專利名稱：一株降低發酵飼料中黃曲霉毒素b1的乳酸菌及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一株發酵飼料用乳酸菌，具體是一株可抑制發酵飼料中霉菌生長、降低黃曲霉毒素含量、改善發酵飼料品質的降低發酵飼料中黃曲霉毒素BI的乳酸菌及其應用。
背景技術：
黃曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)是一類結構和理化性質相似的真菌次級代謝物，分別為B1、B2、G1、G2、M1和M2等，在所有黃曲霉毒素中，BI的毒性最強且化學性質最穩定，它具有很強的致癌性、致突變性和致畸形，是國際上認可的A類致癌物。黃曲霉毒素在作物生長過程、飼料加工、貯藏及運輸過程中皆可產生。飼料發霉及由此產生的毒素中毒是世界范圍內普遍存在的問題，實驗證明，動物攝入AFBl后，在肝、腎、肌肉、血、乳汁以及雞蛋中可檢測到黃曲霉毒素BI及其代謝產物，從而造成動物性食品的污染，威脅人類健康。因此掌握黃曲霉毒素的防治措施，對保障糧油食品質量安全和確保動物性食品安全尤為重要。目前，生物去除黃曲霉毒素由于效率高、無毒副作用越來越受到關注。乳酸菌是近年來正在推廣的微生物添加劑，一些研究表明乳酸菌的代謝產物乳酸、醋酸、苯乳酸、丙酸和蛋白類等物質具有抑制黃曲霉生長和產毒素的能力，乳酸菌在生長過程中形成的代謝物可以抑制毒素合成或將毒素轉化成無毒性的物質，乳酸菌還可通過細胞壁成分吸附黃曲霉毒素，達到去 除真菌毒素的目的。因此乳酸菌在降低飼料中的黃曲霉毒素具有廣闊的發展前景。本發明針對上述課題，從分離于自然發酵飼料的130株植物乳桿菌中，篩選出一株具有抑制霉菌、降低黃曲霉毒素、改善發酵飼料品質的植物乳桿菌M-9 (Lactobacillusplantarum M-9)。
發明內容
本發明的目的在于提供一株能夠抑制發酵飼料中霉菌生長、降低黃曲霉毒素含量、改善發酵飼料品質的降低發酵飼料中黃曲霉毒素BI的乳酸菌及其應用。本發明的技術方案是:一株降低發酵飼料中黃曲霉毒素BI的乳酸菌，其特征在于:所述乳酸菌為植物乳桿菌M-9 (Lactobacillus plantarum M_9),從130株植物乳桿菌中篩選出，具有降低發酵飼料中黃曲霉毒素BI含量的特性；已于2012年10月29日，在地址為中國北京市朝陽區大屯路，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號=CGMCC N0.6740。所述植物乳桿菌在發酵飼料中的應用，具體制備方法如下:植物乳桿菌的活化和培養,其特征在于:將冷凍保存的Lactobacillus plantarumM-9接種于MRS液體培養基中，在溫度37°C下培養18_22h，如此傳代培養2_3次得到所述的活化Lactobacillus plantarum M_9菌種；所述的MRS液體培養基組成如下:10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三鈉、ImL吐溫80、0.2g硫酸鎂、0.05g硫酸錳加入IOOOmL蒸餾水，調節pH至6.5，121°C滅菌15min。菌粉制備:將上述活化的菌種離心后，添加菌種保護劑凍干成菌粉，使其含Lactobacillus plantarum M-9 活菌數在 2.0X 10ncfu/g。植物乳桿菌在發酵飼料中的使用方法:向飼料原料中加入煮沸并冷卻至室溫的自來水，使飼料含水量達到40%。以接種量2X 106cfu/g向全價飼料中接種Lactobacillusplantarum M_9菌粉,充分混勻。準確稱取50g飼料原料于真空包裝袋中,將包裝袋壓實以盡量排空空氣，用封口機將包裝袋封口，常溫發酵。發酵飼料的品質檢測:全價飼料在恒溫發酵期間，在0d，Id, 2山3山4(1和5(1分別進行取樣測定霉菌的活菌數和黃曲霉毒素BI等。本發明提供的植物乳桿菌具有下述的積極效果:本發明Lactobacillus plantarum M_9在發酵飼料中具有抑制霉菌生長的特性。本發明Lactobacillus plantarum M-9添加到發酵飼料中可以降低飼料中黃曲霉毒素BI的含量、提聞發酵詞料的品質。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步說明；下述實施例只是說明性的，并不限制本發明的保護范圍。下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為常規方法。一株降低發酵飼料中黃曲霉毒素BI的乳酸菌，所述乳酸菌為植物乳桿菌M-9(Lactobacillus plantarum M_9),從130株植物乳桿菌中篩選出，具有降低發酵飼料中黃曲霉毒素BI含量的特性；已于2012年10月29日，在地址為中國北京市朝陽區大屯路，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號=CGMCC N0.6740。所述植物乳桿菌在發酵飼料中的應用，具體制備方法如下:植物乳桿菌的活化和培養,其特征在于:將冷凍保存的Lactobacillus plantarumM-9接種于MRS液體培養基中，在溫度37°C下培養18_22h，如此傳代培養2_3次得到所述的活化Lactobacillus plantarum M_9菌種；所述的MRS液體培養基組成如下:10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三鈉、ImL吐溫80、
0.2g硫酸鎂、0.05g硫酸錳加入IOOOmL蒸餾水，調節pH至6.5，121°C滅菌15min。菌粉制備:將上述活化的菌種離心后，添加菌種保護劑凍干成菌粉，使其含Lactobacillus plantarum M-9 活菌數在 2.0X 10ncfu/g。植物乳桿菌在發酵飼料中的使用方法:向飼料原料中加入煮沸并冷卻至室溫的自來水，使飼料含水量達到40%。以接種量2X 106cfu/g向全價飼料中接種Lactobacillusplantarum M_9菌粉,充分混勻。準確稱取50g飼料原料于真空包裝袋中,將包裝袋壓實以盡量排空空氣，用封口機將包裝袋封口，常溫發酵。實驗1:Lactobacillus plantarum M_9在發酵豆柏飼料中抑制霉菌的特性將活化的菌種離心后，添加保護劑凍干成菌粉，以接種量2X 106cfu/g向含水量為40%豆柏飼料中接種Lactobacillus plan tarum M_9菌粉,充分混勻。準確稱取50g全價飼料于真空包裝袋中，將包裝袋壓實以盡量排空空氣，用封口機將包裝袋封口，常溫發酵。全價飼料在恒溫發酵期間，分別在0d，Id, 2d，3d，4d和5d進行取樣，準確稱取IOg發酵飼料樣品于裝有玻璃珠的250mL滅菌三角瓶中，加入90g滅菌蒸餾水，置于搖床上160r/min搖動15min,取0.5mL稀釋液用0.85% (w/v)滅菌生理鹽水梯度稀釋至適當倍數時，選取100 μ L稀釋液涂布于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(Potato Dextrose Agar), 30°C恒溫培養箱中厭氧培養48h后，對霉菌進行計數。發酵豆柏樣品在發酵過程中的霉菌動態變化見表I。表I發酵豆柏樣品在發酵過程中的霉菌的活菌數變化
權利要求
1.一株降低發酵飼料中黃曲霉毒素BI的乳酸菌，其特征在于:所述乳酸菌為植物乳桿菌M-9 (Lactobacillus plantarum M_9),從130株植物乳桿菌中篩選出，具有降低發酵飼料中黃曲霉毒素BI含量的特性；該菌菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號=CGMCC N0.6740，保藏日期為2012年10月29日。
2.一株降低發酵飼料中黃曲霉毒素BI的乳酸菌的活化和培養，其特征在于:將冷凍保存的Lactobacillus plantarum M-9接種于MRS液體培養基中，在溫度37°C下培養18_22h，如此傳代培養2-3次得到所述的活化Lactobacillus plantarum M_9菌種；所述的MRS液體培養基組成如下:10g蛋白胨 、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三鈉、ImL吐溫80、0.2g硫酸鎂、0.05g硫酸錳加入IOOOmL蒸餾水，調節pH至 6.5,121°C滅菌 15min。。
3.一株降低發酵飼料中黃曲霉毒素BI的乳酸菌菌粉的制備，其特征在于:將活化的菌種離心后，加入菌種保護劑凍成干粉，使其含乳酸菌活菌數在2.0X 10ncfU/g。
4.一株降低發酵飼料中黃曲霉毒素BI的乳酸菌的使用方法，其特征在于:向混合均勻的飼料中加入煮沸并冷卻至室溫的自來水，使飼料含水量達到40%。以接種量2X 106cfu/g向飼料中接種Lactobacillus plantarum M_9菌粉,充分混勻。準確稱取50g全價飼料于真空包裝袋中，將包裝袋壓實以盡量排空空氣，用封口機將包裝袋封口，常溫發酵。
全文摘要
一株在發酵飼料中抑制霉菌生長、降低黃曲霉毒素B1含量，改善發酵飼料品質的乳酸菌及其應用。技術方案是所述乳酸菌為植物乳桿菌M-9(Lactobacillus plantarum M-9)已于2012年10月29日，在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號CGMCC No.6740。本發明還公開了該乳酸菌的制備和使用方法。
文檔編號C12N1/20GK103205374SQ201310082969
公開日2013年7月17日 申請日期2013年3月15日 優先權日2013年3月15日
發明者于潔, 姚國強, 其木格蘇都 申請人:廈門和美科盛生物技術有限公司