0至200倍儲備溶 液添加表面活性劑。最后，用緩沖液將蛋白質濃度調節至約110mg/ml、120mg/ml或130mg/ ml的最終曲妥單抗濃度，如下文進一步的特定配制劑中規定的。
[0171] 將所有配制劑無菌過濾通過0.22ym低蛋白質結合濾器，并在無菌條件下填充入 無菌6ml玻璃管形瓶中，用經ETFE(乙稀和四氟乙稀的共聚物）包被的橡膠塞和Alucrimp 帽密封。填充體積是約3. 0ml。將這些配制劑在不同氣候條件（5°C、25°C和30°C)貯存不 同時間間隔，并通過搖動（于5°C和25°C以200min-的搖動頻率持續1周）和冷凍-融化 壓力法來施壓。在應用壓力測試之前和之后通過下列分析方法來分析樣品：
[0172] 1)UV分光光度法；
[0173] 2)大小排阻層析（SEC);
[0174] 3)通過離子交換層析（IEC);
[0175] 4)通過溶液的濁度；
[0176] 5)在可見顆粒方面；及
[0177] 6)在rHuPH20 活性方面。
[0178] 在PerkinElmerA35UV分光光度計上以240nm至400nm的波長范圍實施用于測 定蛋白質含量的UV分光術。用相應的配制劑緩沖液將純的蛋白質樣品稀釋至約0. 5mg/ml。 依照等式1計算蛋白質濃度。
[0179]等式1:
[0180] 針對320nm的光散射校正280nm的UV光吸收，并乘以稀釋因子（其自純樣品和稀 釋緩沖液的加權質量和密度確定）。用分子除以比色皿的路徑長度d和消光系數e的乘 積。
[0181] 使用大小排阻層析（SEC)來檢測配制劑中的可溶性高分子量種類（聚集體）和低 分子量水解產物（LMW)。在具有WatersW2487雙吸光度檢測儀并裝備有2個行內TosoHaas TSK凝膠SuperSW3000,4,6x300mm柱的WatersAlliance2695HPLC儀上實施該方法。使用 50mM磷酸鈉、420mM高氯酸鈉，pH7. 0作為流動相通過等度洗脫概況來分開完整的單體、聚 集體和水解產物，并于280nm的波長檢測。
[0182] 實施離子交換層析（IEC)以檢測配制劑中改變曲妥單抗的凈電荷的化學降解產 物。出于此目的，用羧肽酶B消化曲妥單抗。該方法使用裝備有UV檢測儀（檢測波長214nm) 和DionexProPac? WCX-10分析用陽離子交換柱（4x250mm)的合適的HPLC儀。分別使用 H20中的10mM磷酸鈉緩沖液pH7. 5和10mM磷酸鈉緩沖液pH7. 5和lOOmMNaCl作為流動 相A和B，流動速率為0. 8ml/分鐘。
[0183] 為了測定濁度，于室溫使用HACH2100AN濁度計以FTU(濁度單位）測量乳光。
[0184] 通過使用SeidenaderV90-T目視檢查儀對樣品分析可見顆粒。
[0185] 使用rHuPH20作為透明質酸酶的體外酶測定法作為活性測定法。該測定法基于在 乙酰透明質酸（透明質酸鈉）結合陽離子沉淀劑時形成不溶性沉淀物。通過將rHuPH20與 乙酰透明質酸底物一起溫育，然后用酸化的血清清蛋白（馬血清）沉淀未消化的乙酰透明 質酸來測量酶活性。以640nm的波長測量濁度，并且源自對乙酰透明質酸底物的酶活性的 濁度降低是酶活性的測量。使用用rHuPH20測定參照標準品的稀釋物產生的標準曲線運行 該規程，并自曲線閱讀樣品活性。
[0186] 實施進一步的實驗，包括下列變化：
[0187]-約5. 0至約6. 0的pH變化
[0188]-約110mg/ml至約130mg/ml的蛋白質含量變化
[0189]-約0. 02 %至約0. 06 %的表面活性劑變化
[0190]-約5mM至約15mM的穩定劑（甲硫氨酸）變化
[0191] 下文表1中提供了液體抗HER-2藥物產品配制劑（配制劑A至X)的組成和穩定 性測試的結果，其中使用下列縮寫：
[0192] ffp:=沒有顆粒；effp:=基本上沒有顆粒；wafp:=具有少許顆粒
[0193]F/T:=冷凍/融化；skg:=搖動；nd:=未測定
[0194] 下文規定的配制劑顯示了，有可能提供具有高濃度的兩種不同蛋白質的液體配制 劑。可以比凍干配制劑以更大的便利且更低的成本制備此類配制劑。此外，此類配制劑更 易于處理，因為不需要溶解凍干的終產物（重建）（準備好使用）。已經發現了，表1、3和4 中規定的配制劑也適合于配制缺乏透明質酸酶酶的藥學活性抗HER2抗體的高度濃縮的穩 定的藥物配制劑。因此，在一方面，本發明還涉及具有規定的成分，但是缺乏透明質酸酶酶 的配制劑。
[0195]
[0196]
[0197]
[0198]
[0199]
[0200]
[0201]
[0202]
[0203]
[0204]
[0205]
[0206]
[0207]
[0208]
[0209]
[0210]
[0211]
[0212]
[0213]
[0214]
[0215]
[0216]
[0217]
[0218]
[0219] 實施例2:凍干配制劑的制備
[0220] 如上文關于液體配制劑所描述的那樣制備約60mg/ml曲妥單抗的溶液。已經以上 文提及的液體配制劑濃度的一半添加所有賦形劑。將配制劑無菌過濾通過0. 22iim濾器， 并在無菌條件下以等量分配入無菌20ml玻璃管形瓶中。將管形瓶用適合于在凍干工藝中 使用的ETFE(乙烯和四氟乙烯的共聚物）包被的橡膠塞部分密封，并使用表2中報告的冷 凍-干燥循環來凍干。
[0221] 表2:冷凍-干燥循環
[0222]
[0223] 首先將產物自室溫冷卻至約5°C(預冷卻），接著以約1°C/分鐘的板冷卻速率 于_40°C進行冷凍步驟，接著于_40°C進行保持步驟約2小時。于約-25°C的板溫度和約 80ybar的室壓力實施第一個干燥步驟達約76小時。隨后，自-25°C至25°C以0. 2°C/分 鐘的溫度斜坡開始第二個干燥步驟，接著于25°C的保持步驟以約80ybar的室壓力持續至 少5小時。
[0224]在UsifroidSMH-90LN2 冷凍干燥器（Usifroid，Maurepas，France)或LyoStar II冷凍干燥器（FTSSystems，StoneRidge，NY，USA)中實施凍干。將冷凍干燥的樣品于不 同氣候條件（5°C、25°C和30°C)貯存不同時間間隔。用注射用水（WFI)將凍干的管形瓶重 建至終體積2. 65ml，產生具有約120mg/ml抗體濃度的等張配制劑。冷凍干燥的餅的重建 時間是10分鐘左右。于周圍溫度在重建液體樣品的24小時溫育期后實施對重建樣品的分 析。
[0225] 通過上文所描述的下列分析方法再次分析樣品：
[0226] 1)UV分光光度法；
[0227] 2)大小排阻層析（SEC);
[0228] 3)離子交換層析（IEC);
[0229] 4)溶液的濁度；及
[0230] 5)在可見顆粒方面。
[0231] 下文表3中提供了配制劑Y的穩定性測試的結果，其中使用下列縮寫：
[0232] ffp:=沒有顆粒；
[0233]effp:=基本上沒有顆粒；
[0234] nd:=未測定
[0235] CN105168125A 說明書 54/57 頁
[0236」 以卜衣4 j/7T坭識tfJ上迚K明介UtfJ符T王：
[0237]
[0238] F= 配制劑 Tr = 曲妥單抗 His= L-組氨酸/HOtre = 二水合a,a-海藻糖 NaCl= 氯化枘 met = 曱硫氣酸 PS=以％(\\'./\，)計的聚山梨酯 rHu=rHuPH20
[0239] *)= 重建后
[0240] 本申請涉及下述各項。
[0241] 1.藥學活性抗HER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物配制劑，其包含：
[0242]a?約 50 至 350mg/ml抗HER2 抗體；
[0243]b?約 1 至lOOmM緩沖劑，其提供pH5. 5±2. 0;
[0244]c.約1至500mM穩定劑或兩種或更多種穩定劑的混合物；
[0245]d.約0. 01至0. 08%非離子型表面活性劑；和
[0246] e.有效量的至少一種透明質酸酶酶。
[0247] 2.依照權利要求1的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑，其中所述抗 HER2 抗體濃度分別是 100 至 150mg/ml、120±18mg/ml、約 110mg/ml、約 120mg/ml、或約 130mg/ml〇
[0248] 3.依照權利要求1或2的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑，其分別包含 大于150至約16' 000個U/ml、約2' 000個U/ml、或約12' 000個U/ml透明質酸酶酶。
[0249] 4.依照權利要求1至3中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑，其 中所述緩沖劑的濃度為1至50mM。
[0250] 5.依照權利要求1至4中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑，其 中所述緩沖劑提供pH5. 5 ±0. 6。
[0251] 6.依照權利要求1至5中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑，其 中所述緩沖劑是組氨酸緩沖液，例如20mM組氨酸/HC1。
[0252]7.依照權利要求1至6中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑，其 中所述穩定劑是糖類，諸如例如二水合a，a-海藻糖或蔗糖。
[0253] 8.依照權利要求1至7中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑，其 中所述穩定劑的濃度分別是15至250mM或約210mM。
[0254] 9.依照權利要求7或8的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑，其中甲硫氨 酸作為第二穩定劑使用，例如濃度為5至25mM。
[0255] 10.依照權利要求1至9中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑， 其中所述非離子型表面活性劑是聚山梨酯，其選自下組：聚山梨酯20、聚山梨酯80、和聚乙 烯-聚丙烯共聚物。
[0256] 11.依照權利要求10的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑，其中所述聚山 梨酯的濃度分別是 〇. 02% (w/v)、0. 04% (w/v)或 0. 06% (w/v)。
[0257] 12.依照權利要求1至11中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑， 其中所述抗J1ER2抗體選自下組：曲妥單抗、帕妥珠單抗和T-DM1或此類抗體的組合。
[0258] 13.依照權利要求1至12中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑， 其在冷凍和融化后是穩定的。
[0259] 14.依照權利要求1至13中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑， 其中所述透明質酸酶酶是rHuPH20。
[0260] 15.依照權利要求1至13中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑， 其缺乏所述透明質酸酶酶。
[0261] 16.依照權利要求1至14中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑， 其用于皮下或肌肉內施用。
[0262] 17.依照權利要求1至16中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑， 其為液體形式。
[0263] 18.依照權利要求1至16中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑， 其為凍干形式。
[0264] 19.依照權利要求1至18中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配制劑， 其用于治療適合于用抗HER2抗體治療的疾病或病癥，諸如例如癌癥或非惡性疾病。
[0265] 20.-種注射裝置，其包含依照權利要求1至19中任一項的高度濃縮的穩定的藥 物抗HER2抗體配制劑。
[0266] 21.依照權利要求1至19中任一項的配制劑用于制備可用于治療受試者中適合于 用抗HER2抗體治療的疾病或病癥，諸如例如癌癥或非惡性疾病的藥物的用途，包括以有效 治療所述疾病或病癥的量對受試者施用本文中所描述的配制劑。
[0267] 22.依照權利要求20的注射裝置或依照權利要求21的用途，其中與化療劑伴隨或 序貫共施用所述配制劑。
[0268] 23.-種治療受試者中適合于用抗HER2抗體治療的疾病或病癥，諸如癌癥或非惡 性疾病的方法，包括以有效治療所述疾病或病癥的量對受試者施用依照權利要求1至19中 任一項的配制劑。
[0269] 24.-種試劑盒，其包含裝有依照權利要求1至19中任一項的配制劑的一個或多 個管形瓶和關于對患者皮下施用所述配制劑的指令。
[0270] 25.依照權利要求24的試劑盒，其進一步包含用于對患者皮下施用所述配制劑的 注射裝置。
[0271] 26.如本文中所描述的發明。
【主權項】
1. 用于皮下注射用于治療適合于用抗ffiR2抗體治療的疾病或病癥的藥學活性抗HER2 抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其包含： a. 120± 18mg/ml抗HER2 抗體； b. 1至IOOmM緩沖劑，其提供pH5. 5 ±2.O; c. 1至500mM穩定劑或兩種或更多種穩定劑的混合物； d. 0. 01至0. 08 %非離子型表面活性劑。2. 依照權利要求1的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治療的疾病或病癥 的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中所述緩沖劑的濃度為1 至 50mM。3. 依照權利要求1或2的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治療的疾病或 病癥的藥學活性抗HER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中所述緩沖劑提供 pH5. 5±0. 6〇4. 依照權利要求1至3中任一項的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治療 的疾病或病癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中所述緩 沖劑是組氨酸緩沖液。5. 依照權利要求4的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治療的疾病或病癥 的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中所述緩沖劑是20mM組 氨酸/HCl。6. 依照權利要求1至5中任一項的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治療 的疾病或病癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中所述穩 定劑是糖類。7. 依照權利要求1至6中任一項的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治療 的疾病或病癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中所述穩 定劑是二水合a，a-海藻糖或蔗糖。8. 依照權利要求1至7中任一項的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治療 的疾病或病癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中所述穩 定劑的濃度分別是15至250mM或210mM。9. 依照權利要求6至8中任一項的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治療 的疾病或病癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中甲硫氨 酸作為第二穩定劑使用。10. 依照權利要求6至8中任一項的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治療 的疾病或病癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中濃度為5 至25mM的甲硫氨酸作為第二穩定劑使用。11. 依照權利要求1至10中任一項的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治 療的疾病或病癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中所述 非離子型表面活性劑是聚山梨酯，其選自下組：聚山梨酯20、聚山梨酯80、和聚乙烯-聚丙 烯共聚物。12. 依照權利要求11的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治療的疾病或病 癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中所述聚山梨酯的濃 度分別是0.02%(￥八）、0.04%(￥八）或0.06%(界八）。13. 依照權利要求1至12中任一項的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治 療的疾病或病癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中所述 抗HER2抗體選自下組：曲妥單抗、帕妥珠單抗和T-DMl或此類抗體的組合。14. 依照權利要求1的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治療的疾病或病癥 的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其包含120mg/ml曲妥單抗、 20mML-組氨酸/HClpH5.5、210mM二水合a,a-海藻糖、IOmM甲硫氨酸、〇.〇4 %聚山梨 酯20。15. 依照權利要求1至14中任一項的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治 療的疾病或病癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其在冷凍 和融化后是穩定的。16. 依照權利要求1至15中任一項的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治 療的疾病或病癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其用于與 150至16' 000U/ml酶透明質酸酶一起重建。17. 依照權利要求1至15中任一項的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治 療的疾病或病癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其用于與 2' 000或12' 000U/ml酶透明質酸酶一起重建。18. 依照權利要求1至15中任一項的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治 療的疾病或病癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中所述 疾病或病癥為癌癥或非惡性疾病。19. 依照權利要求18的用于皮下注射用于治療適合于用抗HER2抗體治療的疾病或病 癥的藥學活性抗J1ER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液體配制劑，其中所述癌癥為胃癌、轉 移性乳腺癌或早期乳腺癌。20. -種注射裝置，其包含依照權利要求1至15中任一項的用于皮下注射用于治療適 合于用抗HER2抗體治療的疾病或病癥的藥學活性抗HER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物液 體配制劑。21. 依照權利要求20的注射裝置，其中所述配制劑與150至16'OOOU/ml酶透明質酸 酶共施用。22. 依照權利要求20的注射裝置，其中所述配制劑與2' 000或12' 000U/ml酶透明質 酸酶共施用。23. 依照權利要求21或22的注射裝置，其中所述透明質酸酶酶是rHuPH20。24. 依照權利要求20至23中任一項的注射裝置，其中所述配制劑與化療劑伴隨或序貫 共施用。25. -種試劑盒，其包含裝有依照權利要求1至15中任一項的用于皮下注射用于治療 適合于用抗J1ER2抗體治療的疾病或病癥的藥學活性抗HER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物 液體配制劑的一個或多個管形瓶和關于對患者皮下施用所述配制劑的指令。26. 依照權利要求25的試劑盒，其進一步包含裝有酶透明質酸酶的一個或多個管形瓶 和關于對患者皮下施用所述配制劑和150至16' 000U/ml酶透明質酸酶的指令。27. 依照權利要求25的試劑盒，其進一步包含裝有酶透明質酸酶的一個或多個管形瓶 和關于對患者皮下施用所述配制劑和2'OOO或12'OOOU/ml酶透明質酸酶的指令。28. 依照權利要求26或27的試劑盒，其中所述酶透明質酸酶是rHuPH20。29. 依照權利要求25至28中任一項的試劑盒，其進一步包含用于對患者皮下施用所述 配制劑的注射裝置。30. -種體外酶測定法，其使用rHuPH20作為透明質酸酶，基于在乙酰透明質酸（透明 質酸鈉）結合陽離子沉淀劑時形成不溶性沉淀物，所述測定法包括：將rHuPH20與乙酰透明 質酸底物一起溫育，然后用酸化的血清清蛋白（馬血清）沉淀未消化的乙酰透明質酸來測 量酶活性；以640nm的波長測量濁度，并且源自對乙酰透明質酸底物的酶活性的濁度降低 是酶活性的測量；使用用rHuPH20測定參照標準品的稀釋物產生的標準曲線運行該規程， 并自曲線閱讀樣品活性。
【專利摘要】本發明涉及皮下抗HER2抗體配制劑。本發明涉及供皮下注射用的藥學活性抗HER2抗體，諸如例如曲妥單抗(HERCEPINTM)、帕妥珠單抗或T-DM1，或此類抗體分子的混合物的高度濃縮的穩定的藥物配制劑。特別地，本發明涉及在合適量的抗HER2抗體外包含作為組合配制劑或以共配制形式使用的有效量的至少一種透明質酸酶酶的配制劑。所述配制劑另外包含至少一種緩沖劑，諸如例如組氨酸緩沖液、穩定劑或兩種或更多種穩定劑的混合物(例如，糖類，諸如例如二水合α,α-海藻糖或蔗糖，和任選地作為第二穩定劑的甲硫氨酸)、非離子型表面活性劑和有效量的至少一種透明質酸酶酶。還提供了用于制備此類配制劑的方法及其用途。
【IPC分類】A61P35/00, A61K47/34, A61K47/36, A61K38/47, A61K47/22, A61K47/18, A61K9/08, A61K47/20, A61K39/395
【公開號】CN105168125
【申請號】
【發明人】M.阿德勒, U.格勞肖普夫, H-C.馬勒, O.B.斯托赫
【申請人】霍夫曼-拉羅奇有限公司
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2010年7月28日