專利名稱：：聚酵素芽孢桿菌kjs-2產生的抗菌大環內酯菌素a的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種由聚酵素芽孢桿菌(5ac/〃w;w/^y/enwe"Wc^)KJS-2(KCCM10了69P)產生的抗生素一一大環內酯菌素A(MacrolactinA)及其應用；特別涉及具有針對有害細菌例如耐萬古霉素腸球菌(VRE)和耐曱氧西林金黃色葡萄球菌(Stop/^/ococcas^wrew)(MRSA)的抗菌活性的大環內酯菌素A及其應用。
背景技術：
：耐萬古霉素腸球菌(VRE)的增加對于人類而言是不幸的，帶來了許多問題，例如非常高的新抗生素開發費用。有報道稱在1989年醫院中VRE感染率僅為0.3%,-f旦該感染率在1993年增加到了7.9%。由多重耐藥性VRE所引起的菌血癥死亡率高達約70%,與此同時人們擔憂VRE抗性基因轉化其他革蘭氏陽性球菌的能力，其可增加耐萬古霉素MRSA的可能性。近來，已有報道居家已開始使用抗生素替考拉寧(teycoplanin)來抵抗耐藥菌，同時出現了耐替考拉寧細菌。因此，本發明人已分離出一抹產生大環內酯菌素A的新菌林——聚酵素芽孢桿菌KJS-2，該大環內酯菌素A具有針對耐萬古霉素VRE和耐曱氧西林MRSA，以及大腸桿菌C&c/^n'c/z/aco//)、枯草芽孑包桿菌(5ac/〃/51w6"嗣168、膝黃微球菌(M/crococcws/她us)、創傷孑瓜菌(Ff6n'ovw/myc^)和副乳房鏈3求菌(5^eptocMccws/oraMZ)eW50的抗菌活性，并且該新菌抹已保藏(菌抹保藏編號KCCM10769P)。純化了活性成分并測定了其結構，證實其為大環內酯菌素A,并驗證具有相同的效果。在下文中，將給出關于大環內酯菌素A和產生大環內酯菌素A的菌林的本研究的概要。WilliamFenical首先于1989年從存在于深海的海洋細菌中純化出大環內酯菌素A。據報道大環內酯菌素A具有選擇性抗菌活性并顯示出針對B16-F10鼠黑素瘤癌細胞的細胞毒性，還具有針對單純皰滲和HIV的抗病毒活性。在1997年，ICK-DONGYOO從馬杜拉放線菌04c""oma^/wra平)中純化出大環內酯菌素A,該純化的大環內酯菌素A被用于研究通過谷氨酸鹽觸發的神經元保護。在2001年，HiroshiSano從芽孢桿菌(5ac/〃肌乎)PP19-H3中純化出大環內酯菌素A，并研究了其針對金黃色葡萄球菌IFO12732和枯草芽孢桿菌IFO3134的抗菌活性。在2003年，Sung-WonChoi從鏈霉菌OS&印to附;;ce;y5/.)YB-401中純化出大環內酯菌素A,并顯示具有對膽固醇生物合成的抑制效果。在2004年，Keun-HyungPark從解淀粉芽孢桿菌(5ac/〃wam_y/o//^e/ac/era)CHO104中純化出大環內酯菌素A，并研究了其針對金黃色葡萄球菌KCTC1928、大腸桿菌KCTC2593和灰葡萄孢菌CSo^y^c/"ea)的抗菌活性。在2005年，Joo-WonSuh從芽孢桿菌sunhua(5ac/〃wssp.ww/ma)中純化出大環內酉旨菌素A，并將純化的大環內酯菌素A用于研究對疾痂病鏈霉菌O^reptomycMscaZ/e力的抑制作用。在2006年，GabriellaMolinari從枯草芽孢桿菌DSM16696中純化出大環內酯菌素A和丙二酰基-大環內酯菌素A(MMA),分別測試了它們針對耐萬古霉素腸球菌(VRE)、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)和洋蔥伯克氏菌(5wr狄oWer/flc印ac/a)的抗菌活性。在該研究中，丙二酰基-大環內酯菌素A(MMA)顯示出針對所有用于該試驗的細菌的優異的抗菌活性，與此同時大環內酯菌素A僅顯示具有針對MRSA的抗菌活性。這些結果是非常有意義的，然而由各種菌抹所純化出的大環內酯菌素A的最大量小于1mg/1,以及丙二酰基-大環內酯菌素A(MMA)的最大量小于1.2mg/1,這已經妨礙了它們的工業應用。此外，尚未有針對大環內酯菌素A的光學異構體的研究，并且其低產率也使得它們難以得到鑒定。將來必定需要該方面的研究，并且作為本發明結果獲得的大環內酯菌素也未被作為光學異構體得到充分研究。理論上，結構中的4個手性中心有可能存在16種光學異構體。由于是大多數藥物所具有的情況，因此帶有光學上不同結構的大環內酯菌素應當在特性上顯示不同的效果，即使它們的結構式是相同的。這意味著不同菌抹所產生的物質可能具有取決于它們的光學結構的不同效果。這是科學上所證實的事實——即使具有相同結構式的物質也具有取決于它們的光學結構的不同的性質。
發明內容因此，本發明的目的是產生具有針對VRE和MRSA以及大腸桿菌、枯草芽孢桿菌168、藤黃微球菌、創傷弧菌和副乳房鏈球菌的抗菌活性的大環內酯菌素A,以及通過測試其效果將本發明的物質開發成抗生素。本發明物質是具有帶有多個雙鍵和羥基(-OH)的環結構、分子量402.24的大環內酯類抗生素。該24元環結構具有碳和氧，并且該物質的分子式為C24H3405。公開本發明以達到利用一種新分離的菌抹——聚酵素芽孢桿菌KJS-2菌抹(保藏編號KCCM10769P)提供一種特異性控制VRE和MRSA手段的目的。為實現上述目的之一，本發明有利地利用了菌抹聚酵素芽孢桿菌KJS-2(保藏編號KCCM10769P),提供了具有優異的針對VRE和MRSA的抗菌活性的大環內酯菌素A。為實現另一目的，本發明提供了聚酵素芽孢桿菌KJS-2產生的大環內酯菌素A,其具有優異的針對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌168、藤黃凝:球菌、創傷弧菌和副乳房鏈球菌的抗菌活性；以及該菌林產生的大環內酯菌素衍生物。由本發明提供的新菌抹——聚酵素芽孢桿菌KJS-2產生的大環內酯菌素A顯示了針對多種微生物和真菌的廣語抗菌活性。引人注目地，抑制超過90%的11種VRE菌林和13種MRSA菌抹生長所需的平均最小抑制濃度(MIO90)分別為約31.25pg/ml和約19.83)ig/ml,與目前感染多重耐藥性菌患者所使用的替考拉寧相比，其活性高至45.3倍；因此表明其具有開發成抗生素的足夠價值。因此，本發明的聚酵素芽孢桿菌KJS-2產生的大環內酯菌素A和該大環內酯菌素A的衍生物可產生極好的物質用于控制微生物和細菌，由此對于醫藥工業是非常有用的。圖1是在發酵期間于不同的時間點由UV檢測儀(OD6oonm)測量出的用于本發明的菌抹聚酵素芽孢桿菌KJS-2培養基中的細胞數目。圖2是在發酵過程中的不同時間點由HPLC采集并分析的用于本發明的菌林聚酵素芽孢桿菌KJS-2培養基的色譜圖。圖3是用于本發明的菌林聚酵素芽孢桿菌KJS-2培養基的LC/Mass分析數據，該培養基是在發酵2.5天后釆集的。萃取該培養基并通過LC/Mass進行分析。圖4是用于本發明的菌抹聚酵素芽孢桿菌KJS-2培養基的生物測定，該培養基是在發酵2.5天后采集的。萃取該培養基并進行HPLC分餾，并對每個峰的餾分進行生物測定。圖5是測定由圖4中所示優異抗菌活性的第一餾分純化得到的物質的純度和分子量的LC/Mass數據。圖6是圖4中聚酵素芽孢桿菌KJS-2培養基的第一餾分的制備性LC分析，該第一餾分來自發酵所產生的物質。圖7是用于確定由圖6制備性LC的第一餾分純化得到物質的純度和分子量的LC/Mass數據。圖8是通過BruckerNMR在500MHz分析得到的圖7的純化的物質的iH-NMR波譜。圖9是通過BruckerNMR在500MHz分析得到的圖7的純化的物質的13C-NMR波譜。圖10是通過BruckerNMR在500MHz分析得到的圖7的純化的物質的DEPT-90NMR波譜。圖11是通過BruckerNMR在500MHz分析得到的圖7的純化的物質的DEPT-135NMR波鐠。圖12是通過BruckerNMR在500MHz分析得到的圖7的純化的物質的HOMO-COZYNMR波譜。圖13是通過BruckerNMR在500MHz分析得到的圖7的純化的物質的HMQCNMR波譜。圖14是通過BruckerNMR在500MHz分析得到的圖7的純化的物質的HMBCNMR波譜。圖15是圖7的純化的物質的HR-Mass分析。圖16是大環內酯菌素A的結構式。圖17是本發明中使用的菌抹聚酵素芽孢桿菌KJS-2的培養基的分析數據，該菌抹是在發酵2.5天后采集的。萃取該培養基并通過LC/Mass分析所萃取的溶液。圖18是在本發明中使用的菌林聚酵素芽孢桿菌KJS-2的培養基的分析數據，該培養基是在發酵4.2天后采集的。萃取該培養基并通過LC/Mass分析所萃取的溶液。圖19是間接測定大環內酯菌素A在50%丙酮溶劑和曱醇溶劑中的溶解度的HPLC分析。(A)是已稀釋10倍的在1ml的50%丙酮中的1mg大環內酯菌素A的1pi等分試樣的HPLC色譜圖。(B)是已稀釋IO倍的在1ml的曱醇中的1mg大環內酯菌素A的1pl等分試樣的HPLC色譜圖。圖20是測試純化后的大環內酯菌素A針對釀酒酵母(Sacc/^ramycescerev/57'a)、創傷弧菌、藤黃樣i3求菌和副乳房者連5求菌的抗菌活性結果。圖21是在濃度梯度下測試的純化的大環內酯菌素A針對VRE5菌林的抗菌活性結果。具體實施例方式在針對日本Terakado博士的研究組于1933年分離出的聚酵素芽孑包斥干菌(5flc〃/w51/o(y/ermew〃CMS".s;)的4元菌活'〖生i式馬全過禾呈中，分離得到一株在形態學上具有不同于其他芽孢桿菌菌抹的菌抹。顯微鏡觀察顯示該菌林具有芽孢桿菌的特性并產生孢子，并基于16srRNA的DNA序列同源性的系語圖分析證實了其是一種屬于芽孢桿菌屬的新菌抹。該芽孢桿菌菌抹被命名為聚酵素芽孢桿菌KJS-2，其在2006年8月16日保藏于KCCM(韓國微生物保藏中心)，并給出保藏編號KCCM10769P。為純化聚酵素芽孢桿菌KJS-2菌株所產生的具有抗菌活性的物質，在3L的TSB培養基(TSB瓊脂胰蛋白胨17g,大豆胨3g，葡萄糖2.5g,NaCl:5g,磷酸氫二鉀2.5g,pH6.87.2)中培養聚酵素芽孢桿菌KJS-2菌抹，然后接種于相同的培養基中并發酵2.5天(30。C，200rpm,1vvm,pH6.8)。對培養基進行乙酸乙酯溶劑萃取，繼之以LC/MS分析。通過LC/Mass分析找出具有優異抗菌活性的餾分，并同樣測試抗菌效果，最后使用制備硅膠RP-18進行純化。同樣，進行第一NMR和第二NMR(^H-NMR、13C-NMR、90-DEPT,135-DEPT、HMQC、HMBC)以及HRMS/FAB以分析最終純化的物質的結構，結果證實本發明的聚酵素芽孢桿菌KJS-2菌抹所產生的抗菌物質是大環內酯菌素A。用實驗方法測定了抑制超過90。/()(MICw())的臨床上分離的11種VRE菌林和13種MRSA菌抹的生長所需的聚酵素芽孢桿菌KJS-2產生的大環內酯菌素A的最小抑制濃度分別為約31.25pg/ml和約19.83pg/ml,與目前用于治療多重耐藥性菌的替考拉寧相比，其活性高至45.3倍。此外，大環內酯菌素A顯示抗大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、藤黃微球菌168、創傷弧菌和副乳房鏈球菌的優異的抗菌活性。聚酵素芽孢桿菌KJS-2菌抹所產生的大環內酯菌素A同樣顯示優異的熱穩定性，并且在弱酸性和中性環境中非常穩定。除聚酵素芽孢桿菌KJS-2產生的抗生素大環內酯菌素A之外，該物質的衍生物也顯示廣語抗菌活性。以下試—驗實施例和實施例更詳細地描述了本發明的內容，<旦是本發明權利要求的范圍不受限于如下實施例。實施例1:聚酵素芽孢桿菌KJS-2的分離和鑒定以及抗菌物質的產生聚酵素芽孢桿菌KJS-2菌抹的抗菌活性菌抹抑制作用藤黃孩i球菌+++枯草芽孢桿菌++米曲霉C^5/eZ-g7'〃W51+++++:非常強的抑制++:強抑制+:抑制在上表1中自身顯示優異抗菌活性的本發明的菌林被命名為聚酵素芽孢桿菌KJS-2,并在2006年8月16日保藏于KCCM(韓國微生物保藏中心)，并給出保藏編號KCCM10769P。[步驟2:用于分析的設備和條件]下述設備和條件用于分析本發明菌抹所產生的抗菌物質。為了HPLC分析，使用agilent1100系列和ShimadzuHPLC以及ZorbaxSB-C18柱(柱尺寸4.6*250mm,粒度5pm)。使用包括加入乙腈中的0.1%甲酸和水的溶劑。兩種條件用于HPLC分析(1)0%~100%梯度濃度的乙腈，持續20分鐘，(2)40%等度濃度的乙腈。使用Agilent1100系列時用于HPLC的流速為1ml/min,和使用ShimadzuHPLC時流速為1.5ml/min。在228、262、280、300和350nm波長下的UV檢測儀用于HPLC分析。Agilent1100MSD用于LC/Mass分析，用于LC/Mass分析的條件與HPLC相同，并且用于LC/Mass分析的條件為如下在AP-ESI模式中，干燥氣體的流速為131/min,蒸氣壓為50psi,干燥氣體的溫度為350°C，毛細管電壓為4000V(在陽離子模式下)和3500V(在陰離子模式下)，質量范圍為100~1000m/z,石卒片電壓為150V,以及流速為1ml/min。Agilent制備LC與制備柱Gemini-C18(柱尺寸10mm*250mm,粒度10pm)—起用于制備LC。乙腈和水用作溶劑，流速為5ml/min。在228、262、280、300和350nm;皮長下的UV才全觀'M義也用于制備LC。+和402.8的分子量。實施例2:從聚酵素芽孢桿菌KJS-2的培養基中純化抗菌物質為了純化菌林聚酵素芽孢桿菌KJS-2所產生的抗菌物質，將該菌抹的種培養物稀釋于3L的TSB培養基(TSB瓊脂胰蛋白胨17g,大豆胨3g,葡萄糖2.5g,NaCl5g，磷酸氫二鉀2.5g,pH6.8~7.2)中至4%的終濃度，并培養2.5天(30。C,200rpm,lvvm，pH6.8)。用乙酸乙酯萃取培養基并在使用實施例1的步驟2的溶劑的條件下，由HPLC進行分析，如圖4中所示分餾出每個峰。測試每個餾分對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌168和耐萬古霉素腸球菌的抗菌活性。結果顯示餾分1、4、5和7具有針對大腸桿菌的抗菌活性(參看圖4),餾分1、2、4、5、6、7和9具有針對枯草芽孢桿菌168的抗菌活性(參看圖4)。而餾分1和2則同時顯示針對耐萬古霉素腸球菌的抗菌活性(參看圖4)。然而，由于本發明的餾分1不僅較餾分2產率更高，并且其還顯示出針對用于該試驗的所有三種細菌的抗菌活性(參看圖4),因此餾分1被確定用于試驗。下圖5是在實施例1的步驟2的相同條件下，通過LC/Mass對圖4的餾分1的分析，該純化達到的純度為94.63%。實施例3:顯示針對VRE的優異的抗菌活性的餾分的結構分析為分析最終純化的抑制大腸桿菌、枯草芽孢桿菌168和耐萬古霉素腸球菌生長的物質的結構，在與實施例1的步驟2的制備LC相同的條件下大量制備餾分(參看圖6)。在與實施例1的步驟2的LC/Mass相同的條件下分析餾分，對實施例2的餾分1進行純化，具有97.72%的純度(參看圖7)。將通過制備LC純化的30mg物質溶解在700pl的溶劑DMS0-d6中并測試第一和第二NMR(^H-雇R、13C-NMR、90-DEPT、135-DEPT、H-HCOZY、HMQC、HMBC)。NMR分析的結果示于以下表2、圖8、圖9、圖10、圖11、圖12、圖13和圖14中。基于NMR分析的結果，最終純化的物質被鑒定為大環內酯菌素A(參看圖16)，并通過進行HRMS/FAB測試證實為大環內酯菌素A,其具有425.23m/z的[M+Na]+和402.23的分子量。使用HRMS(FAB)JMS-700進行精確的質量分析。該通過HRMS/FAB的精確的質量分析數據示于下圖15中。總結所有分析數據，具有優異抗菌活性的實施例2的餾分1被鑒定為大環內酯菌素A，其具有(3241!3405的分子式和402.23的分子量(參看圖16)。[表2]聚酵素芽孢桿菌KJS-2產生的抗菌物質——大環內酯菌素A的NMR數據<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實施例4:聚酵素芽孢桿菌KJS-2的培養基中代謝物的LC/Mass分析在發酵2.5天和4.2天后，通過使用乙酸乙酯萃取50ml的實施例2的聚酵素芽孢桿菌KJS-2的培養基，并通過LC/Mass進行分析。基于聚酵素芽孢桿菌KJS-2產生的所有代謝物的分子量和UV光譜以及關于芽孢桿菌屬代謝物的現有文獻，獲得了示于下表3和表4中的結果(參看圖17和圖18)。下表3和表4中所期望的物質的評判是基于大環內酯菌素A衍生物的分子量和特有的UV波長，以及之后要求的關于NMR的結構分析以及抗菌活性測試的附加數據。[表3〗在發酵2.5天后，聚酵素芽孢桿菌KJS-2的培養基的萃取后溶液的LC/Mass分析<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>[表4]在發酵4.2天后，聚酵素芽孢桿菌KJS-2的培養基的萃取后溶液的LC/Mass分析<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實施例5:針對VRE和MRSA的最小抑制濃度(MIC)的比較測定針對VRE和MRSA的MIC(最小抑制濃度)以測試聚酵素芽孢桿菌KJS-2產生的大環內酯菌素A的抗菌活性，該聚酵素芽孢桿菌KJS-2是抗這兩種菌林的本發明的菌抹。用于試驗的菌抹是臨床上分離的11種VRE菌抹和13種MRSA菌抹。在37°C下，在MHII培養基中以200rpm將每一用于試驗的菌抹培養6小時，使用UV檢測儀在OD6oo證處測定培養基的吸光度，然后將1ml等分試樣的培養基涂抹在MHII瓊脂培養基上并在37°C下培養16小時。將培養16小時后瓊脂培養基上形成的菌落個數進行計數。在37°C下，在MHII培養基中以200rpm培養每一用于試驗的菌抹6小時，并使用UV檢測儀在OD,謹處測定培養基的吸光度。基于菌落數目對培養基吸光度的比值計算細胞數目，并通過上述方法測定。將每種培養基稀釋到0.25*107cfu/ml的最終細胞濃度，并將大環內酯菌素A溶解在溶劑DMSO中，同時將氨芐西林、替考拉寧、萬古霉素和曱氧西林溶解在水中。為測定大環內酯菌素A或其他四種抗生素的MIC,將分別處于500pieppendorff管中的列于表5中的物質和大環內酯菌素A的混合物或列于表6中的物質和其他四種抗生素中每一種的混合物在37°C下以200rpm培養16小時，然后使用熒光多功能酶標儀(FluorescenceMulti-DetectionReader)通過UV/可見光4企測4義在600nm處測定吸光度。如表7和表8所示的結果揭示大環內酯菌素A抗11種VRE菌抹的平均MIC^o為31.25pg/ml,其為替考拉寧的4倍那么高；而大環內酯菌素A抗13種MRSA菌抹的平均MIO90為19.83jxg/ml,其為替考拉寧的5.3倍那么高。[表5]MIC的比較，以及大環內酯菌素A濃度梯度<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>大環內酯菌素A溶于DMSC^中細月包*的濃度為0.25x107cfu/ml<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>氨爺西林、替考拉寧、萬古霉素、曱氧西林溶于水中細胞*的濃度為0.25x107cfu/ml[表7]大環內酯菌素A和其他抗生素抗11種VRE菌抹的MIC>90的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>實施例6:大環內酯菌素A的生物測定進行生物測定以測量本發明菌抹——聚酵素芽孢桿菌KJS-2產生的大環內酯菌素A對微生物的抑制效果。用于該試驗的菌抹是釀酒酵母、創傷弧菌、藤黃微球菌和副乳房鏈球菌。除創傷弧菌之外，將每種菌林接種在TSB培養基中并在37°C下以200rpm培養16小時，然后將0.5ml(大約2.8*109cfu/ml)等分試樣的培養基涂抹在TSB瓊脂培養基上。將創傷弧菌接種在TSB培養基中并在25°C下(其最佳生長條件)以200rpm培養16小時，然后將上述量的培養基涂抹在瓊脂培養基上。生物測定所需的溶劑為對用于該試驗的菌抹不具有毒性的、可溶解大環內酯菌素A的溶劑。曱醇是一種用于大環內酯菌素A的良好的溶劑，但不適合于生物測定，原因在于其自身顯示針對試驗用菌抹的毒性。然而，50%丙酮對用于該試驗的三種菌抹不顯示毒性(參看圖20)。在圖19中，(A)是已稀釋IO倍的于1ml的50%丙酮中的1mg大環內酯菌素A的1|il等分試樣的HPLC色譜圖，(B)是已稀釋10倍的在1ml的曱醇中的1mg大環內酯菌素A的1pi等分試樣的HPLC色譜圖。即，在實施例2的步驟2的HPLC條件下進行色譜分析。總結實驗結果，因為50%丙酮對試驗用的三種菌林不顯示毒性(圖20),同時大環內酯菌素A在50%丙酮中的溶解度類似于曱醇(圖19),因此用50%丙酮作為生物測定的溶劑。測試10pl的溶于50%丙酮中的大環內酯菌素A溶液(25mg/ml)并顯示針對釀酒酵母、創傷弧菌、藤黃微球菌和副乳房鏈球菌菌抹具有優異的抗菌活性(參看圖20)。此外，將10pl的大環內酯菌素A溶液(1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、10mg/ml禾口20mg/ml，分別溶于50%丙酮中)施用于已涂抹在TSB瓊脂培養基上的VRE5(該VRE5用于實施例5的MIC試驗中)，同時分別施用10pl的50%丙酮和10pl的萬古霉素溶液(5mg/ml，溶于1120中)作對照組。結果表明用于該試驗的VRE5不為50%丙酮或萬古霉素溶液(5mg/ml)所抑制，但為具有高于1.25mg/ml濃度的大環內酯菌素溶液所抑制(參看圖21)。實施例7:液體培養基中抗VRE效果對于使用VRE的該試驗，將菌抹接種在液體培養基中直至濃度達到l，OOO，OOOcfu/ml，并與大環內酯菌素A(用于待測試的菌抹)或不與大環內酯菌素A(用于對照)一起培養。大環內酯菌素A的濃度為50嗎/ml,如下用于該試驗的11種菌抹獲得自Donga大學醫學院VRE1、VRE2、VRE3、VRE4、VRE5、VRE6、VRE7、VRE8、VREll、VRE914和VRE915。如下表所示，與4小時相比，在培養6小時后，對照組(C)顯示顯著的生長，而測試組顯示顯著的生長延緩和抑制；VRE8和VRE11顯示顯著的生長延緩，但與其他菌林相比顯然具有更低的敏感性。所測試的11種菌抹中的9種顯示顯著的生長抑制。在培養4小時后，對照組的平均吸光度為0.76,而與大環內酯菌素A—起培養的組的吸光度則為0.19，顯示在這兩組之間存在顯著差異。在培養6小時后，對照組顯示快速生長至1.5的吸光度，而與大環內酯菌素A—起培養的組的吸光度再次顯示顯著的生長抑制至0.26的吸光度。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>實施例8:測定比旋光的結果由"Gabriella，，等測定的大環內酯菌素A的比旋光為[a]22D(c于MeOH中)=-10.7(0.68)(7-O-MalonylMacrolactinA,aNewMacrolactinAntibioticfromBacillussubtilisActiveagainstMethicillin-ResistantStaphylococcusaureus,Vancomycin-ResistantEnterococci,andaSmall-ColonyVariantofBurkholderiacepacia.Antimicrob.AgentsChemother.50:1701-1709,2006)。由"Yoo"等測定的大環內酯菌素A的比旋光為[a]18D(c于MeOH中)=-20(0.1)(NeuronalcellprotectionactivityofmacrolactinAproducedbyActinomadurasp.J.Microbiol.Biotechnol.7:429-434.1997)。由"William"等測定的大環內酯菌素A的比旋光為[a]D(c于MeOH中)=-9.6(1.86)(Themacrolactins,anovelclassofantiviralandcytotoxicmacrolidesfromadeep-seamarinebacterium.J.Am.Chem.Soc.111:7519-7524.1989)。由"Park"等測定的大環內酯菌素A的比旋光為[a]25D(c于MeOH中)=-10.36(0.13)(IsolationandCharacterizationofAntimicrobialSbustanceMacrolactinAProducedfromBacillusamyloliquefaciensCHOI04IsolatedfromSoil.J.Microbiol.Biotechnol.14:525-531,2004)。由聚酵素芽孢桿菌KJS-2制得的本發明的大環內酯菌素A的比旋光為[a]22D(c于MeOH中)=-10(4.0)。這不同于之前的結果，例證了作為一種光學異構體的唯一性，同時用作對照的蔗糖的比旋光顯示了正常值的[a]28D(c于水中)=64.038(26)。結果，可推斷本發明具有一種不同于純化自其他菌抹的大環內酯菌素A的異構體。權利要求1.聚酵素芽孢桿菌KJS-2菌株，其是一株產生大環內酯菌素A的新菌株(保藏編號KCCM10769P)。2.—種使用權利要求1的大環內酯菌素A作為抗耐萬古霉素腸球菌(VRE)的抗生素的方法。3.權利要求2的方法，其中大環內酯菌素A的最小抑制濃度MIC,為15.63|tig/ml~31.25pg/ml。4.一種使用權利要求1的大環內酯菌素A作為抗耐曱氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的抗生素的方法。5.權利要求4的方法，其中大環內酯菌素A的最小抑制濃度MIC,為7.81ng/ml~31.25pg/ml。6.—種使用權利要求1的大環內酯菌素A作為抗傳染性菌的抗生素的方法，該傳染性菌包括創傷弧菌和副乳房鏈球菌。全文摘要本發明涉及一株新的芽胞桿菌菌株——酵素芽孢桿菌KJS-2(KCCM10769P)產生的大環內酯菌素A作為抗生素的應用。本發明的由聚酵素芽孢桿菌KJS-2產生的大環內酯菌素A顯示了針對多種微生物和真菌的廣譜抗菌活性，經證明特別對多重耐藥性菌——耐萬古霉素腸球菌(VRE)和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的抑制是非常有效的。該聚酵素芽孢桿菌KJS-2產生的抗生素大環內酯菌素A可用作一種抗耐萬古霉素腸球菌(VRE)和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的極好的抗生素，因此本發明對于醫藥工業是一項非常有用的發明。文檔編號C12P17/02GK101636501SQ200880008596公開日2010年1月27日申請日期2008年3月12日優先權日2007年3月16日發明者姜在璿,崔光進,李進英,洪勇根,洪才憲,車仁俊,金東勛,金東熙,金天圭,金江民申請人:仁濟大學校產學協力團;姜在璿