.8-2,感官調節劑0.3-2,酵素粉3-10,植物乳桿菌粉1-3.
[0056] 藜麥粉制備方法如下:藜麥采用烘焙技術,對藜麥原料進行熟化,熟化條件為烘焙 溫度150°C,9min。然后用小型粉碎機將熟化的藜麥粉碎,過80目篩,得到藜麥粉。
[0057] 基礎配料包的重量份數組成如下
[0058] 燕麥20-25、黑豆13-16、紅豆8-13、黑芝麻5-8、蘋果0.5-1、酪蛋白鈣3-5、紅棗2-5、 菊粉3-6、核桃1 -4、膠原蛋白3-5、枸杞0.2-1、花生1 -2、酵母提取物0.1-0.3;
[0059] 基礎配料包制備方法如下
[0060] 其中燕麥、黑豆、紅豆、黑芝麻、紅棗、枸杞、核桃和花生首先進行熱風干燥,然后粉 碎、過80目篩,得到相應的熟粉。蘋果采用真空冷凍干燥后粉碎,過80目篩。將基礎配料包 的原料按照添加量由少到多進行混合。
[0061 ]營養強化包重量份數組成如下:包括L-乳酸鈣20-25、維生素 A 1-3、鹽酸硫胺1-2、 核黃素 1、維生素 B61,維生素 B120.5-1。
[0062]營養強化包制備方法如下:將上述營養強化劑混合均勻。
[0063]感官調節劑重量份數組成如下:紅糖5-8、銀耳多糖0.2-1,三氯蔗糖0.1-0.4;
[0064] 感官調節劑的制備方法如下:將這些成分混合均勻。
[0065] 將感官調節劑與營養強化包混勻,再與基礎配料包混勻,最后加入藜麥粉混勻。
[0066] 酵素粉制備方法如下:采用泡菜發酵生產末期排放的發酵液為原料,過濾除去發 酵液中的菜葉等大粒物質得到發酵液體,發酵液體采用冷凍干燥等干燥方法制備獲得酵素 粉。冷凍干燥的條件是:-30-40度預凍6小時;然后凍干直到含水量小于5%。
[0067] 泡菜生產方法參照中國專利201110421967.3或201210310308.7制備。
[0068] 植物乳桿菌菌粉的制備方法如下:
[0069] 植物乳桿菌粉狀菌粉,生產步驟如下:將斜面菌種轉接到液體培養基并逐級擴培 到要求的體積;將擴培得到的菌液進行離心分離,收集沉淀菌體;向沉淀菌體中加入保護劑 并進行稀釋;利用干燥設備制備粉狀菌劑,上述方法制得植物乳桿菌菌粉中活細胞數為 (0.1~9.0)*(10 1())個/克,菌粉混合時可以加入淀粉和糊精實現各菌活菌數的合適比例。所 述植物乳桿菌為CGMCC 11763。
[0070] 藜麥營養配方粉制備方法如下:將本產品配方按照比例混合均勻,包裝即可。
[0071] 酵素粉中含有乳酸,蔬菜水溶性營養成分維生素、乳酸菌。上述酵素粉和植物乳桿 菌添加到產品中,具有明顯保護腸胃效果。 具體實施例
[0072] 所述植物乳桿菌為CGMCC 11763。
[0073] 植物乳桿菌益生特性如下:
[0074]本發明所提供的植物乳桿菌CGMCC NO. 11763經實驗發現能夠在pH為1.50的條件 下存活,在1%膽鹽培養4小時后仍處于存活狀態;植物乳桿菌CGMCC NO. 11763降解亞硝酸 鹽速度快,分解能力達到10.9mg/h/kg,該菌種在生產泡菜時,整個發酵過程中亞硝酸鹽濃 度在4.8mg/kg以下;CGMCC NO. 11763在發酵60h小時后,對膽固醇降解率可達到64.76%。 CGMCC NO · 11763黏附能力測定的自凝集率為95 · 71 %。
[0075] CGMCC NO. 11763菌株對膽固醇降解能力研究和測定:
[0076] 取Iml CGMCC NO. 11763母液接種于IOmL的MRS膽固醇液體培養基(膽固醇含量 0.1mg/ml,pH 6.2)中,37°C的恒溫靜置分別培養20h、40h、60h備用,以接入ImL無菌水的MRS 膽固醇培養基為對照,取以上培養不同時間的菌液樣品及對照液各lml,9000r/min,4°C下 離心10min,得到發酵上清液,鄰苯二甲醛法測定上清液中膽固醇含量(具體為:取各上清液 0 . Iml于相應的試管中,加冰醋酸0.3ml,lmg/ml的鄰苯二甲醛0.15ml,緩緩加入濃硫酸 I.Oml,混合均勻。室溫靜置IOmin,于550nm下測吸光值)。每一處理3個重復,以同樣方法制 作膽固醇標準曲線,計算上清液中膽固醇含量及降解率,結果見表1。可知,CGMCC NO. 11763 對膽固醇有很好的降解作用,在發酵60h小時后,降解率可達到64.76%。
[0077]表1對膽固醇的降解情況。
[0079] CGMCC NO .11763菌株的耐膽鹽試驗:
[0080] 取CGMCC NO.11763菌液ImL接種菌種于含有不同膽鹽(含量梯度為0·0%、0.2%、 0.4%、0.6%、0.8%、1%)的1011^]\?5液體培養基(?!1=6.4),置于37°(:下分別培養0、2、411, 每個處理3個重復。各取Iml樣品菌液于9ml生理鹽水中混勻,制備稀釋度溶液,取0.1ml稀釋 液于MRS中涂布,于37°C生化培養箱中倒置培養48小時(每個稀釋度做3個平行)記錄計算平 板上的菌數個數。結果見表2。可知該菌在膽鹽濃度為1 %處理4h后菌的生長量依然達到 O· 59±0·92 X IO7(Cfu/ml),有很好的耐膽鹽能力。
[0081 ] 表2耐膽鹽能力檢測「(土s) X 107cfu/mll
[0083] CGMCC NO.11763菌株的耐酸試驗
[0084] 取CGMCC腸.11763母液按11111接種菌種于不同?!1值(?!1梯度為1.5、2.0、2.5、3.0、 3.5、4.0)的1〇11^11?液體培養基,置于37°(:下分別培養0、2、411,每一處理3個重復。各取 Iml樣品菌液于9ml生理鹽水中混勻,制備稀釋溶液,取0.1 ml稀釋液于MRS中涂布,于37°C生 化培養箱中倒置培養48小時(每個稀釋度做3個平行)記錄平板上的菌落個數。結果見表3。 說明該菌具有很強的耐酸能力。
[0085]表3耐酸能力檢測[(土s) X 107cfu/ml]
[0087] CGMCC NO.11763菌株的黏附能力測定
[0088] 培養CGMCC N0.11763(MRS液體培養基)、大腸桿菌DH 5a(LB液體培養基)24h得發 酵液,分別置于3000r/min、4°C下離心10min,收集菌泥,分別用pH= 7.0的無菌磷酸鹽緩沖 液(PBS)洗滌菌泥2次(即在菌落中加入I3BS,震蕩混合均勻后,置于3000r/min、4°C下離心 IOmin,收集菌體)。自凝集率(% :用無菌的I3BS將菌泥CGMCC NO. 11763制成在波長600nm處 的吸光值為0.4 ±0.1 (A 0)的懸浮菌液及菌懸液,靜置24h后測定吸光值A 24,自凝集率 (%)公式為(A 0-A 24)/A 0。;他凝集率(%):將CGMCC如.11763和大腸桿菌0耶€[的懸菌 液調節成在波長600nm處的吸光值為0.6±0.1(A 0)的混合懸浮菌液。靜置24H后測定吸光 值A 24,他凝集率(% )公式為(A 0 -A 24)/A 0。測定結果見表4,可知CGMCC NO. 11763的自 凝集率為95.71 %,有很強的黏附能力。
[0089]表4黏附能力表
菌株生理特性 所述植物乳桿菌(LactobaciIlus plantarum)XH于2015年11月30日保藏于中國微生物 菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC),保藏號為CGMCC NO. 11763,保藏地址 為:中國北京市朝陽區北辰西路1號院3號,中國科學院微生物研究所,郵編:100101。
[0091] 該菌株特點如下:在顯微鏡下觀察,該菌株為短桿狀,革蘭氏染色呈陽性,無鞭毛, 不產芽孢;在固體培養基上,該菌菌落為白色,表面光滑,致密,形態為圓形,邊緣較整齊。
[0092] 理化特征為:過氧化氫酶(-),明膠液化(-),吲哚實驗( + ),運動性(-),發酵產氣 (-),亞硝酸鹽還原(-),發酵產氣(-),產硫化氫氣體(_),pH4.0MRS培養基中生長(+ )。經過 生理生化鑒定為為植物乳桿菌(Lactobaci llusp Iantarum),命名為植物乳桿菌 (Lactobacillus plantarum)XH〇
[0093] 該菌株能夠在57°C下生長良好,葡萄糖耐受能力為275g/L。
[0094] 本發明植物乳桿菌由采集人李建樹,從新疆維吾爾族老鄉家中酸奶中分離得到, 采集時間2015年6月2日。
[0095] 5L發酵罐試驗
[0096] (1)取斜面上的植物乳桿菌CGMCC NO. 11763-環,接入裝有50mL培養基MRS(無瓊 脂)(葡萄糖濃度為150g/L)培養基的250mL三角瓶中,200rpm,37°C培養12h左右,使菌體處 于對數生長中期。
[0097] (2)將對數期的菌種接入裝有3L MRS液體培養基(初始葡萄糖為150g/L)的5L發酵