蛋白酶變體的用途的制作方法

專利名稱：蛋白酶變體的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及新型枯草桿菌酶(subtilase)變體的用途，其相對于親本枯草桿菌酶在一個或多個性質中呈現改變，所述性質包括洗滌性能，熱穩定性，儲藏穩定性或催化活性。本發明的變體特別適用于例如清潔硬表面如洗碟。因此，本發明還涉及包含本發明變體的清潔和洗碟組合物，包括自動洗碟組合物。本發明還涉及本發明的組合物用于去除蛋白性污跡，特別是煮蛋污跡的用途。
背景技術：
在去污劑工業中，酶應用于在洗滌制劑中已超過30年。用于此類制劑的酶包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶、甘露糖苷酶以及其他酶，或其混合物。商業上，最重要的酶是蛋白酶。越來越多數量的商業上使用的蛋白酶是天然出現的野生型蛋白酶的蛋白質工程變體，例如 DURAZYM(R)、RELASE#, ALCALASEt, SAVINASE1；
、DURALAW, IiSPIiRASLk , OVOZYMli! , RELASE (R)和KANNASEs (Novozymes A/S)、AXAPEM(R) (Gist-Brocades N. V. )、PURAFECT (R)(Genencor International、Inc. )、MAXATASE 、MAXACAL 、MAXAPEM 、PROPERASE 、PURAFECT 、PURAFECT OxP 、FN2 、FN3 和 FM (Genencor International、Inc.)。此外，本領域中描述了許多變體，如WO 04/041979 (NOVOZYMES A/S)中描述了相對于親本枯草桿菌酶在例如洗滌性能、熱穩定性、儲藏穩定性或催化活性中呈現改變的枯草桿菌酶變體。所述變體適用于例如清潔或去污劑組合物。已描述了許多有用的蛋白酶變體，其中許多在不同去污劑中具有改善的活性、穩定性和溶解性。然而，多種因素使得蛋白酶的進一步改善是有利的。在洗碟中，一種特別的問題是去除蛋白性污物，如蛋污跡，且已進行了數種嘗試提供對此種污跡有效的蛋白酶或蛋白酶變體。因此本發明的一個目標是提供與其親本酶相比具有改善的性能的枯草桿菌蛋白酶(subtilinsin)的變體。

發明內容
本發明涉及親本枯草桿菌蛋白酶的變體的用途，所述親本可為如示于SEQ IDNO: I的枯草桿菌蛋白酶。本發明的變體與親本枯草桿菌蛋白酶相比具有至少一種改善的性質，所述親本可為如示于SEQ ID N0:1的枯草桿菌蛋白酶。具體而言，本發明的變體在硬表面洗滌如洗碟洗滌中具有改善的洗滌性能，在本發明的一個方面，所述變體具有改善的蛋去除能力，如改善的從硬表面去除煮蛋(boiled egg)的能力。
因此，本發明的一個方面涉及枯草桿菌蛋白酶變體在硬表面清潔中的用途，其中所述變體包含親本枯草桿菌蛋白酶的取代91 、151\684、2451 和218 {D，G，V}，且其中所述位置對應于SEQ ID N0:2[BPN’ ]的成熟多肽的位置。在一個具體實施方案中，在位置218的取代為用D的取代。另一個實施方案涉及變體在硬表面清潔中的用途，所述變體進一步包含至少一種下述修飾G61 {D, E}，N62 {D, E}，N76 {D, E} ;*97aG，A98 {G, S}，S99G, S101G, H120 {N, Q, V, D}，P131 {T, S}，Q137H, A194P, A228V, A230V, N261D。一個具體實施方案涉及變體在硬表面清潔中的用途，所述變體包含下述取代S9R、A15T、V68A、N218D 和 Q245R。
在一個進一步的實施方案中，所述變體進一步包括一種或多種下述取代G61E、A98S 和 S99G。因此，一個具體實施方案涉及變體在硬表面清潔中的用途，所述變體包含下述取代S9R、A15T、G61E、V68A、A98S、S99G、N218D 和 Q245R。在另一個實施方案中，所述親本枯草桿菌蛋白酶是包含與SEQ ID N0:1具有至少80%同一性的氨基酸序列的多肽。一個進一步的實施方案涉及變體在硬表面清潔中的用途，所述變體具有與SEQ IDNO:3具有至少80%同一性的多肽序列。一個進一步的實施方案涉及變體在硬表面清潔中的用途，所述變體具有與SEQ IDNO:4具有至少80%同一性的多肽序列。還在另一個實施方案中，所述變體與親本枯草桿菌蛋白酶相比，具有一種或多種改善的性質，包括如硬表面清潔例如洗碟中改善的洗漆性能等改善的性質。在本發明的一個方面，所述變體具有改善的蛋去除能力，如改善的從硬表面去除煮蛋的能力。一個進一步的實施方案涉及包含本發明的變體的去污劑或洗碟組合物，和此種組合物用于清潔硬表面，特別是洗碟中的用途。本發明的一個方面涉及包含本發明的變體的組合物用于去除蛋白性污跡，特別是煮蛋污跡的用途。在一個進一步的實施方案中，提供了用于從硬表面或衣物去除蛋白性污跡，特別是煮蛋污跡的方法，所述方法包括將含有蛋污跡的硬表面或含有蛋污跡的衣物與清潔或去污劑組合物相接觸，所述組合物優選為包含枯草桿菌蛋白酶變體的洗衣或洗碟組合物，所述變體包含親本枯草桿菌蛋白酶中的取代9R、15T、68A、245R和218 {D, G，V}，且其中所述位置對應于SEQ ID N0:2[BPN’ ]的成熟多肽的位置。


圖I和2闡明了具有不同濃度的Savinase，和變體V1(S9R，A15T, V68A, Q245R)，V2(S9R, A15T, G61E, V68A, A98S, S99G, Q245R)， V3(S9R, A15T, V68A, N218D, Q245R)和V4(S9R, A15T，G61E，V68A，A98S，S99G，N218D, Q245R)的兩種不同的去污劑的強度差值(delta intensity)。發明詳述定義
蛋白酶解活性該術語在本文中定義為能夠通過蛋白酶解降解蛋白，其為通過水解在多肽鏈中將氨基酸連接在一起形成蛋白的肽鍵而進行的蛋白分解代謝。因此，蛋白由具有蛋白酶解活性的蛋白酶降解為氨基酸。術語“蛋白酶活性”和“蛋白酶解活性”可互換使用。亦參見下文中對“蛋白酶”的定義。變體術語“變體”在本文中定義為在一個或多個(幾個)特定位置包含改變或修飾，如取代、插入和/或缺失一個或多個(幾個)氨基酸殘基的多肽。經改變的多核苷酸經過人為干預通過修飾多核苷酸序列而得到。所述變體可為枯草桿菌蛋白酶變體，即枯草桿菌蛋白酶的變體，例如SEQ ID NO: I中公開的多核苷酸序列或其同源序列。術語“蛋白酶變體”和“枯草桿菌蛋白酶變體”可互換使用。本發明的變體優選具有蛋白酶活性或蛋白酶解活性。術語“一個或多個”，“一個或幾個”和“至少一個”可互換使用。 修飾本文中使用的術語“修飾”定義為包括枯草桿菌酶的化學修飾以及編碼親本蛋白酶的DNA的遺傳操作。所述修飾可為在感興趣的氨基酸處或感興趣的氨基酸中進行的氨基酸側鏈的替代、取代、缺失和/或插入。野生型酶術語“野生型”蛋白酶變體表示由天然存在的微生物如見于自然界的細菌、酵母或絲狀真菌表達的蛋白酶變體，即，編碼蛋白酶變體的多肽并不是經過人為干預通過修飾多核苷酸序列而得到的。親本酶術語“親本”蛋白酶變體，如“親本”枯草桿菌蛋白酶變體用于本文指一種蛋白酶，如枯草桿菌蛋白酶，本發明中的酶變體是對其進行修飾，例如，取代、插入、缺失和/或截短(truncation)而產生的。該術語亦指變體用以比較和比對的多肽。所述親本可為天然存在(野生型)多肽或變體。舉例而言，所述親本多肽可為天然存在的多肽的變體，其氨基酸序列經修飾或改變。親本亦可為等位基因變體，其為由占據相同染色體基因座的基因的兩種或更多可選形式中的任一種所編碼的多肽。分離的變體或多肽術語“分離的變體”或“分離的多肽”用于本文指一種自來源分離的變體或多肽。在一個方面，該變體或多肽至少是1%純的，優選至少是5%純的，更優選至少是10%純的，更優選至少是20%純的，更優選至少是40%純的，更優選至少是60%純的，甚至更優選至少是80%純的，且最優選至少是90%純的，其純度由SDS-PAGE確定。基本上(substantially)純的變體或多肽術語“基本上純的變體”或“基本上純的多肽”在本文中指一種多肽制備物，其包含至多10%，優選至多8%，更優選至多6%，更優選至多5%，更優選至多4%，更優選至多3%，甚至更優選至多2%，最優選至多1%，且甚至最優選至多O. 5%以重量計的與其天然或重組結合的其他多肽物質。因此，優選地，所述基本上純的變體或多肽是以存在于該制備物中的總多肽物質重量計至少92%純的，優選至少94%純的，更優選至少95%純的，更優選至少96%純的，更優選至少96%純的，更優選至少97%純的，更優選至少98%純的，甚至更優選至少99%純的，最優選至少99. 5%純的，且甚至最優選100%純的。本發明的變體和多肽優選為基本上純的形式。其可通過，例如，以公知的重組方法或以經典的純化方法制備該變體或多肽而達成。成熟多肽術語“成熟多肽”在本文中定義為具有蛋白酶變體活性的多肽，其為經翻譯和任何翻譯后修飾，如N末端加工、C末端截短、糖化、磷酸化等之后的其最終形式。在一個方面，所述成熟多肽是SEQ ID N0:3或SEQ ID N0:4的多肽。信號程序SignalIP3. O程序可用于預測成熟多肽。
成熟多肽編碼序列術語“成熟多肽編碼序列”在本文中定義為編碼具有蛋白酶變體活性的成熟多肽的核苷酸序列。在一個方面，所述成熟多肽編碼序列是編碼SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的核苷酸。同一性兩個氨基酸序列間或兩個核苷酸序列間的相關性由參數”同一性”所描述。就本發明而言，兩個氨基酸序列之間的同一'I"生程度使用Needleman-Wunsch算法(Needleman 和 Wunsch, 1970，J. Mol. Biol. 48 :443-453)確定，如 EMBOSS 軟件包(EMBOSS 歐洲分子生物學開放軟件組(The European Molecular Biology Open Software Suite),Rice 等，2000, Trends in Genetics 16:276-277 http: //emboss, org)的 Needle 程序，優選為3. 0. 0版或之后的版本中執行的。所用的可選參數為缺口開放罰分(gap openpenalty) 10,缺口延伸罰分(gap extension penalty) 0. 5,和 EBL0SUM62 (BL0SUM62 的EMBOSS版)取代矩陣。使用標記為“最長同一性”的Needle輸出(使用-nobrief選項獲得)作為百分比同一性并如下計算(相同的殘基X100)/(比對長度-比對中缺口總數)就本發明而言，兩個脫氧核糖核苷酸序列之間的同一性程度使用Needleman-Wunsch 算法(Needleman 和 Wunsch, 1970,見上)確定，如 EMBOSS 軟件包(EMB0SS :歐洲分子生物學開放軟件組(The European Molecular Biology Open SoftwareSuite), Rice 等，2000,見上http: //emboss, org)的 Needle 程序，優選為 3· 0· 0 版或之后的版本中執行的。所用的可選參數為缺口開放罰分10，缺口延伸罰分0.5，和EDNAFULL(NCBI NUC4. 4的EMBOSS版)取代矩陣。使用標記為”最長同一性”的Needle輸出(使用-nobrief選項獲得)作為百分比同一性并如下計算(相同的脫氧核糖核苷酸X100)/(比對長度-比對中缺口總數)同源序列術語“同源序列”在本文中定義為用白小羊蹄菌(Microdochiumnivale)蛋白酶變體 CBS 100236 在 tfasty 檢索(Pearson, ff. R. , 1999,于 BioinformaticsMethods and Protocols, S. Misener 和 S. A. Krawetz 編，185-219 頁)中給出小于 0.001 的E值(或期望分數)的預測的多肽。多肽片段術語“多肽片段”在本文定義為從成熟多肽或其同源序列的氨基和/或羧基末端缺失了一個或多個(幾個)氨基酸的多肽；其中所述片段具有蛋白酶變體活性。亞序列術語“亞序列(subsequence) ”在本文中定義為從成熟多肽編碼序列或其同源序列的5'和/或3'端缺失了一個或多個(幾個)核苷酸的多核苷酸序列；其中所述亞序列編碼具有蛋白酶變體活性的多肽片段。等位變體(allelic variant):術語“等位變體”在本文中表示占據相同染色體基因座的基因的任何兩種以上可選形式。等位變異通過突變天然地發生，并且可導致種群內的多態性。基因突變可以是沉默的(在編碼的多肽中無變化)或可以編碼具有改變的氨基酸序列的多肽。多肽的等位變體是由基因的等位變體編碼的多肽。分離的多核苷酸術語“分離的多核苷酸”用于本文中指從來源分離的多核苷酸。在一個方面，如通過瓊脂糖電泳測定的，所述分離的多核苷酸為至少1%純，優選至少5%純，更優選至少10%純，更優選至少20%純，更優選至少40%純，更優選至少60%純，甚至更優選 至少80%純，并且最優選至少90%，并且甚至最優選至少95%純。
基本上純的多核苷酸術語“基本上純的多核苷酸”用于本文指多核苷酸制備物，其不含其它外來的或不期望的核苷酸，并且處于適合在遺傳工程多肽生產體系中使用的形式。因此，基本上純的多核苷酸含有按重量計至多10%，優選至多8%，更優選至多6%，更優選至多5%，更優選至多4%，更優選至多3%，甚至更優選至多2%，最優選至多1%，并且甚至最優選至多O. 5%的與其天然或重組結合的其它多核苷酸物質。然而，基本上純的多核苷酸可以包括天然存在的5’和3’非翻譯區，如啟動子和終止子。優選基本上純的多核苷酸是按重量計至少90%純，優選至少92%純，更優選至少94%純，更優選至少95%純，更優選至少96%純，更優選至少97%純，甚至更優選至少98%純，最優選至少99%，并且甚至最優選至少99. 5%純的。本發明的多核苷酸優選為基本上純的形式，即所述多核苷酸制備物基本上(essentially)不含與其天然或重組結合的其它多核苷酸物質。所述多核苷酸可以是基因組、cDNA、RNA、半合成、合成來源的，或它們的任何組合。編碼序列當用于本文時術語“編碼序列”的意思是直接指定其多肽產物的氨基酸序列的多核苷酸。編碼序列的邊界通常由開讀框確定，所述開讀框通常以ATG起始密碼子或可供選擇的起始密碼子如GTG和TTG開始，并且以終止密碼子如TAA、TAG和TGA結束。編碼序列可以是DNA、cDNA、合成的或重組的多核苷酸。cDNA :術語“cDNA”在本文中定義為能夠通過反轉錄從得自真核細胞的成熟的、已剪接的mRNA分子制備的DNA分子。cDNA缺少通常存在于相應基因組DNA中的內含子序列。起始的(initial)、初級的RNA轉錄物是mRNA的前體,其通過一系列的步驟加工然后作為成熟的已剪接的mRNA出現。這些步驟包括通過稱為剪接的過程去除內含子序列。因而源自mRNA的cDNA沒有任何內含子序列。核酸構建體術語“核酸構建體”用于本文指單鏈或雙鏈的核酸分子，所述核酸分子分離自天然存在的基因，或將所述核酸分子以本來不存在于(not otherwise exist)自然界中的方式修飾以含有核酸的區段或所述核酸分子是合成的。當所述核酸構建體含有表達本發明的編碼序列所需的調控序列時，術語核酸構建體與術語“表達盒”同義。調控序列(control sequence):術語“調控序列”在本文定義為包括編碼本發明多肽的多核苷酸表達所必需的所有組分。各個調控序列對于編碼所述多肽的多核苷酸可以是天然的或外源的，或各個調控序列對于彼此可以是天然的或外源的。這些調控序列包括但不限于前導序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、啟動子、信號肽序列和轉錄終止子。最少的情況，調控序列包括啟動子和轉錄和翻譯的終止信號。調控序列可以和用于引入特異性限制位點的接頭一起提供，所述特異性限制位點促進調控序列與編碼多肽的多核苷酸編碼區的連接。可操作地連接術語“可操作地連接”在本文表示這樣的構型，其中將調控序列置于相對于多核苷酸序列的編碼序列的適當位置，使得調控序列指導多肽的編碼序列的表達。表達術語“表達”包括涉及多肽產生的任何步驟，其包括但不限于轉錄、轉錄后修飾、翻譯、翻譯后修飾和分泌。表達載體術語“表達載體”在本文定義為線性的或環狀的DNA分子，其包含編碼本發明多肽的多核苷酸，并與供用于其表達的額外核苷酸可操作地連接。宿主細胞如本文中所使用的術語“宿主細胞”包括任何細胞類型，所述細胞類型對于用包含本發明多核苷酸的核酸構建體或表達載體的轉化、轉染、轉導等是易感的(susceptible)。術語“宿主細胞”涵蓋由于在復制過程中發生的突變而與親本細胞不完全相同的親本細胞的任何后代。改善的性質術語“改善的性質”在本文中定義為與相對于親本蛋白酶變體而改善的變體相關的特征。此類改善的性質包括但不限干洗滌性能如污跡性能，例如對含有蛋白的污物的性能，污跡去除例如蛋污跡的去除，穩定性例如熱穩定性、氧化穩定性、化學穩定性、pH穩定性或在粉末、液體或凝膠去污劑制劑或洗碟組合物中的穩定性。本發明的變體還可具有改變的溫度依存性活性概貌，PH活性，底物特異性，產物特異性。在一個實施方案中，所述改善的性質包括改善的洗碟性能和改善的穩定性，以及改善的洗碟性能與改善的穩定性的組合。在一個實施方案中，改善的性質包括改善的洗滌或洗碟性能，例如蛋白性污物如蛋污跡的污跡去除。洗滌性能在本文的語境中，術語“洗滌性能”用作酶在例如洗滌或硬表面清潔過 程中去除存在于待清潔的目標上的蛋白性或有機的污跡的能力。洗滌性能的改善可通過計算本文實施例3中定義的所謂的強度值(Int)來定量。亦參見本文實施例3中的洗滌性能測試。術語洗滌性能和洗碟性能可互換使用。改善的洗滌性能術語“改善的洗滌性能”在本文中定義為的變體酶相對于親本蛋白酶變體的洗滌性能展示蛋白酶變體的洗滌性能的改變，例如，增加的污跡去除。術語“洗滌性能”包括洗衣中的，但亦包括例如洗碟中的洗滌性能。硬表面清潔該術語包括“洗碟”，且為清潔硬物體，如用于洗碟的典型物體，包括但不限于盤、杯、玻璃杯(glasses)、碗和餐具如勺、刀、叉、餐皿(serving utensils)、陶瓷制品、塑料制品、金屬制品、瓷器、玻璃和聚丙烯酸酷。洗碟組合物術語“洗碟組合物”指所有形式的用于清潔硬表面的組合物。本發明并不限于任何具體類型的洗碟組合物或任何具體的去污劑。蛋白酶在蛋白底物中切割酰胺連接的酶歸類為蛋白酶，或(可互換使用)肽酶(參見 Waish, 1979，Enzymatic Reaction Mechanisms, ff. H. Freeman and Company, SanFrancisco, Chapter 3)。
_2] 氨基酸位置/殘基的編號如果沒有提及其他，則本文中使用的氨基酸編號對應于枯草桿菌酶BPN’ (BASBPN)序列的編號。對于BPN’序列的進一步描述，參見SEQ ID NO: 2或Siezen等，ProteinEngng. 4(1991)719-737。絲氨酸蛋白酶絲氨酸蛋白酶是催化肽鍵水解且其中在活性位點有ー個必需絲氨酸殘基的酶(White, Handler 和 Smith, 1973"Principles of Biochemistry, "FifthEdition, McGraw-Hill Book Company, NY, pp.271-272)。細菌絲氨酸蛋白酶具有20000至45000道爾頓范圍的分子量。它們受ニ異丙基氟磷酸抑制。它們水解簡單的末端酷，并在活性上類似于也是絲氨酸蛋白酶的真核膜凝乳蛋白酶。ー個涵蓋亞組的更狹窄的術語，堿性蛋白酶，反映了 ー些絲氨酸蛋白酶的高最適pH，為 pH 9. O 至 11. O (關于綜述，參見 Priest (1977) Bacteriological Rev. 41 711-753)。
枯草桿菌酶Siezen 等，Protein Engng. 4(1991)719-737 和 Siezen 等 Protein Science6(1997)501-523提出了暫時命名為枯草桿菌酶的絲氨酸蛋白酶的亞組。它們通過之前稱作枯草桿菌蛋白酶樣蛋白酶的絲氨酸蛋白酶的超過170個氨基酸序列的同源性分析而定義。枯草桿菌蛋白酶之前常常定義為由革蘭氏陽性細菌或真菌產生的絲氨酸蛋白酶，而根據Siezen等，現在為枯草桿菌酶的亞組。已鑒定了廣泛種類的枯草桿菌酶，并且已確定了許多枯草桿菌酶的氨基酸序列。對于此類枯草桿菌酶及其氨基酸序列的更加具體的描述，參照 Siezen 等(1997)。枯草桿菌酶的一個亞組，I-Sl或“真性”枯草桿菌蛋白酶，包括“經典”枯草桿菌蛋 白酶，如枯草桿菌蛋白酶168 (BSS168)，枯草桿菌蛋白酶BPN'，枯草桿菌蛋白酶Car I sberg(ALCALASE , novozymes A/s)，和枯草桿菌蛋白酶 DY (bssdy)。枯草桿菌酶的另一個亞組，I-S2或高堿性枯草桿菌蛋白酶，由Siezen等(見上)認定。亞組I-S2蛋白酶描述為高度堿性的枯草桿菌蛋白酶，并包括酶如枯草桿菌蛋白酶 PB92(BAAlKP) ( M.AX.ACALS · Genencor International Inc.),枯草桿菌蛋白酶309 ( sAVlNASE ，NOVOZYMES A/S)，枯草桿菌蛋白酶 147(BLS147) ( ESPERASE ，NOVOZYMES A/S)，和堿性彈性蛋白酶 YaB (BSEYAB)。
“SAV1NASE ”·SAVINASE 由NOVOZYMES A/S出售。其為來自遲緩芽孢桿菌(B. Lentus)的枯草桿菌蛋白酶309，并僅在一個位置與BAALKP不同(N87S)。SAVINASE 具有SEQ ID NO: I的氨基酸序列。親本枯草桿菌酶術語“親本枯草桿菌酶”描述由Siezen等(1991和1997)定義的枯草桿菌酶。對于進一步細節，參見上文對“枯草桿菌酶”的描述。親本枯草桿菌酶亦可為從天然來源分離的枯草桿菌酶，其中進行了后續修飾但保留了枯草桿菌酶的特征。此外，親本枯草桿菌酶可為通過DNA改組技術制備的枯草桿菌酶，如描述于J. E. Ness等，NatureBiotechnology, 17, 893-896(1999)。或者，術語“親本枯草桿菌酶”也可命名為“野生型枯草桿菌酶”。作為參考，提供了在本文中提及的多種枯草桿菌酶的縮寫的表，對于其他縮寫，參見 Siezen 等，Protein Engng. 4(1991)719-737 和 Siezen 等 Protein Science6(1997)501-523。表III
權利要求
1.枯草桿菌蛋白酶變體在硬表面清潔中的用途，其中所述變體包含親本枯草桿菌蛋白酶中的取代91 、151\684、2451 和218{0，6，￥}，且其中所述位置對應于5￡0 ID N0:2[BPN，]的成熟多肽的位置。
2.權利要求I的用途，其中在位置218的取代是D。
3.權利要求I或2的用途，其中所述變體進一步包含至少一種下述修飾G61{D, E}、N62 {D, E}、N76 {D, E} ;*97aG、A98 {G, S}、S99G、S101G、H120 {N, V, Q, D}、P131 {T, S}、Q137H、A194P、A228V、A230V、N261D。
4.前述任一項權利要求的用途，其中所述變體包含下述取代S9R、A15T、V68A、N218D和 Q245R。
5.權利要求4的用途，其中所述變體進一步包含取代G61E。
6.權利要求4或5的用途，其中所述變體進一步包含取代A98S。
7.權利要求4-6任一項的用途，其中所述變體進一步包含取代S99G。
8.前述任一項權利要求的用途，其中所述變體包含下述取代S9R、A15T、G61E、V68A、A98S、S99G、N218D 和 Q245R。
9.前述任一項權利要求的用途，其中所述親本枯草桿菌蛋白酶屬于亞組I-S2。
10.前述任一項權利要求的用途，其中所述親本枯草桿菌蛋白酶是包含與SEQID NO: I具有至少80%同一性的氨基酸序列的多肽。
11.權利要求I的用途，其中所述變體是與SEQID NO: 3具有至少80%同一性的多肽序列。
12.權利要求I的用途，其中所述變體是與SEQID N0:4具有至少80%同一性的多肽序列。
13.前述任一項權利要求的用途，其中所述變體相對于親本枯草桿菌蛋白酶具有一種或多種改善的性質，其中所述改善的性質包括在硬表面洗滌如洗碟中改善的洗滌性能。
14.一種洗碟組合物，其包含權利要求1-13任一項的變體。
15.權利要求14的組合物，進一步包含至少一種選自下組的其他酶脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶。
16.權利要求14-15任一項的組合物用于去除蛋白性污跡，特別是煮蛋污跡的用途。
全文摘要
本發明涉及蛋白酶變體，特別是所述蛋白酶變體在硬表面清潔中的用途。本發明還涉及包含所述蛋白酶變體的去污劑組合物，如洗碟組合物，以及此類組合物用于去除蛋白性污跡，特別是煮蛋污跡的用途。最后，本發明提供了使用所述變體酶或包含所述變體酶的洗衣和去污劑組合物來去除蛋白性污跡的方法。
文檔編號C12N9/52GK102648277SQ201080053391
公開日2012年8月22日 申請日期2010年9月24日 優先權日2009年9月25日
發明者J.C.F.諾澤爾, M.N.霍考夫 申請人:諾維信公司