；包括此類抗體或片段的氨基酸序列變體和/或糖 基化變體。人源化抗J1ER2抗體的例子以INN名稱曲妥單抗和帕妥珠單抗已知。另一種 合適的抗J1ER2抗體是T-DM1，其是一種由huMAb4D5-8 (HERCEPIN?)和美登木素生物堿類 (maytansinoide)(即DM1 =N2 -脫乙酰基-N2 -(3-疏基-1-氧丙基）-美登素；即一種高 度有力的抗微管劑）組成的抗體-毒素綴合物，該綴合物（具有MCC接頭）目前開發用于 轉移性乳腺癌。具有各種特性的其它HER2抗體已經記載于Tagliabue等，Int.J.Cancer， 47:933-937 (1991);McKenzie等，0ncogene，4 :543_548 (1989);CancerRes.，51: 5361-5369(1991);Bacus等，MolecularCarcinogenesis，3 :350_362(1990);Stancovski 等，PNAS(USA)，88 :8691-8695 (1991);Bacus等，CancerResearch，52 :2580-2589 (1992); Xu等，Int.J.Cancer，53 :401_4〇8(l993) ;W〇94/00136;Kasprzyk等，CancerResearch，52 : 2771-2776(1992);Hancock等，CancerRes.，51 :4575_4580 (1991);Shawver等，Cancer Res.，54 :1367-1373 (1994);Arteaga等，CancerRes.，54 :3758_3765(1994);Harwerth 等，J.Biol.Chem.，267 :15160-15167(1992);美國專利No. 5, 783, 186 ;及Klapper等， Oncogene，14:2099-2109 (1997)。最成功的治療性抗HER2 抗體是由GenentechInc?和 F.Hoffmann-LaRocheLtd以商品名HERCEPIN?出售的曲妥單抗。關于HER2抗原及針 對其的抗體的更多詳情記載于許多專利和非專利出版物（關于合適的概述，見美國專利 No.5, 821，337 和TO2006/044908)。
[0050] 抗HER2抗體選自例如曲妥單抗、帕妥珠單抗和T-DM1的組，并且也可以由抗HER2 抗體的混合物，諸如例如曲妥單抗和帕妥珠單抗或T-DM1和帕妥珠單抗組成。已經發現了 帕妥珠單抗和曲妥單抗的組合在先前曲妥單抗療法期間已經經歷進展的轉移性J1ER2陽性 乳腺癌患者中是有活性的且耐受良好[見例如Baselga，J.等，JournalofClin.Oncol. 第28卷（7)2010 :第1138頁-第1144頁]。依照本發明的配制劑在本文中以抗HER2抗體 曲妥單抗例示。術語"曲妥單抗"、"帕妥珠單抗"和"T-DM1"涵蓋在選自美國、歐洲和日本 的國家或地區中滿足獲得作為相同或生物相似產品的銷售授權必需的要求的所有相應抗 HER2抗體。曲妥單抗具有EP-B-590058中限定的CDR區。帕妥珠單抗具有W0 01/00245中 限定的⑶R區。已經發現了BT-474抗增殖測定法[Nahta，R?等，"TheHER-2-targeting antibodiesTrastuzumabandPertuzumabsynergisticallyinhibitthesurvival ofbreastcancercells"，CancerRes. 2004 ;64 :2343. 2346]中的曲妥單抗活性在 0. 7-1. 3xl04個U/mg間。T-DM1 記載于W02005/117986。
[0051]HERCEPIN? (曲妥單抗）已經在EU得到批準，用于如下治療具有過表達HER2的腫 瘤的轉移性乳腺癌（MBC)患者：
[0052]-作為單一療法以治療已經接受針對其轉移性疾病的至少兩種化學療法方案的患 者。先前的化學療法必須已經至少包含蒽環類抗生素和紫杉烷（taxane)，除非患者不適合 這些治療。激素受體陽性患者也必須是激素療法已經失敗，除非患者不適合這些治療。
[0053]-與帕利他塞（paclitaxel)組合以治療尚未接受針對其轉移性疾病的化學療法 且不適合蒽環類抗生素的那些患者。
[0054]-與多西他賽（docetaxel)組合以治療尚未接受針對其轉移性疾病的化學療法的 那些患者。
[0055]-與芳香酶抑制劑組合以治療先前沒用曲妥單抗治療的具有激素受體陽性MBC的 絕經后患者。
[0056] 曲妥單抗也已經在EU得到批準，用于治療具有過表達HER2的腫瘤的MBC患者，用 于在手術、化學療法（新輔助或輔助）和放射療法（若可適用的話）后治療J1ER2陽性早期 乳腺癌（EBC)患者。
[0057] 此外，曲妥單抗目前開發用于治療胃癌。
[0058]目前對曲妥單抗批準兩種劑量給藥方案（表1);對于轉移性乳腺癌（MBC)和早期 乳腺癌（EBC)兩者均為一周一次（qlw)和每3周一次（q3w)。在qlw劑量給藥方案中，加載 劑量是4mg/kg，接著是2mg/kg的后續劑量。在q3w劑量給藥方案中，加載劑量是8mg/kg， 接著是6mg/kg的后續劑量。
[0059] 如上文所記錄的，靜脈內施用的HERCEPIN?(曲妥單抗）目前以管形瓶中的凍干形 式出售。在歐洲出售的配制劑中，每個管形瓶裝有在凍干填充體積6. 25ml無菌水溶液后獲 得的干殘留物，所述無菌水溶液含有下列組分：150mg曲妥單抗（有效的156. 3mg以確保可 以在重建后自最終產物取出150mg的名義數量）、3. 50mg鹽酸L-組氨酸、2. 25mgL-組氨 酸、141. 9mga，a-二水合海藻糖、〇. 63mg聚山梨酯20。溶解的凍干物含有約24mg/ml曲妥 單抗、5禮1^-組氨酸/11(：1?冊.0、601111二水合€[，€ [-海藻糖、0.01%聚山梨酯20。然后， 將溶液添加至輸注溶液，然后在90分鐘里對患者施用輸注（若耐受良好的話，可以在MBC 中在30分鐘里給予后續的輸注）。
[0060] 許多可溶性透明質酸酶糖蛋白是現有技術中已知的。為了進一步限定此類可溶性 透明質酸酶糖蛋白的功能、作用機制和特性，提供了以下背景信息。
[0061]SC(皮下）間質基質由糖胺聚糖的粘彈性凝膠內包埋的纖維狀蛋白質的網絡構 成。乙酰透明質酸（HA)，即一種非硫酸化重復線性二糖是SC組織的主要糖胺聚糖。HA由 成纖維細胞以一種高分子量兆道爾頓粘性聚合物分泌入間質中，隨后，其在局部、在淋巴 中、及在肝中經由溶酶體透明質酸酶和外切糖苷酶的作用降解。身體中的約50 %乙酰透明 質酸是由SC組織生成的，其中它以約0. 8mg/gm濕重組織找到[AuklandK.和ReedR.， 見上文]。估計平均70kg成人含有15克HA，其中30 %每天周轉（合成和降解）[Laurent L.B.等，"Catabolismofhyaluronaninrabbitskintakesplacelocally,inlymph nodesandliver"，Exp.Physiol. 1991;76:695-703]。作為皮下基質的凝膠樣組分的主要 成分，HA顯著促成其粘性。
[0062] 糖胺聚糖（GAG)是胞外基質（ECM)的復雜線性多糖。GAG以N-取代的氨基己酸和 糖醛酸（在乙酰透明質酸（HA)、硫酸軟骨素（CS)、軟骨素（C)、硫酸皮膚素（DS)、硫酸乙酰 肝素（HS)、和肝素（H)的情況中），或半乳糖（在硫酸角質素（KS)的情況中）的重復二糖 結構為特征。除了HA外，所有都以與核心蛋白共價結合方式存在。GAG及其核心蛋白在結 構上稱為蛋白聚糖（PG)。
[0063] 在哺乳動物中，主要在結締組織、皮膚、軟骨中，及在滑液中找到乙酰透明質酸 (HA)。乙酰透明質酸也是眼的玻璃體的主要組分。在結締組織中，與乙酰透明質酸有關的 水合水產生組織間的水合基質。乙酰透明質酸在與細胞運動性有關的生物學現象，包括快 速發育、再生、修復、胚胎發生、胚胎學發育、傷口愈合、血管發生、和腫瘤發生中發揮關鍵的 作用（Toole，CellBiol.Extracell.Matrix，Hay(編），PlenumPress，NewYork，1991 ; 第 1384 頁-第 1386 頁；Bertrand等，Int.J.Cancer1992 ;52 :1-6;Knudson等，FASEB J. 1993 ;7 :1233-1241]。另外，乙酰透明質酸水平與腫瘤攻擊性相關聯[Ozello等，Cancer Res. 1960 ;20 :600_604;Takeuchi等，CancerRes. 1976 ;36 :2133_2139;Kimata等，Cancer Res. 1983 ;43 :1347-1354] 〇
[0064] 在許多細胞的胞外基質中，特別地在軟結締組織中找到HA。已經給HA分配各 種生理學功能，諸如在水和血漿蛋白質穩態中[LaurentT.C.等，FASEBJ.，1992 ;6: 2397-2404]。HA生成在增殖細胞中增加，并且可以在有絲分裂中發揮作用。它還已經牽涉 行進和細胞迀移。HA似乎在細胞調節、發育、和分化中發揮重要的作用[Laurent等，見上 文]。
[0065] 已經在臨床醫學中廣泛使用HA。其組織保護和流變學特性已經證明為可用于眼 科手術（例如以在白內障手術期間保護角膜內皮）。血清HA是肝疾病和各種炎性狀況， 諸如類風濕性關節炎的診斷。由HA積累引起的間質性水腫可以引起各個器官的功能障礙 [Laurent等，見上文]。
[0066] 乙酰透明質酸蛋白質相互作用也牽涉胞外基質或"基質"的結構。
[0067] 透明質酸酶是遍及動物界找到的一組一般中性或酸性活性酶。透明質酸酶就底物 特異性和作用機制而言有所變化（W0 2004/078140)。存在著三大類透明質酸酶：
[0068] 1.哺乳動物型透明質酸酶（EC3. 2. 1. 35)，其是以四糖和六糖作為主要終產物的 內-N-乙酰基己糖胺酶。它們具有水解和轉糖苷酶活性兩者，并且可以降解乙酰透明質 酸和硫酸軟骨素（CS)，一般地C4-S和C6-S。
[0069] 2.細菌透明質酸酶（EC4. 2. 99. 1)降解乙酰透明質酸及以各種程度降解CS和 DS。它們是內-0-N-乙酰基己糖胺酶，其通過主要生成二糖終產物的0消除反應運行。
[0070] 3.來自水蛭、其它寄生物、和甲殼動物的透明質酸酶（EC3. 2. 1. 36)是經由水解 0 1-3連接生成四糖和六糖終產物的內-葡糖醛酸糖苷酶。
[0071] 哺乳動物透明質酸酶可以進一步分成兩組：中性活性和酸性活性酶。人基因組 中存在著6種透明質酸酶樣基因，S卩HYAL1、HYAL2、HYAL3、HYAL4、HYALP1和PH20/SPAM1。 HYALP1是一種假基因，并且尚未顯示HYAL3擁有針對任何已知底物的酶活性。HYAL4是一種 軟骨素酶，并且展現出很少的針對乙酰透明質酸的活性。HYAL1是原型酸性活性酶，而PH20 是原型中性活性酶。一般地，酸性活性透明質酸酶，諸如HYAL1和HYAL2在中性pH(即pH 7)缺乏催化活性。例如，HYAL1在體外超過pH4. 5具有很少的催化活性[FrostI.G.和Stem，R.，"Amicrotiter-basedassayforhyaluronidaseactivitynotrequiring specializedreagents"，Anal.Biochemistry，1997 ;251 :263_269]。HYAL2 是一種在體外 具有非常低的比活的酸性活性酶。
[0072] 透明質酸酶樣酶也可以以那些一般經由糖基磷脂酰肌醇錨鎖定質膜的酶，諸如 人HYAL2 和人PH20 [Danilkovitch-Miagkova等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2003 ; 100 (8): 4580-4585;Phelps等，Science1988 ;240 (4860) :1780-1782]，和那些一般可溶的酶，諸 如人HYAL1 [Frost，I.G.等，"Purification，cloning，andexpressionofhumanplasma hyaluronidase"，Biochem.Biophys.Res.Commun. 1997 ;236(1) : 10-15]為特征。然而，存在 著物種間的變化：例如牛PH20非常松散地附著于質膜，并且沒有經由磷脂酶敏感性錨來錨 定[Lalancette等，Biol.Reprod.，2001 ;65(2) :628_36]。牛透明質酸酶的此獨特特征已經 容許使用可溶性牛睪丸透明質酸酶酶作為臨床使用的提取物（Wydase?，Hyalase?)。其它 PH20種類是脂質錨定的酶，其一般在不使用去污劑或脂肪酶的情況中是不可溶的。例如，人 PH20經由GPI錨而錨定于質膜。嘗試生成人PH20,不會將脂質錨引入多肽中的DNA構建體 生成無催化活性的酶，或不溶性的酶[Arbing等，Eur.J.Biochem.，1997 ;247 (3) :810_4]。 以可溶性和膜結合形式兩者找到天然存在的彌猴精子透明質酸酶。雖然64kDa膜結合形式 在pH7. 0擁有酶活性，但是54kDa形式僅在pH4. 0有活性[Cherr等，Dev.Biol.，1996 ; 10 ;175(1) :142-53]。如此，PH20的可溶性形式經常缺乏中性條件下的酶活性。
[0073] 如上文所記錄的且依照W02006/091871中的教導，可以將少量可溶性透明質酸酶 糖蛋白（sHASEGP)引入配制劑中以便于將治療性藥物施用入下皮中。通過快速解聚胞外空 間中的HA，sHASEGP降低間質的粘性，由此提高水力傳導，并且容許安全且舒適地將較大體 積施用入SC組織中。經由降低的間質粘性由sHASEGP誘導的升高的水力傳導容許更大的 分散，這潛在地提高sc施用的治療性藥物的系統生物利用度。
[0074]在下皮中注射時，sHASEGP對HA的解聚定位于SC組織中的注射部位。實驗證據顯 示sHASEGP在小鼠中以半衰期13至20分鐘在間質空間中局部失活，在CD-1小鼠中靜脈內 單劑后在血液中沒有可檢出的系統吸收。在血管區室內，sHASEGP在多至0. 5mg/kg劑量的 情況中在小鼠和獼猴中分別表明2. 3和5分鐘的半衰期。與HA底物在SC組織中的連續合 成組合，sHASEGP快速清除導致其它共注射分子的瞬時的且局部有活性的滲透增強，該效應 在施用后 24 至 48 小時內完全可逆[BywatersG.L?等，"Reconstitutionofthedermal barriertodyespreadafterHyaluronidaseinjection''，Br.Med.J.，1951 ;2 (4741): 1178-1183]。
[0075] 在其對局部液體分散的影響外，sHASEGP還充當吸收增強劑。大于16千道爾頓 (kDa)的大分子大多排除在經由擴散通過毛細管的吸收之外，并且大多經由引流淋巴結吸 收。因此，皮下施用的大分子，諸如例如治療性抗體（分子量約150kDa)必須穿過間質基質， 之后到達引流淋巴系統，隨后吸收入血管區室中。通過提高局部分散，sHASEGP增加許多大 分子的吸收速率（Kah相對于在沒有sHASEGP的情況中的SC施用，這導致升高的峰血液水 平（Cmax)，而且潛在地導致升高的生物利用度[BookbinderL.H.，等，"Arecombinanthuman enzymeforenhancedinterstitialtransportoftherapeutics''，J.Control.Release 2006 ；114 ：230-241]〇
[0076] 動物起源的透明質酸酶產品已經在臨床上使用超過60年，主要用于提高其 它共施用的藥物的分散和吸收及用于皮下輸液（大體積的流體的SC注射/輸注） [FrostG.I.，"Recombinanthumanhyaluronidase(rHuPH20)：anenablingplatform forsubcutaneousdrugandfluidadministration''，ExpertOpiniononDrug Delivery，2007 ;4:427-440]D關于透明質酸酶作用機制的詳情已經詳細記載于下列出 片反物：Duran_ReynoldsF.，"Aspreadingfactorincertainsnakevenomsandits relationtotheirmodeofaction''，CRSocBiolParis，1938 ;69_81;ChainE.， "Amucolyticenzymeintestesextracts''，Nature1939 ；977~978；ffeissmannB.， "Thetransglycosylativeactionoftesticularhyaluronidase''，J.Biol.Chem.， 1955 ;216 :783_94 ;Tammi，R.，Saamanen，A.M.，Maibach，H.I.，TammiM.，"Degradation ofnewlysynthesizedhighmolecularmasshyaluronanintheepidermaland dermalcompartmentsofhumanskininorganculture''，J.Invest.Dermatol. 1991 ; 97 :126_130 ;Laurent，ILB.G.，Dahl，L.B.，Reed，R.K.，"Catabolismofhyaluronanin rabbitskintakesplacelocally，inlymphnodesandliver''，Exp.Physiol. 1991 ; 76 ：695-703 ；Laurent?T.C.和Fraser，J.R.E."'DegradationofBioactiveSubstances： PhysiologyandPathophysiology''，Henriksen，J.H. (Ed)CRCPress，BocaRaton，FL; 1991.第 249 頁-第 265 頁；Harris，E.N.等，"Endocyticfunction，glycosaminoglycan specificity，andantibodysensitivityoftherecombinanthuman190-kDa hyaluronanreceptorforendocytosis(HARE) "，J.Biol.Chem. 2004 ;279 :36201_36209 ; Frost，G.I.，"Recombinanthumanhyaluronidase(rHuPH20)：anenablingplatformfor subcutaneousdrugandfluidadministration''，ExpertOpiniononDrugDelivery， 2007 ;4 :427-440。在EU國家得到批準的透明質酸酶產品包括Hylase? "Dessau"和 Hyalase?。在美國得到批準的動物起源的透明質酸酶產品包括Vitrase?、Hydase?、和Amphadase?。
[0077] 已經廣泛建立了透明質酸酶產品的安全性和功效。所鑒定的最重大的安全性 風險是超敏感性和/或變應原性，認為其與動物衍生的制備物的純度缺乏目關[Frost， G.I.，"Recombinanthumanhyaluronidase(rHuPH20)：anenablingplatformfor subcutaneousdrugandfluidadministration'，，ExpertOpiniononDrugDelivery, 2007 ;4 :427-440]。應當注意，在英國、德國與美國間就動物衍生的透明質酸酶的批準劑量 而言有差異。在英國，作為皮下或肌肉內注射佐劑的常用劑量是對注射直接添加的1500個 單位。在美國，出于此目的使用的常用劑量是150個單位。在皮下輸液中，使用透明質酸酶 來幫助相對大體積的流體的皮下施用。在英國，一般以皮下使用的每500至1000ml流體給 予1500個單位的透明質酸酶。在美國，認為150個單位對于每升皮下輸液溶液是足夠的。 在德國，認為150至300個單位對于此目的是足夠的。在英國，通過添加1500個單位來加 速局部麻醉劑的擴散。在德國和美國，認為150個單位對于此目的是足夠的。雖然有劑量 差異（在英國的劑量比在美國高10倍），但是已經報告了分別在美國和英國銷售的動物衍 生的透明質酸酶產品的安全性概況沒有明顯差異。
[0078]在2005年12月2日，HalozymeTherapeuticsInc?收到來自FDA的關于重組 人透明質酸酶的可注射配制劑rHuPH20(HYLENEX?)的批準。FDA批準150個單位的劑量的 HYLENEX?用于下列適應癥的SC施用：
[0079]-作為佐劑以提高其它注射藥物的吸收和分散
[0080]-用于皮下輸液
[0081]-作為SC尿路造影術中的輔助物以改善不透射線劑的吸收。
[0082] 作為所述管理審閱的一部分，建立的是，rHuPH20與先前批準的動物衍生的透明質 酸酶制備物擁有增強其它注射藥物分散和吸收的相同特性，但是具有改善的安全性概況。 具體地，與動物衍生的透明質酸酶相比，重組人透明質酸酶（rHuPH20)的使用使被動物病 原體和傳染性海綿狀腦病污染的潛在風險最小化。<