高，IOyM、15yM、20yM和30yM的甲糞威處理組ALT、AST含量均顯著性升高（P<0. 05， P<0. 01)(表1)。可見，斑馬魚肝臟面積指數的減小與轉氨酶生化指標升高在反映斑馬魚 肝臟損傷程度上具有相關性，肝臟面積指數的降低可作為斑馬魚肝功能損傷模型的評價指 標。與空白對照組相比，10yM的甲糞威處理組斑馬魚肝臟面積指數顯著性降低，ALT、AST 含量顯著性升高，同時該劑量組斑馬魚未出現水腫、崎形及大量幼魚死亡現象。因此，選擇 10yM的甲糞威處理組作為斑馬魚肝功能損傷模型組。
[0080] 表I甲糞威對斑馬魚幼魚轉氨酶的影響（；+s，n=30)
[0082] 沖<0. 05si即ificantlydifferentfromthecontrol;*沖<0.Olsi即ificantly differentfromthecontrol.
[0083] 實施例2 :還原型谷脫甘膚對甲糞威引起的斑馬魚肝功能損傷的保護作用
[0084] 1.斑馬魚幼魚的獲得與使用
[00化]采用健康性成熟的肝臟特異表達巧光的斑馬魚，按雌雄1/1或1/2的比例放入交 配缸內，中間放置隔板，置于黑暗環境中，次日亮燈前抽去隔板，光照刺激使其排卵，半小時 后將成魚拱出，使排卵時間控制在半小時內，W降低胚胎間發育時間的差異。收集受精卵， 對受精卵進行消毒和清洗后，移入斑馬魚胚胎培養用水中，并向所述培養水中加入0.化pm 亞甲基藍，28°C下控光培養。從斑馬魚胚胎出生后12小時加入0. 2mM的苯硫脈，中間每24 小時換約1/2水，并及時吸出死亡胚胎。將出生后3天的斑馬魚置于解剖鏡下，選取發育正 常的斑馬魚仔魚，放入24孔板中，每孔5尾。每組3個平行孔。
[0086] 2.化合物處理
[0087] 設置5個實驗組：1個正常組，1個肝損傷組，3個治療組。將受精后3天的發育正 常的斑馬魚置于含有甲糞威濃度為10yM的培養水溶液中，培養72小時，制得肝損傷組斑 馬魚；將發育3天的斑馬魚置于含有甲糞威濃度為IOiiM和不同濃度還原型谷脫甘膚的混 合溶液，還原型谷脫甘膚的濃度依次為5yM，50yM，150yM，分別作為治療組1、治療組2和 治療組3,培養72小時，制得治療組斑馬魚；將發育3天的斑馬魚采用含0. 5% (v/v)二甲 基亞諷值MS0)的培養水在相同條件下培養72小時，制得正常組斑馬魚。每24h換液一半。 各孔溶液終體積均為2mL。 陽0蝴 3.定性分析
[0089] 于施藥后72小時，將斑馬魚用質量濃度為0. 3%。的S卡因麻醉，然后用3%甲基纖 維素固定于載玻片上，體式顯微鏡下觀察肝臟形態。
[0090] 正常組斑馬魚的肝臟透明，結構正常；肝損傷組斑馬魚的肝臟顏色變暗、透光性 差。隨著還原型谷脫甘膚濃度的增加，肝臟形態逐漸恢復正常，150yM還原型谷脫甘膚治療 組肝臟形態明顯改善，接近正常組斑馬魚肝臟形態（圖4)。因此，可通過觀察肝臟形態定性 分析還原型谷脫甘膚的肝臟損傷保護作用。
[0091] 4.定量分析
[0092] 巧光顯微鏡下拍照記錄斑馬魚肝臟巧光情況。利用圖像處理軟件計算所述模型的 肝臟面積和體面積。根據如下公式計算各組斑馬魚的肝臟面積指數：肝臟面積指數=肝臟 面積/體面積X100%。各組斑馬魚肝臟面積指數W之:±S表示，采用獨立樣本t檢驗法分析 比較組間差異的顯著性。
[0093] 統計結果顯示，與正常組相比，肝損傷組斑馬魚的肝臟面積指數顯著降低。隨著治 療組還原型谷脫甘膚濃度的提高，斑馬魚的肝臟面積指數顯著升高，接近正常（圖5和圖 6)。因此，可通過計算肝臟面積指數定量評價還原型谷脫甘膚的肝臟損傷保護作用。
[0094] 實施例3 :維生素C對甲糞威引起的斑馬魚肝功能損傷的保護作用 陽0巧]1.斑馬魚幼魚的獲得與使用
[0096] 采用健康性成熟的肝臟特異表達巧光的斑馬魚，按雌雄1/1或1/2的比例放入交 配缸內，中間放置隔板，置于黑暗環境中，次日亮燈前抽去隔板，光照刺激使其排卵，半小時 后將成魚拱出，使排卵時間控制在半小時內，W降低胚胎間發育時間的差異。收集受精卵， 對受精卵進行消毒和清洗后，移入斑馬魚胚胎培養用水中，并向所述培養水中加入0.化pm 亞甲基藍，28°C下控光培養。從斑馬魚胚胎出生后12小時加入0. 2mM的苯硫脈，中間每24 小時換約1/2水，并及時吸出死亡胚胎。將出生后3天的斑馬魚置于解剖鏡下，選取發育正 常的斑馬魚仔魚，放入24孔板中，每孔5尾。每組3個平行孔。
[0097] 2.化合物處理
[0098] 設置5個實驗組：1個正常組，1個肝損傷組，3個治療組。將受精后3天的發育正常 的斑馬魚，置于含有甲糞威濃度為IOyM的培養水溶液中，培養24小時，去除死亡斑馬魚， 用純水洗凈斑馬魚表面殘留液，然后將斑馬魚分為兩組，一組移入培養水中，另=組移入含 有不同濃度維生素C的培養水溶液中，將四組斑馬魚繼續培養48小時，培養水培養的一組 為肝損傷組斑馬魚，另S組維生素C的濃度依次為1yM，10yM，100yM，分別作為治療組1、 治療組2和治療組3 ;將發育3天的斑馬魚采用含0. 5% (v/v)二甲基亞諷值MS0)的培養 水在相同條件下培養斑馬魚72小時，制得正常組斑馬魚。每24h換液一半。各孔溶液終體 積均為2mL。
[0099] 3.定性分析 陽100] 于施藥后72小時，將斑馬魚用質量濃度為0. 3%。的；卡因麻醉，然后用3%甲基纖 維素固定于載玻片上，體式顯微鏡下觀察肝臟形態。 陽101] 正常組斑馬魚的肝臟透明，結構正常；肝損傷組斑馬魚的肝臟顏色變暗、透光性 差。隨著維生素C濃度的增加，肝臟形態逐漸恢復正常（圖7)。因此，可通過觀察肝臟形態 定性分析維生素C的肝臟損傷保護作用。 陽102] 4.定量分析 陽103] 巧光顯微鏡下拍照記錄斑馬魚肝臟巧光情況。利用圖像處理軟件計算所述模型的 肝臟面積和體面積。根據如下公式計算各組斑馬魚的肝臟面積指數：肝臟面積指數=肝臟 面積/體面積X100%。各組斑馬魚肝臟面積指數W去+g表示，采用獨立樣本t檢驗法分析 比較組間差異的顯著性。 陽104] 統計結果顯示，與正常組相比，肝損傷組斑馬魚的肝臟面積指數顯著減小。隨著治 療組維生素C濃度的提高，斑馬魚的肝臟面積指數顯著升高，逐漸恢復正常（圖8和圖9)。 因此，可通過計算肝臟面積指數定量評價維生素C的肝臟損失保護作用。
[0105]對比例：利用硫代乙酷胺制備斑馬魚肝功能損傷模型 陽106] 1.斑馬魚幼魚的獲得與使用 陽107] 采用健康性成熟的肝臟特異表達巧光的斑馬魚，按雌雄1/1或1/2的比例放入交 配缸內，中間放置隔板，置于黑暗環境中，次日亮燈前抽去隔板，光照刺激使其排卵，半小時 后將成魚拱出，使排卵時間控制在半小時內，W降低胚胎間發育時間的差異。收集受精卵， 對受精卵進行消毒和清洗后，移入斑馬魚胚胎培養用水中，并向所述培養水中加入0.化pm 亞甲基藍，28°C下控光培養。從斑馬魚胚胎出生后12小時加入0. 2mM的苯硫脈，中間每24h 換約1/2水，并及時吸出死亡胚胎。將出生后3天的斑馬魚置于解剖鏡下，選取發育正常的 斑馬魚仔魚，放入24孔板中，每孔5尾，每組3個平行孔。 陽108] 2.化合物處理
[0109] 設置6個實驗組：1個空白對照組，5個硫代乙酷胺肝功能損傷誘導劑處理組。移 除微孔板中的培養水，空白對照組中加入2ml培養水，肝功能損傷誘導劑處理組2ml分別加 入濃度為lmM，5mM，IOmM, 15mM，20mM的硫代乙酷胺溶液，由培養水與相應濃度的硫代乙酷 胺儲液配制獲得。然后，放入28°C恒溫培養箱中培養72小時。每24h換液一半。
[0110] 3.定性分析
[0111] 于施藥后72小時，將斑馬魚用質量濃度為0.3%。的S卡因麻醉，然后用3%甲基纖 維素固定于載玻片上，體式顯微鏡下觀察肝臟形態。
[0112] 空白對照組