專利名稱：一種從大白菜中提取sod的方法
技術領域：
本發明涉及一種生物化學制品的制作方法，具體涉及一種從大白菜中提取SOD的方法。
背景技術：
SOD是超氧化物歧化酶的簡稱，是一種特效抗衰老酶制劑，具有抗炎、抗病毒、抗輻射、抗腫瘤等作用，能維護人體正常生理機能，增強免疫力，預防心腦血管等疾病，延緩衰老，被廣泛應用于化妝品、美容、醫藥、保健品領域，在國內外都受到高度重視。傳統的SOD 主要從動物血中提取，不僅原材料嚴重受限，而且還存在原材料污染的隱患，以及提取SOD 后的廢水、殘渣所造成的污染問題，傳統的SOD提取工藝復雜，價格十分昂貴，嚴重影響SOD 的應用及系列產品開發。在現代經濟快速發展的推動下，各行業對SOD的純度和數量都在不斷提高，傳統工藝生產的SOD已遠遠不能滿足市場的需求，尋求更為廣泛的提取原材料及提取更高純度的SOD產品已是大勢所趨。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是，克服以上所述缺陷，提供一種原材料易得、制作工藝簡單、綠色環保且所得產品純度高的從大白菜中提取SOD的方法。為了解決以上所述技術問題，本發明一種從大白菜中提取SOD的方法，包括以下步驟a.原材料處理將大白菜清除雜物、雜質及枯萎菜葉；b.粉碎、攪拌將處理好的大白菜放入粉碎機粉碎成糊狀后放入攪拌機內，加入與大白菜等重量的純凈水攪拌均勻，得初菜糊；c.加熱在初菜糊內加入大白菜重量的3-3.5%的工業鹽，加熱至63_67°C，保持恒溫15-20分鐘后，放出，得次菜糊；d.脫水、冷卻將次菜糊放入脫水機內脫水，得菜汁，將菜汁冷卻至20_25°C ；e.超濾將經過冷卻處理后的菜汁放入超濾機超濾三次，去掉變性的雜蛋白和過濾掉菜汁中的鹽分，得到菜汁的濃縮液；f.沉淀濃縮液里分別以15克/升的量加入99%的氯化鈉和99%的硫酸銅，攪拌至完全溶解，放入離心機以5000轉/分鐘的轉速離心20-25分鐘，進行雜質分離，取回離心后的液體，用99 %的氫氧化鈉將PH值調至6. 0-6. 2，再用99 %的磷酸氫二鉀將PH值調到 7. 6-7. 8，再離心20-25分鐘除去雜質，取回液體，用99%的氫氧化鈉將PH值調至4. 8-5,按每升濃縮液加入277克45%的硫酸銨，攪拌至完全溶解后放入零下10-15°C的冰柜內，3小時后取出離心，取回液體，按每升濃縮液加入385克90%的硫酸銨，攪拌至溶解后放入零下 10-15°C的冰柜，存放8-10小時后取出，離心20分鐘，取回沉淀物，得凝膠狀的初級SOD ；g.離心、濃縮將初級SOD以1 12的量加入純凈水溶解后，用99%的磷酸氫二鉀將PH值調至7. 6-7. 8，之后進行離心，取回水溶液，再經微型超濾機超濾8-10小時，并在超濾過程中以1 30的量加入純凈水，排除變質的蛋白和硫酸銨分子，得到SOD濃縮液；h.冷凍、干燥將SOD濃縮液放入低于零下25度的冰柜內冷凍10-12小時，待完全凍結后放入冷凍干燥機進行干燥處理二4小時后即得粉末狀的SOD產品；i.對粉末狀SOD進行酶活性檢驗，符合要求即得成品S0D，打包存放入冷凍庫。作為優選，本發明在所述步驟a中，大白菜的種植過程中不可使用催長劑；在所述步驟c中，加熱方式為蒸汽加熱，并在加熱的同時進行攪拌；在所述步驟d中，冷卻方法為 菜汁從脫水機導管流出后進入冷卻管，冷卻管放在不斷循環的常溫水中進行冷卻；在所述步驟e中，超濾機三次超濾的速度分別為80方/小時、20方/小時和5方/小時；在所述步驟g中，超濾的速度為0. 6方/小時；在所述步驟g中，所述純凈水的電導率小于6，其PH 值用99%的磷酸氫二鉀調至7. 6-7. 8。本發明取經驗收達到要求的大白菜原料，通過篩選去雜后，將大白菜放入粉碎機粉碎成糊狀后放入攪拌混合機，加入等量的純凈水將其攪拌均勻后，一次性加入3-3. 5%的工業鹽，對SOD起保護作用，加熱至63-67度恒溫15-20分鐘后放出，因為蛋白質在55度至 70度開始變性，SOD在75度開始變性，控制好溫度就能很好的保證SOD的活性。次菜糊經濾袋脫水機脫出菜汁，經冷卻池冷卻至20-25度，經過三道不同分子量的超濾機濃縮后放出， 其主要目的是去掉變性的雜蛋白和過濾掉菜汁中的鹽分。在濃縮液里加入氯化鈉，可以減少濃縮液的溶解量，便于離心出雜質，加入硫酸銅可以起到穩定酶活性的作用。因為菜汁濃縮液呈酸性，用氫氧化鈉調到堿性，再用磷酸氫二鉀沉淀金屬離子后，用離心機除去雜質， 再用硫酸銨沉淀出S0D，離心出SOD產品，將水性SOD用純凈水溶解后再經過一次微型超濾機濃縮8-10小時，排除變質的蛋白和硫酸銨分子，得到SOD濃縮液，將SOD濃縮液放入低于零下25度的冰柜內冷凍10-12小時，待完全凍結后放入冷凍干燥機進行干燥處理，M小時后得粉末狀的SOD初品，經檢驗其酶的活性，達到300萬至400萬個活性單位的，即為成品， 打包放入冷凍庫。本發明的有益效果與現有的提取SOD的加工方法相比，本發明具有諸多優點1、 原材料易得。人工種植大白菜，簡單容易，生長周期短，可源源不斷地提供原材料，同時為大白菜種植戶帶來更多經濟收入。2、制作工藝簡單，生產成本低。3、大白菜種植環保，加工過程環保，不會造成提取后殘渣廢水對環境的污染，本發明工藝所產生的殘渣可做飼料，廢水可用于養殖。4、所得產品純度高。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步詳細說明。本發明一種從大白菜中提取SOD的方法，包括以下步驟a.原材料處理將大白菜清除雜物、雜質及枯萎菜葉；b.粉碎、攪拌將處理好的大白菜放入粉碎機粉碎成糊狀后放入攪拌機內，加入與大白菜等重量的純凈水攪拌均勻，得初菜糊； c.加熱在初菜糊內加入大白菜重量的3-3. 5 %的工業鹽，加熱至63-67 °C，保持恒溫15-20分鐘后，放出，得次菜糊；d.脫水、冷卻將次菜糊放入脫水機內脫水，得菜汁，將菜汁冷卻至20_25°C ；e.超濾將經過冷卻處理后的菜汁放入超濾機超濾三次，去掉變性的雜蛋白和過濾掉菜汁中的鹽分，得到菜汁的濃縮液；f.沉淀濃縮液里分別以15克/升的量加入99 %的氯化鈉和99 %的硫酸銅，攪拌至完全溶解后，放入離心機以5000轉/分鐘的轉速離心20-25分鐘，進行雜質分離，取回離心后的液體，用99 %的氫氧化鈉將PH值調至6. 0-6. 2，再用99 %的磷酸氫二鉀將PH 值調到7. 6-7. 8，再離心20-25分鐘除去雜質，取回液體，用99%的氫氧化鈉將PH值調至 4. 8-5，以277克/升的量加入45%硫酸銨，攪拌至完全溶解后放入零下10_15°C的冰柜內， 3小時后取出離心，取回液體，以385克/升的量加入90%的硫酸銨，攪拌至溶解后放入零下10-15°C的冰柜，存放8-10小時后取出，離心20分鐘，取回沉淀物，得凝膠狀的初級SOD ；g.離心、濃縮將初級SOD以1 12的量加入純凈水溶解后，用99%的磷酸氫二鉀將PH值調至7. 6-7. 8，之后進行離心，取回水溶液，再經微型超濾機超濾8-10小時，并在超濾過程中以1 30的量加入純凈水，排除變質的蛋白和硫酸銨分子，得到SOD濃縮液；h.冷凍、干燥將SOD濃縮液放入低于零下25度的冰柜內冷凍，待完全凍結后放入冷凍干燥機進行干燥處理二4小時后即得粉末狀的SOD產品；i.對粉末狀SOD進行酶活性檢驗，符合要求即得成品S0D，打包存放入冷凍庫。作為優選，本發明在所述步驟a中，大白菜的種植過程中不可使用催長劑；在所述步驟c中，加熱方式為蒸汽加熱，并在加熱的同時進行攪拌；在所述步驟d中，冷卻方法為 菜汁從脫水機導管流出后進入冷卻管，冷卻管放在不斷循環的常溫水中進行冷卻；在所述步驟e中，三次超濾的速度分別為80方/小時、20方/小時和5方/小時；在所述步驟g 中，超濾的速度為0. 6方/小時；在所述步驟g中，所述純凈水的電導率小于6，其PH值用 99%的磷酸氫二鉀調至7. 6-7. 8。實施例一1、采用純天然生長的大白菜1000kg，清除雜物、雜質及枯萎菜葉；2、將處理好的大白菜放入粉碎機粉碎成糊狀后放入攪拌機內，加入IOOOkg的純凈水攪拌均勻，得初菜糊；3、在初菜糊內加入30kg的工業鹽，以蒸汽加熱同時進行攪拌，加熱至63°C，保持恒溫15分鐘后，放出，得次菜糊；4、將次菜糊放入脫水機內脫出菜汁，菜汁從脫水機導管流出后進入冷卻管，冷卻管為不銹鋼管彎成的S型，放在不斷循環的常溫水中進行冷卻，將菜汁冷卻至20°C ；5、將經過冷卻處理后的菜汁放入超濾機分別以80方/小時、20方/小時和5方/ 小時的速度超濾三次，這樣，就可超濾掉分子量小于80000、30000和30000的物質，去掉變性的雜蛋白和過濾掉菜汁中的鹽分，得到菜汁的濃縮液；6、根據濃縮液的多少，按每升15克的量分別加入99%的氯化鈉和99%的硫酸銅， 攪拌至完全溶解，放入離心機以5000轉/分鐘的轉速離心20分鐘，進行雜質分離，取回離心后的液體，用99 %的氫氧化鈉將液體PH值調至6. 0，再用99 %的磷酸氫二鉀將液體PH值調到7. 6，再離心20分鐘除去雜質，取回液體，用99%的氫氧化鈉將PH值調至4. 8，根據液體的多少，以277克/升的量加入45%硫酸銨，攪拌至完全溶解后放入零下10°C的冰柜內， 存放3小時后取出離心，取回液體，根據液體的多少，以385克/升的量加入90%的硫酸銨， 攪拌至溶解后放入零下10°C的冰柜，存放8小時后取出，離心20分鐘，取回沉淀物，得凝膠狀的初級SOD ；
5
7、在初級SOD內加入其12倍體積的純凈水溶解后，用99%的磷酸氫二鉀將PH值調至7. 6，之后進行離心，取回水溶液，再經微型超濾機以0. 6方/小時的速度超濾8小時， 超濾掉分子量小于20000的物質，在超濾過程中加入液態SOD的30倍體積的純凈水，該純凈水要求其電導率小于6，其PH值用99%的磷酸氫二鉀調至7. 6，這樣，排除變質的蛋白和硫酸銨分子，得到SOD濃縮液；8、將SOD濃縮液放入低于零下25度的冰柜內冷凍，待完全凍結后放入冷凍干燥機進行干燥處理二4小時后即得粉末狀的SOD產品；9、對粉末狀SOD進行酶活性檢驗，符合要求即得成品S0D，打包存放入冷凍庫。實施例二 1、2、同實施例一；3、在初菜糊內加入35kg的工業鹽，以蒸汽加熱同時進行攪拌，加熱至67°C，保持恒溫20分鐘后，放出，得次菜糊；4、本步驟同實施例一，只是將菜汁冷卻至25°C ；5、同實施例一；6、根據濃縮液的多少，按每升15克的量分別加入99%的氯化鈉和99%的硫酸銅， 攪拌至完全溶解后，放入離心機以5000轉/分鐘的轉速離心25分鐘，進行雜質分離，取回離心后的液體，用99%的氫氧化鈉將PH值調至6. 2，再用99%的磷酸氫二鉀將PH值調到 7. 8，再離心25分鐘除去雜質，取回液體，用99%的氫氧化鈉將PH值調至5. 0，以277克/ 升的量加入45%硫酸銨，攪拌至完全溶解后放入零下15°C的冰柜內，3小時后取出離心，取回液體，以385克/升的量加入90%的硫酸銨，攪拌至溶解后放入零下15°C的冰柜，存放10 小時后取出，離心20分鐘，取回沉淀物，得凝膠狀的初級SOD ；7、在初級SOD內加入其12倍體積的純凈水溶解后，用99%的磷酸氫二鉀將PH值調至7. 6，之后進行離心，取回水溶液，再經微型超濾機以0. 6方/小時的速度超濾10小時， 超濾掉分子量小于20000的物質，在超濾過程中加入液態SOD的30倍體積的純凈水，該純凈水要求其電導率小于6，其PH值用99%的磷酸氫二鉀調至7. 8，這樣，排除變質的蛋白和硫酸銨分子，得到SOD濃縮液；8、9、同實施例一。實施例三1、2、同實施例一；3、在初菜糊內加入32kg的工業鹽，以蒸汽加熱同時進行攪拌，加熱至65°C，保持恒溫18分鐘后，放出，得次菜糊；4、本步驟同實施例一，只是將菜汁冷卻至23°C ；5、同實施例一；6、根據濃縮液的多少，按每升15克的量分別加入99%的氯化鈉和99%的硫酸銅， 攪拌至完全溶解后，放入離心機以5000轉/分鐘的轉速離心25分鐘，進行雜質分離，取回離心后的液體，用99%的氫氧化鈉將PH值調至6. 1，再用99%的磷酸氫二鉀將PH值調到 7. 7，再離心23分鐘除去雜質，取回液體，用99 %的氫氧化鈉將PH值調至4. 9，以277克/ 升的量加入45%硫酸銨，攪拌至完全溶解后放入零下13°C的冰柜內，3小時后取出離心，取回液體，以385克/升的量加入90%的硫酸銨，攪拌至溶解后放入零下13°C的冰柜，存放9小時后取出，離心20分鐘，取回沉淀物，得凝膠狀的初級SOD ； 7、在初級SOD內加入其12倍體積的純凈水溶解后，用99%的磷酸氫二鉀將PH值調至7. 7，之后進行離心，取回水溶液，再經微型超濾機以0. 6方/小時的速度超濾9小時， 超濾掉分子量小于20000的物質，在超濾過程中加入液態SOD的30倍體積的純凈水，該純凈水要求其電導率小于6，其PH值用99%的磷酸氫二鉀調至7. 7，這樣，排除變質的蛋白和硫酸銨分子，得到SOD濃縮液；8、9、同實施例一。
用本發明工藝提取的SOD主要成分可達如下指標
單位體積酶活力(U/mg):3000-4000
蛋白質含量(％ )53-80
水份< 3%
PH (25 0C )5. 8-6. 5
分子量32000
汞含量< IPPM
鉛含量< 5PPM
砷含量< 5PPM
細菌總數(只/g)< 80
金黃色葡萄球菌不得檢出
糞大腸菌群不得檢出
綠膿植桿菌不得檢出。
權利要求
1. 一種從大白菜中提取SOD的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟a.原材料處理將大白菜清除雜物、雜質及枯萎菜葉；b.粉碎、攪拌將處理好的大白菜放入粉碎機粉碎成糊狀后放入攪拌機內，加入與大白菜等重量的純凈水攪拌均勻，得初菜糊；c.加熱在初菜糊內加入大白菜重量的3-3.5%的工業鹽，加熱至63-67°C，保持恒溫 15-20分鐘后，放出，得次菜糊；d.脫水、冷卻將次菜糊放入脫水機內脫水，得菜汁，將菜汁冷卻至20-25°C；e.超濾將經過冷卻處理后的菜汁放入超濾機超濾三次，去掉變性的雜蛋白和過濾掉菜汁中的鹽分，得到菜汁的濃縮液；f.沉淀濃縮液里分別以15克/升的量加入99%的氯化鈉和99%的硫酸銅，攪拌至完全溶解后，放入離心機以5000轉/分鐘的轉速離心20-25分鐘，進行雜質分離，取回離心后的液體，用99 %的氫氧化鈉將PH值調至6. 0-6. 2，再用99 %的磷酸氫二鉀將PH值調到 7. 6-7. 8，再離心20-25分鐘除去雜質，取回液體，用99%的氫氧化鈉將PH值調至4. 8-5. 0， 以277克/升的量加入45%硫酸銨，攪拌至完全溶解后放入零下10-15°C的冰柜內，3小時后取出離心，取回液體，以385克/升的量加入90%的硫酸銨，攪拌至溶解后放入零下 10-15°C的冰柜，存放8-10小時后取出，離心20分鐘，取回沉淀物，得凝膠狀的初級SOD ；g.離心、濃縮將初級SOD以1 12的量加入純凈水溶解，用99%的磷酸氫二鉀將PH 值調至7. 6-7. 8，之后進行離心，取回水溶液，再經微型超濾機超濾8-10小時，并在超濾過程中以1 30的量加入純凈水，排除變質的蛋白和硫酸銨分子，得到SOD濃縮液；h.冷凍、干燥將SOD濃縮液放入低于零下25°C的冰柜內冷凍，待完全凍結后放入冷凍干燥機進行干燥處理二4小時后即得粉末狀的SOD產品；i.對粉末狀SOD進行酶活性檢驗，符合要求即得成品S0D，打包存放入冷凍庫。
2.根據權利要求1所述一種從大白菜中提取SOD的方法，其特征在于，在所述步驟a 中，大白菜的種植過程中不可使用催長劑。
3.根據權利要求1所述一種從大白菜中提取SOD的方法，其特征在于，在所述步驟c 中，加熱方式為蒸汽加熱，并在加熱的同時進行攪拌。
4.根據權利要求1所述一種從大白菜中提取SOD的方法，其特征在于，在所述步驟d 中，冷卻方法為菜汁從脫水機導管流出后進入冷卻管，冷卻管放在不斷循環的常溫水中進行冷卻。
5.根據權利要求1所述一種從大白菜中提取SOD的方法，其特征在于，在所述步驟e 中，超濾機三次超濾的速度分別為80方/小時、20方/小時和5方/小時。
6.根據權利要求1所述一種從大白菜中提取SOD的方法，其特征在于，在所述步驟g 中，超濾機超濾的速度為0. 6方/小時。
7.根據權利要求1所述一種從大白菜中提取SOD的方法，其特征在于，在所述步驟g 中，所述純凈水的電導率小于6，其PH值用99%的磷酸氫二鉀調至7. 6-7. 8。
全文摘要
本發明公開了一種從大白菜中提取SOD的方法，包括以下步驟原材料處理→粉碎、攪拌→加熱→脫水、冷卻→超濾→沉淀→離心、濃縮→冷凍、干燥→酶活性檢驗→包裝入庫。本發明具有諸多優點1、原材料易得。人工種植大白菜，簡單容易，生長周期短，可源源不斷地提供原材料，同時為大白菜種植戶帶來更多經濟收入。2、制作工藝簡單。3、綠色環保。大白菜種植環保、加工過程環保、新型工藝不造成提取后殘渣廢水對環境所造成污染，殘渣可做飼料，廢水用于養殖。4、所得產品純度高。
文檔編號C12N9/02GK102154232SQ20101055431
公開日2011年8月17日 申請日期2010年11月23日 優先權日2010年11月23日
發明者郭雨忠 申請人:郭雨忠