本發明涉及T細胞受體活化劑多肽及其應用，具體涉及具有促進T細胞受體的激活，治療惡性腫瘤的多肽。
背景技術：
T細胞受體(T cell receptor，TCR)，即T細胞抗原受體：是T細胞特異性識別和結合抗原肽-MHC分子的分子結構， 通常與CD3分子呈復合物形式存在于T細胞表面。T細胞受體的主要功能是在識別特異抗原后激活T細胞。T細胞激活的過程屬于跨膜信號傳遞，由眾多的分子和生化反應共同完成。細胞內信號傳遞最常見的方式是由激酶和磷酸酶所主導的蛋白磷酸化和去磷酸化。CD3和ζ亞基的胞內區域有許多免疫受體酪氨酸激活基序（en: immuno-receptor tyrosine-based activation motifs，ITAM）。在T細胞受體被激活后，這些序列中的酪氨酸被Src激酶家族磷酸化，從而實現了信號的跨膜傳遞。
2003年發表于《新英格蘭醫學雜志》的一項研究發現，腫瘤浸潤T細胞數量與宮頸癌患者的總生存期及無進展生存期相關，證實了腫瘤特異性T細胞的存在，表明免疫系統是可以識別腫瘤并試圖控制其生長的。因此，腫瘤細胞的免疫系統是通過特異性T細胞受體激活來實現。
現階段，多采用細胞因子和單克隆抗體激活T細胞受體，但都存在分子量大，引起免疫抵抗，從而中和抗體的作用。因此，發明人希望設計和制備分子量較小的T細胞受體活化劑多肽，克服大分子細胞因子和單克隆抗體的臨床使用缺陷。
目前，沒有成熟開發的T細胞受體活化劑多肽問世，用于治療惡性腫瘤。
技術實現要素：
發明目的
本發明提供全新的序列，該序列為T細胞受體活化劑，對惡性腫瘤具有很好的療效。
技術方案
T細胞受體活化劑多肽，其特征在于其序列為SEQ ID NO：1。
T細胞受體活化劑多肽在治療惡性腫瘤，如套細胞淋巴瘤和胰腺癌藥物中的應用。
有益效果
利用固相合成法化學合成T細胞受體活化劑多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可促進T細胞受體的激活，治療惡性腫瘤，如套細胞淋巴瘤和胰腺癌。我們發現的T細胞受體活化劑多肽可以抑制套細胞淋巴瘤Mino細胞增殖活力，也可以抑制人胰腺癌細胞ASPC-1，MiapacaⅡ的增殖。在體內試驗顯示本發明多肽可以加強5-氟尿嘧啶對荷瘤S180小鼠抗腫瘤作用，延長荷瘤小鼠的存活期；同時，單獨使用本發明多肽也可提高荷瘤小鼠生存率。具有潛在的新藥開發價值。
具體實施方式
實施例1
T細胞受體活化劑多肽延長5-氟尿嘧啶對實體瘤S180小鼠的存活期的影響。
取于昆明種小鼠腹腔傳代S180后第8天的腹水瘤細胞液，無菌0.9%氯化鈉注射液稀釋，使濃度為2.5×107/mL，每只小鼠腹腔接種5×106/0.2mL。將實驗動物隨機分為8組，每組10只，即模型對照組（0.6mL/mouse DW）、5-氟尿嘧啶組（20mg/kg，腹腔注射）、T細胞受體活化劑多肽（上海生工合成）低、中、高（5、10、20 mg/Kg，尾靜脈注射）及其聯合5- 氟尿嘧啶組。接種第2 天開始給藥，1 次/d，共14天。停藥后觀察至小鼠死亡，記錄小鼠生存時間。
觀察小鼠精神狀態、活動、飲食、毛發、糞便等一般狀況以及小鼠的生存情況，并記錄生存時間，并按下述公式計算生命延長率：生命延長率=（實驗組平均生存天數/對照組平均生存天數-1）×100%。按公式Q=EAB/（EA+ EB － EA×EB）計算聯合用藥Q值，判斷聯合用藥療效。（注：公式中EA為A藥生命延長率，EB為B藥生命延長率，EAB為兩藥合用生命延長率，Q=0.85-1.15，為兩藥合用作用相加，Q>1.15為兩藥合用作用增強，Q<0.85 為兩藥合用作用拮抗。）
結果顯示，T細胞受體活化劑多肽對5-氟尿嘧啶的生命延長率為Q>1.13，可見T細胞受體活化劑多肽和5-氟尿嘧啶聯用可以延長荷瘤S180小鼠的存活期，具有相加的作用。
實施例2
用腫瘤模型檢測T細胞受體活化劑多肽的體內活力。
建立套細胞淋巴瘤腫瘤模型，陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑， 實驗組多肽(上海生工合成)設3個劑量：5、10、20 mg/Kg。21天后，觀察小鼠存活數量，計算存活率。結果顯示，T細胞受體活化劑多肽可有效地保護小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率達到79.1%。
實施例3
T細胞受體活化劑多肽對體外培養人套細胞淋巴瘤細胞的生長和存活IC50。
采用 MTT 比色法。將對數生長的人套細胞淋巴瘤Mino細胞，以 1.0×105加入 96 孔培養板中，培養 24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物T細胞受體活化劑多肽(上海生工合成)和陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養48h后，每孔加入 MTT，作用 4h 后，加入 DMSO，孵育 30min，在酶標儀 620nm 處測定吸光度 A 值，按公式人套細胞淋巴瘤Mino細胞生長抑制率＝（1-實驗組吸光值/對照組吸光值）×100％。計算出實驗藥物的 IC50 為7.97μM。
實施例4
T細胞受體活化劑多肽人胰腺癌細胞ASPC-1增殖的作用。
采用MTT 比色法。將對數生長的ASPC-1細胞，以 1.0×105加入 96 孔培養板中，培養 24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物T細胞受體活化劑多肽和陽性對照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養 48h， 每孔加入MTT，作用4h后，加入 DMSO，孵育 30min，在酶標儀 620nm 處測定吸光度 A 值，按公式腫瘤細胞生長抑制率＝（1-實驗組吸光值/對照組吸光值）×100％。計算出實驗藥物的 IC50 為14.43μM。當濃度為14.43μM時，對ASPC-1增殖抑制率為75.32%。
實施例5
T細胞受體活化劑多肽人胰腺癌細胞MiapacaⅡ增殖的作用。
采用MTT 比色法。將對數生長的MiapacaⅡ細胞，以 1.0×105加入 96 孔培養板中，培養 24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物T細胞受體活化劑多肽和陽性對照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養 48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入 DMSO，孵育 30min，在酶標儀 620nm 處測定吸光度 A 值，按公式腫瘤細胞生長抑制率＝（1-實驗組吸光值/對照組吸光值）×100％。計算出實驗藥物的 IC50 為6.54μM。當濃度為6.54μM時，對MiapacaⅡ增殖抑制率為79.31%。
SEQUENCE LISTING
<110> 蘇州普羅達生物科技有限公司
<120> 一種T細胞受體活化劑多肽及其應用
<130>
<160> 1
<170> Patent In version 3.3
<210> 1
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Ser Glu Val Thr Ala Val Glu Gly Ala Ile Val Gln Ile Asn Cys Thr
1 5 10 15
Tyr Gln Thr Ser Ala Ala Ala Gly Phe Tyr Gly Leu Ser
20 25