br>【附圖說明】
[003引圖1為BTW和BTM各密碼子的使用頻率。
[0034] 圖2為重組植物表達載體pCAMBIABTW、pCAMBIABTM和pCAMBIAmGFPS的圖譜。其 中 A 為 pCAMBIABTW 圖譜；B 為 pCAMBIABTM 的圖譜；C 為 pCAMBIAmGFPS 的圖譜。
[0035] 圖3為紫外光下檢測轉BTW基因煙草和轉BTM基因煙草中mGFP5基因的表達。其 中，a為陽性對照煙草；b為轉BTW基因煙草；C為轉BTM基因煙草；d為本氏煙16c ;e為本 氏煙。
[0036] 圖4為轉BTW基因煙草和轉BTM基因煙草中mGFP5基因系統沉默速率。其中， mGFP5表示陽性對照煙草，BTW表示轉BTW基因煙草，BTM表示轉BTM基因煙草，16c表示本 氏煙16c。
[0037] 圖5為半定量RT-PCR檢測轉BTW基因煙草和轉BTM基因煙草中mGFP5基因的表達 量。其中，1為陽性對照煙草；2為轉BTW基因煙草；3為轉BTM基因煙草；4為本氏煙16c ; 5為本氏煙；ACTIN為內參基因。
[0038] 圖6為實時定量RT-PCR檢測轉BTW基因煙草和轉BTM基因煙草中mGFP5基因的 相對表達量。
[0039] 圖7為Western blot檢測轉BTW基因煙草和轉BTM基因煙草中mGFP5的蛋白量。 其中，1為陽性對照煙草；2為轉BTW基因煙草；3為轉BTM基因煙草；4為本氏煙16c ;5為 本氏煙。
【具體實施方式】
[0040] 下面結合【具體實施方式】對本發明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡 明本發明，而不是為了限制本發明的范圍。
[0041] 下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。
[0042] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0043] 下述實施例中的pSPROK載體（馮德江等，2003)公眾可從中國科學院遺傳與發育 生物學研究所（即申請人）獲得，該生物材料只為重復本發明的相關實驗所用，不可作為其 它用途使用。
[0044] 下述實施例中的pCNPTII2300(宋貴生等，2007)公眾可從中國科學院遺傳與發育 生物學研究所（即申請人）獲得，該生物材料只為重復本發明的相關實驗所用，不可作為其 它用途使用。
[004引下述實施例中的EHA105 (易自力等，2004)公眾可從中國科學院遺傳與發育生物 學研究所（即申請人）獲得，該生物材料只為重復本發明的相關實驗所用，不可作為其它用 途使用。
[0046] 下述實施例中的轉mGFP5基因的本氏煙（Nicotiana benthamiana)株系16c (M. Teresa Ruizet al. ， Initiation and Maintenance of Virus-Induced Gene Silencing, The Plant Cell, Vol. 10, 937 - 946,化ne 1998)公眾可從中國科學院遺傳與發育生物學研 究所（即申請人）獲得，該生物材料只為重復本發明的相關實驗所用，不可作為其它用途使 用。該轉mGFP5基因的本氏煙（Nicotiana benthamiana)株系16c在該文獻中的名稱為 GFP16C，該株系含有報告基因 mGFP5基因，mGFP5基因的序列是SEQ ID No. 5,編碼SEQ ID No. 1 的 mGFP5。
[0047] 下述實施例中的本氏煙（N. benthamiana)(關翠萍、周雪平，2005)公眾可從中國 科學院遺傳與發育生物學研究所獲得，該生物材料只為重復本發明的相關實驗所用，不可 作為其它用途使用。
[0048] 本發明的鑒別或輔助鑒別外源蛋白基因是否為受體生物材料密碼子優化基因的 方法，包括如下S1)-S3)的步驟：
[0049] S1)將沒有進行受體生物材料密碼子優化的目的外源蛋白基因作為對照外源基因 轉入所述受體生物材料中得到對照轉基因生物材料；所述受體生物材料表達報告基因，所 述報告基因相對于所述受體生物材料是外源基因；
[0050] S2)將編碼所述目的外源蛋白的待測外源基因轉入所述受體生物材料得到待測外 源基因轉基因生物材料；
[0051] S3)比較所述對照轉基因生物材料和所述待測外源基因轉基因生物材料中所述報 告基因的表達量，確定所述待測外源基因是否為所述受體生物材料密碼子優化基因；如果 所述待測外源基因轉基因生物材料中所述報告基因的表達量高于所述對照轉基因生物材 料中所述報告基因的表達量，所述待測外源基因為所述受體生物材料密碼子優化基因或候 選為所述受體生物材料密碼子優化基因；如果所述待測外源基因轉基因生物材料中所述報 告基因的表達量等于或低于所述對照轉基因生物材料中所述報告基因的表達量，所述待測 外源基因不為所述受體生物材料密碼子優化基因或候選為非所述受體生物材料密碼子優 化基因。
[0052] 下面，將核巧酸序列為序列表中SEQ ID No. 4的來源于蘇云金芽抱桿菌度acillus thuringiensis)的δ-內毒素基因度TW)作為對照外源基因，將該基因進行煙草密 碼子優化后得到核巧酸序列如序列表中SEQ ID No. 3所示的煙草優化δ-內毒素化ylAc 基因度TM)作為待測外源基因，將轉mGFP5基因的本氏煙（Nicotiana benthamiana)株系 16c作為受體生物材料來闡明本發明。
[0053] 實施例1、BTM基因密碼子優化的鑒別
[0054] 1、BTW和BTM基因的制備
[00巧]將來源于蘇云金芽抱桿菌度acillus thuringiensis)的δ -內毒素基 因度TW)進行煙草密碼子優化，得到煙草優化δ -內毒素化ylAc基因度TM)，δ -內毒素 化ylAc基因度TW)的核巧酸序列如序列表中SEQ ID No. 4所示，
[0056] 煙草優化δ-內毒素化ylAc基因度TM)的核巧酸序列如序列表中SEQ ID No. 3 所示。BTW和BTM各密碼子的使用頻率見圖1。BTW和BTM均編碼SEQ ID No. 2所示的蛋白 質。
[0057] 2、重組菌的制備
[0058] 將pSPROK載體的BamHI和Smal識別位點間的序列替換為BTW的核巧酸序列（序 列表中SEQ ID No. 4)，其他序列均不變，得到重組載體地TW ;用BamH I和化nd III酶切 地TW得到含有CaMV35S啟動子、BTW的核巧酸序列和化OS的DNA片段，將該DNA片段命 名為P35S-BTW-Tnos，將PCNPTII2300載體BamH I和Hind III識別位點間的序列替換為 P35S-BTW-Tnos，其他序列均不變，得到重組植物表達載體pCAMBIABTW (圖2)。
[0059] 按照上述方法，將"BTW的核巧酸序列（序列表中SEQ ID No. 4)"替換為"BTM 的核巧酸序列（序列表中SEQ ID No. 3)"，其他步驟均不變，得到重組植物表達載體 pCAMBIABTM (圖 2)。
[0060] 按照上述方法，將"BTW的核巧酸序列（序列表中SEQ ID No. 4)"替換為"mGFP5 的核巧酸序列（序列表中SEQ ID No.5)"，其他步驟均不變，得到重組植物表達載體 pCAMBIAmGFP5(圖 2)。
[0061] 分別將 pCAMBIABTW、pCAMBIABTM 和 pCAMBIAmGFPS 導入根癌農桿菌 EHA105 中，分別得到重組菌EHA105-PCAMBIABTW、重組菌EHA105-PCAMBIABTM和重組菌 EHA105-pCAMBIAmGFP5〇
[0062