(KBr)cm-11735，1676，16611H-NMR(DMSO-d6)δ1.21，1，23(3H，d，J＝7.2Hz)，3.57，3.58(3H，s)，3.81-3.98(2H，m)，4.02-4.04(1H，m)，104.12-4.41(3H，m)，5.60(2H，brs)，5.91-5.94(1H，m)，6.10-6.20(1H，m)，7.15-7.24(3H，m)，7.34-7.45(3H，m)，7.73(1H，brs)，7.81，7.86(1H，d，J＝4.2Hz)，8.29(1H，brs)實施例9
將0.20g 4-[(2R，3R，4R，5R)-3，4-雙(苯甲酰氧基)-5-[2-(二乙氧基磷酰基)乙基]四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯溶于2.0mL乙腈，然后在冰冷卻下向其中加入0.33mL溴三甲基甲硅烷，隨后在0℃下攪拌30分鐘，接著在室溫下攪拌1小時。在減壓下從反應混合物中除去溶劑。將2.0mL甲醇加到所得的固體并溶解，隨后在冰冷卻下向其中吹入氨氣體至飽和，然后在室溫下攪拌3小時。在減壓下從反應混合物中除去溶劑，加入10mL水，并用氯仿洗滌混合物。過濾不溶產物，然后在減壓下除去溶劑。通過反相硅膠柱色譜法[洗脫劑；水]純化所得的產物，得到28mg淺黃色固體，2-[(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基]乙基磷酸。
IR(KBr)cm-116761H-NMR(D2O)δ1.7-1.95(2H，m)，2.0-2.2(2H，m)，3.95-4.0(1H，m)，4.2-4.25(1H，m)，4.33(1H，d，J＝4.6Hz)，6.06(1H，s)，7.79(1H，d，J＝4.0Hz)，8.03(1H，d，J＝4.0HZ)實施例10
以與參考實施例6相同的方式，由0.43g 3-羥基-6-甲基-2-吡嗪甲酰胺制備1.2g黃色油產物，[(2R，3R，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-甲基-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-雙(苯甲酰氧基)四氫-2-呋喃基]甲基苯甲酸酯。
IR(KBr)cm-11727，1686，16541H-NMR(CDCl3)δ2.15(3H，s)，4.67(1H，dd，J＝3.4，12.7Hz)，4.85-4.88(1H，m)，4.99(1H，dd，J＝2.4，12.7Hz)，5.88-5.95(2H，m)，6.03(1H，d，J＝3.2Hz)，6.47(1H，d，J＝3.9Hz)，7.36-7.65(10H，m)，7.93-8.00(4H，m)，8.10-8.13(2H，m)，9.12(1H，d，J＝3.9Hz)實施例11 以與參考實施例7相同的方式，由1.05g[(2R，3R，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-甲基-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-雙(苯甲酰氧基)四氫-2-呋喃基]甲基苯甲酸酯得到0.4g淺黃色固體，4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-6-甲基-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺。
IR(KBr)cm-11698，16541H-NMR(DMSO-d6)δ2.24(3H，s)，3.62-3.67(1H，m)，3.80-3.85(1H，m)，3.94-4.01(3H，m)，5.10(1H，d，J＝5.1Hz)，5.32(1H，t，J＝4.8Hz)，5.62(1H，d，J＝3.2Hz)，5.92(1H，d，J＝1.7Hz)，7.76(1H，brs)，8.16(1H，s)，8.48(1H，brs)實施例12
以與參考實施例6相同的方式，由0.35g 3-羥基-6-苯基-2-吡嗪甲酰胺得到0.5g黃色油產物，[(2R，3R，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-5-苯基-1(2H)-吡嗪基]-3，4-雙(苯甲酰氧基)四氫-2-呋喃基]甲基苯甲酸酯。
IR(KBr)cm-11720，1717，1684，16541H-NMR(CDCl3)δ4.77(1H，dd，J＝3.6，12.4Hz)，4.90-104.97(2H，m)，5.93-5.99(2H，m)，6.03(1H，d，J＝3.7Hz)，6.58(1H，d，J＝4.2Hz)，7.32-7.68(14H，m)，7.95-8.05(6H，m)，8.11(1H，s)，8.93(1H，d，J＝3.4Hz)實施例13 以與參考實施例7相同的方式，由0.48g[(2R，3R，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-5-苯基-1(2H)-吡嗪基]-3，4-雙(苯甲酰氧基)四氫-2-呋喃基]甲基苯甲酸酯得到0.12g黃色固體，4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-6-苯基-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺。
IR(KBr)cm-11685，1670，1654
1H-NMR(DMSO-d6)δ3.71-3.75(1H，m)，3.93-3.97(1H，m)，4.02-4.15(3H，m)，5.10(1H，d，J＝6.6Hz)，5.67(1H，t，J＝4.0Hz)，5.73(1H，d，J＝4.6Hz)，S.96(1H，s)，7.32-7.46(3H，m)，7.82(1H，brs)，7.88(2H，d，J＝7.8Hz)，8.43(1H，brs)，9.07(1H，s)實施例14 將0.24g 3-羥基-2-吡嗪甲酰胺懸浮在5mL 1，1，1-3，3，3-六甲基二硅氮烷，并將懸浮液加熱回流2小時。冷卻后，在減壓下除去溶劑。加入5mL二甲苯，并在減壓下除去溶劑。往所得的殘余物連續地加入12.5mL乙腈、0.50g[(2S，4R)-4，5-雙(乙酰氧基)四氫-2-呋喃基]甲基苯甲酸酯和0.29mL氯化錫(IV)，然后將混合物于室溫下攪拌30分鐘。將水加到反應溶液，并在減壓下除去有機溶劑。然后將飽和的碳酸氫鈉水溶液和乙酸乙酯加到殘余物，并通過過濾除去不溶產物。分離有機層，并用乙酸乙酯萃取水層。所得的有機層用無水硫酸鎂干燥并在減壓下除去溶劑。用硅膠色譜法[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝16∶1]純化所得的殘余物，得到0.61g淺黃色固體，{(2S，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]四氫-2-呋喃基}甲基苯甲酸酯。
IR(KBr)cm-11743，1706，16671H-NMR(CDCl3)δ2.13-2.23(5H，m)，4.67(1H，dd，J＝4.0，12.8Hz)，4.78-4.85(2H，m)，5.48(1H，d，J＝4.0Hz)，6.05(1H，s)，6.61(1H，brs)，7.47-7.51(2H，m)，7.58(1H，d，J＝4.0Hz)，7.62-7.66(1H，m)，7.96(1H，d，J＝4.0Hz)，8.02-8.04(2H，m)，9.06(1H，brs)實施例15 將1.21g{(2S，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]四氫-2-呋喃基}甲基苯甲酸酯溶于36mL甲醇，然后在冰冷卻下向其中加入1.28g 28％甲醇鈉甲醇溶液，隨后在相同的溫度下攪拌1小時。通過加入1mol/L鹽酸而將反應溶液調節至pH5，并在減壓下除去溶劑。用硅膠色譜法[洗脫劑；正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1]純化所得的殘余物，并向其中加入2-丙醇和乙酸乙酯的混合溶劑。過濾收集沉淀，得到0.47g白色固體，4-[(2R，3R，5S)-3-羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺。
IR(KBr)cm-11682，16541H-NMR(DMSO-d6)δ1.72(1H，dd-J＝5.2，13.2Hz)，1.86-1.93(1H，m)，3.61-3.66(1H，m)，3.88-3.93(1H，m)，4.25(1H，t，J＝4.0Hz)，4.43-4.48(1H，m)，5.28(1H，t，J＝5.0Hz)，5.77(1H，d，J＝4.0Hz)，5.82(1H，s)，7.56(1H，d，J＝4.4Hz)，7.76(1H，brs)，8.37(1H，d，J＝4.4Hz)，8.42(1H，brs)實施例16
將0.5g 4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺，然后向其中加入0.29g 1，1’-羰基二咪唑，隨后在室溫下攪拌1小時。然后向其中加入0.21mL 1，4-丁二醇，并將混合物于室溫下攪拌1小時，然后在60℃下攪拌1小時。再向其中加入0.29mL 1，4-丁二醇，并將混合物于60℃下攪拌3小時。在減壓下濃縮反應溶液，然后將30 mL乙酸乙酯、30mL水和5mL飽和鹽水溶液加到濃縮物。分離有機層，然后用20mL乙酸乙酯萃取水層。合并有機層，然后用無水硫酸鎂干燥，并在減壓下除去溶劑。用硅膠色譜法[洗脫劑；乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1]純化所得的殘余物，得到0.31g淺黃色油產物，{(3aR，4R，6R，6aR)-6-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基}甲基4-羥基丁基碳酸酯。
IR(KBr)cm-11750，1684，16541H-NMR(CDCl3)δ1.41(3H，s)，1.47-1.54(2H，m)，1.62-1.68(5H，m)，3.60-3.66(2H，m)，4.04-4.16(2H，m)，4.32(1H，dd，J＝3.2，12.4Hz)，4.48(1H，dd，J＝2.2，12.2Hz)，4.73-4.76(1H，m)，4.79(1H，dd，J＝2.4，6.0Hz)，4.92(1H，dd，J＝1.8，6.2Hz)，5.98(1H，d，J＝2.0Hz)，6.31(1H，d，J＝23.6Hz)，7.77(1H，s)，7.75(1H，s)，8.78(1H，br)，9.25(1H，brs)實施例17 將1.2g{(3aR，4R，6R，6aR)-6-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-2，2-二甲基-四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基}甲基4-羥基丁基碳酸酯溶于8mL甲醇和60mL水的混合溶劑，然后向其中加入19g Dowex 50WX4-200離子交換樹脂(H+形式)，然后在室溫下攪拌3小時。接著過濾除去樹脂，并用甲醇洗滌，然后用水洗滌。合并所得的濾液和洗滌液，并在減壓下除去溶劑。將殘余物溶于水，并將溶液凍干。用乙腈洗滌所得的固體，然后用氯仿洗滌，得到0.16g無色固體，(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基4-羥基丁基碳酸酯。
IR(KBr)cm-11745，16641H-NMR(DMSO-d6)δ1.45-1.51(2H，m)，1.64-1.67(2H，m)，3.40-3.42(2H，m)，3.90(1H，d，J＝4.8Hz)，4.08-4.15(4H，m)，4.36-4.47(3H，m)，5.38(1H，d，J＝5.2Hz)，5.74(1H，brs)，5.92(1H，s)，7.50(1H，d，J＝3.6Hz)，7.75(1H，brs)，7.81(1H，d，J＝3.6Hz)，8.30(1H，brs)實施例18 將200mg(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[(乙酰氧基)甲基]-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]四氫-3-呋喃基乙酸酯溶于2mL吡啶，然后向其中加入0.1mL肼一水合物，隨后在室溫下攪拌1小時。然后向其中加入丙酮，接著在減壓下除去溶劑。用硅膠色譜法[洗脫劑；乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1]純化所得的殘余物，得到42mg白色固體，{(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基乙酸酯。
1H-NMR(DMSO-d6)δ3.20(3H，s)，3.90(1H，dd，J＝6.8，11.5)，4.06-4.09(1H，m)，4.12-4.17(1H，m)，4.31(1H，dd，J＝5.6，12.7)，4.35(1H，dd，J＝3.4，12.7)，5.33(1H，d，J＝6.6)，5.73，(1H，d，J＝5.1)，5.90(1H，d，J＝2.0)，7.57(1H，d，J＝4.4)，7.75(1H，brs)，7.85(1H，d，J＝4.4)，8.31(1H，brs)實施例19 將5g 4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺懸浮在25mL乙酸酐和12.5mL吡啶，并將懸浮液在50℃下攪拌1小時，然后在70℃下攪拌1小時。將懸浮液冷卻至室溫后，過濾除去不溶產物。在減壓下濃縮殘余物，并通過硅膠柱色譜法[洗脫劑；乙酸乙酯]純化濃縮物，得到1.26g淺黃色固體，(2R，3R，4R，5R)-2-[3-[(乙酰基氨基)羰基]-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-4-(乙酰氧基)-5-[(乙酰氧基)甲基]四氫-3-呋喃基乙酸酯。
IR(KBr)cm-11750，17091H-NMR(DMSO-d6)δ2.06(6H，s)，2.09(3H，s)，2.17(3H，s)，4.26-4.42(3H，m)，5.35(1H，t，J＝6.1Hz)，5.50(1H，dd，J＝3.7，6.1Hz)，6.06(1H，d，J＝3.4Hz)，7.50(1H，d，J＝4.4Hz)，7.83(1H，d，J＝4.4Hz)，11.44(1H，s)實施例20
將0.2g 4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺懸浮在1mL乙酸酐和4mL吡啶，并將懸浮液在室溫下攪拌1小時。在減壓下濃縮反應溶液，將5mL的水加到殘余物，并用5mL乙酸乙酯萃取混合物10次。合并有機層，向其中加入1mL水，并用2mol/L鹽酸調節所得的溶液至pH3。分離有機層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，然后用無水硫酸鎂干燥。然后在減壓下除去溶劑。用硅膠柱色譜法[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝10∶1]純化所得的殘余物，得到0.15g淺黃色油產物，{(3aR，4R，6R，6aR)-6-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基}甲基乙酸酯。
IR(KBr)cm-11743，16851H-NMR(CDCl3)δ1.41(3H，s)，1.65(3H，s)，1.94(3H，s)，4.32(1H，dd，J＝4.4，12.5Hz)，4.40(1H，dd，J＝2.9，12.5Hz)，154.68-4.71(1H，m)，4.76(1H，dd，J＝2.9，6.1Hz)，4.87(1H，dd，J＝2.1，6.2Hz)，5.95(1H，d，J＝2.0Hz)，6.17(1H，brs)，7.70(1H，d，J＝4.2Hz)，7.80(1H，d，J＝4.2Hz)，9.13(1H，brs)實施例21
將0.5g 4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2-苯基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酸甲酯懸浮在含有大約5 mol/L無水氨的5mL甲醇溶液，并將懸浮液于室溫下攪拌3小時。過濾收集沉淀，然后用甲醇洗滌，得到0.34g無色固體，4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2-苯基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺。
IR(KBr)cm-116841H-NMR(DMSO-d6)δ3.61-3.75(2H，m)，4.52-4.54(1H，m)，4.87(1H，dd，J＝2.4，6.3Hz)，5.00(1H，dd，J＝2.2，6.6Hz)，5.25(1H，t，J＝4.9HZ)，5.96(1H，s)，6.10(1H，d，J＝2.0Hz)，7.45-7.48(3H，m)，7.54-7.57(3H，m)，7.76(1H，brs)，8.06(1H，d，J＝4.4Hz)，8.34(1H，brs)實施例22 將1.39g 3-羥基-2-吡嗪甲酰胺懸浮在10mL 1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷，并將懸浮液加熱回流10小時。冷卻后，在減壓下除去溶劑。然后加入5mL甲苯并在減壓下除去溶劑。往所得的殘余物中連續地加入15mL乙腈、4.14g β-D-呋喃核糖1，2，3，5-四乙酸酯和1.99mL三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯，并將所得的混合物于室溫下攪拌2小時。然后向其中加入0.95g β-D-呋喃核糖1，2，3，5-四乙酸酯，并將混合物于室溫下再攪拌1小時。在減壓下除去溶劑，并加入氯仿和水。分離有機層，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，然后用無水硫酸鎂干燥。在減壓下除去溶劑。將乙酸乙酯加到殘余物，并過濾收集沉淀，得到1.73g(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[(乙酰氧基)甲基]-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]四氫-3-呋喃基乙酸酯。
1H-NMR(CDCl3)δ2.10(3H，s)，2.16(3H，s)，2.17(3H，s)，4.40-4.52(3H，m)，S.29(1H，t，J＝6.2Hz)，5.48(1H，dd，J＝3.2，S.1Hz)，6.05(1H，brs)，6.16(1H，d，J＝3.2Hz)，7.79(1H，d，J＝4.2Hz)，7.81(1H，d，J＝4.2Hz)，8.98(1H，brs)，實施例23 將0.40g(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[(乙酰氧基)甲基]-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]四氫-3-呋喃基乙酸酯懸浮在四氫呋喃，然后在冰冷卻下將0.06g氫化鈉(60％礦物油懸浮液)和0.14mL新戊酰氯連續地加到懸浮液。將混合物于室溫下攪拌2小時。然后再向其中加入0.06g氫化鈉(60％礦物油懸浮液)和0.14mL新戊酰氯，并將混合物于室溫下攪拌1小時。進一步向其中加入0.06g氫化鈉(60％礦物油懸浮液)和0.14mL新戊酰氯，并將混合物于室溫下攪拌1小時。將乙酸乙酯和水加到反應溶液。分離有機層，用水洗滌，并用無水硫酸鎂干燥。在減壓下除去溶劑，并通過硅膠色譜法[洗脫劑；正己烷∶乙酸乙酯＝3∶1]純化所得的殘余物，得到0.14g黃色固體，(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-(乙酰氧基)甲基]-5-[3-{[(2，2-二甲基丙酰基)氨基]羰基}-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]四氫-3-呋喃基乙酸酯。
1H-NMR(CDCl3)δ1.30(9H，s)，2.13(3H，s)，2.16(6H，s)，4.39-4.49(2H，m)，4.52-4.55(1H，m)，5.29(1H，t，J＝5.9Hz)，5.48(1H，dd，J＝3.7，5.6Hz)，6.22(1H，d，J＝3.4Hz)，7.84(1H，d，J＝4.2Hz)，7.86(1H，d，J＝4.2Hz)，11.82(1H，brs)實施例24 將0.16g(2S)-2-{[(3-羥基-2-吡嗪基)羰基]氨基}丁二酸二乙酯懸浮在2mL 1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷，并將懸浮液加熱回流1小時。冷卻后，在減壓下除去溶劑。加入1mL甲苯，并在減壓下除去溶劑。將2mL乙腈、0.24g β-D-呋喃核糖1，2，3，5-四乙酸酯和0.11mL三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯連續地加到所得的殘余物，并將所得的混合物于室溫下攪拌1小時。向其中加入氯仿和水，并分離有機層。用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌所得的有機層，然后用無水硫酸鎂干燥。在減壓下除去溶劑。用硅膠色譜法[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝40∶1]純化所得的殘余物，得到0.25g淺黃色固體，(2S)-2-{[(4-{(2R，3R，4R，5R)-3，4-雙(乙酰氧基)-5-[(乙酰氧基)甲基]四氫-2-呋喃基}-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪基)羰基]氨基}丁二酸二乙酯。
1H-NMR(CDCl3)δ1.25(3H，t，J＝7.2Hz)，1.28(3H，t，J＝7.2Hz)，2.10(3H，s)，2.15(3H，s)，2.17(3H，s)，2.98(1H，dd，J＝4.8，17.2Hz)，3.11(1H，dd，J＝4.8Hz，17.2Hz)，4.13-4.18(2H，m)，4.21-4.28(2H，m)，4.40-4.47(2H，m)，4.49-4.51(1H，m)，5.09-S.12(1H，m)，5.26-5.28(1H，m)，5.43-5.44(1H，m)，6.27(1H，d，J＝3.3Hz)，7.77(1H，d，J＝4.0Hz)，7.79(1H，d，J＝4.0Hz)，10.13(1H，d，J＝8.1Hz)
實施例25 將0.21g(2S)-2-{[(4-{(2R，3R，4R，5R)-3，4-雙(乙酰氧基)-5-[(乙酰氧基)甲基]四氫-2-呋喃基}-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪基)羰基]氨基}丁二酸二乙酯溶于乙醇，然后在冰冷卻下向其中加入75mg乙醇鈉，接著在室溫下攪拌1小時。隨后終止攪拌，并將反應混合物在室溫下靜置過夜。向其中連續加入0.13mL乙酸和1mL水并在減壓下除去溶劑。用硅膠色譜法[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝40∶1]純化所得的殘余物。將乙酸乙酯和正己烷加到所得的殘余物，并過濾收集沉淀，得到39mg黃色固體，(2S)-2-{[(4-{(2R，3R，4S，5R)-5-[(乙酰氧基)甲基]-3，4-二氫-2-呋喃基}-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪基)羰基]氨基}丁二酸二乙酯。
IR(KBr)cm-11739，16701H-NMR(DMSO-d6)δ1.18(6H，t，J＝6.8Hz)，2.10(3H，s)，2.89(2H，brs)，3.90(1H，brs)，4.07-4.15(6H，m)，4.30-4.38(2H，m)，4.87-4.92(1H，m)，5.30-5.34(1H，m)，5.77-5.79(1H，m)，5.91(1H，s)，7.70(1H，d，J＝3.4Hz)，7.96(1H，d，J＝3.4Hz)，9.83(1H，d，J＝7.6Hz)實施例26
將0.31g 4-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(羥基甲基)-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺溶于2mL N，N-二甲基甲酰胺，然后向其中連續地加入0.33gN-(叔丁氧基羰基)-1-纈氨酸、12mg 4-二甲基氨基吡啶和0.41g 1，3-二環己基碳化二亞胺，接著在室溫下攪拌2小時。將0.5mL乙酸加到混合物，并將其在室溫下攪拌30分鐘。然后向其中加入乙酸乙酯和水，并過濾除去不溶產物。分離有機層，用1mol/L鹽酸洗滌，并用無水硫酸鎂干燥。然后在減壓下除去溶劑。通過硅膠色譜法[洗脫劑；乙酸乙酯]純化所得的殘余物，得到0.40g黃色固體，{(3aR，4R，6R，6aR)-6-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基}甲基(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酸酯。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.83-0.86(6H，m)，1.30(3H，s)，1.38(9H，s)，1.52(3H，s)，1.86-1.95(1H，m)，3.79(1H，t，J＝7.2Hz)，4.27-4.34(2H，m)，4.46(1H，brs)，4.78-4.80(1H，m)，5.03(1H，d，J＝6.1Hz)，6.00(1H，s)，7.24(1H，d，J＝7.2Hz)，7.54(1H，d，J＝4.3Hz)，7.77(1H，brs)，7.86(1H，d，J＝4.3Hz)，8.28(1H，brs)實施例27
將0.26g{(3aR，4R，6R，6aR)-6-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4-d][1，3]間二氧雜環戊烯-4-基}甲基(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酸酯溶于3mL甲醇和3mL水的混合溶劑，然后向其中加入2.6g a Dowex 50WX4-200離子交換樹脂(H+形式)，接著在室溫下攪拌3小時。然后過濾除去樹脂，隨后用甲醇洗滌，接著用水洗滌。合并所得的濾液和洗滌液，并在減壓下除去溶劑。加入2mL甲苯并在減壓下除去溶劑，得到70mg淺黃色固體，{(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酸酯。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.87-0.91(6H，m)，1.38(9H，s)，1.97-2.05(1H，m)，3.53(2H，br)，3.85-3.93(2H，m)，4.07(1H，brs)，4.19(1H，brs)，4.31-4.35(1H，m)，4.39-4.42(1H，m)，5.92(1H，s)，7.32(1H，d，J＝7.6Hz)，7.60(1H，d，J＝4.1Hz)，7.76(1H，brs)，7.87(1H，d，＝4.1Hz)，8.32(1H，brs)實施例28 將14.1g 3-羥基-2-吡嗪甲酰胺懸浮在150mL甲苯，然后將懸浮液在回流下攪拌1小時，接著進行共沸脫氫。在冷卻至室溫后，在減壓下除去溶劑。將42.3mL 1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷加到殘余物，并將所得的混合物加熱回流2小時。在減壓下濃縮反應混合物，向其中加入45mL甲苯并在減壓下除去溶劑。使用45mL甲苯，重復相同的以上操作二次。將殘余物溶于40mL乙腈，然后將其加到含有48.4gβ-D-呋喃核糖1-乙酸酯2，3，5-三苯甲酸酯的100mL乙腈溶液。在室溫下將25g氯化錫(IV)滴到混合物。將所得的溶液于50℃下攪拌4.5小時。冷卻至室溫后，將其加到由100g碳酸氫鈉、500mL水和280mL二氯甲烷組成的混合溶液。過濾不溶產物，并分離有機層。用50ml水洗滌所得的有機層，然后用50mL飽和氯化鈉水溶液洗滌，并在減壓下除去溶劑。將280mL乙酸乙酯和30mL水加到所得的殘余物，并將混合物加熱至50℃，然后冷卻至5℃。過濾收集沉淀，得到40.9g淺灰色-白色固體，[(2R，3R，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-雙(苯甲酰氧基)四氫-2-呋喃基]甲基苯甲酸酯。
IR(KBr)cm-11729，16831H-NMR(DMSO-d6)δ4.69-4.78(2H，m)，4.88-4.92(1H，m)，S.97-6.0S(2H，m)，6.34(1H，d，J＝2.4Hz)，7.40-7.54(7H，m)，7.62-7.71(3H，m)，7.80(1H，brs)，7.84-7.86(2H，m)，7.95-258.03(5H，m)，8.22(1H，m)實施例29 室溫下將含有2.2g氫氧化鈉的17.5mL水加到含有35g(2R，3R，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-雙(苯甲酰氧基)四氫-2-呋喃基]甲基苯甲酸酯的330mL甲醇懸浮液。將混合物于相同的溫度下攪拌2小時，然后冷卻至5℃。過濾收集所得的沉淀，得到12.5g淺黃色固體，4-[(2R，3R，45，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺(水含量0.4％)。
IR(KBr)cm-13406，16541H-NMR(DMSO-d6)δ3.65(1H，ddd，J＝2.6，5.1，12.5Hz)，3.81(1H，ddd，J＝2.2，4.8，12.1Hz)，3.96-4.00(2H，m)，4.01-4.03(1H，m)，5.10(1H，d，J＝5.9Hz)，5.28(1H，t，J＝4.9Hz)，5.64(1H，d，J＝4.8Hz)，5.93(1H，d，J＝2.6HZ)，7.54(1H，d，J＝4.0Hz)，7.74(1H，s)，8.29(1H，d，J＝4.0HZ)，8.36(1H，s)實施例29(2)將11g在實施例29中所得的4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺溶于300mL水(45℃)，然后向其中加入活性炭，接著攪拌10分鐘。過濾活性碳，并用20mL水洗滌二次。合并濾液和洗滌液，并向其中加入1.1g活性碳，然后攪拌10分鐘。過濾活性碳，用20mL水洗滌二次，并在減壓下濃縮。將90mL水加到濃縮物，然后過濾混合物，得到9.35g無色結晶，4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺一水合物(水含量6.8％)。
IR(KBr)cm-13578，3399，3091，2929，16741H-NMR(DMSO-d6)δ3.65(1H，ddd，J＝2.6，5.1，12.5Hz)，3.81(1H，ddd，J＝2.2，4.8，12.1Hz)，3.96-4.00(2H，m)，4.01-4.03(1H，m)，5.10(1H，d，J＝5.9Hz)，5.28(1H，t，J＝4.9Hz)，5.64(1H，d，J＝4.8Hz)，5.93(1H，d，J＝2.6Hz)，7.54(1H，d，J＝4.0Hz)，7.74(1H，s)，8.29(1H，d，J＝4.0Hz)，8.36(1H，s)實施例30
以與參考實施例6相同的方式，由0.23g 6-氟-3-羥基-2-吡嗪甲酰胺得到0.47g淺黃色固體，[(2R，3R，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-雙(苯甲酰氧基)四氫-2-呋喃基]甲基苯甲酸酯。
IR(KBr)cm-11726，16901H-NMR(DMSO-d6)δ4.6-5.0(3H，m)，5.9-6.1(2H，m)，6.33(1H，s)，7.3-8.2(17H，m)，8.53(1H，brs)實施例31 以與參考實施例6相同的方式，由4.0g 6-氟-3-羥基-2-吡嗪甲酰胺，得到7.37g淺黃色固體，(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[(乙酰氧基)甲基]-5-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]四氫-3-呋喃基乙酸酯。
IR(KBr)cm-11748，1715，16621H-NMR(CDCl3)δ2.04(3H，s)，2.08(3H，s)，2.18(3H，s)4.47-4.58(3H，m)，5.20-5.34(1H，m)，5.51(1H，dd，J＝2.3，5.0Hz)，6.16(1H，d，J＝2.2Hz)，6.41(1H，brs)，7.95(1H，d，J＝5.6Hz)，8.94(1H，brs)實施例32
將0.15g[(2R，3R，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-雙(苯甲酰氧基)四氫-2-呋喃基]甲基苯甲酸酯溶于2.0mL甲醇，然后在冰冷卻條件下向其中加入0.14g 28％甲醇鈉甲醇溶液。將所得的混合物于相同的溫度下攪拌20分鐘，然后在室溫下攪拌30分鐘。將0.75mL 1mol/L鹽酸加到反應混合物，并在減壓下除去溶劑。用柱色譜法[洗脫劑；氯仿∶甲醇＝5∶1]純化所得的殘余物，然后向其中加入異丙醇和二乙基醚。然后過濾混合物，得到40mg4-[(2R，3R，4S，5R)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺。
IR(KBr)cm-11686實施例33 將0.20g 3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪亞甲酰胺和10mg硫酸銨懸浮在2.0mL 1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷，并將懸浮液在氮氣流下加熱回流10分鐘。向其中加入9.0mg硫酸銨，并再次將混合物加熱回流2小時。將反應混合物冷卻，然后在減壓下除去溶劑。將所得的殘余物溶于4.0mL乙腈，然后向其中連續地加入0.46g β-D-呋喃核糖-1，2，3，5-四乙酸酯和0.34mL氯化錫(IV)，隨后在室溫下攪拌3小時。將10μL三氟乙酸和1.0mL水加到反應混合物，然后在減壓下除去溶劑。使用0.05g 3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪亞甲酰胺，重復相同的以上反應得到反應混合物。合并所得的反應混合物，然后用反相硅膠柱色譜法[洗脫劑；乙腈∶水＝1∶4]純化，得到0.34g淺黃色固體，(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[(乙酰氧基)甲基]-5-[3-[氨基(亞氨基)甲基]-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]四氫-3-呋喃基乙酸酯。
IR(KBr)cm-13392，1750，16851H-NMR(CDCl3)δ2.11(3H，s)，2.16(6H，s)，4.4-4.7(3H，m)，5.31(1H，t，J＝5.4Hz)，5.5-5.6(1H，m)，6.22(1H，d，J＝3.0Hz)，7.8-8.0(1H，m)，8.1-8.3(1H，m)，8.67(1H，brs)，10.45(2H，brs)實施例34 在冰冷卻下將0.10g(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[(乙酰氧基)甲基]-5-[3-[氨基(亞氨基)甲基]-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]四氫-3-呋喃基乙酸酯加到5.0mL 25％氨水，并將混合物在相同的溫度下攪拌2小時。將4.9mL乙酸加到反應混合物，并在減壓下除去溶劑。使用20mg(2R，3R，4R，5R)-4-(乙酰氧基)-2-[(乙酰氧基)甲基]-5-[3-[氨基(亞氨基)甲基]-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]四氫3-呋喃基乙酸酯，完成相同的以上的反應。合并所得的反應混合物，然后通過反相硅膠柱色譜法[洗脫劑；水]純化。將5.0mL 1mol/L鹽酸加到所得的固體，并在減壓下除去溶劑。而且，還向其中加入5.0mL 1mol/L鹽酸，并在減壓下除去溶劑。將乙醇加到所得的殘余物，并過濾收集固體，得到30mg 4-[(2R，3R，45，SR)-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺的鹽酸鹽，一種淺黃色固體。
IR(KBr)cm-13374，3281，16901H-NMR(DMSO-d6)δ3.7-3.9(2H，m)，3.9-4.2(3H，m)，5.1-5.3(1H，m)，5.3-5.6(1H，m)，5.6-5.8(1H，m)，5.90(1H，s)，7.86(1H，d，J＝4.0Hz)，8.76(1H，d，J＝4.0Hz)，9.44(4H，brs)實施例35 以與實施例18相同的方式，由200mg{(2R，3R，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-雙(苯甲酰氧基)四氫-2-呋喃基}甲基苯甲酸酯得到37mg{(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基苯甲酸酯。
1H-NMR(DMSO-d6)δ4.06(1H，dd，J＝6.6，12.7)，4.12-4.15(1H，m)，4.28-4.32(1H，m)，4.59(1H，dd，J＝S.1，12.2)，4.67(1H，dd，J＝2.7，12.5)，5.40(1H，d，J＝6.3)，5.76(1H，d，J＝4.9)，5.91(1H，d，J＝2.0)，7.37(1H，d，J＝4.4)，7.57(2H，t，J＝7.8)，7.71(1H，dd，J＝7.1，7.6)，7.75(1H，brs)，7.85(1H，d，J＝4.2)，8.01(2H，dd，J＝1.0，7.4)，8.30(1H，brs)實施例36
將100mg{(2R，35，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基}甲基(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酸酯溶于1mL三氟乙酸和0.1mL水的混合溶劑，并將混合物于室溫下攪拌1小時。在減壓下除去三氟乙酸，并加入水。用飽和碳酸氫鈉水溶液將混合物調節至pH 8，然后用反相硅膠色譜法[洗脫劑；10％乙腈水溶液]純化，接著與乙醇進行共沸，得到59mg白色固體，{(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基甲基(2S)-2-氨基-3-甲基丁酸酯。
IR(KBr)cm-11724，1670，16531H-NMR(DMSO-d6，D2O)δ0.84(3H，d，J＝6.6Hz)，0.89(3H，d，J＝6.6Hz)，1.82-1.90(1H，m)，3.22(1H，d，J＝5.2Hz)，3.88-3.94(1H，m)，4.09(1H，s)，4.17-4.20(1H，m)，4.36-4.38(2H，m)，5.91(1H，s)，7.58(1H，d，J＝4.0Hz)，7.90(1H，d，J＝4.0)實施例37 將58mg 4-[(2R，3R，4S，5R)]-3，4-二羥基-5-(羥基甲基)四氫-2-呋喃基]-6-氟-3-氧代-3，4-二氫-2-吡嗪甲酰胺懸浮在1mL磷酸三甲酯，然后在冰冷卻下連續地向其加入37μL吡啶和49μL氧氯化磷，接著在相同的溫度下攪拌1小時。向其中加入3mL 1mol/L三乙基碳酸氫銨水溶液，并將混合物攪拌15分鐘。在減壓下除去溶劑，并用離子交換柱色譜法[洗脫劑；0.1mol/L三乙基碳酸氫銨水溶液]純化殘余物。接著，用反相硅膠柱色譜法[洗脫劑；水]純化，得到39mg三乙基銨鹽固體，[(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡啶]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基]甲基磷酸酯。
在室溫下將含有0.14g高氯酸鈉的3mL丙酮溶液加到含有36mg以上得到的-磷酸三乙基銨鹽的0.5mL甲醇懸浮液，并將混合物攪拌30分鐘。過濾收集沉淀，并用丙酮洗滌，得到27mg[(2R，3S，4R，5R)-5-[3-(氨基羰基)-5-氟-2-氧代-1(2H)-吡嗪基]-3，4-二羥基四氫-2-呋喃基]甲基磷酸酯的鈉鹽，淺黃色固體。
1H-NMR(D2O)δ4.13-4.18(1H，m)，4.29-4.40(4H，m)，6.10(1H，s)，8.46(1H，d，J＝4.9Hz)工業實用性根據以上的試驗實施例，發現吡嗪核苷酸三磷酸酯類似物在病毒聚合酶抑制試驗中具有特異性抑制病毒聚合酶的活性，用本發明提供的取代基修飾的吡嗪甲酰胺核苷酸移動到細胞內，并在其中具有抗病毒活性，雖然已知核苷酸不可能通過細胞膜移動到細胞內，而且吡嗪核苷在施用吡嗪核苷的動物體內轉化為吡嗪核苷酸三磷酸酯類似物。因此，以使用通過激酶如核苷酸激酶的作用產生的吡嗪核苷酸或吡嗪核苷類似物或其鹽為特征的本發明的病毒生長抑制和/或殺病毒方法可用作治療病毒感染的方法。而且，本發明的新的吡嗪核苷酸或吡嗪核苷類似物或其鹽可用作預防和/或治療病毒感染的試劑。
權利要求
1.一種病毒生長抑制和/或殺病毒方法，其特征在于使用以下通式[1]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；A代表氧原子或亞甲基；Y代表氧原子或亞氨基；而n代表0-3的整數。
2.根據權利要求1的方法，其特征在于使用通式[1]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽，其中Y為氧原子。
3.根據權利要求1或2的方法，其特征在于使用通式[1]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽，其中n為1-3的整數。
4.根據權利要求1-3之任一項的方法，其特征在于使用通式[1]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽，其中所述的吡嗪環取代基是一個或多個選自以下的基團鹵原子；可以被羥基、烷氧基、烷硫基、芳基、氨基或烷基氨基取代的烷基；可以被鹵原子取代的烷基或鏈烯基；環烷基；羥基；烷氧基；環烷氧基；烷氧基羰基；巰基；可以被芳基取代的烷硫基；芳基；芳氧基；芳硫基；芳基氨基；氰基；硝基；可以被酰基取代的氨基；烷基氨基；環烷基氨基；酰基；羧基；氨基甲酰基；硫代氨基甲酰基；烷基氨基甲酰基；和雜環基。
5.根據權利要求1-4之任一項的方法，其特征在于使用通式[1]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽，其中n為3。
6.根據權利要求1-5之任一項的方法，其特征在于使用由激酶產生的通式[1]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽。
7.根據權利要求1-5之任一項的方法，其特征在于使用由核苷酸激酶產生的通式[1]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽。
8.根據權利要求1-7之任一項的方法，其中通式[1]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽由以下通式[2]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽衍生 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；在磷酸或膦酸上的R7和R8各自獨立地代表在生理條件下將分解的保護或未保護的、取代或未取代的的羥基；A代表氧原子或亞甲基；并且Y代表氧原子或亞氨基。
9.根據權利要求1-8之任一項的方法，其中通式[1]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽由以下通式[3]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽衍生 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；磷酸或膦酸中的R7和R8各自獨立地代表在生理條件下將分解的保護或未保護的、取代或未取代的羥基；并且A代表氧原子或亞甲基。
10.一種病毒生長抑制和/或殺病毒方法，其特征在于使用以下通式[3z]代表的吡嗪核苷類似物或其鹽 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4z、R5和R6z中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基，或者R4z和R6z一起代表可以被取代的表示為-O-亞烷基-O-的基團；Rz代表在生理條件下將分解的保護或未保護的、取代或未取代的羥基；并且Y代表氧原子或亞氨基。
11.根據權利要求10的方法，其中在通式[3z]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽中，Y為亞氨基。
12.根據權利要求1-11之任一項的方法，其特征在于利用一種聚合酶抑制作用。
13.根據權利要求1-12之任一項的方法，其中所述病毒為流感病毒、RS病毒、AIDS病毒、乳頭瘤病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、脊髓灰質炎病毒、艾柯病毒、柯薩奇病毒、腸病毒、鼻病毒、輪狀病毒、新城病病毒、流行性腮腺炎病毒、水皰性口炎病毒、狂犬病病毒、拉薩熱病毒、麻疹病毒、絲狀病毒、日本腦炎病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒或西尼羅河病毒。
14.根據權利要求1-12之任一項的方法，其中所述的病毒是流感病毒或丙型肝炎病毒。
15.以下通式[1z]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；R代表羥基，所述基團可以被在生理條件下分解的基團保護或取代；A代表氧原子或亞甲基；而n代表1-3的整數。
16.以下通式[1z]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；R代表可以被在生理條件下分解的基團保護或取代的羥基；A代表氧原子或亞甲基；而n代表1-3的整數；附帶條件是排除如下的情況R為羥基，A為氧原子，并且R1為氫原子或鹵原子。
17.以下通式[2]代表吡嗪核苷酸類似物代表或其鹽 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；磷酸或膦酸中的R7和R8各自獨立地代表在生理條件下將分解的保護或未保護的、取代或未取代的羥基；A代表氧原子或亞甲基；并且Y代表氧原子或亞氨基。
18.根據權利要求17的吡嗪核苷酸類似物或其鹽，其中Y為氧原子。
19.以下通式[3z]代表的吡嗪核苷類似物或其鹽 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4z、R5和R6z中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基，或者R4z和R6z一起代表可以被取代的表示為-O-亞烷基-O-的基團；Rz代表在生理條件下將分解的保護或未保護的、取代或未取代的羥基；并且Y代表氧原子或亞氨基。
20.根據權利要求19的吡嗪核苷類似物或其鹽，其中在通式[3z]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽中，Y為亞氨基。
21.根據權利要求19的通式[3z]代表的吡嗪核苷類似物或其鹽，所述化合物由通式[3z’]表示 其中Ra代表氫或鹵原子；Rb和Rc各自可以相同或不同，代表氫原子或羥基保護基，或者Rb和Rc一起代表可以被取代的亞烷基。
22.一種具有通式[1x]代表的吡嗪核苷酸類似物結構的RNA聚合酶抑制劑前體 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；A代表氧原子或亞甲基；Y代表氧原子或亞氨基；而m代表0-2的整數；該RNA聚合酶抑制劑前體在體內轉化為通式[1y]代表的吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；Z10、Z11、Z12和Z13各自可以相同或不同，代表氫原子或羥基，因而表現出RNA聚合酶抑制作用。
23.根據權利要求22的RNA聚合酶抑制劑前體，其中在通式[1x]代表的吡嗪核苷酸類似物結構中，Y為氧原子。
24.根據權利要求22或23的RNA聚合酶抑制劑前體，其中在通式[1x]代表的吡嗪核苷酸類似物結構中，吡嗪環取代基是一個或多個選自以下的基團鹵原子；可以被羥基、烷氧基、烷硫基、芳基、氨基或烷基氨基取代的烷基；可以被鹵原子取代的烷基或鏈烯基；環烷基；羥基；烷氧基；環烷氧基；烷氧基羰基；巰基；可以被芳基取代的烷硫基；芳基；芳氧基；芳硫基；芳基氨基；氰基；硝基；可以被酰基取代的氨基；烷基氨基；環烷基氨基；酰基；羧基；氨基甲酰基；硫代氨基甲酰基；烷基氨基甲酰基；和雜環基。
25.根據權利要求22-24之任一項的RNA聚合酶抑制劑前體，其中在通式[1x]代表的吡嗪核苷酸類似物結構中，R1、R3和R5中的每一個代表氫原子；而R4和R6各自代表羥基，所述吡嗪核苷酸類似物結構在體內轉化為通式[1y]代表的吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物，其中R1、Z10和Z12中的每一個代表氫原子；而Z11和Z13各自代表羥基。
26.根據權利要求22-25之任一項的RNA聚合酶抑制劑前體，其中通式[1y]代表的吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物是通過激酶產生的。
27.根據權利要求22-26之任一項的RNA聚合酶抑制劑前體，其中通式[1y]代表的吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物是通過核苷酸激酶產生的。
28.根據權利要求22-27之任一項的RNA聚合酶抑制劑前體，其特征在于它抑制來源于病毒的RNA聚合酶，且其選擇性比來源于宿主的RNA聚合酶的選擇性高出200倍或更多。
29.根據權利要求22-27之任一項的RNA聚合酶抑制劑前體，它是通式[1w]代表的吡嗪核苷或吡嗪一核苷酸類似物結構 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中每一個，可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；Y代表氧原子或亞氨基；而p代表0或1；其特征在于RNA聚合酶抑制劑前體對來源于病毒的RNA聚合酶的抑制作用與RNA聚合酶抑制劑前體對來源于宿主細胞的肌苷一磷酸脫氫酶的抑制作用的比率為900∶1或更大。
30.根據權利要求29的RNA聚合酶抑制劑前體，其中在通式[1w]代表的吡嗪核苷或吡嗪一核苷酸類似物中，Y為氧原子。
31.根據權利要求29或30的RNA聚合酶抑制劑前體，其中在通式[1w]代表的吡嗪核苷或吡嗪一核苷酸類似物結構中，吡嗪環取代基是一個或多個選自以下的基團鹵原子；可以被羥基、烷氧基、烷硫基、芳基、氨基或烷基氨基取代的烷基；可以被鹵原子取代的烷基或鏈烯基；環烷基；羥基；烷氧基；環烷氧基；烷氧基羰基；巰基；可以被芳基取代的烷硫基；芳基；芳氧基；芳硫基；芳基氨基；氰基；硝基；可以被酰基取代的氨基；烷基氨基；環烷基氨基；酰基；羧基；氨基甲酰基；硫代氨基甲酰基；烷基氨基甲酰基；和雜環基。
32.根據權利要求29-31之任一項的RNA聚合酶抑制劑前體，所述前體是通式[1w]代表的吡嗪核苷或吡嗪一核苷酸類似物，其中R1、R3和R5各自代表氫原子；并且R4和R6各自代表羥基。
33.根據權利要求29-32之任一項的RNA聚合酶抑制劑前體，其中來源于病毒的RNA聚合酶來源于流感病毒、RS病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、脊髓灰質炎病毒、艾柯病毒、柯薩奇病毒、腸病毒、鼻病毒、輪狀病毒、新城病病毒、流行性腮腺炎病毒、水皰性口炎病毒、狂犬病病毒、拉薩熱病毒、麻疹病毒、絲狀病毒、日本腦炎病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒或西尼羅河病毒。
34.根據權利要求33的RNA聚合酶抑制劑前體，其中來源于病毒的RNA聚合酶來源于流感病毒或丙型肝炎病毒。
35.根據權利要求22-34之任一項的RNA聚合酶抑制劑前體，其中在通式[1w]代表的吡嗪核苷或吡嗪一核苷酸類似物中，m為0。
36.一種RNA聚合酶抑制劑，所述抑制劑表現出RNA聚合酶抑制作用并具有通式[1y]代表的吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物結構 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；而Z10、Z11、Z12和Z13中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或羥基。
37.根據權利要求36的具有吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物結構的RNA聚合酶抑制劑，其特征在于它對來源于病毒的RNA聚合酶的抑制作用的選擇性是對來源于宿主的RNA聚合酶的抑制作用的選擇性的200倍或更大。
38.根據權利要求37的具有吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物結構的RNA聚合酶抑制劑，其中所述來源于病毒的RNA聚合酶來源于流感病毒、RS病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、脊髓灰質炎病毒、艾柯病毒、柯薩奇病毒、腸病毒、鼻病毒、輪狀病毒、新城病病毒、流行性腮腺炎病毒、水皰性口炎病毒、狂犬病病毒、拉薩熱病毒、麻疹病毒、絲狀病毒、日本腦炎病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒或西尼羅河病毒。
39.根據權利要求38的具有吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物結構的RNA聚合酶抑制劑，其中所述來源于病毒的RNA聚合酶是來源于流感病毒的RNA聚合酶或來源于丙型肝炎病毒的RNA聚合酶。
40.一種治療感染病毒的患者的方法，所述方法包括給感染病毒的患者施用以下通式[3z]代表的吡嗪核苷類似物或其鹽的步驟 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4z、R5和R6z中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基，或者R4z和R6z一起代表可以被取代的表示為-O-亞烷基-O-的基團；Rz代表在生理條件下將分解的保護或未保護的、取代或未取代的羥基；并且Y代表氧原子或亞氨基。
41.根據權利要求40的方法，所述方法還包括在感染病毒的患者的體內將通式[3z]轉化成通式[1y]代表的吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物的步驟 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；而Z10、Z11、Z12和Z13中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或羥基。
42.根據權利要求41的方法，其特征在于在感染病毒的患者的體內，通式[3z]至通式[1y]代表的吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物的轉化經過通式[1v]代表的吡嗪核苷酸類似物 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；而Z10、Z11、Z12和Z13中每一個可以相同或不同，代表氫原子或羥基。
43.根據權利要求42的方法，其特征在于通式[1v]代表的吡嗪核苷酸類似物基本上不抑制來源于宿主細胞的肌苷一磷酸脫氫酶。
44.根據權利要求41-43之任一項的方法，其特征在于通式[1y]代表的吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物抑制來源于病毒的RNA聚合酶的選擇性大于抑制來源于宿主的RNA聚合酶的選擇性。
45.根據權利要求44的方法，其中所述的來源于病毒的RNA聚合酶來源于流感病毒、RS病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、脊髓灰質炎病毒、艾柯病毒、柯薩奇病毒、腸病毒、鼻病毒、輪狀病毒、新城病病毒、流行性腮腺炎病毒、水皰性口炎病毒、狂犬病病毒、拉薩熱病毒、麻疹病毒、絲狀病毒、日本腦炎病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒或西尼羅河病毒。
46.根據權利要求40的治療感染病毒的患者的方法，其中R1代表氫原子，R2代表氫原子，R3和R5各自代表氫原子，R4z、R6z和Rz各自代表羥基，并且Y代表氧原子。
47.通式[1]代表的吡嗪核苷酸類似物或其鹽用于制備抗病毒劑的用途 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4、R5和R6中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基；A代表氧原子或亞甲基；Y代表氧原子或亞氨基；并且n代表0-3的整數。
48.根據權利要求47的用途，其中R1代表氫原子，R2代表氫原子，R3和R5各自代表氫原子，R4和R6各自代表羥基，A代表氧原子，Y代表氧原子，并且n為0。
49.通式[3z]代表的吡嗪核苷類似物或其鹽用于制備抗病毒劑的用途 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；R2代表氫原子、酰基或可以被取代的氨基甲酰基烷基或羧基烷基；R3、R4z、R5和R6z中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或可以被取代或保護的羥基，或者R4z和R6z一起代表可以被取代的表示為-O-亞烷基-O-的基團；Rz代表在生理條件下將分解的保護或未保護的、取代或未取代的羥基；并且Y代表氧原子或亞氨基。
50.根據權利要求47-49之任一項的用途，其中在感染病毒的患者的體內將通式[3z]轉化成通式[1y]代表的吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；而Z10、Z11、Z12和Z13中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或羥基。
51.根據權利要求49的用途，其特征在于在感染病毒的患者的體內，通式[3z]至通式[1y]代表的吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物的轉化經過通式[1v]代表的吡嗪核苷酸類似物 其中R1代表氫原子或吡嗪環取代基；而Z10、Z11、Z12和Z13中的每一個可以相同或不同，代表氫原子或羥基。
52.根據權利要求51的用途，其特征在于通式[1v]代表的吡嗪核苷酸類似物基本上不抑制來源于宿主細胞的肌苷一磷酸脫氫酶。
53.根據權利要求50-52之任一項的用途，其特征在于通式[1y]代表的吡嗪三磷酸酯核苷酸類似物抑制來源于病毒的RNA聚合酶的選擇性大于抑制來源于宿主的RNA聚合酶的選擇性。
54.根據權利要求50-53之任一項的用途，其中所述的來源于病毒的RNA聚合酶來源于流感病毒、RS病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、脊髓灰質炎病毒、艾柯病毒、柯薩奇病毒、腸病毒、鼻病毒、輪狀病毒、新城病病毒、流行性腮腺炎病毒、水皰性口炎病毒、狂犬病病毒拉薩熱病毒、麻疹病毒、絲狀病毒、日本腦炎病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒或西尼羅河病毒。
全文摘要
在右式中，R
文檔編號C07H19/20GK1551777SQ02817259
公開日2004年12月1日 申請日期2002年8月13日 優先權日2001年8月14日
發明者古田要介, 江川裕之, 高橋和美, 筒井康裕, 上原小百合, 村上誠, 之, 百合, 美, 裕 申請人:富山化學工業株式會社