一種質粒的提取方法
【專利摘要】本發明公開了一種質粒的提取方法。步驟如下：首先挑取平板上的菌落，在10-15mlLB條件下接種，隨后經過35攝氏度振蕩培養過夜；第二步，吸取3毫升過夜培養的菌液，6000rpm離心27秒，丟棄上清，收集菌落；第三步，使用200ul的溶液重懸菌體沉淀，渦旋振蕩，直至徹底懸浮未知；第三步，重復上述步驟一次；第四步，去除吸附柱，然后放進一個干凈的離心管中；最后提取到的質粒溶液在零下20-25度的條件下凍存。本發明的有益效果是，實驗簡單，費用較低，抗體的制備為將來檢測臨床器官和人工肝中的PERV的表達及傳播具有重要意義。
【專利說明】一種質粒的提取方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種實驗方法，具體來說，一種質粒的提取方法。
【背景技術】
[0002]質粒是真核細胞細胞核外或原核生物擬核區外能夠進行自主復制的遺傳單位，包括真核生物的細胞器(主要指線粒體和葉綠體)中和細菌細胞擬核區以外的環狀脫氧核糖核酸(DNA)分子。現在習慣上用來專指細菌(大腸桿菌)、酵母菌和放線菌等生物中細胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質粒常被用做基因的載體(Vector)。許多細菌除了擬核中的DNA外，還有大量很小的環狀DNA分子，這就是質粒(plasmid)(補充:部分質粒為RNA)。質粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質粒稱為附加體(episome)，這類質粒能夠整合進真菌的染色體，也能從整合位置上切離下來成為游離于染色體外的DNA分子。質粒在宿主細胞體內外都可復制，通過個些特性，人們可以把一些目的DNA片斷構建在質粒中，通過轉化入大腸桿菌中，不斷的復制，來得到目的產物。這就是轉化的目的。
【發明內容】
[0003]為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案:
一種質粒的提取方法，步驟如下:首先挑取平板上的菌落，在10-15mlLB條件下接種，隨后經過35攝氏度振蕩培養過夜；第二步，吸取3毫升過夜培養的菌液，6000rpm離心27秒，丟棄上清，收集菌落；第三步，使用200ul的溶液重懸菌體沉淀，渦旋振蕩，直至徹底懸浮未知；第三步，重復上述步驟一次；第四步，去除吸附柱，然后放進一個干凈的離心管中；最后提取到的質粒溶液在零下20-25度的條件下凍存。
[0004]本發明中，凍存的時候要在21攝氏度。
[0005]本發明的有益效果是，實驗簡單，費用較低，抗體的制備為將來檢測臨床器官和人工肝中的PERV的表達及傳播具有重要意義。
【具體實施方式】
[0006]一種質粒的提取方法，步驟如下:首先挑取平板上的菌落，在10_15mlLB條件下接種，隨后經過35攝氏度振蕩培養過夜；第二步，吸取3毫升過夜培養的菌液，6000rpm離心27秒，丟棄上清，收集菌落；第三步，使用200ul的溶液重懸菌體沉淀，渦旋振蕩，直至徹底懸浮未知；第三步，重復上述步驟一次；第四步，去除吸附柱，然后放進一個干凈的離心管中；最后提取到的質粒溶液在零下21度的條件下凍存。
[0007]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種質粒的提取方法，其特征在于，步驟如下:首先挑取平板上的菌落，在10-15mlLB條件下接種，隨后經過35攝氏度振蕩培養過夜；第二步，吸取3毫升過夜培養的菌液，6000rpm離心27秒，丟棄上清，收集菌落；第三步，使用200ul的溶液重懸菌體沉淀，渦旋振蕩，直至徹底懸浮未知；第三步，重復上述步驟一次；第四步，去除吸附柱，然后放進一個干凈的離心管中；最后提取到的質粒溶液在零下20-25度的條件下凍存。
2.如權利要求1所述的一種質粒的提取方法，其特征在于，凍存的時候要在21攝氏度。
【文檔編號】C12N15/10GK103602661SQ201310522036
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年10月30日 優先權日:2013年10月30日
【發明者】徐麗 申請人:徐麗