林蛙卵多肽及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于多膚制備技術領域，具體設及一種林蛙卵多膚及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 林蛙在我國東北地區分布廣泛，集藥食補于一體，具有很高的經濟價值，且日益受 到國內外生產、加工和流通企業的重視。林蛙卵具有很高的營養價值，且具有多種生理功 能，可應用于制藥和保健食品，脫脂（超臨界萃取）干燥后的林蛙卵蛋白質含量可達80%W 上，且其氨基酸種類齊全，含有人體所需的9種必需氨基酸，必需氨基酸與總氨基酸的比值 (E/T)高達50 %，并且富含微量元素，是天然優質的保健食品原料。
[0003] 生物活性膚化ioactiveP巧tides)是由20種氨基酸W不同組成與排列方式構 成，具有氨基酸與蛋白質不可比擬的生理功能。生物活性膚的滲透壓低于游離氨基酸，其吸 收率高，致敏性低，安全性高。另外，由于其結構的多樣性與復雜性使其具有多種生物活性， 大量的研究表明，它們還擁有潛在的降血壓，降血脂，抗氧化，抗衰老，抗病毒，抑菌，抗癌， 促進生長，鎮靜，降低膽固醇，促進礦物質吸收，改善物質代謝，增強機體免疫能力等諸多功 能，運些功能很多都是其原蛋白質和單一氨基酸所沒有的。現研究表明，酶解林蛙卵制備的 多對-OH與DPPH?的抑制率分別達到80. 91 %和70. 45%，說明其有較高的抗氧化活性。林 蛙卵抗氧化膚具有抗氧化、保護生物膜、清除自由基、解毒排毒等生理功能的生物活性膚， 是一類非酶類自由基清除劑。由于其無任何副作用、安全性高、抗氧化性高等優點，可被添 加到日常膳食中作為天然抗氧化劑。
[0004] 但長期W來，林蛙卵油是林蛙卵的主要產品，脫脂后的林蛙卵一直被視為加工副 產物，其開發利用尚處于空白階段，造成優質動物蛋白資源的浪費。隨著現代生物技術的發 展，工業化生產已開始利用酶法水解改善蛋白質的功能性質，制得的活性膚可作為食品或 營養保健品的基料。而且研究表明，食源性蛋白質經過消化系統酶促水解后，主要是W小膚 的形式被吸收，其機體吸收利用率比游離氨基酸更高。膚與蛋白質相比，具有更好的理化性 質、加工性能W及生理功能。因此，開發利用林蛙卵蛋白制備多膚對于提高蛋白資源利用率 和林蛙產業的經濟效益有重要意義。
【發明內容】
[0005] 為了解決現有技術中脫脂林蛙卵蛋白尚未進行充分開發利用的問題，本發明提供 了一種林蛙卵多膚及其制備方法和應用，制得的林蛙卵多膚可作為天然抗氧化劑添加到日 常膳食中，促進人體健康。
[0006] 本發明是運樣實現的，根據本發明的一個方面，提供了一種林蛙卵多膚的制備方 法，包括如下步驟：
[0007] 1)粉碎篩分，將脫脂干燥林蛙卵粉碎過篩；
[000引。酶解，將步驟1)中制備的林蛙卵粉末加水稀釋，加熱并保持恒溫，調節抑，加入 膜蛋白酶、木瓜蛋白酶的酶系組合進行酶解反應降解林蛙卵；
[0009] 3)滅酶，反應至設定時間后，調節抑，水浴終止反應；
[0010] 4)兩次離屯、，合并上清液；
[0011] 5)將上清液冷凍干燥，制得林蛙卵多膚凍干粉，研磨為均勻粉末，制得所述林蛙卵 多膚。
[0012] 進一步地，步驟1)中將脫脂干燥林蛙卵粉碎后過60目篩。
[0013] 進一步地，步驟2)中加水使林蛙卵粉末稀釋2. 5-3. 5倍，保持恒溫溫度為 25-35°C，用1mol/L化OH溶液或1mol/L肥1溶液調節體系抑值為6。
[0014] 進一步地，步驟2)中膜蛋白酶、木瓜蛋白酶的酶活添加量為10400u/g料，膜蛋白 酶：木瓜蛋白酶的酶活比為1. 13,底物濃度10%，酶解溫度45-55°C，pH7. 70,反應時間為 3. 5-4. 5h。
[0015] 進一步地，步驟3)中用1 mol/L化OH溶液或1 mol/L肥1溶液調節抑值為7. 0， 水浴溫度為85-95°C，水浴時間8-12min。
[0016] 進一步地，步驟4)中離屯、溫度4°C、轉速為8000r/min，時間為15min，首次離屯、后 用蒸饋水洗涂沉淀進行二次離屯、。
[0017] 根據本發明另外一個方面，還提供了一種按照上述方法制備的林蛙卵多膚。
[0018] 本發明還提供了上述林蛙卵多膚作為天然抗氧化劑在醫藥、日常膳食中的應用。
[0019] 與現有技術相比，本發明的優點在于，利用林蛙卵制備出林蛙卵多膚，將脫脂后的 林蛙卵再利用，所得的林蛙卵多膚作為一種生物活性膚，可應用在醫藥、膳食等多個方面， 具有較高的抗氧化活性，并且本發明提供的方法簡單易操作，多膚得率高。
【附圖說明】
[0020] 下面結合附圖及實施方式對本發明作進一步詳細的說明：
[0021] 圖1為BCA法測定多膚含量的標準曲線；
[0022] 圖2為本發明制備的林蛙卵多膚傅立葉紅外掃描譜圖；
[0023] 圖3為本發明制備的林蛙卵多膚氨基酸分析譜圖。
【具體實施方式】
[0024] 為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，下面結合實施例及附圖，對 本發明進行進一步詳細說明，應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用于解釋本發明，并 不用于限定本發明。 W25] 脫脂后的林蛙卵中含有大量蛋白質，應用半微量凱氏定氮法（參考GB/ 巧009. 5-2003)，測定出脫脂干燥林蛙卵蛋白含量為81. 36%，但到目前為止，林蛙卵油仍然 是林蛙卵的主要產品，脫脂后林蛙卵中大量蛋白扔未得到充分的提取和利用，為了解決現 有技術中對于脫脂林蛙卵蛋白利用的空白，本發明提供了一種林蛙卵多膚及其制備方法和 應用，通過粉碎過篩一酶解一終止反應一離屯、一冷凍干燥制得所述林蛙卵多膚粉末，可將 其應用在醫藥、膳食等多個方面。 陽〇26] 實施例1
[0027] 利用本發明提供的方法制備林蛙卵多膚，所用到的材料和儀器均為市售。
[0028] 1)粉碎篩分，將13g脫脂干燥林蛙卵用手提式高速中藥粉碎機粉碎，過60目篩；
[0029] 2)酶解，將步驟I)中制備的林蛙卵粉末加蒸饋水稀釋2. 5倍，加熱至25°C并保 持恒溫，用1mol/L化OH溶液或1mol/L肥1溶液調節體系抑值為6,按照酶活添加量 10400u/g料加入膜蛋白酶、木瓜蛋白酶，膜蛋白酶：木瓜蛋白酶的酶活比為1. 13,底物濃度 10%，酶解溫度45°C，pH7. 70,反應時間為3.化；
[0030] ：3)滅酶，反應至3.化后，用1mol/L化OH溶液或1mol/L肥1溶液調節抑值為 7. 0,水浴終止反應，水浴溫度為85 °C，水浴時間Smin; 陽03U 4)兩次離心合并上清液，離屯、溫度4°C、轉速為8000r/min，時間為15min，首次離 屯、后用蒸饋水洗涂沉淀進行二次離屯、；
[0032] 5)將上清液冷凍干燥，制得林蛙卵多膚凍干粉，研磨為均勻粉末，制得所述林蛙 卵多膚。 陽〇3引實施例2
[0034] 1)粉碎篩分，將13g脫脂干燥林蛙卵用手提式高速中藥粉碎機粉碎，過60目篩；
[0035] 2)酶解，將步驟1)中制備的林蛙卵粉末加蒸饋水稀釋3倍，加熱至30°C并保持恒 溫，用1mol/L化OH溶液或1mol/L肥1溶液調節體系抑值為6,按照酶活添加量10400U/ g料加入膜蛋白酶、木瓜蛋白酶，膜蛋白酶：木瓜蛋白酶的酶活比為1. 13,底物濃度10%，酶 解溫度48.8°C，pH7. 70,反應時間為4h;
[0036] 扣滅酶，反應至地后，用1mol/L化OH溶液或1mol/L肥1溶液調節抑值為 7. 0,水浴終止反