專利名稱：一種水產養殖用多菌種微生物復合制劑及其制備方法
技術領域：
本發明屬于水產養殖領域，特別涉及一種水產養殖用多菌種微生物復合制劑及其 制備方法。
背景技術：
隨著規模化水產養殖業的大量出現，養殖密度不斷增加，養殖水體中的排泄物以 及餌料的殘渣不斷增加，致病微生物大量繁殖，養殖水體富營養化程度加劇，生態環境遭到 嚴重的破壞，這導致水產動物大規模且頻繁出現各類病害和應急狀態，與此同時抗生素和 殺菌劑的長期使用和濫用也進一步導致了養殖水體中各種藥物的殘留和致病微生物抗藥 性和耐藥性的提高和，從而進一步破壞了養殖水體的生態環境。近年來，微生物制劑在水產養殖上已有所應用，但是還存在著不少的問題。大多數 微生物制劑僅針對養殖水體發揮功效，但對水產動物本身并沒有直接作用。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種水產養殖用多菌種微生物復合制劑及其 制備方法。該水產養殖用多菌種微生物復合制劑同時可以改善水產動物的生態環境，防治 疾病，降低動物應急狀態，提高水產動物品質，縮短上市周期。為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為
一種水產養殖用多菌種微生物復合制劑，其特征在于它是由光合細菌(/？如而/^^^ elegans)ACCC 10649、酵母菌(/7ZcAia fermentans lodder)ACCC 20319τ、納豆菌(feci/A/s natto Swamura) ACCC 10614、牛古草芽抱桿菌(ifeci/^/iAs subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242T、乳酸桿菌(ZaciococOT1S Iactis) ACCC 11092 和雙歧桿 ^Bifidobacterium sp) ACCC 11054分別進行單菌種培養得到的種子培養液接種于同 一培養基中，然后進行發酵罐培養，待培養液的pH值自然降至3. O 3. 5而得到的，該 制劑中光合細菌elegans) ACCC 10649 的菌數彡 5. OX 109cfu/ml，酵母菌 {Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ 的菌數彡 0. 1 X 109cfu/ml，納豆菌UaciBw1S natto Swamura )ACCC 10614 的菌數彡 5. OX 109cfu/ml，枯草芽孢桿菌(feci/A/s subtilIs subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的菌數彡 5. OX 109cfu/ml，乳酸桿菌 (Lactococcus lactis)ACCC 11092 的菌數彡 5. OX 109cfu/ml，雙歧桿菌(bifidobacterium sp) ACCC 11054 的菌數彡 5. 0X109cfu/ml。按上述方案，所述各菌種的種子培養液的重量百分數為光合細菌的種子培養液 25% 35%，酵母菌的種子培養液5% 15%，納豆菌的種子培養液15% 25%，枯草芽孢桿 菌的種子培養液15% 25%，乳酸桿菌的種子培養液5% 15%，雙歧桿菌的種子培養液 5% 15%。—種水產養殖用多菌種微生物復合制劑的制備方法，其特征在于包括如下步 驟(1)種子培養液的制備
光合細菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的種子培養液的制備將光合細菌 i Rhodoplanes elegant) ACCC 10649在無菌條件下接種到液體培養基中，所述的液體培養 基為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為酵母粉3. 0g、蛋白胨3. 0g、七水硫酸鎂0. 05g、氯 化鈣0. 3g，pH值調至6. 08 7. 0之間，放置于光培養箱內，28°C -30°C常規光照培養6 7 天，得到光合細菌菌數彡5. OX 109CfU/ml的種子培養液；
酵母菌(/7ZcAia fermentans lodder) ACCC 20319τ的種子培養液的制備將酵母菌 {Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ在無菌條件下接種到液體培養基中，所述的液 體培養基為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為無水硫酸鎂1. 0g、磷酸二氫鉀2. 0g、尿素 3. 0g、玉米漿1. 0g、硫酸錳0. 02g、硫酸亞鐵0. 2g，pH值調至5. 5，30°C _31°C培養4 5天， 得到酵母菌菌數彡0. 1 X IO9CfuAil的種子培養液；
納豆菌(^Bacillus natto Swamura) ACCC10614的種子培養液和枯草芽孢桿菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242T 的種子培養液的制 備將納豆菌 UaciWiAS natto Swamura )ACCC ^^^和枯草芽孢桿菌^^/^狀 subtilIs subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ分別在無菌條件下接種于液體培養 基中，所述的液體培養基均為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為蛋白胨10. 0g、牛肉膏 3. 0g、氯化鈉5. 0g, pH值調至7. 0，28°C 32°C，單菌種培養7 8天，分別得到納豆菌菌數 彡5. OX 109CfU/ml的納豆菌種子培養液和枯草芽孢桿菌菌數彡5. OX 109CfU/ml的枯草芽 孢桿菌種子培養液；
乳酸桿菌(Laciococcw1S lactis) ACCC 11092的種子培養液和雙歧桿菌 (.Bifidobacterium sp) ACCC 11054的種子培養液的制備將乳酸桿菌(Lactococcus lactis) ACCC 11092和雙歧桿菌(歷/ii/ο力acieri腫sp) ACCC 11054分別在無菌條件下 接種于液體培養基中，所述的液體培養基均為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為番茄 汁200. 0ml、可溶性淀粉0. 5g、蛋白胨15. 0g、氯化鈉5. 0g、酵母粉6. 0g、吐溫80 1. 0g、 葡萄糖20. 0g, pH值調至7. 2，30°C 35°C單菌種培養2 3天，分別得到乳酸桿菌菌數 彡5. OX 109Cfu/ml的乳酸桿菌種子培養液和雙歧桿菌菌數彡5. OX 109Cfu/ml的雙歧桿菌 種子培養液；
(2)水產養殖用多菌種微生物復合制劑的制備
分別將步驟(1)制備得到的光合細菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649、酵母菌 {Pichia fermentans lodder)ACCC 20319τ、納豆菌(feci/A/s natto 5kaffl ra)ACCC10614、 枯草芽孢桿菌(feciBws subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ、乳 酸桿菌(Zaciococc^s Iactis)ACCC 11092 和雙歧桿菌(歷Λ· /ο力acieri腫 sp)ACCC 11054 的種子培養液按其重量百分數為光合細菌的種子培養液25% 35%，酵母菌的種子培養 液5% 15%，納豆菌的種子培養液15% 25%，枯草芽孢桿菌的種子培養液15% 25%，乳 酸桿菌的種子培養液5% 15%，雙歧桿菌的種子培養液5% 15%，在無菌條件下分別接種 到同一液體培養基中，接種量為液體培養基重量的1 % 2 %，所述的液體培養基中各組分 在1. OL蒸餾水中的含量為紅糖50. 0g、蜂蜜10. Og,在溶氧度為5 %即發酵罐中氧氣的體 積與發酵液的體積比為5%的條件下，28°C 32°C密閉式靜置培養7 15天，使pH值降到 3. 0-3. 5 而成。
利用不同菌種的特性可相應地解決水產養殖中出現的問題，但是不同菌種微生物 復合時，各菌種之間存在相互排異、搶占碳源/氮源和相互侵蝕的現象。本發明將不同特性 的菌種分別發酵，得到種子培養液，然后按一定比例分別接種于同一培養基中混合培養，至 PH值自然降低到3. 0 3. 5而成，在該pH條件下，各菌種處于極端環境，迫使各菌種進入休 眠狀態，從而可避免不同菌種之間存在的相互排異、搶占碳/氮源和相互侵蝕的現象。在使 用時，將本發明制備的水產養殖用微生物復合制劑放入養殖水域后，由于環境的改變可使 得菌種解除休眠狀態，從而使各菌種充分發揮作用，解決實際水產養殖中出現的問題。本發明所選用的菌種的功能如下
(1)光合細菌elegans) ACCC 10649 消耗水體中多余的營養物質，產生 大量對水產動物的有益的營養物質，降低氨氮、硫化物等有害物質。(2)酵母菌(/YcAia fermentans lodder)ACCC 20319τ 大量產生動物必需的多種
氨基酸。(3)枯草芽抱桿菌(泡<^7/"5· subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242τ 產生蛋白酶、淀粉酶以及枯草菌素。(4)乳酸桿菌(Zactococcm Iactis)ACCC 11092 可分解糖產酸，抑制致病菌及腐 敗菌的繁殖，提高動物的餌料的吸收。(5)雙歧桿菌(歷/ii/ο力acterii/ sp)ACCC 11054 維護腸道正常細菌菌群平衡， 抑制病原菌的生長，在腸道內合成維生素、氨基酸和提高機體對鈣離子的吸收，產生維生素 Bi、B2、B6、B12及丙氨酸、纈氨酸、天冬氨酸和蘇氨酸等。(6)納豆菌UaciBw1S natto ^aswra) ACCC10614 調節腸道菌群，增強動物細胞 免疫放應，并能生成多種蛋白酶(特別是堿性蛋白酶)、糖化酶、脂肪酶、淀粉酶，降解植物性 飼料種某些復雜的碳水化合物，從而提高飼料的轉化率。本發明的有益效果
1.促進胃腸道內微生態環境的恢復。本制劑中的乳酸桿菌(LactococcmIactis)ACCC 11092、雙歧桿菌(召i/it/o力acieri腫 sp) ACCC 11054、納豆菌 UaciBw1S natto Swamura) ACCC 10614能夠在水產動物的腸道內迅速定殖，建立起有益菌的種群優勢，促進水產動 物的營養吸收，產生多種水產動物生長所必需的氨基酸、維生素和有機酸，并且雙歧桿菌 (.Bifidobacterium sp)ACCC 11054、納豆菌UaciBw1S aaiio )ACCC10614 能夠明 顯地增強機體的免疫功能，有效預防消化道感染、降低應急狀態；
2.凈化養殖水體。本制劑中的光合細菌elegans)KCCC10649、酵母菌 {Pi chia fermentans Iodder ) ACCC 20319τ 和枯草芽孢桿菌(feci/A/s subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242τ能及時分解在水產養殖過程中產生的動物排泄 物、代謝物和水體中殘留的餌料，明顯降低養殖水體的富營養程度，提高水體的溶氧度，同 時產生多種蛋白質，為水產動物提供了優質的天然餌料，也為浮游生物提供了生長所需要 的營養物質，從而進一步建立和完善養殖水體的微生態環境。
具體實施例方式下面用具體實施例對本發明做進一步的詳細說明，但本發明不僅僅局限于以 下實施例。
實施例1
水產養殖用微生物制劑的制備方法，包括如下步驟 (1)種子培養液的制備
光合細菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的種子培養液制備將光合細菌 iRhodoplanes elegans)KCCC 10649在無菌條件下，接種到液體培養基中，所述的液體培養 基中各組分在1. OL蒸餾水中的含量為酵母粉3. 0g、蛋白胨3. 0g、七水硫酸鎂0. 05克、氯 化鈣0. 3g，pH值調至6. 08 7. 0之間，放置于常規光培養箱內，28°C 30°C常規光照培養 6 7天，得到光合細菌菌數彡5. OX 109CfU/ml的種子培養液。酵母菌(/YcAia fermentans lodder) ACCC 20319τ的種子培養液的制備將酵母 菌(PicAia fermentans lodder) ACCC 20319τ在無菌條件下接種到液體培養基中，所述的 液體培養基中各組分在1. OL蒸餾水中的含量為無水硫酸鎂1. 0g、磷酸二氫鉀2. 0g、尿素 3. 0g、玉米漿1. 0g、硫酸錳0. 02g、硫酸亞鐵0. 2g，pH值調至5. 5，30°C _31°C培養4 5天， 得到酵母菌菌數彡0. IX IO9CfuAil的種子培養液。納豆菌UaciBw1S natto Swamura ) ACCC 10614種子培養液和枯草芽孢桿菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242T 種子培養液的制 備將納豆菌(feci/^As natto Swamura )ACCC ^^^和枯草芽孢桿菌⑶^以·/^^ subtilIs subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ分別在無菌條件下接種于液體培養 基中，所述的液體培養基為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為蛋白胨10.0g、牛肉膏 3. 0g、氯化鈉5. 0g, pH值調至7. 0，28°C 32°C單菌種培養7 8天，分別得到納豆菌菌數 彡5. OX 109CfU/ml的納豆菌種子培養液和枯草芽孢桿菌菌數彡5. OX 109CfU/ml的枯草芽 孢桿菌種子培養液。乳酸桿菌(ZaciococcM lactis) ACCC 11092種子培養液和雙歧桿菌 (.Bifidobacterium sp)ACCC 11054種子培養液的制備將乳酸桿菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092和雙歧桿菌(歷/ii/ο力acieri腫sp)ACCC 11054分別在無菌條件下接種于同一 液體培養基中，所述的液體培養基中各組分在1. OL蒸餾水中的含量為番茄汁200. OmL, 可溶性淀粉0. 5g、蛋白胨15. 0g、氯化鈉5. 0g、酵母粉6. 0g、吐溫80 1. 0g、葡萄糖20. 0g，pH 值調至7. 2，30°C 35°C單菌種培養2 3天，分別得到乳酸桿菌菌數彡5. 0 X 109cfu/ml的 乳酸桿菌種子培養液和雙歧桿菌菌數> 5. OX 109CfU/ml的雙歧桿菌種子培養液。(2)水產養殖用微生物制劑的制備
分別將步驟(1)制備得到的各菌種的種子培養液按照光合細菌(/？如而/^皿^ elegans)ACCC 10649 的種子培養液、酵母菌fermentans lodder)ACCC 20319τ 的 種子培養液、納豆菌UaciB^s natto ^aayra) ACCC10614的種子培養液、枯草芽孢桿菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的種子培養液、乳 酸菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092的種子培養液和雙歧桿菌(歷/ii/ο力acieriws sp) ACCC 11054的種子培養液的重量百分數為光合細菌的種子培養液25%，酵母菌的種子培 養液5%，納豆菌的種子培養液15%，枯草芽孢桿菌的種子培養液25%，乳酸桿菌的種子培養 液15%，雙歧桿菌的種子培養液15%，在無菌條件下分別接種到同一液體培養基中，接種量 為液體培養基重量的1 % 2 %，所述的液體培養基中各組分在1.0L蒸餾水中的含量為 紅糖50. 0g、蜂蜜10. 0g，在溶氧度為5 %即發酵罐中氧氣體積與發酵液體積比為5%的條件下，28°C 32°C密閉式靜置培養7 15天，使pH值自然降到3. 0-3. 5而成。經檢測，該水產養殖用微生物復合制劑為酸性，色澤金黃，pH值為3. 0-3. 5，其制 劑中活菌分別是光合細菌elegans) ACCC 10649的菌數彡5. OXlO9Cfu/ ml,酵母獻Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ 的菌數彡彡 0. lX109cfu/ml, 納豆菌(Macillus natto Swamura ) ACCC 10614 的菌數彡 5. 0 X 109cfu/ml，枯草芽孢 tf M^Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的菌數 彡 5. OX 109cfu/ml，乳酸桿菌(LaciococcWs lactis) ACCC 11092 的菌數彡 5. OXlO9Cfu/ ml，雙歧桿菌(召i/ii/o力acieri腫 sp) ACCC 11054 的菌數彡 5. OX 109cfu/ml。實施例2
(1)種子培養液的制備
采用本實施例1的方法，制得種子培養液；
(2)水產養殖用微生物制劑的制備
分別將步驟(1)制備得到的各菌種的種子培養液按照光合細菌(/？如而/^皿^ elegans)ACCC 10649 的種子培養液、酵母菌fermentans lodder)ACCC 20319τ 的 種子培養液、納豆菌UaciB^s natto ^aayra) ACCC10614的種子培養液、枯草芽孢桿菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的種子培養液、乳 酸菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092的種子培養液和雙歧桿菌(歷Λ· /ο力acieriws sp) ACCC 11054的種子培養液的重量百分數為光合細菌的種子培養液35%，酵母菌的種子培 養液15%，納豆菌的種子培養液25%，枯草芽孢桿菌的種子培養液15%，乳酸桿菌的種子培養 液5%，雙歧桿菌的種子培養液5%，在無菌條件下分別接種到同一液體培養基中，接種量為 液體培養基重量的1 % 2 %，所述的液體培養基中各組分在1.0L蒸餾水中的含量為紅 糖50. 0g、蜂蜜10. Og,在溶氧度為5 %即發酵罐中氧氣體積與發酵液體積比為5%的條件 下，28°C 32°C密閉式靜置培養7 15天，使pH值自然降到3. 0 3. 5而成。經檢測，該水產養殖用微生物復合制劑為酸性，色澤金黃，pH值為3. 0-3. 5， 其制劑中各菌種的活菌數分別是光合細菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的 菌數彡 5. 0X109cfu/ml,酵母獻Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ 的菌數 彡 0. IX 109cfu/ml，納豆菌 UaciBw1S natto Swamura )ACCC 10614 的菌數彡 5. 0 X 109cfu/ ml,枯草芽抱桿 Iif {Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的菌數彡 5. 0X109cfu/ml,乳酸桿菌(ZaciococOT1S Iactis) ACCC 11092 的菌數 彡 5. OX 109cfu/ml，雙歧桿菌(召i/ii/o力acieri腫 sp) ACCC 11054 的菌數彡 5. OXlO9Cfu/ ml ο實施例3
(1)種子培養液的制備
采用本實施例1的方法，制得種子培養液；
(2)水產養殖用微生物制劑的制備
分別將步驟(1)制備得到的各菌種的種子培養液按照光合細菌(/？如而/^皿^ elegans)ACCC 10649 的種子培養液、酵母菌fermentans lodder)ACCC 20319τ 的 種子培養液、納豆菌UaciB^s natto ^aayra) ACCC10614的種子培養液、枯草芽孢桿菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的種子培養液、乳酸菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092的種子培養液和雙歧桿菌(歷Λ· /ο力acieriws sp) ACCC 11054的種子培養液的重量百分數為光合細菌的種子培養液30%，酵母菌的種子培 養液10%，納豆菌的種子培養液20%，枯草芽孢桿菌的種子培養液20%，乳酸桿菌的種子培養 液10%，雙歧桿菌的種子培養液10%，在無菌條件下分別接種到同一液體培養基中，接種量 為液體培養基重量的1 % 2 %，所述的液體培養基中各組分在1.0L蒸餾水中的含量為 紅糖50. 0g、蜂蜜10. 0g，在溶氧度為5 %即發酵罐中氧氣體積與發酵液體積比為5%的條件 下，28°C -32°C密閉式靜置培養7-15天，使pH值自然降到3. 0 3. 5而成。經檢測，該水產養殖用微生物復合制劑為酸性，色澤金黃，pH值為3.0 3. 5， 其制劑中各菌種的活菌數分別是光合細菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的 菌數彡 5. 0X109cfu/ml,酵母獻Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ 的菌數 彡 0. IX 109cfu/ml，納豆菌 UaciBw1S natto Swamura )ACCC 10614 的菌數彡 5. 0 X 109cfu/ ml,枯草芽抱桿 Iif {Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242T 的菌數彡 5. 0X109cfu/ml,乳酸桿菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092 的菌數 彡 5. OX 109cfu/ml，雙歧桿菌(召i/ii/o力acieri腫 sp) ACCC 11054 的菌數彡 5. OXlO9Cfu/ ml ο應用實施例
采用本發明實施例1制備的水產養殖微生物復合制劑，分別在蝦池和魚池中實施如
下
以蝦池為例試驗蝦池面積2畝，放養自繁青蝦蝦苗5萬只/畝；對照蝦池面積2 畝，放養自繁青蝦蝦苗5萬只/畝。使用方法在試驗蝦池中，于蝦苗放養前10天，采用池水潑灑方法，按照500ml水 產養殖微生物復合制劑/畝，并將其稀釋200倍，每10天一次，全池潑灑三次。試驗結果試驗蝦池的溶解氧比對照池增加85% ；氨氮含量< 0. lmg/mL,比對照 蝦池平均下降65% ；總產比對照蝦池增加25kg，增幅15% ；商品率達90%，并且規格大，售 價高，而對照池商品率為54. 5%，并且規格小，相對售價低。以魚池為例
試驗魚池面積8畝，每畝放養草魚、鯽魚和鰱魚魚種共計90kg ；對照魚池面積8畝， 每畝放養草魚、鯽魚和鰱魚魚種共計90kg。使用方法在試驗魚池中，于魚種放養前10天，采用池水潑灑方法，按照500ml水 產養殖微生物復合制劑/畝，并將其稀釋200倍，每10天一次，全池潑灑三次。試驗結果試驗魚池的畝均凈產比對照魚池增100kg，增幅25% ；氨氮含量 (0. lmg/mL,亞硝酸鹽含量< 0. 02mg/mL,水體中COD降低50% 60%，水體富營養化有效降 低；浮游植物種群數增加30% 40%，部分藻類總數下降60% 80%，優化了水體中浮游植物 的種群結構，抑制了藻類的過度繁殖，建立和完善了養殖水體的微生態環境。
權利要求
一種水產養殖用多菌種微生物復合制劑，其特征在于它是由光合細菌(Rhodoplanes elegans)ACCC 10649、酵母菌(Pichia fermentans lodder)ACCC 20319T、納豆菌(Bacillus natto Swamura)ACCC 10614、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtills subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242T、乳酸桿菌(Lactococcus lactis)ACCC 11092和雙歧桿菌(Bifidobacterium sp)ACCC 11054分別進行單菌種培養得到的種子培養液接種于同一培養基中，然后進行發酵罐培養，待培養液的pH值自然降至3.0～3.5而得到的，該制劑中光合細菌(Rhodoplanes elegans)ACCC 10649的菌數≥5.0×109cfu/ml，酵母菌(Pichia fermentans lodder)ACCC 20319T的菌數≥0.1×109cfu/ml，納豆菌(Bacillus natto Swamura)ACCC 10614的菌數≥5.0×109cfu/ml，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtills subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242T的菌數≥5.0×109cfu/ml，乳酸桿菌(Lactococcus lactis)ACCC 11092的菌數≥5.0×109cfu/ml，雙歧桿菌(Bifidobacterium sp)ACCC 11054的菌數≥5.0×109cfu/ml。
2.根據權利要求1所述的水產養殖用多菌種微生物復合制劑，其特征在于所述各菌 種的種子培養液的重量百分數為光合細菌的種子培養液25% 35%，酵母菌的種子培養 液5% 15%，納豆菌的種子培養液15% 25%，枯草芽孢桿菌的種子培養液15% 25%，乳 酸桿菌的種子培養液5% 15%，雙歧桿菌的種子培養液5% 15%。
3.根據權利要求1所述的水產養殖用多菌種微生物復合制劑的制備方法，其特征在 于包括如下步驟(1)種子培養液的制備光合細菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的種子培養液的制備將光合細菌 i Rhodoplanes elegant) ACCC 10649在無菌條件下接種到液體培養基中，所述的液體培養 基為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為酵母粉3. 0g、蛋白胨3. 0g、七水硫酸鎂0. 05g、氯 化鈣0. 3g，pH值調至6. 08 7. 0之間，放置于光培養箱內，28°C 30°C常規光照培養6 7天，得到光合細菌菌數彡5. OX 109CfU/ml的種子培養液；酵母菌(/7ZcAia fermentans lodder) ACCC 20319τ的種子培養液的制備將酵母菌 {Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ在無菌條件下接種到液體培養基中，所述的液 體培養基為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為無水硫酸鎂1. 0g、磷酸二氫鉀2. 0g、尿素 3. 0g、玉米漿1. 0g、硫酸錳0. 02g、硫酸亞鐵0. 2g，pH值調至5. 5，30°C _31°C培養4 5天， 得到酵母菌菌數彡0. IX IO9CfuAil的種子培養液；納豆菌(^Bacillus natto Swamura) ACCC10614的種子培養液和枯草芽孢桿菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al )ACCC 10242T 的種子培養液的制 備將納豆菌(feci/^As natto Swamura )ACCC ^^^和枯草芽孢桿菌⑶^以·/^^ subtilIs subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ分別在無菌條件下接種于液體培養 基中，所述的液體培養基均為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為蛋白胨10. 0g、牛肉膏 3. 0g、氯化鈉5. 0g, pH值調至7. 0，28°C 32°C，單菌種培養7 8天，分別得到納豆菌菌數 彡5. OX 109CfU/ml的納豆菌種子培養液和枯草芽孢桿菌菌數彡5. OX 109CfU/ml的枯草芽 孢桿菌種子培養液；乳酸桿菌(Laciococcw1S lactis) ACCC 11092的種子培養液和雙歧桿菌 (.Bifidobacterium sp) ACCC 11054的種子培養液的制備將乳酸桿菌(Lactococcuslactis) ACCC 11092和雙歧桿菌(歷/ii/ο力acieri腫sp) ACCC 11054分別在無菌條件下 接種于液體培養基中，所述的液體培養基均為各組分在1. OL蒸餾水中的含量為番茄 汁200. 0ml、可溶性淀粉0. 5g、蛋白胨15. 0g、氯化鈉5. 0g、酵母粉6. 0g、吐溫80 1. 0g、 葡萄糖20. 0g, pH值調至7. 2，30°C 35°C單菌種培養2 3天，分別得到乳酸桿菌菌數 彡5. OX 109Cfu/ml的乳酸桿菌種子培養液和雙歧桿菌菌數彡5. OX 109Cfu/ml的雙歧桿菌 種子培養液；(2)水產養殖用多菌種微生物復合制劑的制備分別將步驟(1)制備得到的光合細菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649、酵母菌 {Pichia fermentans lodder)ACCC 20319τ、納豆菌(feci/A/s natto 5kaffltfra)ACCC10614、 枯草芽孢桿菌(feciBws subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242T、乳 酸桿菌(Zaciococc^s Iactis)ACCC 11092 和雙歧桿菌(歷Λ· /ο力acieri腫 sp)ACCC 11054 的種子培養液按其重量百分數為光合細菌的種子培養液25% 35%，酵母菌的種子培養 液5% 15%，納豆菌的種子培養液15% 25%，枯草芽孢桿菌的種子培養液15% 25%，乳 酸桿菌的種子培養液5% 15%，雙歧桿菌的種子培養液5% 15%，在無菌條件下分別接種 到同一液體培養基中，接種量為液體培養基重量的1 % 2 %，所述的液體培養基中各組分 在1. OL蒸餾水中的含量為紅糖50. 0g、蜂蜜10. 0g，在溶氧度為5 %即發酵罐中氧氣的體 積與發酵液的體積比為5%的條件下，28°C 32°C密閉式靜置培養7 15天，使pH值降到 3. 0-3. 5 而成。
全文摘要
本發明涉及一種水產養殖用多菌種微生物復合制劑及其制備方法。一種水產養殖用多菌種微生物復合制劑，其特征在于它是由光合細菌、酵母菌、納豆菌、枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌分別進行單菌種培養得到的種子培養液接種于同一培養基中，然后進行發酵罐培養，待培養液的pH值自然降至3.0～3.5而得到的，該制劑中酵母菌的菌數≥0.1×109cfu/ml，其余各菌種的菌數均≥5.0×109cfu/ml。該水產養殖用多菌種微生物復合制劑同時可以改善水產動物的生態環境，防治疾病，降低動物應急狀態，提高水產動物品質，縮短上市周期。
文檔編號C12N1/00GK101974434SQ201010540308
公開日2011年2月16日 申請日期2010年11月11日 優先權日2010年11月11日
發明者劉志強, 司金安, 唐清池, 尹寶華, 李忠宏, 李旭光, 王學賓, 王建程, 王照, 白帥, 胡偉, 范道佳, 郭金保, 郭銀保, 陸勤 申請人:唐清池