ker，Inc.，NewYork，NewYork，Pubs. (1991)和Jones，A.Adv.DrugDelivery Rev. 10 :29-90(1993)。可以于選定的溫度對穩定性測量選定的時間段。可以以多種不同方 式定性和/或定量評估穩定性，包括評估聚集體形成（例如使用大小排阻層析，通過測量濁 度，和/或通過目視檢查進行）；使用陽離子交換層析或毛細管區帶電泳通過評估電荷異質 性；氨基端或羧基端序列分析；質譜分析；SDS-PAGE分析以比較縮小的和完整的抗體；肽圖 (例如胰蛋白酶消化或LYS-C)分析；評估抗體的生物學活性或抗原結合功能等。不穩定性 可以牽涉下列任何一項或多項：聚集、脫酰胺化（例如Asn脫酰胺化）、氧化（例如Met氧 化）、異構化（例如Asp異構化）、剪裁（clipping)/水解/片段化（例如鉸鏈區片段化）、 琥珀酰亞胺形成、不成對的半胱氨酸、N端延伸、C端加工、糖基化變化等。本文中的"脫酰 胺化"單克隆抗體是其中已經通過翻譯后修飾將其一個或多個天冬酰胺殘基修飾為例如天 冬氨酸或異天冬氨酸的。
[0123] 如本文中所使用的，術語"提供pH5. 5±2. 0的緩沖劑"指通過其酸/堿共輒組分 的作用提供包含其的溶液抵抗pH變化的試劑。依照本發明的配制劑中使用的緩沖液具有 范圍為約5. 0至約7. 0,或約5. 0至約6. 5,或約5. 3至約5. 8的pH。已經發現了pH約5. 5 是最合適的。會控制此范圍中的pH的緩沖劑的例子包括乙酸鹽、琥珀酸鹽、葡糖酸鹽、組氨 酸、檸檬酸鹽、雙甘氨肽和其它有機酸緩沖液。依照本發明的最合適的緩沖液是組氨酸緩沖 液，諸如例如L-組氨酸/HC1。
[0124] "組氨酸緩沖液"是包含氨基酸組氨酸的緩沖液。組氨酸緩沖液的例子包括鹽酸組 氨酸、乙酸組氨酸、磷酸組氨酸、硫酸組氨酸。實施例中鑒定為最合適的組氨酸緩沖液是鹽 酸組氨酸緩沖液。通過用稀釋的氫氯酸滴定L-組氨酸（游離堿，固體）來制備此類鹽酸組 氨酸緩沖液。具體地，組氨酸緩沖液或鹽酸組氨酸緩沖液為pH5. 5 ±0. 6,更具體地為pH約 5. 3至約5. 8,且最具體地具有pH5. 5。
[0125] "等張的"意指感興趣的配制劑與人血液具有基本上相同的滲透壓。等張配制劑一 般會具有約250至350m0sm的滲透壓。可以使用蒸汽壓或凝固點降低型滲壓計來測量等滲 壓性。
[0126] 本文中的"糖類"包含通用組成（CH20)n及其衍生物，包括單糖、二糖、三糖、多糖、 糖醇、還原糖、非還原糖等。本文中糖類的例子包括葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、果糖、麥芽 糖、右旋糖苷、甘油、右旋糖苷、赤蘚糖醇、甘油、阿拉伯糖醇、木糖醇（sylitol)、山梨糖醇、 甘露糖醇、蜜二糖（mellibiose)、松三糖、棉子糖、甘露三糖、水蘇糖（stachyose)、麥芽糖、 乳酮糖（lactulose)、麥芽酮糖（maltulose)、葡糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、異麥芽酮糖等。特 別地，本文中所描述的配制劑包含非還原性二糖作為穩定劑，諸如選自下組的糖類：海藻糖 (例如為二水合a，a-海藻糖形式）和蔗糖。
[0127] 在本文中，"表面活性劑"指一種表面-活性劑，例如非離子型表面活性劑。本文 中的表面活性劑的例子包括聚山梨酯（例如聚山梨酯20和聚山梨酯80);Poloxamer(例 如Poloxamer188) ;Triton;十二烷基硫酸鈉（SDS);月桂基硫酸鈉；辛基糖苷鈉；月桂 基_、肉豆寇基_、亞油酰（linoleyl-)、或硬脂酰-磺基甜菜堿；月桂基-、肉豆寇基-、 亞油酰基或硬脂酰基-肌氨酸；亞油酰基_、肉豆蔻基_、或鯨蠟基-甜菜堿；月桂酰胺 基丙基-、椰油酰胺基丙基-、亞油酰胺基丙基-、肉豆蔻酰胺基丙基-、棕櫚酰胺基丙基 (palmidopropyl)-、或異硬脂酰胺基丙基-甜菜堿（例如月桂酰胺基丙基）；肉豆蔻酰胺基 丙基_、棕櫚酰胺基丙基_、或異硬脂酰胺基丙基-二甲胺；甲基椰油酰基（cocoyl)牛磺酸 鈉、或甲基油烯基牛橫酸二鈉；和MONAQUAT?系列（MonaIndustries，Inc.，Paterson，New Jersey);聚乙二醇、聚丙二醇、和乙稀和丙二醇的共聚物（例如Pluronics、PF68等）等。 已經分別發現了聚山梨酯20 (PS20)和聚山梨酯80 (PS80)在本文中所描述的配制劑中是特 別合適的。
[0128] 本文中的術語"抗體"以最廣義使用，并且明確涵蓋全長單克隆抗體、多克隆抗體、 自至少兩種全長抗體形成的多特異性抗體（例如，雙特異性抗體）、及抗體片段，只要它們 展現出期望的生物學活性。
[0129] 如本文中所使用的，術語"單克隆抗體"指自基本上同質的抗體群體獲得的抗體， 即除了可以在單克隆抗體的生成期間生成的可能的變體（此類變體一般以少量存在）外， 構成群體的抗體個體相同和/或結合相同表位。與通常包含針對不同決定簇（表位）的不 同抗體的多克隆抗體制備物相反，每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。在其特異性 外，單克隆抗體的有利之處在于它們不受其它免疫球蛋白污染。修飾語"單克隆"指示抗體 為自基本上同質的抗體群體獲得的特征，并且不應解釋為要求通過任何特定的方法生成抗 體。例如，可以通過第一次由K6hler等，Nature，256 :495 (1975)描述的雜交瘤方法來生成， 或者可以通過重組DNA方法（見例如美國專利No. 4, 816, 567)來生成要依照本發明使用的 單克隆抗體。也可以使用Clarkson等，Nature，352 :624_628 (1991)和Marks等，]\]\1〇1. Biol.，222 :581-597 (1991)中所描述的技術自噬菌體抗體文庫分離"單克隆抗體"。
[0130] "抗體片段"包含全長抗體的一部分，特別地包含其抗原結合或可變區。抗體片段 的例子包括？ &13、？&13'、？(&13'）2、和？￥片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；和自抗體片 段形成的多特異性抗體。
[0131] "全長抗體"是包含抗原結合可變區及輕鏈恒定域（CL)和重鏈恒定域、CH1、CH2和 CH3的抗體。恒定域可以是天然序列恒定域（例如人天然序列恒定域）或其氨基酸序列變 體。特別地，全長抗體具有一種或多種效應器功能。
[0132]本文中的"氨基酸序列變體"抗體是具有與主要種類抗體不同的氨基酸序列的抗 體。通常，氨基酸序列變體會擁有與主要種類抗體至少約70%的同源性，且優選地，它們會 與主要種類抗體至少約80%，更優選地至少約90%同源。氨基酸序列變體在主要種類抗體 的氨基酸序列內或附近的某些位置擁有替代、刪除、和/或添加。本文中的氨基酸序列變體 的例子包括酸性變體（例如脫酰胺化的抗體變體）、堿性變體、在其一條或兩條輕鏈上具有 氨基端前導延伸（例如VHS-)的抗體、在其一條或兩條重鏈上具有C端賴氨酸殘基的抗體 等，并且包括對重和/或輕鏈的氨基酸序列的改變的組合。相對于主要種類抗體，本文中特 別感興趣的抗體變體是包含在其一條或兩條輕鏈上的氨基端前導延伸，任選地進一步包含 其它氨基酸序列和/或糖基化差異的抗體。
[0133] 本文中的"糖基化變體"抗體是具有與附著于主要種類抗體的一個或多個碳水化 合物模塊不同的其附著的一個或多個碳水化合物模塊的抗體。本文中的糖基化變體的例子 包括具有附著于其Fc區的G1或G2寡糖結構，而不是G0寡糖結構的抗體、具有附著于其一 條或兩條輕鏈的一個或兩個碳水化合物模塊的抗體、沒有附著于抗體的一條或兩條重鏈的 碳水化合物的抗體等，及糖基化變化的組合。此外，術語"糖基化變體"還包括糖工程化改 造抗體諸如那些記載于EP1' 331 '266和USP7' 517' 670的。
[0134] 抗體"效應器功能"指那些可歸因于抗體的Fc區（天然序列Fc區或氨基酸序列 變體Fc區）的生物學活性。抗體效應器功能的例子包括Clq結合；補體依賴性細胞毒性 (CDC) ;Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導的細胞毒性（ADCC);吞噬；細胞表面受體（例如 B細胞受體；BCR)的下調，等等。
[0135] 根據全長抗體重鏈恒定域的氨基酸序列，它可以歸入不同"類"。存在著5類主要 的全長抗體 ：184、18〇、18￡、186、和411，這些中的幾種可以進一步分成"亞類"（同種型），例 如]^61、]^62、]^63、]^64、]^4、和]^42。對應于不同類抗體的重鏈恒定域分別稱作（1[阿 爾法]、0 [德耳塔]、e[厄普西隆]、Y[伽馬]、和y[謬]。不同類免疫球蛋白的亞基 結構和三維結構是公知的。
[0136] 在本文中，單克隆抗體的"生物學活性"指抗體結合抗原，并且產生可以在體外或 在體內測量的可測量生物學應答的能力。此類活性可以是拮抗的（例如在抗體是ffiR2抗 體的情況中）或激動的。在帕妥珠單抗的情況中，在一個實施方案中，生物學活性指配制的 抗體抑制人乳腺癌細胞系MDA-MB-175-VII增殖的能力。
[0137] 本文中的術語"單克隆抗體"明確包括所謂的嵌合抗體，其中重和/或輕鏈的一 部分與自特定物種衍生的或屬于特定抗體類或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，而鏈 的剩余部分與自另一物種衍生的或屬于另一抗體類或亞類的抗體中的相應序列相同或同 源，及此類抗體的片段，只要它們展現出期望的生物學活性（美國專利No. 4, 816, 567 ;及 Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81 :6851_6855(1984))。本文中感興趣的嵌合抗 體包括"靈長源化（primatized)"抗體，其包含自非人靈長類（例如舊世界猴（OldWorld Monkey)、猿等）衍生的可變域抗原結合序列和人恒定區序列。
[0138] 非人（例如嚙齒類）抗體的"人源化"形式指最低限度包含自非人免疫球蛋衍生的 序列的嵌合抗體。大體上，人源化抗體指來自接受體的高變區殘基用來自具有期望特異性、 親和力和性能的非人物種（供體抗體）諸如小鼠、大鼠、家兔或非人靈長類的高變區的殘基 替換的人免疫球蛋白（接受拍私）。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架區（FR)殘基用相 應的非人殘基替換。此外，人源化抗體可以包含在接受抗體或供體抗體中沒有找到的殘基。 做出這些修飾以進一步改進抗體性能。一般地，人源化抗體會包含至少一個、通常為兩個基 本上整個可變域，其中所有或基本上所有高變環對應于非人免疫球蛋白的高變環，且所有 或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。任選地，人源化抗體還會包含至少部分免疫球 蛋白恒定區（Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定區。關于更多詳情，見Jones等，Nature321 : 522-525(1986);Riechmann等，Nature332:323-329(1988);及Presta，Curr.Op.Struct. Biol. 2 :593-596(1992)。
[0139]人源化HER2 抗體包括huMAb4D5-l、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、 huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7 和huMAb4D5-8 或曲妥單抗（HERCEPTIN?)，如美國專 利5, 821，337的表3中所描述的；人源化520C9 (W093/21319)和人源化2C4抗體，諸如帕妥 珠單抗，如下文中進一步描述的。
[0140] 出于本文中的目的，"曲妥單抗"、"HERCEPTIN?"和"huMAb4D5-8"指針對4D5表位 的抗HER2抗體。優選地，此類抗體包含例如W0 2006/044908的圖14中所披露的輕鏈和重 鏈氨基酸序列。
[0141] "表位4D5"是HER2的胞外域中抗體4D5(ATCCCRL10463)和曲妥單抗結合的區 域。此表位接近HER2的跨膜域，并且在HER2的IV域內。為了篩選結合4D5表位的抗體，可 以實施諸如記載于Antibodies，ALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratory, EdHarlow和DavidLane(1988)的常規交叉阻斷測定法。或者，可以實施表位定位以評估抗 體是否結合J1ER2的4D5表位（例如HER2的約殘基529至約殘基625的區域中的任何一個或 多個殘基（包括端點））。"表位7C2/7F3"是HER2的胞外域的I域內7C2和/或7F3抗體結 合的氨基端區域。為了篩選結合7C2/7F3表位的抗體，可以實施諸如記載于"Antibodies，A LaboratoryManual''(ColdSpringHarborLaboratory，EdHarlow和DavidLane(1988)) 的常規交叉阻斷測定法。或者，可以實施表位定位以建立抗體是否結合ffiR2上的7C2/7F3 表位（例如HER2的約殘基22至約殘基53的區域中的任何一個或多個殘基）。
[0142] 在本文中，"帕妥珠單抗"和"rhuMAb2C4"指結合2C4表位，并且優選地包含TO 2006/044908中所披露的可變輕和可變重氨基酸序列的抗體，更具體地W0 2006/044908的 表2中所披露的人源化2C4型式574。
[0143] "表位2C4"是HER2的胞外域中抗體2C4結合的區域。為了篩選結合2C4表位 的抗體，可以實施諸如記載于Antibodies，ALaboratoryManual，ColdSpringHarbor Laboratory，EdHarlow和DavidLane(1988)的常規交叉阻斷測定法。或者，可以實施表位 定位以評估抗體是否結合HER2的2C4表位。表位2C4包含來自HER2的胞外域中的II域的 殘基。2C4和帕妥珠單抗在I、II和III域接合處結合HER2的胞外域（Franklin等Cancer Cell5 ：317-328(2004))〇
[0144] "生長抑制劑"在本文中使用時指在體外或在體內抑制細胞，尤其是表達HER的 癌細胞生長的化合物或組合物。如此，生長抑制劑可以是顯著降低處于S期的表達HER的 細胞的百分比的。生長抑制劑的例子包括阻斷細胞周期行進（處于S期以外的位置）的 藥劑，諸如誘導G1阻滯和M期阻滯的藥劑。經典的M期阻斷劑包括長春藥類（長春新 堿和長春堿）、紫杉烷（taxane)、和拓撲異構酶II抑制劑，諸如多柔比星、表柔比星、柔 紅霉素、依托泊苷、和博來霉素。那些阻滯G1的藥劑也溢出進入S期停滯，例如DNA烷 化劑類諸如他莫昔芬（tamoxifen)、潑尼松（prednisone)、達卡巴嗪（dacarbazine)、雙 氯乙基甲胺（mechlorethamine)、順鉬（cisplatin)、甲氨蝶呤（methotrexate)、5_ 氟尿 啼啶（5-fluorouracil)和ara_C。更多信息可見"TheMolecularBasisofCancer"， Mendelsohn和Israel編，第 1 章，題為"Cellcycleregulation，oncogenes，and antineoplasticdrugs'，，Murakami等（WBSaunders:Philadelphia，1995)，尤其是第 13 頁。
[0145] "生長抑制性"抗體的例子是那些結合HER2并抑制過表達HER2的癌細胞生長的 抗體。優選的生長抑制性J1ER2抗體在約0. 5至30yg/ml的抗體濃度時將細胞培養物中 的SK-BR-3乳腺腫瘤細胞的生長抑制大于20%，且優選地大于50% (例如約50%至約 100% )，其中在將SK-BR-3細胞暴露于抗體后6天測定生長抑制（見1997年10月14日 公告的美國專利No. 5, 677, 171)。優選的生長抑制性抗體是鼠單克隆抗體4D5的人源化變 體，例如曲妥單抗。
[0146] "治療/處理"指治療性處理和防范性或預防性措施兩者。需要治療的對象包括那 些已經患有疾病的對象及那些要預防疾病的對象。因此，本文中要治療的患者可以已經診 斷為患有疾病或者可以有疾病的素因或者對疾病易感。
[0147] 如本文中所使用的，術語"細胞毒劑"指抑制或阻止細胞功能和/或引起細胞破壞 的物質。該術語意圖包括放射性同位素（例如At211、I131、I125、Y'Re186、Re1'Sm153、Bi212、 p32和Lu的放射性同位素）、化療劑、和毒素諸如細菌、真菌、植物或動物起源的小分子毒素 或酶活性毒素，包括其片段和/或變體。
[0148] "化療劑"指可用于治療癌癥的化學化合物。化療劑的例子包括烷化劑類 (alkylatingagents)，諸如塞替派（thiotepa)和環磷酰胺（cyclosphosphamide) (CYTOXAN?);磺酸經基酯類（alkylsulfonates)，諸如白消安（busulfan)、英丙 舒凡（improsulfan)和哌泊舒凡（piposulfan);氮丙啶類（aziridines)，諸如 苯佐替派（benzodepa)、卡波醌（carboquone)、美妥替派（meturedepa)和烏瑞替 派（uredepa);乙撐亞胺類（ethylenimines)和甲基蜜胺類（methylamelamines)， 包括六甲蜜胺（altretamine)、三乙撐蜜胺（triethylenemelamine)、三乙撐磷酰胺 (triethylenephosphoramide)、三乙撐硫代磷酉先胺(triethylenethiophosphoramide) 和三輕甲蜜胺（trimethylolomelamine);番蒸枝內酯類（acetogenin)(尤其是 布拉他辛（bullatacin)和布拉他辛酮（bullatacinone)) ; 5-9-四氫大麻酸 (tetrahydrocannabinol)(屈大麻酸（dronabinol)，MARIN0L?) 拉帕醌（lapachone); 拉帕醇（lapachol);秋水仙素類（colchicines);白樺脂酸（betulinicacid);喜樹堿 (camptothecin)(包括合成類似物托泊替康（topotecan) (HYCAMTIN?)、CPT_11(伊立替 康（irinotecan)，CAMPT0SAR?)、乙酰喜樹堿、東茛菪亭（scopoletin)和9-氨基喜樹堿）； 苔蘚抑素（bryostatin) ;callystatin;CC_1065(包括其阿多來新（adozelesin)、卡折來 新（carzelesin)和比折來新（bizelesin)合成類似物）；鬼臼毒素（podophyllotoxin); 鬼臼酸（podophyllinicacid);替尼泊苷（teniposide);隱藻素類（cryptophycins)(特 別是隱藻素1和隱藻素8);多拉司他汀（dolastatin) ;duocarmycin(包括合成類似物， KW-2189 和CB1-TM1);艾植塞洛素（eleutherobin);pancratistatin;sarcodictyin;海綿 抑素（spongistatin);氮芥類（nitrogenmustards)，諸如苯丁酸氮芥（chlorambucil)、 萘氮芥（chlomaphazine)、膽磷酰胺（cholophosphamide)、雌莫司汀（estramustine)、異環 磷酰胺（ifosfamide)、雙氯乙基甲胺（mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥（mechlorethamine oxidehydrochloride)、美法侖（melphalan)、新氮芥（novembichin)、苯芥膽留醇 (phenesterine)、潑尼莫司汀（prednimustine)、曲磷胺（trofosfamide)、尿啼啶氮 芥（uracilmustard);亞硝脲類（nitrosoureas)，諸如卡莫司汀（carmustine)、氯脲 菌素（chlorozotocin)、福莫司汀（fotemustine)、洛莫司汀（lomustine)、尼莫司汀 (nimustine)和雷莫司汀（ranimustine);抗生素類，諸如稀二炔類抗生素（enediyne) (例如加利車霉素（〇&11(*6&11^(^11)，尤其是加利車霉素丫11和加利車霉素〇11(見 例如Angew，ChemieInti.Ed.Engl.，33:183-186 (1994));蒽環類抗生素（dynemicin)， 包括蒽環類抗生素A;埃斯波霉素（esperamicin);以及新制癌素（neocarzinostatin) 發色團和相關色蛋白稀二炔類抗生素發色團）、阿克拉霉素（aclacinomycin)、放線 菌素（actinomycin)、氨茴霉素（anthramycin)、偶氮絲氨酸（azaserine)、博來霉素 (bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋紅霉素（carminomycin)、嗜 癌霉素（carzinophilin)、色霉素（chromomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、柔紅霉 素（daunorubicin)、地托比星（detorubicin)、6_二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星 (doxorubicin)(包括ADRIAMYCIN?、嗎啉代多柔比星、氰基嗎啉代多柔比星、2-吡咯代多 柔比星和鹽酸多柔比星脂質體注射液（D0XIL?)、脂質體多柔比星TLCD-99(MY0CET?)、 PEG化的脂質體多柔比星（CAELYX?)、和脫氧多柔比星）、表柔比星（epirubicin)、依索 比星（esorubicin)、伊達比星（idarubicin)、麻西羅霉素（marcellomycin)、絲裂霉素類 (mitomycins)諸如絲裂霉素C、霉酷酸（mycophenoli