。
[005引實施例2: 1-(6-氯-5-甲基-1-(6-(Ξ氣甲基）化晚-2-基)-lH-苯并[d]咪挫-2- 基)-N-( (3S，4R) -4-徑基四氨巧喃-3-基)贓晚-4-甲酯胺.
將1-(6-氯-5-甲基-1-(6-(二氣甲基)-R比晚-2-基)-lH-苯并[d]咪挫-2-基)-贓晚-4- 甲酸乙醋（21毫克，0.045毫摩爾）溶解在乙醇（1.0毫升）中并加入氨氧化鋼水溶液（1N， 0.225毫升）。將反應混合物在室溫下攬拌1小時，用鹽酸水溶液(2 N)中和并蒸發至干。將殘 留物與（3R，4S)-4-氨基四氨巧喃-3-醇（5.6毫克，0.054毫摩爾）、N，N-二異丙基乙胺(H? nig'S堿，DIEA，17.4毫克，0.135毫摩爾）和N，N-二甲基甲酯胺（1.0毫升）混合。加入六氣憐 酸2-(7-氮雜-1H-苯并Ξ挫-1-基)-1，1，3，3-四甲基脈鐵化ATU，18.76毫克，0.049毫摩爾）， 將反應混合物攬拌1小時并在真空中濃縮。殘留物在柱上提純(硅膠，使用自動化快速色譜 Biotage SP1，乙酸乙醋/甲醇，使用4至10%甲醇梯度洗脫）W產生18.8毫克(80%收率）的1- (6-氯-5-甲基-1-(6-(Ξ 氣甲基)-化晚-2-基)-lH-苯并[d]咪挫-2-基)-N-((3S，4R)-4-^ 基四氨巧喃-3-基)贓晚-4-甲酯胺。LC-MS (m/z) 524.28 (M+1)。
[0化9] 對比例3(不符合本發明）：（R)-i-(5-氯-6-甲基-1-(5-(Ξ氣甲基川比晚-2-基)- 1Η-苯并[d]咪挫-2-基)-Ν-(四氨巧喃-3-基)-贓晚-4-甲酯胺.
如NovaSAID AB的國際申請No. W02011/023812的實施例272中所述制備運種化合物。
[0060] 對比例4(不符合本發明）：（R)-1-(6-氯-5-甲基-1-(5-(Ξ氣甲基川比晚-2-基)- 1Η-苯并[d]咪挫-2-基)-Ν-(四氨巧喃-3-基)-贓晚-4-甲酯胺.
如NovaSAID AB的國際申請No. W02011/023812的實施例271中所述制備運種化合物。
[0061] 對比例5(不符合本發明）：（R)-1-(5,6-二氯-1-(6-(Ξ氣甲基）化晚-2-基)-lH- 苯并[d ]咪挫-2-基)-N-(四氨巧喃-3-基)贓晚-4-甲酯胺
如NovaSAID AB的國際申請No. W02011/023812的實施例221中所述制備運種化合物。 [006。生物試驗 硫代己比妥酸檢測(TBA-MDA檢測或丙二醒檢測） 丙二醒是脂質過氧化的產物并與硫代己比妥酸反應W形成吸收535納米的光(W.G. Niehaus, Jr和B. Samuelsson, Eur. J. Biochem 6, 126 (1968))并且也是巧光的紅色 產物。TBA-MDA綴合物的消光系數是 1.56 X 105 M-1 cnfi(E.D. Wills. Biochem. J. 113， 315 (1969))。用于檢測111?663-1的抑制的方法基于檢測剩余?6也的量。13曰36￥1油等人在20 多年前描述了運種方法(Bioorg. Khim. 1983，9(5)，658-665)。
[0063] 所用檢測是一種改良變體并使用巧樣酸代替原始檢測中描述的TCA-TBA-HCl試 劑。在運種檢測中，用PG也培養重組膜結合的人mPGEs-1。通過添加巧樣酸至最終pH 3和添 加過量氯化鐵（II)(20 mM)W將任何剩余PG也轉化成MDA和12-HHT，終止該反應。最后加入 TBA試劑(0.67%)并將樣品在80°C下加熱30分鐘。在485/545 nm測量該綴合物的巧光。
[0064] 在運種檢測中不直接測量mPGEs-1的產物(PGE2)，而是通過添加將PG也轉化成MDA 和12-皿Τ的FeCl2而間接測量剩余底物(P細2)。作為陽性對照，使用已知的mPGEs-1抑制劑 M-886并將該新型抑制劑提供的抑制與獲自M-886的抑制進行比較。
[0065] 自動化全細胞膜片錯hERG檢測 自動化全細胞膜片錯hERG檢測使用獲自American Tissue Culture Collection的 CHO-Kl細胞。將hERG cDNA(GenBank序列 NM_000238)亞克隆到pSI載體(Promega)中。用運 種構建體和pPUR(含有嚷嶺霉素選擇性標記物，BD Bioscience)共轉染CH0-K1細胞。在嚷嶺 霉素中選擇10天后，選擇單集落并用hERG鐘電流檢驗。該穩定轉染的細胞在F-12 Kai曲n's Nuhient Mixture培養基（Invit;rogen)+10% FBS中在37C下培養1-3天。隨后，通過膜蛋白 酶化(trypsination)收取細胞并在記錄前在室溫下保存在無血清培養基中。洗涂細胞并再 懸浮在胞外液中，然后施加到膜片錯位點。
[0066] 在實現全細胞模式后，將細胞保持在-80 mV。輸送50毫秒脈沖至-40 mVW測量漏 泄電流，在線從尾電流中減去該漏泄電流。然后將細胞去極化至+20 mV 2秒，接著二次脈沖 至-40 mVW掲示hERG尾電流。每5秒輸送一次該paradigmW監測電流幅值。首先施加胞外液 (對照物)并將細胞在胞外液中穩定5分鐘。然后從低濃度(0.39 μΜ)到高濃度(100 μΜ)漸增 地施加受試化合物。細胞用各受試濃度培養5分鐘。在培養過程中，使用上述電壓程序反復 刺激細胞，并連續監測尾電流幅值。
[0067] 通過如atch (Sophion Bioscience)采集數據并通過在受試化合物培養之前和之 后測量尾電流幅值來獲得抑制程度(％)(將電流差標準化至對照物并乘W100W獲得抑制百 分比）。將濃度(log)響應曲線擬合到邏輯方程中（Ξ參數，假設在極高受試化合物濃度下完 全阻斷電流）W生成50%抑制濃度的估計值（I巧0)。通過連續濃度(0.39 μΜ到100 μΜ)，由電 流幅值的百分比降低構建各化合物的濃度-響應關系。
[006引關于hERG檢測的進一步背景信息可見于E邱e;rt Opin. Ther. Targets (2006) 10(2):319-327。
[0069] 來自人mPGEs-1 TBA-MDA檢測的算術平均值（WyM計的IC50)顯示在表1中，其還顯 示分別對實施例1和2的本發明的化合物和實施例3-5的現有技術的化合物獲得的hERG檢測 IC50值(如Μ計）。
[0070] 表 1
[0071] 表1中所示的實驗結果證實，與現有技術的化合物相比，本發明的化合物能夠抑制 人mPGEs-1，同時具有有利的hERG/mPGEs-1 IC50比。
【主權項】
1. 化合物1-(5-氯-6-甲基-1-(6-(三氟甲基）吡啶-2-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基)-Να 3S ， 4R) -4-羥基四 氫呋喃-3-基) 哌啶-4-甲酰胺或其可藥用鹽。2. 化合物1-(6-氯-5-甲基-1-(6-(三氟甲基）吡啶-2-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基)-Να 3S ， 4R) -4-羥基四 氫呋喃-3-基) 哌啶-4-甲酰胺或其可藥用鹽。3. 根據權利要求1或2的化合物或其可藥用鹽，用作藥物。4. 藥物組合物，其包含與至少一種可藥用賦形劑或載體混合的治療有效量的根據權利 要求1或2的化合物或其可藥用鹽。5. 組合產品，其包含：（Α)根據權利要求1或2的化合物或其可藥用鹽;和(Β)第二治療 劑。6. 根據權利要求1或2的化合物或其可藥用鹽，其用于治療和/或預防選自以下的病癥： 炎性疾病；自身免疫病;疼痛;呼吸病癥;癌癥；心血管疾病;神經退行性疾病;骨病；歸因于 家族性腺瘤息肉病(FAP)病況的病癥;膀胱過度活動癥;發熱;和炎性相關厭食癥。7. 根據權利要求1或2的化合物或其可藥用鹽在制備用于治療和/或預防選自以下的病 癥的藥物中的用途:炎性疾病；自身免疫病;疼痛;呼吸病癥;癌癥;心血管疾病;神經退行性 疾病;骨病；歸因于家族性腺瘤息肉病(FAP)病況的病癥;膀胱過度活動癥;發熱；和炎性相 關厭食癥。8. 治療和/或預防選自炎性疾病；自身免疫病;疼痛;呼吸病癥;癌癥;心血管疾病;神經 退行性疾病;骨病；歸因于家族性腺瘤息肉病(FAP)病況的病癥;膀胱過度活動癥;發熱；和 炎性相關厭食癥的病癥的方法， 由此將根據權利要求1或權利要求2的化合物或其可藥用鹽給藥于需要這種治療的對 象。
【專利摘要】化合物1-(5-氯-6-甲基-1-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-N-((3S,4R)-4-羥基四氫呋喃-3-基)哌啶-4-甲酰胺和1-(6-氯-5-甲基-1-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-N-((3S,4R)-4-羥基四氫呋喃-3-基)哌啶-4-甲酰胺及其可藥用鹽，和包含任一這些化合物的藥物組合物。該化合物可用于治療和/或預防選自炎性疾病；自身免疫病；疼痛；呼吸病癥；癌癥；心血管疾病；神經退行性疾病；骨病；歸因于家族性腺瘤息肉病（FAP）病況的病癥；膀胱過度活動癥；發熱；和炎性相關厭食癥的病癥。
【IPC分類】A61P11/06, A61K31/454, C07D405/14, A61P29/00
【公開號】CN105683185
【申請號】
【發明人】P.斯坦伯格
【申請人】諾瓦賽德股份公司
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2013年6月20日