專利名稱：一種恒pH補料策略發酵生產銀耳多糖的方法
技術領域：
本發明涉及一種恒PH補料策略發酵生產銀耳多糖的方法，具體涉及高等真菌發 酵生產多糖的一種方法，屬于生物發酵工程技術領域。
背景技術：
銀耳的主要藥用成份是多糖，主要包括酸性多糖、中性雜多糖、酸性低聚糖、胞壁 多糖等。銀耳多糖具有強心、延緩衰老、抗血栓、降血脂、降血糖、抗肝炎、抗突變、抗腫瘤、提 高免疫力、抗輻射等功效。銀耳多糖在醫藥、美容、保健食品等領域具有廣泛的應用。銀耳多 糖可以從銀耳子實體分離獲得，也可以通過分生孢子深層發酵法生產。由于發酵法成本低、 多糖純度高，深層發酵法正逐步取代組織提取法。目前對分生孢子發酵法生產銀耳多糖的 研究主要集中于發酵條件的優化，如培養基的優化，反應器的設計優化以及發酵參數優化。 本實驗室早前已對PH值的控制方式對銀耳多糖產量的影響進行了深入研究。本發明在此 基礎上進行補料分批發酵調控，即根據菌株生長和起始培養基的特點，在分批發酵的某階 段適當補加其他不同于起始培養基的碳源，并同時控制PH，使得菌種保持一定的菌體生長 密度，使其代謝流不斷遷移，促進產物多糖的生成，補料分批發酵是介于分批發酵與連續發 酵之間，兼有兩者的優點，又克服了兩者的缺點，因此具有很好的發展前景。
發明內容
本發明的目的是提供一種恒pH補料策略發酵生產銀耳多糖的方法，使菌種保持 一定的菌體生長密度，又促使代謝流遷移，有利于產物多糖的生成。本發明的技術方案(1)菌種Tremella fuciformis ACCC50546購于中國農業微生物菌種保藏管理中 心。(2)培養基以g/L計保藏培養基(PDA培養基)馬鈴薯200，葡萄糖20，瓊脂15。種子培養基葡萄糖20，蛋白胨2，酵母粉2，MgSO4 · 7H20 0. 5，磷酸二氫鉀0. 46，磷酸氫二鉀1。發酵培養基葡葡萄糖20，蛋白胨2，酵母粉2，MgSO4 ·7H20 0.5,磷酸二氫鉀0. 46， 磷酸氫二鉀1。(3)制備工藝菌種保藏所用菌種保藏在保藏培養基斜面上，4°C保存，兩月轉接一次。種子培養從保藏培養基上轉入種子培養基需活化兩次，每次培養3天。控制pH補料發酵的過程將活化好的種子以3% 5%的接種量接入到發酵罐中 (上海保興KLF2000)，發酵罐裝液量為3. 0-3. 5L，發酵溫度為，攪拌轉速為200rpm，流 加10%氫氧化鈉和5%硼酸，控制pH在5. 5-6. 5 ；在碳源葡萄糖消耗完畢時(84h)，利用間 歇流加的方式向發酵罐中補加20%甘油，培養至120h后結束發酵，沉淀多糖。
本發明的有益效果通過控制發酵過程的PH值并及時補加碳源，使得發酵過程能 夠得以保持在最佳環境下，有利于菌體的生長，且有利于代謝流的遷移，所以最終多糖產量 可以達到4. 4g/L，工藝簡單、環境污染小、操作方便、多糖的產量高。
具體實施例方式對照實施例本發明所用的菌種為iTremella fuciformisACCC5(^46，購于中國農 業微生物菌種保藏管理中心，先轉PDA斜面培養7天，然后分離出酵母狀分生孢子進行 搖瓶發酵3天，溫度，轉速200r/min，最后在5L發酵罐中進行發酵5天，發酵條件為 PH值自然，攪拌轉速200r/min，通氣速率2.0vvm。發酵培養基為(g/L):葡萄糖20，蛋白胨 2，酵母粉2，MgSO4 · 7H20 0. 5，磷酸二氫鉀0. 46，磷酸氫二鉀1。每隔12小時取樣一次，發 酵過程中不補加甘油，銀耳多糖產量為1.6g/L。實施例1 從PDA培養基上挑取菌種，在種子培養基中活化兩代后，以3%的接種量 接入5L的發酵罐中，裝液量為3L，攪拌轉速為200rpm，在下培養，流加10%氫氧化鈉 和5%硼酸，控制pH在5. 5 ；當葡萄糖消耗完畢時(84h)，利用間歇流加的方式向發酵罐中 補加20%甘油，培養至120h后結束發酵，銀耳多糖產量為3. 4g/L。實施例2 從PDA培養基上挑取菌種，在種子培養基中活化兩代后，以3%的接種量 接入5L的發酵罐中，裝液量為3L，攪拌轉速為200rpm，在下培養，流加10%氫氧化鈉 和5%硼酸，控制pH在6.0;當葡萄糖消耗完畢時(84h)，利用間歇流加的方式向發酵罐中 補加20%甘油，培養至120h后結束發酵，銀耳多糖產量為3. 7g/L。實施例3 從PDA培養基上挑取菌種，在種子培養基中活化兩代后，以5%的接種量 接入5L的發酵罐中，裝液量為3. 5L，攪拌轉速為200rpm，在下培養，流加10%氫氧化 鈉和5%硼酸，控制pH在6.0;當葡萄糖消耗完畢時(84h)，利用間歇流加的方式向發酵罐 中補加20%甘油，培養至120h后結束發酵，銀耳多糖產量為4. 4g/L。實施例4 從PDA培養基上挑取菌種，在種子培養基中活化兩代后，以5%的接種量 接入5L的發酵罐中，裝液量為3. 5L，攪拌轉速為200rpm，在下培養，流加10%氫氧化 鈉和5%硼酸，控制pH在6.5 ；當葡萄糖消耗完畢時(84h)，利用間歇流加的方式向發酵罐 中補加20%甘油，培養至120h后結束發酵，銀耳多糖產量為4. Og/L。
權利要求
1. 一種恒PH補料策略發酵生產銀耳多糖的方法，其特征在于以Tremella fucif0rmisACCC5(^46(購于中國農業微生物菌種保藏管理中心)為出發菌株，先轉PDA斜 面培養基培養7天，然后分離出酵母狀分生孢子進行搖瓶發酵3天，溫度^°C，轉速 200r/min，再以5%的接種量接種于5L發酵罐中，發酵罐裝液量為3. 5L，發酵溫度為^°C， 攪拌轉速為200rpm，流加10%氫氧化鈉和5%硼酸，控制pH在6. 0 ；在碳源葡萄糖消耗完畢 時(84h)，利用間歇流加的方式向發酵罐中補加20%甘油，培養至120h后結束發酵，沉淀多 糖。
全文摘要
一種恒pH補料策略發酵生產銀耳多糖的方法，屬于生物發酵工程技術領域。本發明用銀耳酵母狀分生孢子作為菌種，接種于發酵罐中，裝液量為3.5L，攪拌轉速為200rpm，流加10％氫氧化鈉和5％硼酸，控制pH在6.0；在碳源葡萄糖消耗完畢時(84h)，利用間歇流加的方式向發酵罐中補加20％甘油，培養至120h后結束發酵，沉淀多糖。本發明的優點是通過控制發酵環境的pH，并補加不同的碳源，既補充了營養物質，又變遷了代謝途徑，使得菌體能夠在適宜的環境下生長，促進了目的代謝產物的合成。發酵結束后，多糖產量達到4.4g/L，工藝簡單、環境污染小、操作方便、多糖的產量高。
文檔編號C12R1/645GK102041285SQ200910019460
公開日2011年5月4日 申請日期2009年10月20日 優先權日2009年10月20日
發明者張帥帥, 朱虎 申請人:中國石油大學(華東)