專利名稱：抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種具有強殺藻活性作用的苯胺類化合物，尤其是涉及一種抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法。
背景技術：
海洋放線菌是一類特殊的、具有重要經濟價值的微生物，近年來50%以上新發現的海洋微生物活性物質是由海洋放線菌這個龐大的分類群產生的，使得利用放線菌控制 水華和赤潮成為值得深入研究的領域。隨著分子生態學方法的廣泛使用，海洋放線菌多樣性研究，尤其是深海放線菌的多樣性研究取得的巨大進展，越來越多的海洋放線菌被發現，包括新的16SrDNA序列簇，放線菌的種類和數量不斷增加，由最初的3個屬增加到了 170個屬，然而，其已知物種與其估計在自然界存在的數量相比仍然是微不足道的。目前發現的不同菌屬溶藻放線菌多數通過分泌胞外活性物質間接殺藻，對于殺藻活性物質的研究多數還僅限于對活性物質的定性表述，如為弱極性脂溶性、非蛋白質類(梁锏文，林煒鐵.溶藻放線菌的分離鑒定及其溶藻特性.環境科學與技術，2009. 32
(9):68-72.)等。僅 Yamamoto 鑒定出 S. phaeofaciens 是通過分泌 L-賴氨酸(YokoYamamoto, T. K. , Yoshikuni Hodoki, Kunimoto Hotta, Hideaki Uchida, Ken-Ichi Harada.Distribution and identification of actinomycetes lysing cyanobacteria inaeutrophic lake. Journal ofApplied Phycology, 1998)破壞藻的細胞壁，抑制藍藻的生長。崔妍等(崔妍，李建宏，汪燕等.高效抑藻放線菌的篩選和活性.生態學報，2008. 28
(11):5691-5697)從江蘇海洋灘涂土壤中分離到I株對微囊藻有強烈抑殺作用的菌株YC0412,屬于灰霉素鏈霉菌(Streptomyces griseinus),該菌株還對小球藻、柵藻、魚腥藻和集胞藻都有不同的抑殺作用，YC0412的發酵液經乙酸乙酯和氯仿抽提后發現乙酸乙酯提取物具有很好的殺藻作用，說明其活性產物應該是一種弱極性脂溶性物質。關英紅等(關英紅等.一株溶藻菌株的分離鑒定及溶藻特性.環境科學學報，2008. 28 (7) :1288-1293)也從某湖泊中分離出一株對銅綠微囊藻具有很好去除效果的菌株W4，加入特定量的菌株培養液8 d后，銅綠微囊藻的去除率可達99.5%，該菌株分泌的抑藻活性物質為非蛋白質類物質。這些研究結果表明，海洋環境是發現和篩選新的放線菌物種和代謝產物的寶貴資源庫，其中蘊藏著大量放線菌資源等待開發和利用。近年來，我國赤潮發生頻率快速增加，赤潮發生規模急劇擴大，發生海域向全部近岸海域擴展，時間跨度逐漸加大，有毒、有害的赤潮生物持續增多。為應對國家高度關注的環境演變與海洋生態安全問題，鑒于我國頻發的有害赤潮對經濟發展造成的困擾，研究新型高效的赤潮調控方法，是當前該領域中亟待解決的重大問題之一。由于物理和化學方法治理赤潮存在難以大面積施用及易造成二次污染等不足之處，利用生物相互之間的生態作用來治理赤潮已成為當前研究熱點。迄今為止，大多數篩選到的抑藻微生物是通過分泌特異的具有抑藻活性的物質來起抑藻作用的。已經報道的抑藻活性物質包括蛋白質(含胞外酶)、多肽、氨基酸、抗生素、含氮化合物等其他尚未定性的抑藻化合物(Yoshikawa，K.，et al. Beta-cyanoalanineproduction by marine bacteria on cyanide-free medium and its specificinhibitory activity toward cyanobacteria. Applied and EnvironmentalMicrobiology,2000. 66(2) :718 ；Katoj J. ,et al.Development of a genetictransformation system for an alga-lysing bacterium. Applied and EnvironmentalMicrobiology,1998. 64(6) :2061-2064 ；KawanojY.，et al.Production of thiotropocinby a marine bacterium, Caulobacter sp. and its antimicroalgal activities. JournalofMarine Biotechnology,1997. 5(4):225-229 ；Hibayashi, R. and N. Imamura. Actionmechanism of a selective anti-cyanobacterial compound, argimicin A.Journalof Antibiotics, 2003. 56 (2):154-159 ；HaeyoungJeong,et al. Genomic blueprintof Hahella chejuensis，amarine microbe producing analgicid alagent. NucleicAcids Research, 2005 ；21. Berger, P.，J. Rhoj and H. Gunner. Bacterial Suppression ofChlorella by Hydroxylamine Production. Water Research 1979. 13:267-273.)。通過篩選高效、專一的抑藻活性物質成為開發抑藻劑用于赤潮治理的一個新思路
發明內容
本發明的目的是提供一種能夠高效、專一地殺滅藻細胞的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法。本發明所述抑藻活性物質為化合物，分子式為CltlH15NO,名稱為二異丁氧基苯基胺，分子量為165。所述抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，包括以下步驟I)將短桿菌(Brevibacterium sp. ) BSOl純化后接種于新鮮海水配制的固體培養基平板上培養；挑取所述固體培養基平板上的單菌落接種于新鮮海水配制的液體培養基中培養，得到發酵液；所述短桿菌(Brevibacterium sp. ) BSOl保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，登記入冊編號為CGMCC No. 6481，地址為北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所，保藏日期為2012年8月28日；2)將步驟I)所得的發酵液離心后加入萃取劑萃取，將乙酸乙酯萃取相合并得到萃取物A，將萃取物A旋轉蒸干，再加入甲醇溶解離心，去鹽，去蛋白，得到粗提物A ；3)將步驟2)所得的粗提物A溶于萃取劑中，然后上樣于硅膠柱，采用流動相梯度濃度洗脫，在洗脫過程中，間隔收集洗脫液，并將洗脫液進行層析，采用紫外顯色、碘蒸氣顯色和硫酸銨乙醇顯色，然后合并相似組分，得到合并洗脫液；4)將在步驟3)所得的合并洗脫液置于旋轉蒸發儀下真空蒸干，然后溶解于DMSO進行抑藻活性驗證，選取經驗證后具有抑藻活性組分的粗提物B ；5)將步驟4)所得的粗提物B采用葡聚糖凝膠柱進一步分離，得到洗脫液；6)將步驟5)得到的洗脫液進行層析分析，采用紫外顯色、碘蒸氣顯色和硫酸銨乙醇顯色，然后合并相似組分，得到合并洗脫液，然后將合并洗脫液置于旋轉蒸發儀真空蒸干，再溶解于DMSO驗證抑藻活性，選取經驗證后具有抑藻活性組分的活性物C ；7)將步驟6)所得的活性物C,經薄層層析(thin-layer chromatography, TLC)分析檢測，并經1H-NMR質譜檢測，得到純化合物，該純化合物即為本發明所述的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺。在步驟I)中，所述固體培養基平板上培養可置于恒溫培養箱中培養；所述恒溫培養箱的溫度可為25 32°C;所述液體培養基中培養可通過搖床培養3 5d,所述搖床的溫度可為28 37°C，所述搖床的轉速可為180 250rpm ;所述固體培養基可采用2216E培養基；所述液體培養基可采用2216E液體培養基。在步驟2)中，所述離心可采用離心機離心，離心力可為10，000 12，00(^，離心時間可為10 20min ;所述萃取劑的加入量按體積比可與發酵液等體積；所述萃取劑最好采用乙酸乙酯等，所述萃取的次數可為5次；所述旋轉蒸干可采用旋轉蒸發儀旋轉蒸干。在步驟3)中，所述萃取劑可采用乙酸乙酯等；所述硅膠柱的規格可為170X30mm，200 300目；所述流動相梯度濃度洗脫最好依次經過以下(a) (h) 8個洗脫過程(a)采用石油醚洗脫2 2. 5個柱體積；(b)采用石油醚和乙酸乙酯洗脫，按體積比，石油醚 乙酸乙酯=4 O. 5，總體積I. 5個柱體積；(c)采用石油醚和乙酸乙酯洗脫，按體積比，石油醚乙酸乙酯=4 I. 5，總體積I. 5個柱體積；(d)采用石油醚和乙酸乙酯洗脫，按體積比，石油醚乙酸乙酯=4 2. 5，總體積I. 5個柱體積；(e)采用石油醚和乙酸乙酯洗脫，按體積比，石油醚乙酸乙酯=4 3. 5，總體積I. 5個柱體積；(f)采用乙酸乙酯洗脫I. 5個柱體積；(g)乙酸乙酯甲醇洗脫，按體積比，乙酸乙酯甲醇=25 1，總體積2個柱體積；(h)采用甲醇洗脫2個柱體積；所述間隔收集洗脫液的間隔時間可為10 15min ;所述層析可采用薄層層析(thin-layer chromatography, TLC)分析方法進行層析。在步驟4)中，所述旋轉蒸發儀真空蒸干的溫度可為28 32°C。在步驟5)中，所述分離的流程可為采用濃度為99%的甲醇為洗脫流動相，每間隔6min收集一次洗脫液，所述葡聚糖凝膠柱可采用型號為S印hadex LH-20的葡聚糖凝膠柱。在步驟6)中，所述層析分析可采用薄層層析(thin-layer chromatography, TLC)分析；所述旋轉蒸發儀真空蒸干的溫度可為28 32°C。與現有技術比較，本發明所述抑藻活性化合物是將用常規方法篩選獲得的短桿菌(Brevibacterium sp. ) BSOl純化后通過發酵培養,獲得含有強抑藻活性化合物的發酵液，將發酵液離心，收集上清液，然后將上清液進行分離純化，可獲得本發明所述抑藻活性化合物。該制備方法簡單，所得抑藻活性化合物物質經測試能夠高效、專一地殺滅藻細胞，具有開發成抑藻劑的潛能，在生物降解藻類、治理赤潮方面具有廣泛的應用。
圖I為本發明所述抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的質譜圖譜。在圖I中，橫坐標代表質荷比(m/z)，縱坐標代表各個峰的相對豐度。圖2為本發明所述抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的核磁共振圖譜。在圖2中，橫坐標表示共振磁場強度，縱坐標表示圖譜中各個峰的相對豐度。圖2的上圖與下圖為同一幅圖，為了清晰起見，圖2分為上圖與下圖兩部分。圖2的上圖為化學位移在I. (Γ4. 5ppm區間的1H-NMR (600M)核磁共振圖譜；圖2的下圖為化學位移在7. 45^7. 75ppm區間的1H-NMR (600M)核磁共振圖譜。圖3為本發明所述抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺抑藻效果圖。在圖3中，橫坐標代表不同的處理時間Treatment time (h);縱坐標代表藻細胞個數Number of cells(cells/mL) ；CK :未經處理的對照組；DMSO :二甲基亞砜，為本發明所述抑藻活性物質的溶劑；用本發明所述抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺處理藻細胞時所使用的終濃度分別為5 μ g/mL、10 μ g/mL、15 μ g/mL、20 μ g/mL。圖4為短桿菌株Brevibacterium sp. BSOl電鏡圖。在圖4中，標尺為O. 5 μ m。
具體實施例方式—、準備階段I、準備菌種、藻種與培養基菌種BS01來源于廈門大學應用與環境微生物研究所從福建省廈門水域中分離 的一株具有較強殺藻活性的放線菌，初步鑒定此菌為短桿菌屬(Brevibacterium sp.)。藻種Alexandrium tamarense (AT)無菌株,藻種系由暨南大學水生生物研究所提供，經本實驗無菌藻技術除菌得到的塔瑪亞歷山大藻無菌株。藻類所用培養基為f/2培養基。藻類置于室內三角瓶中培養，溫度為20±1°C,光照條件為12h光照12h黑暗。培養基篩選培養基(2216E):蛋白胨(Peptone) 5g,酵母提取物(Yeast Extract) Ig,磷酸高鐵O. lg，瓊脂粉IOg (固體培養基)，pH 7. 6 7. 8，陳海水定容到1L。2、測定方法濁度測定法取適當原液或是稀釋的菌體發酵液，以2216E培養基為對照，采用分光光度計在波長600nm下測定光密度(OD6tltl)值。殺藻率取發酵培養后的無細胞濾液，按照1%的比例加入測試藻類中，作用24h后用魯戈氏液固定染色，在光學顯微鏡下計數。Algicidal activity(%) = (Nc-Nt)/NeX 100,式中，Ne表示對照組中的活細胞數，Nt表示實驗組中的活細胞數。二、抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，包括以下步驟I)將短桿菌(Brevibacterium sp. ) BSOl純化后接種于新鮮海水配制的固體培養基平板上，然后置于恒溫培養箱中培養；挑取所述固體培養基平板上的單菌落接種于新鮮海水配制的液體培養基中培養，通過搖床培養3 5d后得到發酵液；所述固體培養基采用2216E固體培養基；所述恒溫培養箱的溫度為25 32°C ;所述液體培養基采用2216E液體培養基；所述搖床的溫度為28 37°C，轉速為180 250rpm。所述2216E固體培養基的組分可為細菌蛋白胨5g，酵母粉lg，磷酸高鐵O. Olg，瓊脂 10 12g，海水 1000mL，2mol/L NaOH 溶液調 pH 值 7. 6 7. 8，121° C，滅菌 20min;所述2216E液體培養基的組分可為細菌蛋白胨5g，酵母粉lg，磷酸高鐵O. Olg,海水 1000mL，2mol/LNa0H 溶液調 pH 值 7. 6 7. 8，121° C，滅菌 20min。2)將步驟I)所得的發酵液通過離心機離心后加入等體積萃取劑進行萃取5次，將乙酸乙酯萃取相合并得到萃取物A，將萃取物A采用旋轉蒸發儀旋轉蒸干，再加入甲醇溶解離心，去鹽去蛋白，得到粗提物A ;所述離心機的離心力為10，000 12，000g，離心時間為10 20min ;所述萃取劑采用乙酸乙酯,所述萃取的次數為5次。3)將步驟2)所得的粗提物A溶于萃取劑中，然后上樣于硅膠柱，采用流動相梯度濃度洗脫；所述萃取劑為乙酸乙酯、所述硅膠柱的規格為170 X 30mm，200 300目；所述流動相梯度濃度洗脫依次經過以下(a) (h)8個洗脫過程(a)采用石油醚洗脫2 2. 5個柱體積；(b)采用石油醚和乙酸乙酯洗脫，按體積比，石油醚乙酸乙酯=4:0.5，總體積1.5個柱體積；(c)采用石油醚和乙酸乙酯洗脫，按體積比，石油醚乙酸乙酯=4:1. 5，總體積
I.5個柱體積；(d)采用石油醚和乙酸乙酯洗脫，按體積比，石油醚乙酸乙酯=4:2. 5，總體積I. 5個柱體積；(e)采用石油醚和乙酸乙酯洗脫，按體積比，石油醚乙酸乙酯=4:3. 5，總體積I. 5個柱體積；(f)采用乙酸乙酯洗脫I. 5個柱體積；(g)乙酸乙酯甲醇洗脫，按體積t匕，乙酸乙酯甲醇=25:1，總體積2個柱體積；(h)采用甲醇洗脫2個柱體積。4)在步驟3)洗脫過程中，間隔收集洗脫液，并將洗脫液采用薄層層析(thin-layerchromatography, TLC)分析方法進行層析,采用紫外顯色,碘蒸氣顯色和硫酸銨乙醇顯色，然后合并相似組分，得到合并洗脫液；所述間隔收集洗脫液的時間為間隔10 15min。5)將在步驟4)所得的合并洗脫液置于旋轉蒸發儀下真空蒸干，然后溶解于DMSO進行抑藻活性驗證，選取經驗證后具有抑藻活性組分的粗提物B ;所述旋轉蒸發儀真空蒸干的溫度為28 32°C。6)將步驟5)所得的粗提物B采用葡聚糖凝膠柱進一步分離，得到洗脫液；所述分離流程為采用濃度為99%的甲醇為洗脫流動相，每間隔6min收集一次洗脫液，所述葡聚糖凝膠柱型號為S印hadex LH-20。7)將步驟6)得到的洗脫液利用薄層層析(thin-layer chromatography, TLC)分析，采用紫外顯色，碘蒸氣顯色和硫酸銨乙醇顯色，然后合并相似組分，得到合并洗脫液，然后將合并洗脫液置于旋轉蒸發儀真空蒸干，再溶解于DMSO驗證抑藻活性，選取經驗證后具有抑藻活性組分的活性物C ;所述旋轉蒸發儀真空蒸干的溫度為28 32°C。8)將步驟7)所得的活性物C,經薄層層析(thin-layer chromatography, TLC)分析檢測，并經1H-NMR質譜檢測，得到純化合物，該純化合物即為本發明所述的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺。下面給出附圖的具體說明參見圖1，分子離子峰、[Μ+Na]+和[M+K]+正離子加合峰分別為164. 97和187. 88，203.78。分子量為165。參見圖2，利用核磁共振技術IH-NMR(600M)、13C-NMR、DEPT和H-1H COSY譜圖。推測化合物結構式見圖4，化學分子式為CltlH15NO,分子量為165. 2322，m/z為165. 1154(100. 0%)，166. 1187 (10.8%)。與Sci Finder數據庫比較得知，化合物為二異丁氧基苯基胺，英文名稱為(2-isobutoxyphenyl) amine,其 CAS 為 104065-95-4。經過MALDI-T0F-MS確定相對分子質量之后，再經核磁共振圖譜解譜而來，所得物質為二異丁氧基苯基胺，相對分子量約為165，其結構式如下
權利要求
1.抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，其特征在于所述二異丁氧基苯基胺的分子式為C10H15NO ； 所述抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，包括以下步驟 1)將短桿菌(Brevibacteriumsp. ) BSOl純化后接種于新鮮海水配制的固體培養基平板上培養；挑取所述固體培養基平板上的單菌落接種于新鮮海水配制的液體培養基中培養，得到發酵液；所述短桿菌(Brevibacterium sp. ) BSOl保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，登記入冊編號為CGMCC No. 6481 ； 2)將步驟I)所得的發酵液離心后加入萃取劑萃取，將乙酸乙酯萃取相合并得到萃取物A，將萃取物A旋轉蒸干，再加入甲醇溶解離心，去鹽，去蛋白，得到粗提物A ； 3)將步驟2)所得的粗提物A溶于萃取劑中，然后上樣于硅膠柱，采用流動相梯度濃度洗脫，在洗脫過程中，間隔收集洗脫液，并將洗脫液進行層析，采用紫外顯色、碘蒸氣顯色和硫酸銨乙醇顯色，然后合并相似組分，得到合并洗脫液； 4)將在步驟3)所得的合并洗脫液置于旋轉蒸發儀下真空蒸干，然后溶解于DMSO進行抑藻活性驗證，選取經驗證后具有抑藻活性組分的粗提物B ； 5)將步驟4)所得的粗提物B采用葡聚糖凝膠柱進一步分離，得到洗脫液； 6)將步驟5)得到的洗脫液進行層析分析，采用紫外顯色、碘蒸氣顯色和硫酸銨乙醇顯色，然后合并相似組分，得到合并洗脫液，然后將合并洗脫液置于旋轉蒸發儀真空蒸干，再溶解于DMSO驗證抑藻活性，選取經驗證后具有抑藻活性組分的活性物C ； 7)將步驟6)所得的活性物C,經薄層層析(thin-layerchromatography, TLC)分析檢測，并經1H-NMR質譜檢測，得到純化合物，該純化合物即為本發明所述的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺。
2.如權利要求I所述的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，其特征在于在步驟I)中，所述固體培養基平板上培養是置于恒溫培養箱中培養；所述恒溫培養箱的溫度為25 32°C ;所述液體培養基中培養可通過搖床培養3 5d，所述搖床的溫度可為28 37 °C，所述搖床的轉速可為180 250rpm。
3.如權利要求I所述的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，其特征在于在步驟I)中，所述固體培養基采用2216E固體培養基；所述液體培養基采用2216E液體培養基。
4.如權利要求I所述的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述離心采用離心機離心，離心力為10，000 12，000g，離心時間為10 20min;所述萃取劑的加入量按體積比可與發酵液等體積。
5.如權利要求I所述的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述萃取劑采用乙酸乙酯，所述萃取的次數可為5次；所述旋轉蒸干可采用旋轉蒸發儀旋轉蒸干。
6.如權利要求I所述的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述萃取劑采用乙酸乙酯；所述硅膠柱的規格為170 X 30mm，200 300目。
7.如權利要求I所述的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述流動相梯度濃度洗脫最好依次經過以下(a) (h) 8個洗脫過程(a)采用石油醚洗脫2 2. 5個柱體積；(b)采用石油醚和乙酸乙酯洗脫，按體積比，石油醚乙酸乙酯=4 O. 5，總體積I. 5個柱體積；(c)采用石油醚和乙酸乙酯洗脫，按體積比，石油醚乙酸乙酯=4 I. 5，總體積I. 5個柱體積；(d)采用石油醚和乙酸乙酯洗脫，按體積比，石油醚乙酸乙酯=4 2. 5，總體積I. 5個柱體積；(e)采用石油醚和乙酸乙酯洗脫，按體積t匕，石油醚乙酸乙酯=4 3. 5，總體積I. 5個柱體積；(f)采用乙酸乙酯洗脫I. 5個柱體積；(g)乙酸乙酯甲醇洗脫，按體積比，乙酸乙酯甲醇=25 1，總體積2個柱體積；(h)采用甲醇洗脫2個柱體積；所述間隔收集洗脫液的間隔時間可為10 15min ;所述層析可采用薄層層析分析方法進行層析。
8.如權利要求I所述的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，其特征在于在步驟4)中，所述旋轉蒸發儀真空蒸干的溫度為28 32°C。
9.如權利要求I所述的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，其特征在于在步驟5)中，所述分離的流程為采用濃度為99%的甲醇為洗脫流動相，每間隔6min收集一次洗脫液，所述葡聚糖凝膠柱可采用型號為Sephadex LH-20的葡聚糖凝膠柱。
10.如權利要求I所述的抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，其特征在于在步驟6)中，所述層析分析是采用薄層層析(thin-layer chromatography, TLC)分析；所述旋轉蒸發儀真空蒸干的溫度可為28 32°C。
全文摘要
抑藻活性物質二異丁氧基苯基胺的制備方法，涉及一種具有強殺藻活性作用的苯胺類化合物。用短桿菌BS01制備發酵液，離心后加入萃取劑，將萃取物蒸干，再加入甲醇溶解離心去鹽去蛋白得粗提物；再溶于萃取劑中，上樣于硅膠柱，洗脫，收集洗脫液，層析，采用紫外顯色、碘蒸氣顯色和硫酸銨乙醇顯色，合并相似組分得合并洗脫液；蒸干后再溶解于DMSO進行抑藻活性驗證，選取具有抑藻活性組分的粗提物；采用葡聚糖凝膠柱分離得洗脫液；層析分析，采用紫外顯色、碘蒸氣顯色和硫酸銨乙醇顯色，合并相似組分得合并洗脫液，蒸干后溶解于DMSO驗證抑藻活性，選取具有抑藻活性組分的活性物；經層析，1H-NMR質譜檢測得產物。
文檔編號C12P13/00GK102911972SQ201210455749
公開日2013年2月6日 申請日期2012年11月12日 優先權日2012年11月12日
發明者鄭天凌, 安新麗, 張化俊, 傅麗君, 李 東 申請人:廈門大學