20yM的甲糞威處理組；g為30yM的甲糞 威處理組；L標注部分為肝臟，Y標注部分為卵黃。
[0037] 圖2為甲糞威對斑馬魚肝功能損傷的肝臟巧光照片； 陽03引 圖中：a為空白對照組；b為溶劑對照組；C為5yM的甲糞威處理組；d為10yM的 甲糞威處理組；e為15yM的甲糞威處理組；f為20yM的甲糞威處理組；g為30yM的甲糞 威處理組。圖中劃線部分為肝臟。
[0039] 圖3為甲糞威對斑馬魚肝臟面積指數的影響；
[0040] 圖中：* :與空白對照組比較，P<0. 05 :與空白對照組比較，P<0. 01。
[0041] 圖4為還原型谷脫甘膚對甲糞威引起斑馬魚肝功能損傷的修復作用形態學照片；
[0042] 圖中：a為正常組；b為肝損傷組；C為治療組3 ;L標注部分為肝臟。
[0043] 圖5為還原型谷脫甘膚對甲糞威引起斑馬魚肝功能損傷的修復作用肝臟巧光照 片；
[0044] 圖中：a為正常組；b為肝損傷組；C為治療組1 ;d為治療組2 ;e為治療組3 ;圖中 劃線部分為肝臟。
[0045] 圖6為還原型谷脫甘膚對肝損傷斑馬魚肝臟面積指數的影響；
[0046] 圖中：* :與正常組比較，P<0. 05 :與正常組比較，P<0.Ol :與肝損傷組比較， P<0. 05 :與肝損傷組比較，P<0. 01。
[0047] 圖7為維生素C對甲糞威引起斑馬魚肝功能損傷的修復作用形態學照片；
[0048] 圖中：a為正常組；b為肝損傷組；C為治療組3 ;L標注部分為肝臟。
[0049] 圖8為維生素C對甲糞威引起斑馬魚肝功能損傷的修復作用肝臟巧光照片；
[0050] 圖中：a為正常組；b為肝損傷組；C為治療組1 ;d為治療組2 ;e為治療組3 ;圖中 劃線部分為肝臟。
[0051] 圖9為維生素C對肝損傷斑馬魚肝臟面積指數的影響；
[0052] 圖中：** :與正常組比較，P<0.Ol :與肝損傷組比較，P<0. 01。
[0053] 圖10為硫代乙酷胺對斑馬魚的形態學照片；
[0054] 圖中：a為空白對照組；b為ImM的硫代乙酷胺處理組；C為SmM的硫代乙酷胺處理 組；d為IOmM的硫代乙酷胺處理組；e為15mM的硫代乙酷胺處理組；f為20mM的硫代乙酷 胺處理組。 陽化5] 圖11為硫代乙酷胺對斑馬魚肝功能損傷的肝臟巧光照片；
[0056] 圖中：a為空白對照組；b為ImM的硫代乙酷胺處理組；C為SmM的硫代乙酷胺處理 組；d為IOmM的硫代乙酷胺處理組；e為15mM的硫代乙酷胺處理組；f為20mM的硫代乙酷 胺處理組。圖中劃線部分為肝臟。
[0057] 圖12為硫代乙酷胺對斑馬魚肝臟面積指數的影響；
[0058] 其中：* :與空白對照組比較，P<0. 05 :與空白對照組比較，P<0. 01。
【具體實施方式】
[0059] 下面結合實施例對本發明的技術方案作進一步闡述，但本發明所保護范圍不限于 此。
[0060] 實驗動物：采用肝臟特異表達巧光的斑馬魚，購自國家斑馬魚資源中屯、。雌雄斑馬 魚在照明14h/黑暗10h、28°C標準條件下分開飼養，定時喂W顆粒狀巧料和豐年郵。用卵 時，取健康性成熟的斑馬魚，按雌雄1/1或1/2的比例放入交配缸內，中間放置隔板，置于黑 暗環境中，次日亮燈前抽去隔板，光照刺激使其排卵，半小時后將成魚拱出，使排卵時間控 制在半小時內，W降低胚胎間發育時間的差異。收集受精卵，對受精卵進行消毒和清洗后， 移入斑馬魚胚胎培養用水中，28°C下控光培養，中間每24h換約1/2水，并及時吸出死亡胚 胎。
[0061] 試劑配制：甲糞威標準品購自上海市農藥研究所，用二甲基亞楓溶解配制成 50mM的儲液。k還原型谷脫甘膚化-Glutathionereduced,CAS號70-18-8)、維生素 C(X-Ascorbicacid,CAS號50-81-7)均購自Sigma公司，分別用純水溶解配制成IOmM的 儲液。所有樣品儲液放于4°C保存，實驗時用培養水稀釋至所需濃度。
[0062] 培養水組分如下：
[0063] NaCl5mM，KCl0. 17mM，CaClzO. 4mM，M拆〇4〇. 16mM，去離子水配制。
[0064] 實施例1 :斑馬魚肝功能損傷模型的建立方法 [00化]1.斑馬魚幼魚的獲得與使用
[0066] 采用健康性成熟的肝臟特異表達巧光的斑馬魚，按雌雄1/1或1/2的比例放入交 配缸內，中間放置隔板，置于黑暗環境中，次日亮燈前抽去隔板，光照刺激使其排卵，半小時 后將成魚拱出，使排卵時間控制在半小時內，W降低胚胎間發育時間的差異。收集受精卵， 對受精卵進行消毒和清洗后，移入斑馬魚胚胎培養用水中，并向所述培養水中加入0.化pm 亞甲基藍，28°C下控光培養。從斑馬魚胚胎出生后12小時加入0. 2mM的苯硫脈，中間每24h 換約1/2水，并及時吸出死亡胚胎。將出生后3天的斑馬魚置于解剖鏡下，選取發育正常的 斑馬魚仔魚，放入24孔板中，每孔5尾，每組3個平行孔。
[0067] 2.化合物處理
[0068] 設置7個實驗組：1個空白對照組，1個溶劑對照組，5個肝功能損傷誘導劑處理 組。移除微孔板中的培養水，空白對照組中加入2ml培養水，溶劑對照組加入2ml含體積濃 度0. 5%二甲基亞諷的培養水溶液，肝功能損傷誘導劑處理組2ml分別加入濃度為5iiM， 10iiM，15yM，20yM，30iiM的甲糞威溶液，由培養水與相應濃度的甲糞威儲液配制獲得。然 后，放入28°C恒溫培養箱中培養72小時。每24h換液一半。 W例 3.定性分析
[0070] 于施藥后72小時，將斑馬魚用質量濃度為0. 3%。的S卡因麻醉，然后用3%甲基纖 維素固定于載玻片上，體式顯微鏡下觀察肝臟形態。
[0071] 空白對照組和溶劑對照組肝臟形態正常。5yM的甲糞威處理組未見肝臟形態學 改變，但卵黃囊腫。IOyM的甲糞威處理組出現肝臟萎縮、顏色變暗、透光性差，卵黃囊腫。 巧yM和20yM的甲糞威處理組肝臟中毒現象更加明顯，肝臟萎縮、顏色變暗，卵黃囊吸收 延滯現象加重，并出現不同程度的屯、包水腫、出血等。30yM的甲糞威處理組斑馬魚發育嚴 重崎形，脊柱彎曲，卵黃囊凝結，肝臟嚴重萎縮、變黑，并導致大量斑馬魚死亡（圖1)。 陽0巧 4.定量分析
[0073] 巧光顯微鏡下拍照記錄斑馬魚肝臟巧光情況。與空白對照組和溶劑對照組相比， 甲糞威處理后的幼魚肝組織巧光面積明顯下降，肝臟明顯萎縮退化（圖2)。
[0074] 利用圖像處理軟件計算所述模型的肝臟面積和體面積。
[00巧]根據如下公式計算各組斑馬魚的肝臟面積指數：肝臟面積指數=肝臟面積/體面 積X100%
[0076] 各組斑馬魚肝臟面積指數W去±g表示，采用獨立樣本t檢驗法分析比較組間差異 的顯著性。
[0077] 統計結果顯示，與空白對照組相比，5iiM的甲糞威處理組斑馬魚肝臟面積指數無 顯著性變化，10yM、15yM、20yM和30yM的甲糞威處理組斑馬魚肝臟面積指數顯著降低， 差異具有顯著統計學意義（P<〇. 01)(圖3)。
[0078] W實施例1制備的所述斑馬魚肝功能損傷模型為研究對象，考察本發明所述的斑 馬魚肝臟損傷的評價指標，即肝臟面積指數的降低與現有技術中的肝臟常規評價指標即谷 丙轉氨酶（ALT)和谷草轉氨酶（AST)的相關性，進一步驗證斑馬魚肝臟面積指數的降低作 為評價斑馬魚肝功能損傷模型是否建立的可靠指標。
[0079] W實施例1制備的所述斑馬魚肝功能損傷模型，制備斑馬魚幼魚組織勻漿，測定 組織中ALT、AST水平。與空白對照組相比，5iiM的甲糞威處理組ALT、AST含量未見顯著性 升