W是-0-，且Y是-(C此)3-。在合成式VI的加利車霉素衍生物的方法的另一個實施方案 中，RW各自是氨。在合成式VI的加利車霉素衍生物的方法的另一個實施方案中，rw各自是 氨，且護是甲基。
[0167] 在本發明用于合成式VI的加利車霉素衍生物的另一個實施方案中，式I的化合物 上的R8和R9均為甲基。
[0168] 在本發明用于合成式VI的加利車霉素衍生物的另一個實施方案中，式I的化合物 中的r是0。在本發明用于合成式VI的加利車霉素衍生物的另一個實施方案中，式I的化合物 中的r是0,且G是氧。在本發明用于合成式VI的加利車霉素衍生物的另一個實施方案中，式I 的化合物中的r是0,且G是硫。
[0169] 在合成式VI的加利車霉素衍生物的方法的另一個實施方案中，式I的化合物是通 過使式II的化合物
[0170]
[0171] 與式ΙΠ 的化合物反應得到的，
[0172]
[0173] 在合成式VI的加利車霉素衍生物的方法的另一個實施方案中，R6和R7之一是氨，而 R6和化的另一個是
[0174]
[0175] 在本發明式I的中間體和合成方法的一個實施方案中，Zi是甲基。在本發明的中間 體和合成方法的另一個實施方案中，r是0,且G是氧。在本發明中間體和合成方法的另一個 實施方案中，Zi是甲基，1·是0,且G是氧。
[0176] 在本發明合成方法的另一個實施方案中，J是奧佐米星部分。
[0177] 在本發明合成方法的另一個實施方案中，式VI的加利車霉素衍生物具有如下結 構：
[017 引
[0179]由本發明方法合成的式VI的加利車霉素衍生物可W與生物大分子例如單克隆抗 體綴合。例如，由本發明方法合成的式VI的加利車霉素衍生物可W與單克隆抗-CD22抗體伊 珠單抗(與某些癌細胞表面上表達的CD22抗原特異性結合的抗體)或抗-CD33抗體吉妥珠單 抗(特異性地祀向某些癌細胞表面上表達的抗-CD33抗原的抗體)綴合。在一個實施方案中， 由本發明方法合成的式VI的加利車霉素衍生物，在與單克隆抗體綴合時，具有如下結構：
[0180]
[0181] 其中Ab是單克隆抗體。單克隆抗體Ab的實例包括，但不限于吉妥珠單抗和伊珠單 抗。
[0182] 本說明書中使用的術語一般具有其在本領域中、本發明上下文中和使用各術語的 專有環境中通常的含義。
[0183] 除非另有說明，否則本申請中所使用的術語"加利車霉素衍生物"是指式C曲-S-S- S-J的化合物的衍生物，其中J如本申請中所定義，該衍生物包含鍵合至連接體中間體基團 的加利車霉素部分-S-S-J:
[0184]
[01化]其中護、護^、6、21、4'、胖、￥和2如本申請中所定義。加利車霉素衍生物還可^在包 含-C(=0)Z部分的末端上與生物大分子，例如單克隆抗體綴合（即共價鍵合）。式CH3-S-S- S-J的化合物的實例描述在例如美國專利齡.4,970，198和美國專利齡.5,053,394中，通過 引用將運兩篇專利的全部內容并入本申請。化合物C曲-S-S-S-J的實例是加利車霉素奧佐 米星。
[0186] 除非另有說明，否則本申請中所使用的術語"連接體中間體"是指本申請中所述的 那些分離的式V的分子，其能夠在其一個末端上共價鍵合至式C曲-S-S-S-J的分子，并且在 另一端（-c(=o)z端)上具有可W共價鍵合至生物大分子例如單克隆抗體的官能團。分離的 連接體中間體可用作用于制備連接至生物大分子例如單克隆抗體的加利車霉素衍生物和 加利車霉素的成分。
[0187] 除非另有說明，否則術語"控基"自身或作為另一個術語的一部分是指具有所示碳 原子數的直鏈或支鏈、飽和或不飽和的控(例如乂 1-C8"控基是指具有1~8個碳原子的控基 基團）。當未顯示碳原子數時，控基基團具有1~8個碳原子（除非它是不飽和的，在此情況 下，控基基團具有2~8個碳原子）。有代表性的直鏈Ci-Cs控基包括，但不限于甲基、乙基、正 丙基、正下基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基;而支鏈Ci-C婚基包括，但不限于-異丙基、- 仲下基、-異下基、-叔下基、-異戊基和-2-甲基下基；不飽和C2-C8控基包括，但不限于乙締 基、締丙基、1-下締基、2-下締基、異下締基、1-戊締基、2-戊締基、3-甲基-1-下締基、2-甲 基-2-下締基、2,3-二甲基-2-下締基、1-己基、2-己基、3-己基、乙烘基、丙烘基、1-下烘基、 2-下烘基、1-戊烘基、2-戊烘基和3-甲基-1-下烘基。
[0188] 除非另有說明，否則"亞烷基"自身或作為另一個術語的一部分是指具有所示碳原 子數的飽和支鏈或直鏈或環狀控基，其具有兩個通過從母體燒控的相同或兩個不同碳原子 上除去兩個氨原子衍生的兩個一價基團中屯、。在一個實施方案中，"亞烷基"是指具有兩個 一價基團中屯、的所示碳原子數的飽和支鏈或直鏈亞烷基基團。典型的亞烷基基團包括，但 不限于：亞甲基（-C此-)、1，2-亞乙基-C此C此-)、1，3-亞丙基（-C出C此C此-)、1，4-亞下基（- C此C此C此CH2-)等。術語"亞締基"是指具有所示碳原子數，但具有至少兩個通過雙鍵連接的 碳原子的支鏈或直鏈或環狀控基團，其中該基團具有兩個通過從母體燒的兩個不同碳原子 上除去兩個氨原子衍生的兩個一價基團中屯、。在一個實施方案中，"亞烷基"是指具有所示 碳原子數，但具有至少兩個通過雙鍵連接的碳原子的支鏈或直鏈基團，其中該基團具有兩 個一價基團中屯、。亞締基的實例包括，但不限于-CH=CH-、-C出CH=CH-和-CH(C出)CH=CH。
[0189] 除非另有說明，否則"芳基"自身或作為另一個術語的一部分意指6~20、優選6~ 14個碳原子的通過從母體芳香環系的一個或多個碳原子上各自除去一個氨原子衍生的碳 環芳香控基團。典型的芳基基團包括，但不限于衍生自苯、糞、蔥、聯苯等的基團。如果有說 明，則本申請中的芳基基團可W任選地被取代。術語"亞芳基"是指衍生自如本申請中所定 義的芳基基團的二價基團。
[0190] "面素"是指氣、氯、漠或艦原子。
[0191] 本發明還提供合成式VI的加利車霉素衍生物的方法，
[0196] R3是
[0197] r5 是-C出、-C2 也或-CH(C出）2;
[0198] X是艦或漠原子；
[0199] R5'是氨或基團RC0,其中R是氨、1~10個碳原子的有支鏈或無支鏈的烷基、2~10個 碳原子的亞烷基、6~11個碳原子的芳基、（C6-C11)芳基-烷基(Ci-Cs)基團或者雜芳基或雜芳 基-烷基(Ci-Cs)基團，其中雜芳基定義為2-或3-巧喃基、2-或3-嚷吩基、2-或3-(N-甲基化咯 基）、2-、3-或4-化晚基、2-、4-或5-(N-甲基咪挫基）、2-、4-或5-P惡挫基、2-、3-、5-或6-喀晚 基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-哇嘟基或1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-異哇嘟基，所有的芳基和雜 芳基任選地被一個或多個徑基、氨基、簇基、面素、硝基、（C1-C3)烷氧基或1~5個碳原子的硫 代烷氧基取代；
[0200] R6和R?各自獨立地選自Η和 、
[0201 ] r8和r9各自獨立地選自氨W及直鏈和支鏈打-C8烷基，其中各自所述R8和r9的烷基 獨立地任選地被-N出、-NHRii、-NRIIrU、-ORii、-OH或-SRii取代，其中各Rii和各rU獨立地選自 直鏈和支鏈C廣C5烷基；
[0202] r是整數0或1;
[0203] G是氧或硫；
[0204] Z堪Η或者直鏈或支鏈Ci-C日烷基；
[0205] Ar是任選地被1、2或3個基團取代的1，2-、1，3-或1，4-亞苯基，所述基團獨立地選 自直鏈或支鏈 C 廣 C6 烷基、-0R14、-SR14、面素、硝基、-C00R14、-C (= 0) NHR14、-0 (C此)nC00Ri4、-S (C出)nC00Ri4、-0 (C出)nC ( = 0) NHR14和-S (C此)nC ( = 0) NHR14，或Ar 是任選地被 1、2、3或4個基 團取代的 1，2-、1，3-、1，4-、1，5-、1，6-、1，7-、1，8-、2,3-、2,6-或2,7-亞糞基，所述基團獨立 地選自直鏈或支鏈Ci-Cs烷基、-or14、-sr14、面素、硝基、-coor14、-c(=o)nhr14、-o(c出） nC00Ri4、-S (C出)nC00Ri4、-0 (C出）nC ( = 0)饑瓜14和-S (C出）nC (= 0) NHR14;
[0206] 其中RM各自獨立地選自（&-C5)烷基，且RM各自獨立地任選地被1或2個選自-OH、- (C廣C4)烷基和-S(Ci-C4)烷基的基團取代；
[0207] η各自是獨立地選自0、1、2、3、4和5的整數；
[020引 W選自-o-、-s-、-C(=0)NH-、-NHC(=0)-和-NRl5-，其中Rl5是（C廣C5)烷基，且Rl5任 選地被1或2個選自-0H、-(C廣C4)烷基和-S(Ci-C4)烷基的基團取代；
[0209] Y是直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基基團或者直鏈或支鏈(C2-C6)亞締基基團；且
[0210] Z選自由如下基團組成的組
[0211]
[0212] 該方法包括使式V的連接體中間體
[0213]
[0214] 與甲基Ξ硫化物化合物C曲-S-S-S-J在碳二亞胺的存在下反應；由此合成式VI的 加利車霉素衍生物。
[0215] 本發明還提供合成式X的加利車霉素衍生物的方法，
[0220]
[0扣。r5 是-c出、-C2 也或-CH(C出）2;
[0222] X是艦或漠原子；
[0223] R5'是氨或基團RC0,其中R是氨、1~10個碳原子的有支鏈或無支鏈的烷基、2~10個 碳原子的亞烷基、6~11個碳原子的芳基、（C6-C11)芳基-烷基(Ci-Cs)基團或者雜芳基或雜芳 基-烷基(Ci-Cs)基團，其中雜芳基定義為2-或3-巧喃基、2-或3-嚷吩基、2-或3-(N-甲基化咯 基）、2-、3-或4-化晚基、2-、4-或5-(N-甲基咪挫基）、2-、4-或5-0惡挫基、2-、3-、5-或6-喀晚 基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-哇嘟基或1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-異哇嘟基，所有的芳基和雜 芳基任選地被一個或多個徑基、氨基、簇基、面素、硝基、（C1-C3)烷氧基或1~5個碳原子的硫 代烷氧基取代；
[0224] R6和R?各自獨立地選自Η巧
[0225] Υ'是直鏈和支鏈(Ci-Ci8)亞烷基基團、直鏈和支鏈(C2-C18)亞締基基團、亞芳基基 團或亞雜芳基基團、亞芳基（Cl-Cl8)亞烷基基團、亞芳基（C2-C18)亞締基基團、亞雜芳基（Cl- Cl8)亞烷基基團或亞雜芳基(C1-C18)亞締基基團，其中所述亞雜芳基基團是衍生自巧喃基、 嚷吩基、N-甲基化咯基、化晚基、N-甲基咪挫基、P楚挫基、喀晚基、哇嘟基、異哇嘟基、N-甲基 巧挫基、氨基香豆素基或吩嗦基的二價基團，且其中所述Y'可W任選地被1~5個碳原子的 二烷基氨基、1~5個碳原子的烷氧基、徑基、-SH或1~5個碳原子的燒硫基取代；
[0226] Q選自-c( =〇)NHN=、-C( =S)NHN=、-NHC( =0)NHN=、-NHC( =S)NHN=和-0-N=;
[0227] Z堪H或者直鏈或支鏈C1-C5烷基；
[0228] Ar是任選地被1、2或3個基團取代的1，2-、1，3-或1，4-亞苯基，所述基團獨立地選 自直鏈或支鏈 C 廣 C6 烷基、-0R14、-SR14、面素、硝基、-C00R14、-C (= 0) NHR14、-0 (CH2) nC00Ri4、-S (C出)nC00Ri4、-0 (C出)nC ( = 0) NHR14和-S (C此)nC ( = 0) NHR14，或Ar 是任選地被 1、2、3或4個基 團取代的 1，2-、1，3-、1，4-、1，5-、1，6-、1，7-、1，8-、2,3-、2,6-或2,7-亞糞基，所述基團獨立 地選自直鏈或支鏈Ci-Cs烷基、-or14、-sr14、面素、硝基、-coor14、-c(=o)nhr14、-o(c出） nC00Ri4、-S (C出)nC00Ri4、-0 (C出）nC ( = 0)饑瓜14和-S (C出）nC (= 0) NHR14;
[0229] 其中RI4各自獨立地選自（C1-C5)烷基，且自RI4各獨立地任選地被1或2個選自-OH、- (C1-C4)烷基和-S(Ci-C4)烷基的基團取代；
[0230] η各自是獨立地選自0、1、2、3、4和5的整數；
[023U W選自-0-、-S-、-C(=0)NH-、-NHC(=0)-和-NRl5-，其中Rl5是(C廣C5)烷基，且Rl5任 選地被1或2個選自-OH、-(Ci-C4)烷基和-S(Ci-C4)烷基的基團取代；
[0232] Υ是直鏈或支鏈(Ci-C6)亞烷基基團或者直鏈或支鏈(C2-C6)亞締基基團；且
[0233] Z選自由如下基團組成的組
[0234]
[0235] 該方法包括使式XI的連接體中間體
[0236]
[0237] 與甲基Ξ硫化物化合物C曲-S-S-S-J在碳二亞胺的存在下反應；由此合成式X的加 利車霉素衍生物。
[0238] 在運種在碳二亞胺的存在下合成式VI或式X的加利車霉素衍生物的方法的一個實 施方案中，1?和化之一是氨，且Rs和R?的另一個是
[0239]
[0240] 在本發明合成式VI或式X的加利車霉素衍生物的方法的另一個實施方案中，所述 甲基Ξ硫化物在所述與式V的連接體中間體(或其可W是式XI的連接體中間體)的反應中具 有大于約3g/L反應混合物的起始濃度。在另一個實施方案中，所述甲基Ξ硫化物在所述與 式V的連接體中間體(或其可W是式XI的連接體中間體)的反應中具有約1 Og/L至110 g/L反 應混合物之間的起始濃度。
[0241] 在運種合成式VI或式X的加利車霉素衍生物的方法的另一個實施方案中，所述碳 二亞胺是1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺。本發明合成式VI或式X的加利車霉素衍生 物的該方法中的碳二亞胺可W是包含碳二亞胺部分的任意分子，且運類分子是本領域中已 知的。可W用于本發明中的碳二亞胺類的實例包括，但不限于1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基） 碳二亞胺化DC);N，N'-二環己基碳二亞胺化CC);N，N'-二異丙基碳二亞胺(DIC);N-環己基- N'-(2-嗎嘟代乙基)碳二亞胺;N-環己基-N'-[2-(4-甲基嗎嘟-4-傭-4-基）乙基]碳二亞胺 甲苯橫酸鹽;N-環己基-N'-[4-(二乙基甲基錠基）環己基]碳二亞胺甲苯橫酸鹽;N，N'-雙 (2,2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-基）甲基]碳二亞胺；W及N-芐基-Ν'-異丙基碳二亞胺。適用 于本發明方法中的另外的碳二亞胺類可W由本領域普通技術人員確定。
[0242] 本發明還提供用于純化式VI的加利車霉素衍生物或式X的加利車霉素衍生物的方 法，其中式VI和式X如上文所定義，該方法包括使式VI的加利車霉素衍生物或式X的加利車 霉素衍生物經受反相高效液相色譜法(RP-冊LC)純化方案。反相純化方案可W用于純化式 VI或式X的加利車霉素衍生物分子是令人意外的，因為運些化合物具有兩個遇水不穩定的 基團，即腺基和N-徑基班巧酷亞胺(畑S)醋基，每個基團其水解具有不同的抑依賴性。另外， 使用反相純化相對于現有技術中所述的正相色譜法純化(參見，美國專利No.8,273,862)是 有利的，因為正相色譜法法使用毒性的對環境不友好的溶劑，例如二氯甲燒和甲醇。