一種用于質粒提取的磁流體的制備方法
【專利摘要】本發明提供一種用于質粒提取的磁流體的制備方法，屬于磁性顆粒的制備領域。本發明是為了解決傳統磁流體制備成本高，磁性粒子在緩沖溶液中的穩定性差，放置1個月、甚至幾天后，其分離和純化效果降低等問題。本發明提供的磁流體的制備方法包括以下內容：將硝酸鐵、硝酸亞鐵和氫氧化鈉分別配制成水溶液，混合攪拌后，逐滴加入羥基乙叉二膦酸，得到黑色溶液A，用外加磁場分離得到黑色固體A；將黑色固體A分散在去離子水中，加入聚醚酰亞胺，超聲振蕩后，分離得到黑色固體B；將黑色固體B干燥、研磨成細粉后分散在去離子水中，即得所述的磁流體。本發明提供的制備方法操作簡單，成本低；制備而成的磁流體，磁響應好，能實現質粒的快速分離和純化。
【專利說明】一種用于質粒提取的磁流體的制備方法
[0001]
【技術領域】
[0002]本發明屬于磁性顆粒的制備領域，具體涉及一種用于質粒提取的磁流體的制備方法。
【背景技術】
[0003]質粒提取是指去除RNA，將質粒與細菌基因組DNA分開，去除蛋白質及其它雜質，以得到相對純凈的質粒。質粒提取是基因工程中的經常性操作，也是載體構建中不可缺少的一個環節。
[0004]質粒提取基本上是采用兩種辦法:一是利用酶/弱去污劑部分裂解細菌，在抽提時只讓質粒從細菌中釋放出來，而不讓基因組DNA從細菌中出來，從而將質粒和基因組DNA分開；二是利用NaOH/SDS完全裂解細菌，讓質粒和細菌基因組DNA都從細菌中出來，再利用質粒和基因組DNA在變性/復性過程中的不同表現，將質粒與基因組DNA分開。
[0005]方便快捷的質粒提取方法，在基因遺傳工程中十分重要。利用磁流體提取質粒具有以下好處:磁性粒子具有超順磁性，在磁場中有較強的磁性，去掉磁場后磁性很快消失，在磁場中不被永久磁化，故可在外加磁場(如磁鐵)作用下，快速、方便地分離和純化目標質粒，無需離心等繁瑣的操作。目前的磁流體制備成本高，磁性粒子在緩沖溶液中的穩定性差，放置I個月、甚至幾天后，其純化效果降低，這些都限制了磁流體在質粒提取操作中的廣泛使用。此外，目前的磁流體中含有某些基團，容易混合在提取的質粒中，影響質粒后續的酶切、轉化等操作。
【發明內容】
[0006]為解決上述問題，本發明提供一種用于質粒提取的磁流體的制備方法，制備而成的磁流體磁響應性好，在不同緩沖液中對質粒的吸附和解吸效果佳，能方便迅速地實現質粒的分離或純化。本發明采用如下技術方案:
一種用于質粒提取的磁流體的制備方法，其特征在于包括以下步驟:
a、將硝酸鐵、硝酸亞鐵和氫氧化鈉分別配制成水溶液，然后攪拌混合，得到混合液A；
b、向混合液A中逐滴加入羥基乙叉二膦酸，繼續攪拌5?9h，得到黑色溶液A，用外加磁場從黑色溶液A中分離得到黑色固體A ；
C、將黑色固體A分散在去離子水中，加入聚醚酰亞胺，超聲振蕩5?12h，得到黑色溶液B，用外加磁場從黑色溶液B中分離得到黑色固體B ;
d、將黑色固體B干燥，研磨成200目?500目的細粉，然后分散在去離子水中，即得所述的磁流體。
[0007]優選地，步驟a中所述的硝酸鐵、硝酸亞鐵和氫氧化鈉的水溶液的混合比例按溶質的摩爾份數計，為2:1:8。
[0008]優選地，步驟a中所述的攪拌混合時間為5?10h ;所述的攪拌混合的同時采用油浴加熱，加熱溫度為3(T50°C。
[0009]優選地，步驟b中所述的用外加磁場從黑色溶液A中分離得到黑色固體A包括以下內容:從黑色溶液A中用外加磁場收集固體后，用無水乙醇清洗固體2?3次，然后用去離子水清洗固體直到清洗液的PH=6.7?7，用外加磁場收集固體，即為所述的黑色固體A。
[0010]本發明的有益效果如下:
1.本發明提供的用于質粒提取的磁流體的制備方法中，在高堿性環境下催化制備四氧化三鐵-二氧化硅核殼結構的磁性納米粒子，采用羥基乙叉二膦酸作為分散劑，制得的磁流體在溶液中的分散性好，增大與質粒的接觸面積。
[0011]2.本發明提供的用于質粒提取的磁流體的制備方法中，采用聚醚酰亞胺對磁性粒子進行表面改性，得到表面有氨基修飾的磁性粒子，便于對質粒純化。
[0012]3.本發明提供的用于質粒提取的磁流體的制備方法，制備而成的磁流體磁響應性好，長期保存仍具有活性，在(T4°C下保存2年以上，對質粒的吸附效果幾乎沒有減少；制備而成的磁流體在碘化鈉等溶膠液中，能很好地吸附核酸，在去離子水或TE緩沖液中，又能很好地將質粒解吸下來，達到質粒的快速分離和純化，無需離心操作，操作過程中，質粒損失少，并且不影響質粒后面的酶切、擴增、轉化等操作。
【具體實施方式】
[0013]以下實施例是為了更好地說明本發明的具體內容，并不用于限制本發明的保護范圍。
[0014]實施例1
一種用于質粒提取的磁流體的制備方法，包括以下步驟:
a、將硝酸鐵、硝酸亞鐵和氫氧化鈉分別配制成水溶液，水溶液的混合比例按溶質的摩爾份數計，為2:1:8 ;然后在油浴加熱條件下攪拌混合，加熱溫度為3(T40°C，攪拌混合時間為5?7h，得到混合液A;
b、向混合液A中逐滴加入羥基乙叉二膦酸，繼續攪拌5?7h，得到黑色溶液A，從黑色溶液A中用外加磁場收集固體后，用無水乙醇清洗固體2?3次，除去多余的羥基乙叉二膦酸，然后用去離子水清洗固體，除去乙醇，直到清洗液的pH=7，用外加磁場收集固體，即為所述的黑色固體A ;
c、將黑色固體A分散在去離子水中，加入聚醚酰亞胺，超聲振蕩5?8h，得到黑色溶液B，用外加磁場從黑色溶液B中將溶液去除，然后用去離子水清洗黑色固體，利用外加磁場分離得到黑色固體B;
d、將黑色固體B干燥，研磨成200目?300目的細粉，然后分散在去離子水中，即得所述的磁流體。
[0015]制備而成的磁流體磁響應性好，長期保存仍具有活性，在(T4°C下保存2年以上，對質粒的吸附效果幾乎沒有減少；制備而成的磁流體對質粒的吸附效果好，達到質粒的快速分離和純化，無需離心操作，操作過程中，質粒損失少，并且不影響質粒后面的酶切、擴增等操作。
[0016]實施例2
一種用于質粒提取的磁流體的制備方法，包括以下步驟:
a、將硝酸鐵、硝酸亞鐵和氫氧化鈉分別配制成水溶液，水溶液的混合比例按溶質的摩爾份數計，為2:1:8 ;然后在油浴加熱條件下攪拌混合，加熱溫度為4(T50°C，攪拌混合時間為5?10h，得到混合液A;
b、向混合液A中逐滴加入羥基乙叉二膦酸，繼續攪拌6、h，得到黑色溶液A，從黑色溶液A中用外加磁場收集固體后，用無水乙醇清洗固體2?3次，除去多余的羥基乙叉二膦酸，然后用去離子水清洗固體，除去乙醇，直到清洗液的pH=7，用外加磁場收集固體，即為所述的黑色固體A ;
C、將黑色固體A分散在去離子水中，加入聚醚酰亞胺，超聲振蕩8?12h，得到黑色溶液B，用外加磁場從黑色溶液B中將溶液去除，然后用去離子水清洗黑色固體，利用外加磁場分離得到黑色固體B;
d、將黑色固體B干燥，研磨成400目飛00目的細粉，然后分散在去離子水中，即得所述的磁流體。
[0017]制備而成的磁流體磁響應性好，長期保存仍具有活性，在(T4°C下保存2年以上，對質粒的吸附效果幾乎沒有減少；制備而成的磁流體對質粒的吸附效果好，達到質粒的快速分離和純化，無需離心操作，操作過程中，質粒損失少，并且不影響質粒后面的酶切、擴增等操作。
[0018]實施例3
一種用于質粒提取的磁流體的制備方法，包括以下步驟:
a、將硝酸鐵、硝酸亞鐵和氫氧化鈉分別配制成水溶液，水溶液的混合比例按溶質的摩爾份數計，為2:1:8 ;然后在油浴加熱條件下攪拌混合，加熱溫度為35?45°C，攪拌混合時間為6?8h，得到混合液A ;
b、向混合液A中逐滴加入羥基乙叉二膦酸，繼續攪拌6?8h，得到黑色溶液A，從黑色溶液A中用外加磁場收集固體后，用無水乙醇清洗固體2?3次，除去多余的羥基乙叉二膦酸，然后用去離子水清洗固體，除去乙醇，直到清洗液的pH=7，用外加磁場收集固體，即為所述的黑色固體A ;
C、將黑色固體A分散在去離子水中，加入聚醚酰亞胺，超聲振蕩8?10h，得到黑色溶液B，用外加磁場從黑色溶液B中將溶液去除，然后用去離子水清洗黑色固體，利用外加磁場分離得到黑色固體B;
d、將黑色固體B干燥，研磨成300目?400目的細粉，然后分散在去離子水中，即得所述的磁流體。
[0019]制備而成的磁流體磁響應性好，長期保存仍具有活性，在(T4°C下保存2年以上，對質粒的吸附效果幾乎沒有減少；制備而成的磁流體對質粒的吸附效果好，達到質粒的快速分離和純化，無需離心操作，操作過程中，質粒損失少，并且不影響質粒后面的酶切、擴增等操作。
【權利要求】
1.一種用于質粒提取的磁流體的制備方法，其特征在于包括以下步驟: a、將硝酸鐵、硝酸亞鐵和氫氧化鈉分別配制成水溶液，然后攪拌混合，得到混合液A； b、向混合液A中逐滴加入羥基乙叉二膦酸，繼續攪拌5?9h，得到黑色溶液A，用外加磁場從黑色溶液A中分離得到黑色固體A ； C、將黑色固體A分散在去離子水中，加入聚醚酰亞胺，超聲振蕩5?12h，得到黑色溶液B，用外加磁場從黑色溶液B中分離得到黑色固體B ; d、將黑色固體B干燥，研磨成200目?500目的細粉，然后分散在去離子水中，即得所述的磁流體。
2.根據權利要求1所述的用于質粒提取的磁流體的制備方法，其特征在于，步驟a中所述的硝酸鐵、硝酸亞鐵和氫氧化鈉的水溶液的混合比例按溶質的摩爾份數計，為2:1:8。
3.根據權利要求1所述的用于質粒提取的磁流體的制備方法，其特征在于，步驟a中所述的攪拌混合時間為5?10h ;所述的攪拌混合的同時采用油浴加熱，加熱溫度為3(T50°C。
4.根據權利要求1所述的用于質粒提取的磁流體的制備方法，其特征在于，步驟b中所述的用外加磁場從黑色溶液A中分離得到黑色固體A包括以下內容:從黑色溶液A中用外加磁場收集固體后，用無水乙醇清洗固體2?3次，然后用去離子水清洗固體直到清洗液的pH=6.7?7，用外加磁場收集固體，即為所述的黑色固體A。
【文檔編號】H01F1/44GK104319055SQ201410656262
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年11月18日 優先權日:2014年11月18日
【發明者】武守陽 申請人:成都理想財富投資咨詢有限公司