專利名稱：桑黃袋料栽培培養基及采用該培養基栽培桑黃子實體的方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，具體的說涉及桑黃袋料培養培養基配方以及采用該培養基規模化栽培桑黃子實體的方法。
背景技術：
桑黃，擔子菌亞門，層菌綱，多孔菌目，多孔菌科，針層孔菌類真菌。學名 Phellinus Linteus，中文名裂蹄針層孔菌，俗稱桑臣、桑黃菇等；是寄生于桑樹等闊葉
樹的一種藥用真菌，素有“森林黃金”之美稱。據《藥性論》記載味甘辛，無毒。《全國中草藥匯編》則記載桑黃具有“利五臟，軟堅，排毒，止血，活血和胃止瀉”等功效，是目前國際公認的生物抗癌領域中有效率最佳的藥用真菌。·目前，由于受生理狀態的特殊性和復雜性以及外部環境的制約，桑黃在自然界中形成子實體困難，造成天然的桑黃數量非常稀少，自然界中可供藥用的資源有限，加之國內外市場對桑黃的需求量越來越大，致使國內各產地藥農掠奪性采集，子實體無法大量形成，難以成為穩定的工業產品來源，對桑黃產業的發展十分不利，因此通過人工培植來彌補野生資源的不足顯得尤為重要。但是桑黃人工栽培極其困難，存在著培養條件苛刻、生長周期長的問題。目前栽培的人工栽培主要有兩種，一種是以桑樹、楊樹、櫟樹的段木栽培為主，段木栽培需要大量的木材資源，資源浪費比較嚴重，難以規模化栽培；另一種是袋料栽培，但是存在培養基營養供給不充分，子實體發育較小、易染雜菌等問題。申請號為200410041704. X的中國專利公開了一種桑黃人工高產栽培方法及桑黃子實體的應用，該發明采用袋料栽培，為了解決培養基營養供給不充分，子實體發育較小、易染雜菌等問題。在培養基中添加了生長素，生長素的添加沒有從根本上解決培養基的問題，而且生長素的添加對桑黃的品質有影響，同時不利于桑黃的天然生長。
發明內容
為了解決目前野生桑黃資源的不足，人工栽培中袋料栽培存在培養基營養供給不充分，子實體發育較小、易染雜菌的問題，本發明提供一種桑黃袋料栽培培養基，采用桑黃袋料培養基配方，可以提供桑黃子實體生長所攝取的營養物質；
同時本發明提供一種采用該培養基規模化栽培桑黃子實體的方法，本發明培養的桑黃子實體近似野生桑黃、質量穩定，同時本發明的培養方式簡單，可用于具有藥用價值的桑黃子實體規模化栽培。為了解決上述技術問題，本發明是通過以下技術方案實現的一種桑黃袋料栽培培養基，所述的桑黃袋料栽培培養基由營養料與水混合后裝袋制成，然后在溫度110 135°C，壓力0. 05 0. 25MPa，滅菌30_180min，其中營養料與水的質量比為I :1. 8 2. 5。如果高溫滅菌不徹底，當采用桑黃袋料栽培培養基栽培桑黃子實體時，雜菌會從袋裝培養基的中部或底部發生。所述的桑黃袋料栽培培養基的營養料由以下組份混合制成，各組分的質量百分比為桑枝木屑40 80%，桑葉粉5 20%，谷粒10 30%，糖0. 5 2%，生石灰1% 5%，KH2PO4O. 1% 2%，MgSO4O. I 2%。選用生石灰不僅可以滅菌，給桑黃菌提供一個良好的生長環境，還可以為培養基提供Ca2+元素，而且成本比石膏粉低。谷粒選自玉米粒、麥粒、稻谷中一種。相對于目 前常用的米糠或麥麩，可以提供更加充足的營養，使桑黃菌生長狀況更好；桑黃菌的母種目前大都采用谷粒培養的，轉接后對菌種來說更容易適應環境；選用谷粒取代了目前常用的另一種基材-棉籽殼，可以避免棉籽殼中的有害成分棉酚進入桑黃子實體中，從而提高桑黃的品質。作為優選，糖選為蔗糖或者葡萄糖。由于桑黃以桑樹長出來的子實體為佳，因此利用桑枝木屑、桑葉粉為基材進行培養，能夠提供最佳生長營養條件，提高其品質；同時充分利用蠶桑廢棄資源，有利于環保和可持續開發利用。雖然桑樹枝木段培養基上桑黃菌絲生長良好，菌蕾出現時間早，但是桑樹長得慢，資源有限，如果都用桑樹段木的話，不僅無法形成規模化培養，而且不環保，因此菌袋是發展趨勢。本發明的桑黃袋料栽培培養基的組成成分解決了袋裝培養基營養供給不充分，子實體發育較小、易染雜菌等問題。一種采用桑黃袋料栽培培養基栽培桑黃子實體的方法為以下步驟
a)桑黃菌袋培養基的菌絲體培養方法在無菌環境中往桑黃菌袋培養基中接入桑黃母種，接種量為桑黃菌袋培養基質量的5 20%，將接種后的桑黃菌袋培養基置于25 30°C恒溫中培養，空氣濕度50 80%，桑黃菌袋培養基濕度50 60%，光照強度10-301uX，通風換氣次數I 5次/天，每次的時間5 30min，培養時間60-90天；
b)采用菌袋培養基規模化栽培桑黃子實體的方法將步驟a)長滿菌絲體的菌袋的一端埋入土中，埋入土中的菌袋長度菌袋長度的1/3 1/2，另一端裸露在外面，栽培3、天后在桑黃菌袋培養基的袋子上劃開切口出菇，作為優選，采用環割方式劃開切口出菇，切口為半月形，切口長度約為袋料周長的三分之一，面積2-9cm2，數量為21個，培養溫度25^300C，土壤濕度40 75%，空氣濕度85 98%，光照強度2(T2001ux，通風換氣次數I 8次/天，每次的時間5 30min，7 10天后即可形成桑黃子實體，培養時間75天 4年。因為桑黃是多年生的，75天就可以長到成品的大小，以后的生長很緩慢，但是年限越長，桑黃子實體藥用效果越好。作為優選，栽培6天后采用環割方式出菇，切口為半月型，約5cm2，栽培溫度28 0C，土壤濕度60%，空氣濕度95%。作為優選，從桑黃菌袋培養基的袋子上劃開切口出菇到形成桑黃子實體期間要采取變溫處理，調節晝夜溫差，刺激利于子實體的形成和生長。一般從桑黃菌袋培養基的袋子上劃開切口出菇到形成小的桑黃子實體的7 10內，采用通風換氣等方法，調節晝夜溫差，使晝夜溫差控制在10°C以上。作為優選，白天溫度控制在25 30°C左右，夜晚控制在12 18°C左右。桑黃子實體形成后可恢復常溫培養溫度25 30°C。桑黃母種來源于從野外采集來的野生桑黃子實體，經過菌種鑒定后，采用常規方法分離純化得到桑黃菌株，接種到母種培養基中培養，獲得桑黃母種。
一般桑黃菌絲開始萌發時雜菌也就開始生長。因此接入桑黃母菌時要在無菌環境中，如果接種室消毒不嚴或者操作時帶進雜菌，會造成雜菌感染，還有原種是否有雜菌感染等。若是原種本身有雜菌，接種后菌種培養基表面全是雜菌，若是接種操作不當，只是部分袋裝培養基表面滋生雜菌，而不是全部感染雜菌。 桑黃菌絲對溫度的變化很敏感，試驗說明，菌絲的生長速度隨溫度的升高而加快，到28°C時最快，隨后隨溫度的升高生長速度逐漸降低；但是菌袋放在28°C下培養，大量的菌袋堆在發菌室中，雜菌繁殖快，菌棒極易被污染，將菌袋放在26°C的條件下培養可減少污染。因此作為優選，菌絲生長階段溫度應控制在26V。同樣菌絲生長階段對于濕度和通風、光照也有要求。在桑黃子實體形成和分化階段同樣要求有適當的溫度、濕度、光線和通氣條件。避免強日光直射，否則子實體很難分化或不分化。桑黃要求有良好的通氣條件，對二氧化碳非常敏感，如果通氣不良，會使子實體發育畸形。與現有技術相比，本發明的有益效果是
(1)采用本發明的袋料培養基可快速、規模化栽培桑黃子實體，近似野生桑黃，并且質·量穩定;
(2)本發明培養方式簡單，可用于具有藥用價值的桑黃子實體大規模培養。(3)本發明可以充分利用桑枝、桑葉等資源，能夠有效減少段木資源的浪費，利于環保。具體實施方法
下面結合實施例對本發明作進一步詳細說明。所用原料均可市購，桑黃母種是采用常規方法分離純化得到桑黃菌株，接種到母種培養基中培養，獲得桑黃母種。實施例I
配置本發明中所述的桑黃子實體培養基I千克，每千克中營養料各組份重量為桑枝木屑720克，桑葉粉100克，玉米顆粒100克，蔗糖10克，生石灰50克，KH2PO4IO克，MgSO4IO克；按配方攪拌均勻，加水I. 8千克，拌好后裝袋，袋裝培養基通過高壓滅菌，滅菌條件壓力0. 15MPa，溫度112°C，時間180min，得到桑黃袋料栽培培養基。將桑黃母種在無菌室中接種于上述桑黃袋料栽培培養基中，接種量10%，將接種后的菌棒培養溫度26°C，空氣濕度75%，袋料濕度50%，光照強度201ux，通風換氣次數2次/天，每次IOmin,培養時間75天；
將長滿菌絲體的菌袋下面三分之一埋入土中，三分之二裸露在外面，對菌袋栽培3天后采用環割方式出菇，切口 5個，面積約2cm2，出菇后采用通風換氣方法，調節晝夜溫差，白天溫度控制在26°C左右，夜晚控制在15°C左右，5天后桑黃子實體形成，然后栽培溫度260C，空氣濕度95%，光照強度lOOlux，通風換氣次數3次，每次20min，培養時間90天，培養結束后可獲得桑黃子實體35克。實施例2
配置本發明中所述的桑黃子實體培養基I千克，每千克中營養料各組份重量為桑枝木屑700克，桑葉粉100克，麥粒135克，葡萄糖15克，生石灰20克，KH2PO415克，MgSO415克；按配方攪拌均勻，加水2. 5千克，拌好后裝袋，袋裝培養基通過高壓滅菌，滅菌條件壓力0. 05MPa，溫度121°C，時間120min，得到桑黃袋料栽培培養基。將桑黃母種在無菌室中接種于上述桑黃袋料栽培培養基中，接種量15%，將接種后的菌棒培養溫度28°C，空氣濕度65%，袋料濕度55%，光照強度lOlux，通風換氣次數3次/天，，每次30min，培養時間60天；
將長滿菌絲體的菌袋下面二分之一埋入土中，其余裸露在外面，對菌袋進行栽培，栽培5天后采用環割方式出菇，切口 3個，面積5cm2，出菇后采用通風換氣方法，調節晝夜溫差，白天溫度控制在28°C左右，夜晚控制在15°C左右。7天后桑黃子實體形成，然后栽培溫度28°C，空氣濕度90%，光照強度1201ux，通風換氣次數5次，每次lOmin，培養時間100天。培養結束后可獲得桑黃子實體30克。實施例3
配置本發明中所述的桑黃子實體培養基I千克，每千克中營養料各組份重量為桑枝木屑650克，桑葉粉100克，稻谷200克，蔗糖10克，生石灰15克，KH2P0415克，MgSO4IO克；按配方攪拌均勻，加水2. 3千克，拌好后裝袋，袋裝培養基通過高壓滅菌，滅菌條件壓力0. 15MPa，溫度128°C，時間90min，得到桑黃袋料栽培培養基。
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將桑黃母種在無菌室中接種到上述桑黃袋料栽培培養基中，接種量20%，將接種后的菌棒培養溫度26°C，空氣濕度70%，袋料濕度60%，光照強度151ux，通風換氣次數5次/天，每次IOmin,培養時間80天；
將長滿菌絲體的菌袋下面三分之一埋入土中，其余裸露在外面，對菌袋進行栽培，栽培9天后采用環割方式出菇，切口 4個，面積9cm2，出菇后采用通風換氣方法，調節晝夜溫差，白天溫度控制在25°C左右，夜晚控制在14°C左右。10天后桑黃子實體形成，然后栽培溫度250C，空氣濕度95%，光照強度801ux，通風換氣次數4次/天，每次20min，培養時間105天。培養結束后可獲得桑黃子實體32克。實施例I、實施例2和實施例3培養出的桑黃子實體呈馬蹄形，質地堅硬，單層片大而質優，子實體呈深黃至淺咖啡色，近似野生桑黃，根據報道是目前桑黃子實體規模化種植唯一成功的實例。以上所述僅為本發明的具體實施例，但本發明的技術特征并不局限于此，任何本領域的技術人員在本發明的領域內，所作的變化或修飾皆涵蓋在本發明的專利范圍之中。
權利要求
1.一種桑黃袋料栽培培養基，其特征在于所述的桑黃袋料栽培培養基由營養料與水混合后裝袋制成，然后在溫度110 135°C，壓力0. 05 0. 25Mpa，滅菌3(Tl80min，其中營養料與水的質量比為I :1.8 2. 5。
2.根據權利要求I所述的桑黃袋料栽培培養基，其特征在于所述的桑黃袋料栽培培養基的營養料由以下組分混合制成，各組分的質量百分比為桑枝木屑4(T80%，桑葉粉5 20%，谷粒 10 30%，糖 0. 5 2%，生石灰 1% 5%，KH2PO4O. 1% 2%，MgSO4O. I 2%。
3.根據權利要求2所述的桑黃袋料栽培培養基，其特征在于谷粒選自玉米粒、麥粒、稻谷中一種。
4.根據權利要求2所述的桑黃袋料栽培培養基，其特征在于糖選為蔗糖或者葡萄糖。
5.一種采用如權利要求I至4中任一所述的桑黃袋料栽培培養基栽培桑黃子實體的方法，其特征在于所述的方法為以下步驟 a)桑黃菌袋培養基的菌絲體培養方法在無菌環境中往桑黃菌袋培養基中接入桑黃母種，接種量為桑黃菌袋培養基質量的5 20%，將接種后的桑黃菌袋培養基置于25 30°C恒溫中培養，空氣濕度50 80%，桑黃菌袋培養基濕度50 60%，光照強度10-301uX，通風換氣次數I 5次/天，每次的時間5 30min，培養時間60-90天； b)采用菌袋培養基規模化栽培桑黃子實體的方法將步驟a)長滿菌絲體的菌袋的1/3 1/2埋入土中，栽培3、天后在桑黃菌袋培養基的袋子上劃開切口出菇，切口 2 8個，培養溫度25 30°C，土壤濕度40 75%，空氣濕度85 98%，光照強度2(T2001ux，通風換氣次數1^8次/天，每次的時間5 30min，培養時間75天 4年。
6.根據權利要求5所述的采用桑黃袋料栽培培養基栽培桑黃子實體的方法，其特征在于步驟b)中在桑黃菌袋培養基的袋子上采用環割方式劃開切口出菇，切口為半月型。
7.根據權利要求5或6所述的采用桑黃袋料栽培培養基栽培桑黃子實體的方法，其特征在于步驟b)中從桑黃菌袋培養基的袋子上劃開切口出菇到形成子實體期間調節晝夜溫差，晝夜溫差控制在10°C以上。
全文摘要
本發明涉及生物技術領域，為了解決目前野生桑黃資源的不足，人工栽培中袋料栽培存在培養基營養供給不充分，子實體發育較小、易染雜菌的問題，本發明提供一種桑黃袋料栽培培養基及采用該培養基栽培桑黃子實體的方法，所述的桑黃袋料栽培培養基由營養料與水混合后裝袋制成，然后在溫度110~135℃，壓力0.05~0.25MPa，滅菌30-180min，其中營養料與水的質量比為1∶1.8~2.5。采用本發明的桑黃袋料培養基配方，可以提供桑黃子實體生長所攝取的營養物質，培養的桑黃子實體近似野生桑黃、質量穩定，同時本發明的培養方式簡單，可用于具有藥用價值的桑黃子實體規模化栽培。
文檔編號A01G1/04GK102786333SQ20121020722
公開日2012年11月21日 申請日期2012年6月21日 優先權日2012年6月21日
發明者萬和炎, 壽旦, 方俊, 李有貴, 計東風, 陳平華, 馬相鋒 申請人:杭州清正生物科技有限公司