領域
本申請大體上涉及藥物化學領域。具體地，本申請涉及egfr和/或egfr突變體抑制劑。
背景
egfr(epidermalgrowthfactorreceptor)是表皮生長因子受體(her)家族成員之一。該家族包括her1(erbb1，egfr)、her2(erbb2，neu)、her3(erbb3)及her4(erbb4)。her家族在細胞生理過程中發揮重要的調節作用。egfr是表皮生長因子(egf)細胞增殖和信號傳導的受體，其突變或過表達一般會引發腫瘤。egfr是一種糖蛋白，屬于酪氨酸激酶型受體，細胞膜貫通，分子量170kda。egfr位于細胞膜表面，靠與配體結合來激活，包括egf和tgfα(transforminggrowthfactorα)。激活后，egfr由單體轉化為二聚體，盡管也有證據表明，激活前也存在二聚體。egfr還可能和erbb受體家族的其他成員聚合來激活，例如erbb2/her2/neu。
概述
一方面，本申請涉及式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽：
其中：
r1選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r2選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r3選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r4選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r5選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；以及
r6選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
條件是r1至r6中至少含有一個氘原子。
另一方面，本申請涉及制備式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽的方法：
其中，所述方法包括：
將式(ii)所示的化合物與丙烯酰氯進行反應得到式(i)所示的化合物：
其中：
r1選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r2選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r3選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r4選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r5選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；以及
r6選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
條件是r1至r6中至少含有一個氘原子。
再一方面，本申請涉及藥物組合物，其包含式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽以及藥物可以接受的載體：
其中：
r1選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r2選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r3選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r4選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r5選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；以及
r6選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
條件是r1至r6中至少含有一個氘原子。
又一方面，本申請涉及式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽在制備用于抑制表皮生長因子受體(her)的藥物中的用途：
其中：
r1選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r2選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r3選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r4選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r5選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；以及
r6選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
條件是r1至r6中至少含有一個氘原子。
另一方面，本申請涉及式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽在制備用于治療癌癥和/或腫瘤的藥物中的用途：
其中：
r1選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r2選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r3選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r4選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r5選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；以及
r6選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
條件是r1至r6中至少含有一個氘原子。
其他方面，本申請涉及治療腫瘤和/或癌癥的方法，其包括向需要所述方法的個體給予治療有效量的式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽，或者給予治療有效量的包含式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽以及藥物可接受的載體的藥物組合物，
其中：
r1選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r2選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r3選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r4選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r5選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；以及
r6選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
條件是r1至r6中至少含有一個氘原子。
詳述
在以下的說明中，包括某些具體的細節以對各個公開的實施方案提供全面的理解。然而，相關領域的技術人員會認識到，不采用一個或多個這些具體的細節，而采用其它方法、部件、材料等的情況下仍實現實施方案。
除非本申請中另有要求，在整個說明書和所附的權利要求書中，詞語“包括(comprise)”及其英文變體例如“包括(comprises)”和“包括(comprising)”應解釋為開放式的、含括式的意義，即“包括但不限于”。
在整個本說明書中提到的“實施方案”、“實施方案”、“在另一實施方案中”或“在某些實施方案中”意指在至少一實施方案中包括與該實施方案所述的相關的具體參考要素、結構或特征。因此，在整個說明書中不同位置出現的短語“在一實施方案中”或“在實施方案中”或“在另一實施方案中”或“在某些實施方案中”不必全部指同一實施方案。此外，具體要素、結構或特征可以任何適當的方式在一個或多個實施方案中結合。
應當理解，在本申請說明書和所附的權利要求書中用到的單數形式的冠詞“一”(對應于英文“a”、“an”和“the”)包括復數的對象，除非文中另外明確地規定。因此，例如提到的包括“催化劑”的反應包括一種催化劑，或兩種或多種催化劑。還應當理解，術語“或”通常以其包括“和/或”的含義而使用，除非文中另外明確地規定。
定義
除非另有相反的說明，否則說明書和所附權利要求中所用的下列術語具有以下的意思：
本文所使用的術語“同位素”系指具有相同質子數，不同中子數的同一元素的不同核素。
本文所使用的術語“豐度”系指某一同位素在其所屬的天然元素中占的原子數百分比。
本文所使用的術語“同位素天然豐度”或“天然豐度”系指自然界中存在的某一天然元素中各種同位素在該天然元素中占的原子數百分比。例如氫的同位素天然豐度：1h＝99.985％，2h＝0.015％。氧的同位素天然豐度：16o＝99.76％，17o＝0.04％，18o＝0.20％。
本文所使用的術語“同位素富集指數”系指某一同位素的豐度與該同位素天然豐度之比。例如，同位素富集指數為6000的氘原子系指豐度為90％的氘原子。
本文所使用的術語“氫”(“h”)系指由具有同位素天然豐度的1h(99.985％)和2h(0.015％)組成的氫。
本文所使用的術語“氘”(“d”和“d”)系指氫(h)的同位素，氘原子核中有一個質子和一個中子，其同位素天然豐度為0.015％。“dx-y”系指用x至y個氘原子進行的取代。例如，甲氧基-d3系指cd3o-。
本文所使用的術語“藥物可接受的鹽”包括酸加成的鹽和堿加成的鹽。
本文所使用的術語“藥物可接受的酸加成鹽”是指保持自由堿的生物有效性和性質的鹽，其不會在生物學上或在其它方面是不期望的，并且其與無機酸類或有機酸類形成。能夠用于本申請的示例性的無機酸類的實例包括但不限于鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。能夠用于本申請的示例性的有機酸類的實例包括但不限于乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、褐藻酸、抗壞血酸、天門冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、樟腦酸、樟腦-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、碳酸、肉桂酸、檸檬酸、環己烷氨基磺酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙烷磺酸、2-羥基乙烷磺酸、甲酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸、龍膽酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、2-氧代-戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、馬尿酸、異丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、順丁烯二酸、蘋果酸、丙二酸、苯基乙醇酸、甲烷磺酸、粘酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羥基-2-萘甲酸、煙酸、油酸、乳清酸、草酸、棕櫚酸、雙羥萘酸、丙酸、焦谷氨酸、丙酮酸、水楊酸、4-氨基水楊酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸、硫氰酸、對甲苯磺酸、三氟醋酸、十一碳烯酸等。
本文所使用的術語“藥物可接受的堿加成鹽”是指保持自由酸的生物有效性與性質的鹽，其不會在生物學上或在其它方面是不期望的。這些鹽通過在自由酸中添加無機堿或有機堿而制備。能夠用于本申請的示例性的衍生自無機堿的鹽的實例包括但不限于鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、辭、銅、錳、鋁鹽等。在某些實施方案中，無機鹽為銨、鈉、鉀、鈣和鎂鹽。能夠用于本申請的示例性的衍生自有機堿的鹽的實例包括但不限于以下的鹽：伯、仲和叔胺，包括天然取代胺在內的取代胺、環狀胺類及堿性離子交換樹脂，例如氨、異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、二乙醇胺、乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、二環己基胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、海巴明、膽堿、甜菜堿、苯乙芐胺、芐星、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡糖胺、可可堿、三乙醇胺、氨基丁三醇、嘌呤、哌嗪、哌啶、n-乙基哌啶、聚胺樹脂等。在某些實施方案中，有機堿為異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環己基胺、膽堿和咖啡因。
本文所使用的術語“藥物組合物”是指本申請中的化合物與本領域中通常接受的用于傳遞生物活性化合物至哺乳動物例如人的介質的制劑。所述介質包括所有供其使用的藥物可接受的載體。藥物組合物有利于化合物向生物體的給藥。在本領域中存在多種方法對化合物進行給藥，其包括但不限于口服給藥、注射給藥、氣霧劑給藥、腸胃外給藥以及局部給藥。通過化合物與諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對苯甲磺酸、水楊酸等無機酸或有機酸反應也可以得到藥物組合物。
本文所使用的術語“載體”定義為有利于將化合物引入細胞或組織的化合物。例如二甲亞砜(dmso)通常用作載體，這是因為它易于將某些有機化合物引入生物體的細胞或組織中。
本文所使用的術語“腫瘤(tumour)”系指機體在各種致瘤因子作用下，局部組織細胞增生所形成的新生物(neogrowth)。根據新生物的細胞特性及對機體的危害性程度，又將腫瘤分為良性腫瘤和惡性腫瘤兩大類。
本文所使用的術語“癌癥(cancer)”系指惡性腫瘤的總稱。
本文所使用的術語“治療有效量”指當對哺乳動物，優選對人類給藥時，本申請的化合物足以有效治療(如下定義)哺乳動物的，優選人類的腫瘤和/或癌癥的量。根據化合物、疾病狀態及其嚴重性、和待治療哺乳動物的年齡，構成“治療有效量”的本申請的化合物的量將會不同，但是本領域的技術人員根據其自身的知識以及本公開可以依慣例確定本申請的化合物的量
本文所用的術語“進行治療”或“治療”涵蓋患有相關疾病或病癥的哺乳動物，優選人類中治療相關的疾病或疾病狀態，并且包括：
(i)預防疾病或疾病狀態在哺乳動物中發生，尤其是當該哺乳動物易感于所述疾病狀態，但尚未被診斷出患有這種疾病狀態時；
(ii)抑制疾病或疾病狀態，即阻止其發生；或者
(iii)緩解疾病或疾病狀態，即使疾病或疾病狀態消退。
正如本文所用的那樣，術語“疾病”和“疾病狀態”可以相互交換使用，或者可以是不同的，因為特殊的疾病或疾病狀態可能并沒有已知的致病因子(因此不能用病因學解釋)，因此其不被公認為是疾病，而是被認為是不期望的疾病狀態或病癥，其中臨床醫生已經鑒定出或多或少的特定系列的癥狀。
在整個治療過程中，體內給藥可以以單次給藥、連續或間歇給藥(例如以分割的劑量以適宜的間隔給藥)的方式來進行。測定最有效的給藥方式和劑量的方法是本領域技術人員公知的，并隨著治療所用的制劑、治療的目的、所治療的靶細胞以及所治療的個體而改變。可以進行單次或多次給藥，劑量水平和模式由主治醫師進行選擇。
具體實施方式
在本領域中，由于氘修飾對藥物活性的影響和對藥物代謝特性的影響具有不可預測性，所以本領域所屬的技術人員通常會質疑乃至放棄氘修飾作為可行的藥物設計策略的想法。
一方面，本申請涉及式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽：
其中：
r1選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r2選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r3選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r4選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r5選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；以及
r6選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
條件是r1至r6中至少含有一個氘原子。
在某些實施方案中，r1選自-ch2d、-chd2或-cd3。
在某些實施方案中，r2選自-ch2d、-chd2或-cd3。
在某些實施方案中，r3選自-chd-或-cd2-。
在某些實施方案中，r4選自-chd-或-cd2-。
在某些實施方案中，r5選自-ch2d、-chd2或-cd3。
在某些實施方案中，r6選自-ch2d、-chd2或-cd3。
在某些實施方案中，r1為-cd3。
在某些實施方案中，r2為-cd3。
在某些實施方案中，r3為-cd2-。
在某些實施方案中，r4為-cd2-。
在某些實施方案中，r5或r6為-cd3。
在某些實施方案中，r5和r6均為-cd3。
在某些實施方案中，r1為-cd3，r2為-ch3，r3為-ch2-，r4為-ch2-，r5為-cd3，并且r6為-ch3。
在某些實施方案中，r1為-cd3，r2為-ch3，r3為-ch2-，r4為-ch2-，r5為-cd3，并且r6為-cd3。
在某些實施方案中，r1為-cd3，r2為-cd3，r3為-cd2-，r4為-cd2-，r5為-cd3，并且r6為-cd3。
在某些實施方案中，r1為-ch3，r2為-ch3，r3為-ch2-，r4為-ch2-，r5為-ch2d，并且r6為-ch3。
在某些實施方案中，r1為-ch3，r2為-ch3，r3為-ch2-，r4為-ch2-，r5為-chd2，并且r6為-ch3。
在某些實施方案中，r1為-ch2d，r2為-ch3，r3為-ch2-，r4為-ch2-，r5為-cd3，并且r6為-ch3。
在某些實施方案中，r1為-chd2，r2為-ch3，r3為-ch2-，r4為-ch2-，r5為-cd3，并且r6為-ch3。
在某些實施方案中，r1為-cd3，r2為-ch3，r3為-chd-，r4為-ch2-，r5為-cd3，并且r6為-ch3。
在某些實施方案中，r1為-cd3，r2為-ch3，r3為-ch2-，r4為-chd-，r5為-cd3，并且r6為-ch3。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為200，即作為取代基的氘原子的豐度為3％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為400，即作為取代基的氘原子的豐度為6％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為666.67，即作為取代基的氘原子的豐度為10％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為1000，即作為取代基的氘原子的豐度為15％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為2000，即作為取代基的氘原子的豐度為30％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為3333.33，即作為取代基的氘原子的豐度為50％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為4000，即作為取代基的氘原子的豐度為60％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為5000，即作為取代基的氘原子的豐度為75％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為6000，即作為取代基的氘原子的豐度為90％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為6333.33，即作為取代基的氘原子的豐度為95％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為6466.67，即作為取代基的氘原子的豐度為97％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為6533.33，即作為取代基的氘原子的豐度為98％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為6566.67，即作為取代基的氘原子的豐度為98.5％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為6600，即作為取代基的氘原子的豐度為99％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為6633.33，即作為取代基的氘原子的豐度為99.5％。
在某些實施方案中，作為取代基的氘原子，其同位素富集指數為6660，即作為取代基的氘原子的豐度為99.9％。
在某些實施方案中，式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽中，作為取代基的氘原子的豐度至少為60％，而其他同位素具有其天然豐度。
在某些實施方案中，式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽中，作為取代基的氘原子的豐度至少為75％，而其他同位素具有其天然豐度。
在某些實施方案中，式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽中，作為取代基的氘原子的豐度至少為90％，而其他同位素具有其天然豐度。
在某些實施方案中，式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽中，作為取代基的氘原子的豐度至少為95％，而其他同位素具有其天然豐度。
在某些實施方案中，式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽中，作為取代基的氘原子的豐度至少為97％，而其他同位素具有其天然豐度。
在某些實施方案中，式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽中，作為取代基的氘原子的豐度至少為98％，而其他同位素具有其天然豐度。
在某些實施方案中，式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽中，作為取代基的氘原子的豐度至少為98.5％，而其他同位素具有其天然豐度。
在某些實施方案中，式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽中，作為取代基的氘原子的豐度至少為99％，而其他同位素具有其天然豐度。
在某些實施方案中，式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽中，作為取代基的氘原子的豐度至少為99.5％，而其他同位素具有其天然豐度。
在某些實施方案中，式(i)所示的化合物選自：
n-(2-{2-[甲基(甲基-d3)氨基]乙基-甲氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺；
n-(2-[2-二(甲基-d3)氨基乙基-甲氨基]-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺；
n-(2-[2-二甲氨基乙基-甲氨基]-4-(甲氧基-d3)-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺；
n-(2-[2-二甲氨基乙基-(甲基-d3)氨基]-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺；
n-(2-[2-二甲氨基-1,1-二氘代乙基-甲氨基]-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺；以及
n-(2-[2-二甲氨基-2,2-二氘代乙基-甲氨基]-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺。
在某些方面，本申請的化合物具有改進的藥效學特性。
在某些方面，本申請的化合物具有表皮生長因子受體抑制活性。
在某些方面，本申請的化合物具有改進的藥代動力學特性。
在某些方面，本申請的化合物具有改進的體內代謝特性。
在某些方面，本申請的化合物具有改進的體內腫瘤抑制活性。
在某些方面，本申請的化合物具有改進的安全性。
在某些方面，本申請的化合物具有改進的耐受性。
在某些實施方案中，本申請的化合物尤其指下列化合物：
n-(2-{2-[甲基(甲基-d3)氨基]乙基-甲氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺；
n-(2-[2-二(甲基-d3)氨基乙基-甲氨基]-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺；
n-(2-[2-二甲氨基乙基-甲氨基]-4-(甲氧基-d3)-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺；
n-(2-[2-二甲氨基乙基-(甲基-d3)氨基]-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺；
n-(2-[2-二甲氨基-1,1-二氘代乙基-甲氨基]-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺；以及
n-(2-[2-二甲氨基-2,2-二氘代乙基-甲氨基]-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺。
另一方面，本申請涉及制備式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽的方法：
其中，所述方法包括：
將式(ii)所示的化合物與丙烯酰氯進行反應得到式(i)所示的化合物：
其中：
r1選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r2選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r3選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r4選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r5選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；以及
r6選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
條件是r1至r6中至少含有一個氘原子。
在某些實施方案中，式(ii)所示的化合物與丙烯酰氯在強堿的存在下進行反應得到式(i)所示的化合物。
能夠用于本申請的示例性的強堿的實例包括但不限于氫氧化鈉、氫氧化鉀、甲醇鈉、乙醇鈉、乙醇鉀和叔丁醇鈉。
在某些實施方案中，式(ii)所示的化合物與丙烯酰氯在極性溶劑的存在下進行反應得到式(i)所示的化合物。
能夠用于本申請的示例性的極性溶劑的實例包括但不限于水、甲酰胺、三氟乙酸、二甲基亞砜(dmso)、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺(dmf)、六甲基磷酰胺、甲醇、乙醇、乙酸、異丙醇、吡啶、四甲基乙二胺、丙酮、三乙胺、正丁醇、二氧六環和四氫呋喃(thf)。
再一方面，本申請涉及藥物組合物，其包含治療有效量的式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽以及藥物可以接受的載體：
其中：
r1選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r2選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r3選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r4選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r5選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；以及
r6選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
條件是r1至r6中至少含有一個氘原子。
能夠用于本申請的示例性的“藥物可接受的載體”的實例包括但不限于任何被國家藥品管理機構批準為可接受用于人或家畜的佐劑、載體、賦形劑、助流劑、甜味劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、增味劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、懸浮劑、穩定劑、等張劑、溶劑或乳化劑。
又一方面，本申請涉及式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽在制備用于抑制表皮生長因子受體(her)的藥物中的用途：
其中：
r1選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r2選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r3選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r4選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r5選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；以及
r6選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
條件是r1至r6中至少含有一個氘原子。
在某些實施方案中，表皮生長因子受體(her)為egfr(her1)。
在某些實施方案中，egfr(her1)為野生型。
在某些實施方案中，egfr(her1)為突變體。
在某些實施方案中，egfr(her1)為單突變體或雙突變體。
在某些實施方案中，式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽對l858regfr突變體、t790megfr突變體和exon19缺失激活突變體具有抑制活性。
另一方面，本申請涉及式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽在制備用于治療癌癥和/或腫瘤的藥物中的用途：
其中：
r1選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r2選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r3選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r4選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r5選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；以及
r6選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
條件是r1至r6中至少含有一個氘原子。
由于本申請的式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽對l858regfr突變體、t790megfr突變體和exon19缺失激活突變體具有抑制活性，其可用于由egfr突變體活性介導的疾病或疾病狀態如癌癥的治療。
在某些實施方案中，本申請的式(i)所示的化合物及其藥物可接受的鹽用于治療由l858regfr突變體和/或t790megfr突變體和/或exon19缺失激活突變體介導的疾病或疾病狀態如癌癥的治療。
在某些實施方案中，癌癥選自卵巢癌、宮頸癌、結腸直腸癌、乳腺癌、胰腺癌、膠質瘤、膠質母細胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、肝細胞癌、胃癌、胃腸道間質瘤(gist)、甲狀腺癌、膽管癌、子宮內膜癌、腎癌、間變性大細胞淋巴瘤、急性髓細胞白血病(aml)、多發性骨髓瘤、黑色素瘤和間皮瘤。
在某些實施方案中，肺癌選自小細胞肺癌(sclc)和非小細胞肺癌(nsclc)。
其他方面，本申請涉及治療腫瘤和/或癌癥的方法，其包括向需要所述方法的個體給予治療有效量的式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽，或者給予治療有效量的包含式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽以及藥物可接受的載體的藥物組合物，
其中：
r1選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r2選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
r3選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r4選自亞甲基或被1至2個氘原子取代的亞甲基；
r5選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；以及
r6選自甲基或被1至3個氘原子取代的甲基；
條件是r1至r6中至少含有一個氘原子。
在某些實施方案中，個體是哺乳動物。
在某些實施方案中，個體是人類。
在某些實施方案中，向需要治療腫瘤和/或癌癥的個體給予式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽的單位劑量為0.1mg-1000mg。
在某些實施方案中，向需要治療腫瘤和/或癌癥的個體給予式(i)所示的化合物或其藥物可接受的鹽的單位劑量為1mg-1000mg。
實施例
雖然任何本領域技術人員能夠依據上述公開的一般技術來制備本申請的化合物，但為方便起見，本說明書中的其它地方提供更加詳細的本申請化合物的合成技術。另外，本領域技術人員已知合成中所使用的所有試劑及反應條件并且可以由普通的商品來源獲得。例如，實施例中所使用的包括氘代試劑在內的各種試劑皆可從sigma-aldrichcompanyltd購得。實施例中所使用的各種細胞系皆可例如從中國科學院典型培養物保藏委員會細胞庫購得。
除非另有說明，1hnmr是使用氘代二甲基亞砜以400或500mhz頻率下于約20-30℃下測定。使用標準nmr縮寫：s＝單峰；d＝雙峰；dd＝雙峰的雙峰；t＝三重峰；q＝四重峰；p＝五重峰；m＝多重峰；br＝寬帶。
制備實施例
中間體1
n1-(2-[甲基(甲基-d3)氨基]乙基)-5-甲氧基-n1-甲基-n4-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，2，4-三胺
將n’-(2-[甲基(甲基-d3)氨基]乙基)-2-甲氧基-n’-甲基-n-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-硝基苯-1,4-二胺(中間體6，44g)、鐵(31g)和nh4cl(1.9g)在乙醇(120ml)和水(40ml)中的混合物加熱回流3.5小時。通過使用scx柱的離子交換層析法對該粗混合物進行純化。用甲醇-氨從柱中洗脫，進行真空濃縮，得米黃色標題化合物(90％)。m/z:434
中間體2
n1-(2-[二(甲基-d3)氨基]乙基)-5-甲氧基-n1-甲基-n4-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,2,4-三胺
將n’-(2-[二(甲基-d3)氨基]乙基)-2-甲氧基-n’-甲基-n-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-硝基苯-1,4-二胺(中間體7，44g)、鐵(31g)和nh4cl(1.9g)在乙醇(120ml)和水(40ml)中的混合物加熱回流3.5小時。通過使用scx柱的離子交換層析法對該粗混合物進行純化。用甲醇-氨從柱中洗脫，進行真空濃縮，得米黃色標題化合物(95％)。m/z:437
中間體3
n1-(2-二甲基氨基乙基)-5-(甲氧基-d3)-n1-甲基-n4-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，2，4-三胺
將n’-(2-二甲基氨基乙基)-2-(甲氧基-d3)-n’-甲基-n-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-硝基苯-1,4-二胺(中間體8，44g)、鐵(31g)和nh4cl(1.9g)在乙醇(120ml)和水(40ml)中的混合物加熱回流3.5小時。通過使用scx柱的離子交換層析法對該粗混合物進行純化。用甲醇-氨從柱中洗脫，進行真空濃縮，得米黃色標題化合物(86％)。m/z:434
中間體4
n1-(2-二甲氨基-1,1-二氘代乙基)-5-甲氧基-n1-甲基-n4-[4-(1-1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,2,4-三胺
將n’-(2-二甲氨基-1,1-二氘代乙基)-2-甲氧基-n’-甲基-n-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-硝基苯-1,4-二胺(中間體9，220mg，0.46mmol)、鐵(155mg，2.78mmol)和nh4cl(17.32mg，0.32mmol)在乙醇(12ml)和水(4ml)中的混合物加熱回流2小時。通過使用scx柱的離子交換層析法對該粗混合物進行純化。用7m甲醇-氨從柱中洗脫出期望產物，將適當的級分合并，在硅膠上進行真空濃縮。利用fcc進行純化，用在ch2cl2中的0-5％的7n甲醇-氨進行洗脫，獲得作為米黃色泡沫的標題化合物(175mg，85％)。m/z:433
中間體5
n1-(2-二甲氨基-2,2-二氘代乙基)-5-甲氧基-n1-甲基-n4-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，2，4-三胺
將n’-(2-二甲氨基-2,2-氘代乙基)-2-甲氧基-n’-甲基-n-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-硝基苯-1,4-二胺(中間體10，220mg，0.46mmol)、鐵(155mg，2.78mmol)和nh4cl(17.32mg，0.32mmol)在乙醇(12ml)和水(4ml)中的混合物加熱回流2小時。通過使用scx柱的離子交換層析法對該粗混合物進行純化。用7m甲醇-氨從柱中洗脫出期望產物，將適當的級分合并，在硅膠上進行真空濃縮。利用fcc進行純化，用在ch2cl2中的0-5％的7n甲醇-氨進行洗脫，獲得作為米黃色泡沫的標題化合物(175mg，85％)。m/z:433
中間體6
n’-(2-[甲基(甲基-d3)氨基]乙基)-2-甲氧基-n’-甲基-n-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-硝基苯-1，4-二胺
500ml三口瓶中，加入190mldma，16.9gn,n’-二甲基-n’-(甲基-d3)-乙烷，23.1gdipea，于室溫攪拌30分鐘后，加入47gn-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-胺(中間體11)，然后將此固液懸浮物升溫至85℃反應2-3小時，tlc和質譜監控反應完全后，趁熱過濾。濾液中加入300ml乙腈(包括洗滌濾餅的乙腈量)，降溫至5℃左右后，此時會有大量紅色產品析出，過濾，在50℃減壓烘干，得到51g產品，收率90％，無需純化，直接用于下步反應。m/z:464
中間體7
n’-(2-[二(甲基-d3)氨基]乙基)-2-甲氧基-n’-甲基-n-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-硝基苯-1，4-二胺
500ml三口瓶中，加入190mldma，16.9gn-甲基-n’,n’-(甲基-d3)-乙烷，23.1gdipea，于室溫攪拌30分鐘后，加入47gn-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-胺(中間體11)，然后將此固液懸浮物升溫至85℃反應2-3小時，tlc和質譜監控反應完全后，趁熱過濾。濾液中加入300ml乙腈(包括洗滌濾餅的乙腈量)，降溫至5℃左右后，此時會有大量紅色產品析出，過濾，在50℃減壓烘干，得到51g產品，收率90％，無需純化，直接用于下步反應。m/z:467
中間體8
n’-(2-二甲氨基-乙基)-2-(甲氧基-d3)-n’-甲基-n-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-硝基苯-1，4-二胺
500ml三口瓶中，加入190mldma，16.9gn,n’,n’-三甲基乙烷，23.1gdipea，于室溫攪拌30分鐘后，加入47gn-(4-氟-2-(甲氧基-d3)-5-硝基苯基)-4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-胺(中間體12)，然后將此固液懸浮物升溫至85℃反應2-3小時，tlc和質譜監控反應完全后，趁熱過濾。濾液中加入300ml乙腈(包括洗滌濾餅的乙腈量)，降溫至5℃左右后，此時會有大量紅色產品析出，過濾，在50℃減壓烘干，得到51g產品，收率90％，無需純化，直接用于下步反應。m/z:464
中間體9
n’-(2-二甲氨基-1，1-氘代乙基)-2-甲氧基-n’-甲基-n-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-硝基苯-1，4-二胺
將n1,n1,n2-三甲基-2,2-二氘代乙烷-1,2-二胺(80mg，0.79mmol)添加到n-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-胺(中間體11，350mg，0.79mmol)和dipea(0.342ml，1.97mmol)在2,2,2-三氟乙醇(5ml)中的懸浮液。將該混合物在微波中于140℃下加熱1小時。通過使用scx柱的離子交換層析法將冷卻的反應混合物純化。用7m甲醇-氨從柱中洗脫出期望產物，將適當的級分合并，在硅膠上進行真空濃縮。利用fcc進行純化，用在ch2cl2中的0-4％7n甲醇-氨進行洗脫，獲得作為橙色固體的標題化合物(230mg，62％)。m/z:463
中間體10
n’-(2-二甲氨基-2,2-氘代乙基)-2-甲氧基-n’-甲基-n-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-硝基苯-1，4-二胺
將n1,n1,n2-三甲基-1,1-二氘代乙烷-1,2-二胺(80mg，0.79mmol)添加到n-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-胺(中間體11，350mg，0.79mmol)和dipea(0.342ml，1.97mmol)在2,2,2-三氟乙醇(5ml)中的懸浮液。將該混合物在微波中于140℃下加熱1小時。通過使用scx柱的離子交換層析法將冷卻的反應混合物純化。用7m甲醇-氨從柱中洗脫出期望產物，將適當的級分合并，在硅膠上進行真空濃縮。利用fcc進行純化，用在ch2cl2中的0-4％7n甲醇-氨進行洗脫，獲得作為橙色固體的標題化合物(230mg，62％)。m/z:463
中間體11
n-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-胺
將對甲苯磺酸水合物(22.73g，119.5mmol)一次性地添加到3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-h-吲哚(中間體13，24.27g，99.58mmol)和4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(中間體14，18.54g，99.58mmol)在2-戊醇(500ml)中的混合物中。將所得混合物于105℃下攪拌2.5小時。然后冷卻到室溫。通過過濾收集所得沉淀物，用2-戊醇(50ml)清洗，在真空下干燥，獲得一些作為黃色固體的期望產物。將濾液冷卻，通過過濾收集所得沉淀物，用2-戊醇(10ml)清洗。將這兩批產物合并，用ch3cn進行研磨，獲得固體，通過過濾收集該固體，在真空下干燥，獲得作為黃色固體的標題化合物(37.4g，95％)。m/z:379
中間體12
n-(4-氟-2-(甲氧基-d3)-5-硝基苯基)-4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-胺
將對甲苯磺酸水合物(22.73g，119.5mmol)一次性地添加到3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-h-吲哚(中間體13，24.27g，99.58mmol)和4-氟-2-(甲氧基-d3)-5-硝基苯胺(中間體15，18.54g，99.58mmol)在2-戊醇(500ml)中的混合物中。將所得混合物于105℃下攪拌2.5小時。然后冷卻到室溫。通過過濾收集所得沉淀物，用2-戊醇(50ml)清洗，在真空下干燥，獲得一些作為黃色固體的期望產物。將濾液冷卻，通過過濾收集所得沉淀物，用2-戊醇(10ml)清洗。將這兩批產物合并，用ch3cn進行研磨，獲得固體，通過過濾收集該固體，在真空下干燥，獲得作為黃色固體的標題化合物(37.4g，95％)。m/z:382
中間體13
3-(2-氯嘧啶-4-基)-1h-吲哚
在10分鐘的時間內于0℃下在n2氣氛中，將ch3mgbr(3m，在乙醚中，22.68ml，68.03mmol)逐滴添加到1-h-吲哚(7.97g，68.03mmol)在1,2-二氯乙烷(250ml)中的攪拌溶液中。將所得溶液攪拌15分鐘，然后一次性地添加2,4-二氯嘧啶(15.00g，100.69mmol)。讓所得溶液升溫至室溫，再攪拌16小時。通過添加ch3oh(25ml)淬滅反應，然后將該混合物進行真空濃縮，使其吸附到硅膠上。利用fcc進行純化，用在ch2cl2中的0-20％的ch3oh進行洗脫，獲得作為黃色固體的標題化合物(7.17g，46％)。m/z:229
中間體14
4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺
將4-氟-2-甲氧基苯胺(2.4g，17.00mmol)分批添加到在冰/水浴中冷卻的濃h2so4(15ml)中，在添加期間將溫度保持在低于15℃。將該混合物攪拌直到所有所形成的固體都已溶解。分批添加kno3(0.815ml，17.00mmol)，以便將溫度保持在低于10℃。將該混合物攪拌過夜，然后倒入冰/水上。將該混合物用濃nh4oh堿化。將所得固體濾出，然后溶解于ch2cl2，用水清洗，干燥(na2so4)，在硅膠上濃縮。利用fcc進行純化，用50-0％在ch2cl2中的庚烷進行洗脫，獲得作為黃色結晶固體標題化合物(2.450g，77％)。m/z:186
中間體15
4-氟-2-(甲氧基-d3)-5-硝基苯胺
將4-氟-2-(甲氧基-d3)苯胺(2.4g，17.00mmol)分批添加到在冰/水浴中冷卻的濃h2so4(15ml)中，在添加期間將溫度保持在低于15℃。將該混合物攪拌直到所有所形成的固體都已溶解。分批添加kno3(0.815ml，17.00mmol)，以便將溫度保持在低于10℃。將該混合物攪拌過夜，然后倒入冰/水上。將該混合物用濃nh4oh堿化。將所得固體濾出，然后溶解于ch2cl2，用水清洗，干燥(na2so4)，在硅膠上濃縮。利用fcc進行純化，用50-0％在ch2cl2中的庚烷進行洗脫，獲得作為黃色結晶固體標題化合物(2.450g，77％)。m/z:189
實施例1
n-(2-{2-[甲基(甲基-d3)氨基]乙基-甲氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺
冰浴條件下向n1-(2-[甲基(甲基-d3)氨基]乙基)-5-甲氧基-n1-甲基-n4-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,2,4-三胺(中間體1，20g)在thf(200ml)和水(20ml)中加入6.9g氫氧化鈉。經攪拌溶液中添加丙烯酰氯4.05g，室溫攪拌30分鐘，將該混合物于室溫下攪拌1小時。tlc檢測反應結束后，反應液加入200ml水和20ml氨水，固體析出，過濾。收集所得固體，用水清洗，于50℃下干燥8小時，得標題化合物(收率86％)。
1hnmr:2.23(3h,s),2.28(2h,t),2.71(3h,s),2.89(2h,t),3.88(3h,s),5.75(1h,dd),6.25(1h,dd),6.46(1h,dd),7.03(1h,s),7.12(1h,t),7.21-7.28(2h,m),7.55(1h,d),7.90(1h,s),8.24(1h,d),8.35(1h,d),8.65(1h,s),9.15(1h,s),10.24(1h,s)
m/z:es+mh+488
n-(2-{2-[甲基(甲基-d3)氨基]乙基-甲氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺甲磺酸鹽
將上步得到的n-(2-{2-[甲基(甲基-d3)氨基]乙基-甲氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺20.5g(1.0eq)加入到500ml三口瓶中，溶于120ml乙醇和80ml乙酸乙酯，室溫下滴加4.1g甲磺酸(1.05eq)+40ml乙酸乙酯，約1小時滴完，滴完后于該溫度保溫1.5-2小時，然后緩慢冷卻至室溫，過濾，濾餅用乙酸乙酯/乙醇溶液(2:1，v/v)洗滌1次后，過濾，烘干，得到18.0g產品，收率83％。
實施例2
n-(2-{2-二(甲基-d3)氨基乙基-甲氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺
冰浴條件下向n1-(2-[二(甲基-d3)氨基]乙基)-5-甲氧基-n1-甲基-n4-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,2,4-三胺(中間體2，20g)在thf(200ml)和水(20ml)中加入6.9g氫氧化鈉。經攪拌溶液中添加丙烯酰氯4.05g，室溫攪拌30min，將該混合物于室溫下攪拌1小時。tlc檢測反應結束后，反應液加入200ml水和20ml氨水，固體析出，過濾。收集所得固體，用水清洗，于50℃下干燥8小時，得標題化合物(收率88％)。
1hnmr:2.28(2h,t),2.71(3h,s),2.89(2h,t),3.88(3h,s),5.75(1h,dd),6.25(1h,dd),6.46(1h,dd),7.03(1h,s),7.12(1h,t),7.21-7.28(2h,m),7.55(1h,d),7.90(1h,s),8.24(1h,d),8.35(1h,d),8.65(1h,s),9.15(1h,s),10.24(1h,s)
m/z:es+mh+491
n-(2-{2-二(甲基-d3)氨基乙基-甲氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺甲磺酸鹽
將上步得到的n-(2-{2-二(甲基-d3)氨基乙基-甲氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺20.5g(1.0eq)加入到500ml三口瓶中，溶于120ml乙醇和80ml乙酸乙酯，室溫下滴加4.1g甲磺酸(1.05eq)+40ml乙酸乙酯，約1小時滴完，滴完后于該溫度保溫1.5-2小時，然后緩慢冷卻至室溫，過濾，濾餅用乙酸乙酯/乙醇溶液(2:1，v/v)洗滌1次后，過濾，烘干，得到黃色固體，收率85％。
實施例3
n-(2-[2-二甲氨基乙基-甲氨基]-4-(甲氧基-d3)-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺
于冰浴條件下向n1-(2-二甲基氨基乙基)-5-(甲氧基-d3)-n1-甲基-n4-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,2,4-三胺(中間體3，20g)在thf(200ml)和水(20ml)中加入6.9g氫氧化鈉。經攪拌溶液中添加丙烯酰氯4.05g，室溫攪拌30min，將該混合物于室溫下攪拌1小時。tlc檢測反應結束后，反應液加入200ml水和20ml氨水，固體析出，過濾。收集所得固體，用水清洗，于50℃下干燥8小時，得標題化合物(收率85％)。
1hnmr:2.23(6h,s),2.28(2h,t),2.71(3h,s),2.89(2h,t),5.75(1h,dd),6.25(1h,dd),6.46(1h,dd),7.03(1h,s),7.12(1h,t),7.21-7.28(2h,m),7.55(1h,d),7.90(1h,s),8.24(1h,d),8.35(1h,d),8.65(1h,s),9.15(1h,s),10.24(1h,s)
m/z:es+mh+488
n-(2-{2-二甲氨基乙基-甲氨基}-4-(甲氧基-d3)-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺甲磺酸鹽
將上步得到的n-(2-{2-二甲氨基乙基-甲氨基}-4-(甲氧基-d3)-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-2-烯酰胺20.5g(1.0eq)加入到500ml三口瓶中，溶于120ml乙醇和80ml乙酸乙酯，室溫下滴加4.1g甲磺酸(1.05eq)+40ml乙酸乙酯，約1小時滴完，滴完后于該溫度保溫1.5-2小時，然后緩慢冷卻至室溫，過濾，濾餅用乙酸乙酯/乙醇溶液(2:1，v/v)洗滌1次后，過濾，烘干，得到黃色固體，收率88％。
實施例4
n-(2-{2-二甲氨基乙基-(甲基-d3)氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺
制備方法與n-(2-{2-二甲氨基乙基-甲氨基}-4-(甲氧基-d3)-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺相同，使用n1-(2-二甲基氨基乙基)-5-(甲氧基)-n1-(甲基-d3)-n4-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,2,4-三胺替換n1-(2-二甲基氨基乙基)-5-(甲氧基-d3)-n1-甲基-n4-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,2,4-三胺，收率70％。
1hnmr:2.23(6h,s),2.28(2h,t),2.89(2h,t),3.88(3h,s),5.75(1h,dd),6.25(1h,dd),6.46(1h,dd),7.03(1h,s),7.12(1h,t),7.21-7.28(2h,m),7.55(1h,d),7.90(1h,s),8.24(1h,d),8.35(1h,d),8.65(1h,s),9.15(1h,s),10.24(1h,s)
m/z:es+mh+488
n-(2-{2-二甲氨基乙基-(甲基-d3)氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺甲磺酸鹽
制備方法與n-(2-{2-二甲氨基乙基-甲氨基}-4-(甲氧基-d3)-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺甲磺酸鹽相同，黃色固體，收率79％。
實施例5
n-(2-[2-二甲氨基-1,1-二氘代乙基-甲氨基]-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺
冰浴條件下向n1-(2-二甲氨基-1,1-二氘代乙基)-5-甲氧基-n1-甲基-n4-[4-(1-1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,2,4-三胺(中間體4，10g，21.32mmol)在thf(95ml)和水(9.5ml)中的經攪拌溶液中添加氯丙酰氯(3.28g,25.59mmol)。將該混合物于室溫下攪拌15分鐘，然后添加naoh(3.48g，85.28mmol)。將所得混合物加熱到65℃并維持10小時。然后將該混合物冷卻到室溫，添加ch3oh(40ml)和水(70ml)。將所得混合物攪拌過夜。通過過濾收集所得固體，用水(25ml)清洗，于50℃下干燥12小時，獲得標題化合物(7.0g，94％)。
1hnmr:2.23(6h,s),2.28(2h,t),2.71(3h,s),3.88(3h,s),5.75(1h,dd),6.25(1h,dd),6.46(1h,dd),7.03(1h,s),7.12(1h,t),7.21-7.28(2h,m),7.55(1h,d),7.90(1h,s),8.24(1h,d),8.35(1h,d),8.65(1h,s),9.15(1h,s),10.24(1h,s)
m/z:es+mh+487
于50℃下向n-(2-[2-二甲氨基-1,1-二氘代乙基-甲氨基]-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺(4.44g，9.11mmol)在丙酮(45.5ml)和水(4.55ml)中的經攪拌溶液中添加在丙酮(4.55ml)中的甲磺酸(0.893g，9.11mmol)溶液。將所得混合物攪拌1.5小時。通過過濾收集所得固體，于80℃下真空干燥過夜，獲得固體形式的標題鹽(4.9g，94％)。
實施例6
n-(2-[2-二甲氨基-2,2-二氘代乙基-甲氨基]-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺
冰浴條件下向n1-(2-二甲氨基-2,2-二氘代乙基)-5-甲氧基-n1-甲基-n4-[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,2,4-三胺(中間體5，10g，21.32mmol)在thf(95ml)和水(9.5ml)中的經攪拌溶液中添加氯丙酰氯(3.28g,25.59mmol)。將該混合物于室溫下攪拌15分鐘，然后添加naoh(3.48g，85.28mmol)。將所得混合物加熱到65℃并維持10小時。然后將該混合物冷卻到室溫，添加ch3oh(40ml)和水(70ml)。將所得混合物攪拌過夜。通過過濾收集所得固體，用水(25ml)清洗，于50℃下干燥12小時，獲得標題化合物(7.0g，94％)。
1hnmr:2.23(6h,s),2.71(3h,s),2.89(2h,t),3.88(3h,s),5.75(1h,dd),6.25(1h,dd),6.46(1h,dd),7.03(1h,s),7.12(1h,t),7.21-7.28(2h,m),7.55(1h,d),7.90(1h,s),8.24(1h,d),8.35(1h,d),8.65(1h,s),9.15(1h,s),10.24(1h,s)
m/z:es+mh+487
于50℃下向n-(2-[2-二甲氨基-2,2-二氘代乙基-甲氨基]-4-甲氧基-5-{[4-(1-h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基}丙-2-烯酰胺(4.44g，9.11mmol)在丙酮(45.5ml)和水(4.55ml)中的經攪拌溶液中添加在丙酮(4.55ml)中的甲磺酸(0.893g，9.11mmol)溶液。將所得混合物攪拌1.5小時。通過過濾收集所得固體，于80℃下真空干燥過夜，獲得固體形式的標題鹽(4.9g，94％)。
實施例7
n-(2-[2-二甲氨基乙基-甲氨基]-5-{[4-(1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}-4-甲氧基苯基)丙-2-烯酰胺
將丙烯酰氯(0.584ml，1m在ch2cl2中，0.58mmol)的溶液逐滴添加到n1-(2-二甲氨基乙基)-n4-[4-(1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-甲氧基-n1-甲基苯-1,2,4-三胺(252mg，0.58mmol)在ch2cl2(10ml)中的溶液中，然后將該混合物于-5℃下攪拌1小時。然后將該混合物用ch2cl2(100ml)稀釋，將所得溶液用飽和nahco3(25ml)、水(25ml)、然后用飽和鹽水(25ml)清洗，然后進行真空濃縮。利用fcc進行純化，用在ch2cl2中的0-30％ch3oh洗脫，獲得白色固體的標題化合物(76mg，27％)。
1hnmr:2.23(6h,s),2.28(2h,t),2.71(3h,s),2.89(2h,t),3.88(3h,s),5.75(1h,dd),6.25(1h,dd),6.46(1h,dd),7.03(1h,s),7.12(1h,t),7.21-7.28(2h,m),7.55(1h,d),7.90(1h,s),8.24(1h,d),8.35(1h,d),8.65(1h,s),9.15(1h,s),10.24(1h,s)
m/z:es+mh+485
生物學實施例
實施例1
將calu3(wt)、calu6(wt)、nci-h1975(t790m/l858r)和pc9(ex19del)pc9vanr(ex19del/t790m)細胞系接種在384孔板上，每孔500-1000個細胞(取決于細胞系)，每孔加入70μl含10％胎牛血清、2mml-谷氨酰胺以及1％青霉素/鏈霉素的rpmi培養基。同時以每個細胞系雙行的形式制備第0天的培養板。細胞在37℃，5％co2下貼壁過夜。次日使用echoliquidhandler向測定板中加入滴定的供試化合物，處理后的細胞在37℃，5％co2下再孵育72小時。各化合物均按11點劑量反應測定，最高濃度為10μm，1:3稀釋。與給藥測定板平行的第0天培養板使用sytoxgreen和皂苷處理，并測定各孔中的活細胞數。在將化合物處理的培養板孵育72小時后，每孔加入5μl2μm的sytoxgreen，并將培養板在室溫下孵育1小時。每孔的熒光細胞數用acumen測定。每孔加入10μl0.25％的皂苷，將培養板在室溫下孵育過夜。每孔中的熒光細胞總數在acumen上讀取。從細胞總數中減去死亡細胞數計算活細胞數。將各化合物獲得的數據輸入合適的軟件包以執行曲線擬合分析。基于此數據通過計算獲得50％效果所需的化合物濃度來確定ic50值。
表1結果顯示，實施例1-6的化合物與實施例7的化合物(對照組)對表達野生型egfr的細胞系和表達突變型egfr(ex19del、l858r和/或t790megfr)的細胞系的增殖抑制作用相當。
表1測試化合物對表達突變型或野生型egfr的一組nsclc細胞系增殖的抑制作用(ic50μm)
實施例2
募集8名男性健康志愿者進行單次給藥藥代動力學對比研究。將受試者隨機分為2組，實施例7的化合物(對照組)和實施例1-6的化合物組分別4名受試者。7天清洗期后重新分組對其他實施例化合物進行試驗。受試者禁食10小時后，次日早上進食統一標準餐后開始口服給予受試物，劑量均為0.4mg/kg(此劑量約為動物急性毒性劑量1/50，因此對受試者沒有潛在的毒副作用)。整個研究期間，受試者需要在設定的9個時間點(給藥前、給藥后30分鐘、給藥后1、2、3、6、12、24、48、72小時)采集血樣，用于測定血漿中的藥物濃度。在每個采樣點分別采集約5ml靜脈全血置干燥的肝素或edta試管內，4℃放置2小時后進行4℃離心(6000rpm，10min)分離血清，血清轉移至樣品凍存管中，-20℃冰箱保存至測定。采用反相高效液相色譜(hplc)加turboion
研究結果如下表2所示，實施例1-6的化合物的auc0-t與實施例7的化合物(對照化合物)相比增加了46-84％，t1/2與對照化合物相比增加了54-88％。
表2健康受試者單次給藥藥代對比研究結果
實施例3
實驗方法：裸小鼠(balb/c裸小鼠，6-8周齡，20-22g)皮下接種人類細胞系h1975(l858r/t790m)，待腫瘤生長至100-300mm3后，將動物隨機分為5組，其中受試樣品每組8只，溶劑組12只，雌性。分別為實施例1-6的化合物2.5、5、10mg/kg/d3個劑量組，實施例7的化合物5mg/kg/d劑量組及溶劑對照組。以上各組連續灌胃給予共21天。實驗中每周測2-3次瘤體積，稱瘤重。腫瘤體積(tv)、相對腫瘤體積(rtv)、腫瘤生長抑制率(tgi)、腫瘤增殖率(t/c)公式如下：
tv＝1/2a×b2(其中a和b分別表示腫瘤的長徑和短徑)
rtv＝tvdt/tvd0
相對腫瘤增殖率(t/c％)＝rtv治療組/rtv對照組×100％
腫瘤生長抑制率(tgi％)＝100％×(1-(tvdt(治療組)-tvd0(治療組))/(tvdt(對照組)-tvd0(對照組)))
實驗結果：實施例1-6的化合物均明顯抑制人肺癌h1975裸小鼠移植瘤的生長，導致部分小鼠腫瘤消退。實施例7的化合物對h1975也有療效。在同等劑量下，實施例1-6的化合物的療效明顯優于實施例7的化合物，約增加19-43％。荷瘤小鼠對以上化合物均能較好耐受。
表3實施例1-7的化合物對人細胞系h1975裸小鼠移植瘤的療效
本說明書中所引用的所有專利、專利申請公開、專利申請及非專利出版物，均以其全文并入本文供參考。
自前文可以理解，雖然為了說明的目的在本文中描述了本發明的具體實施方案，但可在不偏離本發明的精神與范圍下進行各種修正。因此，本發明的范圍應當僅受所附的權利要求的限定。