>[0071] 5-7周齡的雌性BALB/cAnN-nu (裸鼠）購自 Charles River實驗室(Charles River Laboratories) (Wilmington, ΜΑ)并按照香港大學(皿U)實驗室動物部口的指南養護。所 有動物實驗根據由皿U教育和研究中使用活動物委員會(Committee on the Use of Live Animals in Teaching and Research of HKU)批準的指南進行。為建立HeLa異種移植物模 型，將懸浮于100 μ1 PBS中的4 X 106個化La細胞經皮下注射接種到雌性BALB/cAnN-nu (裸)小鼠的背側面。當腫瘤體積達到約50 mm3 (在腫瘤接種后4天），將小鼠隨機分成不同 的治療組(3 mg/kg的5或溶劑對照）。絡合物5在陽T稀釋液(60%聚乙二醇400、30%乙醇、10% 吐溫80)重新構成。使絡合物5溶于PET稀釋液中，然后在PBS或補充有等量的PET的PBS中稀 釋，經腫瘤內注射每3天1次，注射到小鼠體內，直至小鼠被處死。在該模型中，注射到每只小 鼠中的PET稀釋液的體積是<6 μ1。每周3次測量腫瘤大小，腫瘤體積(V)通過式V = ab2 X 0.52計算，其中a和b是異種移植的腫瘤的最長和最短直徑。腫瘤抑制作用根據下式計算： 抑制百分比=[1 - (V - V0)/(V' - Vo'）] X 100 〇/〇 其中V和V'分別是5治療和溶劑對照的腫瘤體積。Vo和Vo '分別是5治療和溶劑對照的 初始腫瘤體積。
[0072] 結果顯示，經3 mg/kg 5治療后，在11 (P < 0.05)和14 (P < 0.01)天發現腫瘤體 積顯著減小，腫瘤抑制率分別高達60 %和76 % (圖5a、c d)。未發現小鼠死亡或小鼠體重損 失（圖5b)。溶劑對照組中的小鼠體重的稍微增加可能是由于該組裸小鼠中腫瘤的較快生 長。
[0073] 初步毒性實驗證實20 mg/kg的5對小鼠是有毒性的，而7 mg/kg引起體重的稍稍下 降，因此有效的劑量(3 mg/kg)相當低于致死劑量。
[0074] Au(III)-NHC絡合物的劑量是足W抑制腫瘤生長的量并可依賴于癌癥的類型和癌 癥的位置。該量對于小鼠和人可W是約0.1 mg/kg-約50 mg/kgDAu(III)-NHC絡合物的直接 腫瘤內注射是優選的。許多藥物劑型可用于給予Au(III)-NHC絡合物。優選地，適合于注射 或輸注的藥物劑型包括包含Au( III )-NHC絡合物的無菌水性溶液或分散液或無菌粉末，所 述絡合物適合容易地制備所用的無菌可注射或可輸注的溶液或分散液。在所有的情況下， 劑型應該是無菌的、流體的并在生產和儲存的條件下是穩定的。液體載體或媒介可W是溶 劑或液體分散介質，其包含例如水、乙醇、多元醇、植物油、無毒性甘油醋及其合適的混合 物。
[0075] 本文描述的內容僅僅舉例說明Au(III)-NHC絡合物及其活性。其它實施方案可由 本領域技術人員實施，而不背離本發明的范圍和精神。
[007引實施例6.5:作為依賴于巧光變化的硫醇探針的應用 實施例5描述9對不同分析物的巧光變化結果和用于細胞硫醇檢測和細胞成像的應用。 [0077] ESI-MS分析和1h醒R實驗顯示，Au(m)-NHC絡合物可與G細按照1:3摩爾比定量 地反應，其中rN~N配體釋出而形成GS-Au(I)-NHC化合物。由于游離rrN配體是高度發射 的，因此它們可充當用于硫醇檢測的巧光開啟探針。化合物9被用作檢測對不同分析物的巧 光變化的實例和作為細胞成像劑的應用。
[007引 9對不同分析物的巧光反應:在1XPBS:DMS0 = 9:1 (2 ml)中新鮮制備化CUKC1、 MgCl2、CaCl2、氨基酸（56'、？^、1^611、116、化3、413、切3)、0口'和65巧諸備液。于室溫下使9溶于 DMSOW提供探針儲備液（10 ml)。然后將10化9加入到5 mL不同的分析物溶液中。充分震 搖生成的溶液。2 min后，記錄發射光譜。2 h和12 h后，發射強度沒有顯著的變化。對于所有 的測量，激發波長是340 nm，激發和發射狹縫寬度為3 nm。測量并比較9與各分析物在前述 條件下反應后獲得的發射強度。
[0079] 巧光顯微術檢查9:化La細胞（IX 105個細胞)接種在一塊含有培養基(2 mL孔-1)的 室玻片(化lgene;Nunc)中并于37°C，在5% 0)2/95%空氣的潮濕氣氛中解育24 h。用9 (20 μ Μ, 1 mL)處理10 min后，使細胞直接暴露于巧光成像而不除去舊的培養基。在Axioved 200 (Carl Zeiss)和在Axio Vision Rel. 4.5成像系統（Carl Zeiss)中檢查亮視野和巧 光圖像（ex: 340 nm) 發現在用GSH或切s處理9后，出WB配體的釋放導致發射強度至少200-倍的增加（圖6)。 當用Na+、r、Ca2+、Mg2+或無硫醇的氨基酸如Ala、Ser、Pro、Leu、I le和Hi S處理9時，未發現巧 光。絡合物9對含硫醇化合物(包括GSH、切S和通常使用的二硫鍵還原劑二硫蘇糖醇(DTT)) 敏感。
[0080] 對于巧光顯微術分析，發現在僅僅10 min后，在胞漿中，而不是在核或細胞外環境 中檢測到明顯的藍色巧光（圖6 )，提示9對細胞培養基的穩定性和Au (III )-NHC絡合物在胞 漿中有效激活成Au( I )-N肥并將活性的Au( I )-N肥遞送至其分子祀化xR。
[0081] 本發明在范圍上并不限于本文描述的特定實施方案。事實上，對本領域技術人員 而言，除了描述的運些外的本發明的各種修飾將從前述的描述和附圖中而變得顯而易見。 運樣的修飾意欲落入所附權利要求書的范圍內。
[0082] 本文引用的所有參考文獻均通過引用W其整體結合到本文中用于所有的目的，其 結合程度如同將各個獨立的出版物或專利或專利申請特別地和單獨地指明通過引用W其 整體結合到本文中用于所有目的一樣。
[0083] 參考文獻；
[Berners-Price, S. J.等人.J. Am. Qiem. Soc. 2008, 130, 12570-12571.]
【主權項】
1. 用于癌癥治療或用于熒光硫醇檢測的Au( III )-NHC絡合物的組合物，其含有有效量 的具有式I的Au (III) -NHC絡合物，其中，-心、1?2、1?7、1?8各自獨立地選自基團-11，和1?3、1?4、1? 1()、1?11各自獨立地選自電子對或-11;或 Ri和R3、R2和R4、R7和Rs、Ri和Rio、R2和Rn的每一對獨立地連接在一起以形成-Rs、R6、R9各自獨立地選自-H、-CH3、-C4H9、-C 6H13、-CsHn、_C1()H21、-C16H 33、-C3H6PPh3+; -n是范圍從+1至+2的整數； -y等于n/b的絕對值;和 -X選自碳或氮原子； -Y選自碳或氮原子。2. 權利要求1的組合物，其中， _ X是氣原子； -Y是碳原子； -Riq、Rii各自是孤電子對； _ 尺1、1?2、1?3、1?4、1?7、1?8、1?9各自是_11; _ R5、R6各自是 _CH3; -η是+1，和 -7厶|3是〇卩33〇3-。3. 權利要求1的組合物，其中， _ X是氣原子； -Υ是碳原子； -Riq、Rii各自是孤電子對； _ 尺1、1?2、1?3、1?4、1?7、1?8、1?9各自是_11; _ 尺5是_013 ; _ R6 是-C4H9; -η是+1，和 -7厶|3是〇卩33〇3-。4. 權利要求1的組合物，其中， _ X是氣原子； -Υ是碳原子； -Riq、Rii各自是孤電子對； _ 1?1、1?2、1?3、1?4、1?7、1?8、1?9各自是_11; _ Rs 是-CH3; _ R6是-C8Hl7; -η是+1，和 -7八|3是〇?35〇3-。5. 權利要求1的組合物，其中， _ X是氮I原子； -Υ是碳原子； -Riq、Rii各自是孤電子對； _ 1?1、1?2、1?3、1?4、1?7、1?8、1?9各自是_11; _ Rs 是-CH3; _ R6是_Cl〇H21， -η是+1，和 -7八|3是〇?35〇3-。6. 權利要求1的組合物，其中， _ X是氮I原子； -Υ是碳原子； -Riq、Rii各自是孤電子對； _ 1?1、1?2、1?3、1?4、1?7、1?8、1?9各自是_11; _ Rs 是-CH3; _ R6是_Cl6H33 ; -η是+1，和 -7八|3是〇?35〇3-。7. 權利要求1的組合物，其中， _ X是氮I原子； -Υ是碳原子； -Riq、Rii各自是孤電子對； _ 1?1、1?2、1?3、1?4、1?7、1?8、1?9各自是_11; _ R5、R6各自是 _C4H9; -η是+1，和 -7八|3是〇?35〇3-。8. 權利要求1的組合物，其中， _ X是氮I原子； -Υ是碳原子； -Riq、Rii各自是孤電子對； _ 1?1、1?2、1?3、1?4、1?7、1?8、1?9各自是_11; _ R5、R6各自是_C6Hl3; -η是+1，和 -7八|3是〇?35〇3-。9.權利要求1的組合物，其中， _ X是氣原子； -Y是碳原子； -Riq、Rii各自是孤電子對； _ 尺1、1?2、1?3、1?4、1?7、1?8、1?9各自是_11; _ 尺5是_013 ; -R6是-C3H6PPh3+; _ η是+2,和 -7厶|3是2〇卩35〇3-。 1 〇.權利要求1的組合物，其中， _ X是氣原子； -Υ是碳原子； -辦和辦以及R2和R4的每一對連接在一起以形成-R7、R8、R9各自是 _H; -Riq、Rii各自是孤電子對； _ R5、R6各自是 _CH3; -η是+1，和 -7八|3是〇?3503-。11. 權利要求1的組合物，其中， _ X是氣原子； -Υ是碳原子； -辦和心，和R2和R4的每一對連接在一起以形成 _ R7、R8、R9各自是 _H;-Riq、Rii各自是孤電子對； _ R5、R6各自是 _C4Hg; -η是+1，和 -7厶|3是〇卩33〇3-。12. 權利要求1的組合物，其中， _ X是氣原子； -Υ是碳原子； -辦和辦以及和R2和R4的每一對連接在一起以形成 -R7、R8、R9各自是 _H;-Riq、Rii各自是孤電子對； _ R5、R6各自是_C6Hl3; -η是+1，和 -7厶|3是〇卩33〇3-。13. 權利要求1的組合物，其中， -X是碳原子； -Y是氮原子； -R3、R4各自是孤電子對； _ 尺1、1?2、1?7、1?8、1?9、1?1()、1?11各自是_11; _ R5、R6各自是 _CH3; -η是+1，和 -7厶|3是05〇2〇卩3-。14. 權利要求1的組合物，其中， -X是碳原子； -Υ是氮原子； -R3、R4各自是孤電子對； _ 尺1、1?2、1?7、1?8、1?9、1?1()、1?11各自是_11; _ 尺5是_013 ; _ R6 是-C4H9; -η是+1，和 -7厶|3是〇卩33〇3-。15. 權利要求1的組合物，其中， -X是碳原子； -Υ是氮原子； -R3、R4各自是孤電子對； _ 尺1、1?2、1?7、1?8、1?9、1?1()、1?11各自是_11; _ 尺5是_013 ; _ R6是_Cl6H33 ; -η是+1，和 -7厶|3是〇卩33〇3-。16. 權利要求1的組合物，其中， -X是碳原子； -Υ是氮原子； -R3、R4各自是孤電子對； _ 尺1、1?2、1?9、1?1()、1?11各自是_11; -R?和Rs連接在一起以形成_ R5、R6各自是 _CH3; -η是+1，和 -7八|3是〇?3503-。17. 合成權利要求1的Au(III)-NHC絡合物的方法，其包括兩個步驟:i)使H2N~N~N配體 與KAuC14反應以形成N~N~N-Au-Cl，和ii)使N~N~N-Au-Cl與三氟甲磺酸銀(AgOTf)和碳烯 銀(X-Ag-NHC，X = Cl、Br、或I)反應，形成權利要求1的Au(III)-NHC絡合物。18. 權利要求17的方法，其中H2N~N~N包括2，6-雙（1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡啶(H2BPB)、 2,6-二（1!1-咪唑-2-基）吡啶(!1 21?1)或2,6-二（1!1-吡唑-5-基）吡啶（!1:^?)中的一種或多 種。19. 權利要求17的方法，其中N~N~N包括去質子化的2,6_雙（1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡 啶（Bro)、2,6-二（1H-咪唑-2-基）吡啶（IPI)或2,6_二（1H-吡唑-5-基）吡啶）（PPP)中的一 種或多種。20. 權利要求1的方法，其中Au(III)-NHC絡合物包含配位到雙陰離子取代的2，6-雙 (1H-苯并[d]咪唑-2-基）吡啶、2,6_二（1H-咪唑-2-基）吡啶或2,6_二（1H-吡唑-5-基)吡啶 配體和N-雜環碳烯配體的金(III)原子。21. 權利要求1的"癌癥治療"的方法，其中癌癥是肝細胞癌、宮頸上皮樣癌、肺癌、乳腺 癌、黑素瘤和鼻咽癌中的一種或多種。22. 權利要求1的"癌癥治療"的方法，其中治療意指誘導細胞死亡，或抑制細胞增殖，或 抑制/毒化硫氧還蛋白還原酶，或抑制腫瘤體內生長。23. 權利要求1的"熒光硫醇檢測"的方法，其中硫醇意指含硫醇化合物，這樣的化合物 的非限制性實例包括半胱氨酸、谷胱甘肽和二硫蘇糖醇。24. 權利要求1的方法，其中給予式I的優選的量對于癌癥治療是約0.1 mg/kg-50 mg/ kg和對于硫醇檢測是1 μΜ-500 μΜ。
【專利摘要】本文提供一種合成Au(III)-NHC絡合物的方法，包含所述絡合物的藥用組合物。本文還提供通過給予Au(III)-NHC絡合物在有需要的患者中治療和預防癌癥/腫瘤的方法。本文還提供在生物系統中檢測硫醇的方法。Au(III)-NHC絡合物具有抗癌活性如誘導細胞死亡，抑制細胞增殖，抑制硫氧還蛋白還原酶活性，和抑制腫瘤體內生長。
【IPC分類】G01N31/22, C07F1/12, A61K31/28, A61P35/00, G01N21/77
【公開號】CN105683201
【申請號】
【發明人】支志明, 鄒滔滔
【申請人】香港大學
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2013年11月15日