一種高通量清露酊微生物檢查方法
【專利摘要】本發明屬于微生物【技術領域】，本發明的目的在于提供一種清露酊微生物限度檢查的方法，有助于醫學和生物學方面的研究。薄膜過濾使微生物被濾膜充分截留,再用適量無干擾的沖洗液洗去供試品的干擾,就能準確地進行樣品的微生物限度檢查。沖洗液的用量是關鍵,如過量沖洗,會使菌體受損,不利于生長,從而影響回收率,還會使濾膜受損,孔徑改變,影響實驗結果。反之,如沖洗不充分,樣品抗菌作用就不能徹底消除,也無法保證實驗效果的準確性。
【專利說明】一種高通量清露酊微生物檢查方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物【技術領域】，涉及一種清露酊微生物限度檢查的方法，有助于醫學和生物學方面今后對微生物的研究。
【背景技術】
[0002]清露酊較合理地運用了中醫治標固本，滋陰潤喉，清熱解毒辨證施治。處方中桔梗、甘草清利咽喉載藥上行，配枳殼理氣升降氣機。麥冬、天冬、石斛、生地、熟地滋陰清熱潤喉消炎。全方達到滋陰潤喉，清熱解毒(利咽)。主治急慢性咽炎、喉頭水腫。本品氣味方香純正，口感良好，適宜患者服用，未見不良反應，為臨床治療急慢性咽炎、喉頭水腫良藥。
[0003]微生物限度檢查法系檢查法規定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法，也是評價生產企業的要用原料、輔料、設備、器具、工藝流程、環境和操作者衛生狀況的重要手段和依據。檢查項目包括染菌量及控制菌檢查。
【發明內容】
[0004]清露酊由桔梗、石斛、枳實、生地、甘草、熟地、麥冬和天冬等中藥組成，有治療咽痛、咳喘和清熱解毒功效，放置后出現少量沉淀，對質量功效無影響。清露酊含有15%乙醇，低醇環境對微生物生長有干擾，可影響試驗結果的準確性。試驗表明，按常規方法測定其回收率僅為50%~60%，不符合要求(應為70%以上)。通過采用薄膜過濾法測定，可以減少乙醇對試驗結果的影響。
【具體實施方式】
[0005]1、供試液制備取樣品的 上清液加稀釋液制成供試液。
[0006]2、菌液制備按中國藥典2005年版二部方法制備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌及黑曲霉菌菌液，另配制濃度為l(T100cfu/ml大腸埃希菌液。
[0007]3、取供試液加濾器中經薄膜過濾后沖洗，在最后一次的沖洗液中加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌液或白色念珠菌和黑曲霉菌菌液，過濾。取出濾膜，菌面朝上貼于營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基上，培養。每株試驗菌平行制備2個平皿，計數。
[0008]實施例1
1、供試液制備取樣品的上清液10 ml，加稀釋液至100ml，制成I 10供試液。
[0009]2、菌液制備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌及黑曲霉菌菌液均按中國藥典2005年版二部方法制備，濃度為5(T100cfu/ml，另配制濃度為10~IOOcfu /m I大腸埃希菌液。
[0010]3、取I 10供試液Iml加入裝有50ml稀釋液的濾器中，經薄膜過濾后，沖洗3次，每次100ml,在最后一次的沖洗液中各加入1ml的50~IOOcfu / ml大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌液或白色念珠菌和黑曲霉菌菌液，過濾。取出濾膜，菌面朝上貼于營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基上，分別置30~35°C培養48 h或置23~28°C培養72h。每株試驗菌平行制 備2個平皿。按中國藥典2005年版菌落計數方法計數。
【權利要求】
1.一種清露酊微生物限度檢查的方法，其特征是:通過以下步驟實現的:(1)供試液制備取樣品的上清液加稀釋液制成供試液；(2)菌液制備按中國藥典2005年版二部方法制備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌及黑曲霉菌菌液，另配制濃度為l(T100cfU/ml大腸埃希菌液；(3)取供試液加濾器中經薄膜過濾后沖洗，在最后一次的沖洗液中加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌液或白色念珠菌和黑曲霉菌菌液，過濾；取出濾膜，菌面朝上貼于營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基上，培養；每株試驗菌平行制備2個平皿，計數。
2.如權利要求1所述的細胞共養方法，其特征是:步驟(1)取樣品的上清液10ml，加稀釋液至100ml，制成I 10供試液。
3.如權利要求1所述的細胞共養方法，其特征是:步驟(2)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌及黑曲霉菌菌液均按中國藥典2005年版二部方法制備，濃度為5(T100cfu/ml，另配制濃度為KTlOOcfu /m I大腸埃希菌液。
4.如權利要求1所述的細胞共養方法，其特征是:步驟(3)取I10供試液Iml加入裝有50ml稀釋液的濾器中，經薄膜過濾后，沖洗3次，每次100mL，在最后一次的沖洗液中各加入1ml的50~IOOcfu / ml大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌液或白色念珠菌和黑曲霉菌菌液，過濾；取出濾膜，菌面朝上貼于營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基上，分別置30~35°C培養48 h或置23~28°C培養72h ;每株試驗菌平行制備2個平皿；按中國藥典2005年版菌 落計數方法計數。
【文檔編號】C12Q1/02GK103882089SQ201210560914
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年12月21日 優先權日:2012年12月21日
【發明者】王英俊, 郝智慧 申請人:青島康地恩藥業股份有限公司