細胞培養用試劑盒、及細胞培養用試劑盒的使用方法
【專利摘要】本發明的課題在于，在使用培養容器的細胞培養中，可以使從細胞注入到培養基追加、取樣、回收在試劑盒內在保持封閉系統的同時進行自動培養。解決方法為一種用于培養細胞的封閉系統細胞培養用試劑盒，其分別具有至少1個以上用于培養細胞的培養容器、用于預先儲藏培養基等的培養基儲藏容器、用于注入細胞的細胞注入容器、和回收培養后的細胞懸浮液的細胞回收容器，培養基儲藏容器還作為回收培養后的培養基的廢液容器使用，培養容器、培養基儲藏容器、細胞注入容器及細胞回收容器通過導管連接。另外，該細胞培養用試劑盒具有至少1個以上能夠對培養中的細胞懸浮液的一部分進行取樣的取樣容器，取樣容器通過導管與培養容器連接。
【專利說明】細胞培養用試劑盒、及細胞培養用試劑盒的使用方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及用于在使用培養容器進行細胞培養的自動細胞培養裝置中使用的細 胞培養用試劑盒及其使用方法。
【背景技術】
[0002] 近年來，在醫藥品的生產、基因治療、再生醫療、免疫療法等領域中，要求在人工環 境下高效地大量培養細胞、組織、微生物等。
[0003] 在這樣的細胞的大量培養中，可以優選使用采用培養容器自動進行細胞培養的自 動細胞培養裝置。
[0004] 在使用自動細胞培養裝置時，為了降低污染的風險，在封閉系統中進行是很重要 的。但是，目前為止還不存在能夠將從細胞注入到培養基追加、取樣、回收在保持封閉系統 的同時進行自動培養的簡便的細胞培養用試劑盒。
[0005] 現有技術文獻
[0006] 專利文獻
[0007] 專利文獻1 :國際公開2007/052716號小冊子
【發明內容】
[0008] 發明要解決的課題
[0009] S卩，目前自動細胞培養裝置提出了若干方案，還提出了用于該裝置的容器試劑盒， 但不存在臨床應用中需要的能夠將從細胞注入到培養基追加、取樣、回收在保持封閉系統 的狀態下，簡便地達成的細胞培養用試劑盒。
[0010] 具體來說，作為使用培養容器自動進行細胞培養的自動細胞培養裝置，可以舉出 例如專利文獻1中記載的細胞培養裝置。在該裝置中，培養基儲存裝置、表達功能用培養容 器、及增殖用培養容器由封閉系統構成（參照權利要求7)。但是，在該細胞培養裝置中，沒 有發現在由廢液袋更換為細胞回收袋時可以保持封閉系統的構成，從而可以認為是在開放 體系中進行的。另外，除此之外，還沒有找到在使從細胞注入到回收保持封閉系統的狀態下 能夠實現這一過程的細胞培養用試劑盒。
[0011] 另外，在使用自動細胞培養裝置時，有時冷藏細胞培養用試劑盒中的培養基儲藏 容器。但是，若將冷藏的培養基從培養基儲藏容器直接送液至培養容器，則存在培養容器內 的培養基溫度降低、細胞的增殖變差的問題。
[0012] 而且，冷藏的培養基的氣體溶解度高，溶入有大量碳酸氣體、氧氣。若將其轉移至 培養容器后加溫，則氣體的溶解度隨著液溫升高而降低，因此，存在培養容器內產生氣泡的 問題。培養容器內產生的氣泡在攪拌容器內時產生細泡，對細胞造成不良影響。另外，存在 觀察容器內部時氣泡成為障礙、變得難以觀察的問題。
[0013] 作為這樣的問題的對策，可以想到預先對培養基儲藏容器自身加熱，但若培養基 加熱時間變長則細胞的培養效率降低。因此，理想的是盡量到即將進行培養之前為止，將培 養基冷藏保存。
[0014] 本發明鑒于上述問題而完成，目的在于提供在使用培養容器的細胞培養中，能夠 將從細胞注入到培養基追加、取樣、回收在試劑盒內在保持封閉系統的同時自動進行的細 胞培養用試劑盒。
[0015] 另外，目的在于提供具備用于調節培養基的溫度的溫度調節容器的細胞培養用試 劑盒及其使用方法。
[0016] 用于解決課題的手段
[0017] 為了達成上述目的，本發明的細胞培養用試劑盒是用于培養細胞的封閉系統細胞 培養用試劑盒，其形成以下構成：分別具有至少1個以上用于培養細胞的培養容器、用于預 先儲藏培養基等的培養基儲藏容器、用于注入細胞的細胞注入容器、和回收培養后的細胞 懸浮液的細胞回收容器，培養基儲藏容器還作為回收培養后的培養基的廢液容器使用，培 養容器、培養基儲藏容器、細胞注入容器及細胞回收容器通過導管連接。
[0018] 另外，還優選使本發明的細胞培養用試劑盒形成以下構成：具有至少1個以上能 夠對培養中的培養基的一部分進行取樣的取樣容器，取樣容器通過導管與培養容器連接。
[0019] 而且，優選使本發明的細胞培養用試劑盒形成以下構成：用于調節培養基等的溫 度的溫度調節容器從連接培養容器和培養基儲藏容器的導管分支設置，還優選形成以下構 成：在培養基儲藏容器中冷藏的培養基等的一部分或全部被轉移至溫度調節容器并升溫到 規定溫度后，被轉移至培養容器。
[0020] 另外，本發明的細胞培養用試劑盒的使用方法為如下方法：在細胞培養用試劑盒 中分別具有至少1個以上用于培養細胞的培養容器、用于預先儲藏培養基等的培養基儲藏 容器、用于注入細胞的細胞注入容器、回收培養后的細胞懸浮液的細胞回收容器、和用于調 節培養基等的溫度的溫度調節容器，培養基儲藏容器還作為回收培養后的培養基的廢液容 器使用，培養容器、培養基儲藏容器、細胞注入容器、細胞回收容器及溫度調節容器通過導 管連接，在培養基儲藏容器中冷藏培養基等，該冷藏的培養基等的一部分或全部從培養基 儲藏容器被轉移至溫度調節容器，在溫度調節容器中，培養基等升溫到規定溫度，調節過溫 度的培養基等被轉移至培養容器。
[0021] 發明效果
[0022] 在使用培養容器的細胞培養中，能夠將從細胞注入到培養基追加、取樣、回收在試 劑盒內保持封閉系統的同時進行。另外，由于能夠將培養基儲藏容器中冷藏的培養基轉移 至溫度調節容器并在調節溫度后轉移至培養容器，因此能夠防止培養容器內的培養基溫度 的降低，防止細胞的增殖障礙。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0023] 圖1是表示本發明的第一實施方式的細胞培養用試劑盒（1接口方式）的構成的 圖。
[0024] 圖2是表示本發明的第二實施方式的細胞培養用試劑盒（2接口方式）的構成的 圖。
[0025] 圖3是表示本發明的第三實施方式的細胞培養用試劑盒（3接口方式）的構成的 圖。
[0026] 圖4是表示本發明的第四實施方式的細胞培養用試劑盒（1接口方式）的構成的 圖。
[0027] 圖5是表示本發明的第四實施方式的細胞培養用試劑盒（2接口方式）的構成的 圖。
[0028] 圖6是表示本發明的第四實施方式的細胞培養用試劑盒（3接口方式）的構成的 圖。
【具體實施方式】
[0029] 以下，對本發明的細胞培養用試劑盒的優選實施方式邊參照附圖邊進行說明。
[0030] [第一實施方式]
[0031] 首先，參照圖1說明本發明的第一實施方式。該圖是表示本實施方式的細胞培養 用試劑盒的構成的圖。
[0032] 本實施方式的細胞培養用試劑盒具備：培養容器10、培養基儲藏容器20、細胞注 入容器30、細胞回收容器40。另外，優選具備取樣容器50。
[0033] 培養容器10是以可撓性材料為材料、形成為袋狀（袋型）的容器，是用于加入培 養基（培養液）并且接種培養對象的細胞后大量培養細胞的容器。
[0034] 培養容器10必須具有對于細胞的培養來說必要的透氣性。具體來說，優選具有 5000ml/m 2 ·天· atm(37°C- 80% RH)以上的氧氣透過率。
[0035] 另外，為了能夠確認內容物，優選培養容器10的全部或部分具有透明性。圖1中， 示有在培養容器10上難以發生褶皺、可以使內部的觀察容易進行的觀察框11。
[0036] 而且，為了實現高細胞增殖效率，培養容器10優選具有低細胞毒性、低溶出性、及 放射線滅菌適應性。
[0037] 作為滿足這樣的條件的培養容器10的材料，優選聚乙烯系樹脂。聚乙烯系樹脂可 以列舉：聚乙烯、乙烯和α -鏈狀烯烴的共聚物、乙烯和乙酸乙烯酯的共聚物、乙烯和丙烯 酸或甲基丙烯酸共聚物、以及使用金屬離子的離聚物等。另外，還可以使用聚烯烴、苯乙烯 系彈性體、聚酯系熱塑性彈性體、硅酮系熱塑性彈性體、硅酮樹脂等。
[0038] 另外，培養容器10具備用于進行培養基、細胞的注入、回收等的接口。該接口的數 量沒有特別限定，但如下所述可以優選使用1?3接口的培養容器。
[0039] 培養基儲藏容器20是容納向培養容器10轉移的、用于培養細胞的培養基的容器。 為了使容納的培養基的pH在培養期間不會大幅變化，培養基儲藏容器20優選具有氣體阻 隔性。具體來說優選具有l〇〇〇ml/m 2 ·天· atm(23°C - 80% RH)以下的二氧化碳透過率。 這是由于，為了避免培養基中含有的高濃度的碳酸氣體漏到空氣中從而培養基中的碳酸氣 體濃度下降，結果pH上升，理想的是盡量減少二氧化碳從培養基儲藏容器20的內部向外部 漏出。
[0040] 另外，在培養基儲藏容器20上，優選具備至少2個接口。其中1個接口連接著與 培養容器10連接的導管（管），配合著培養細胞的增殖等新鮮的培養基從該培養基儲藏容 器20 -點點輸送至培養容器10。裝有培養基的培養基儲藏容器20優選用冰箱保存。另 夕卜，培養基儲藏容器20的另1個接口是用于由本實施方式的細胞培養用試劑盒的外部將培 養基供給至培養基儲藏容器20的培養基填充口 21，經由無菌接合裝置等由該培養基填充 口 21填充培養基。
[0041] 另外，在本實施方式的細胞培養用試劑盒中，還可以使用僅具備1個接口的培養 基儲藏容器20,由該接口將培養基填充至培養基儲藏容器20后，由該接口將培養基轉移至 培養容器10。
[0042] 此外，培養基儲藏容器20還可以在培養結束后作為廢液容器使用。即，通過在從 培養容器10向細胞回收容器40回收細胞之前將培養基的上清液轉移至作為廢液容器的培 養基儲藏容器20,可以將之后濃縮的細胞懸浮液從培養容器10送至細胞回收容器40。這 在不使用專用的廢液容器的第二實施方式中也同樣。
[0043] 另外，在本實施方式的細胞培養用試劑盒中，也可以具備2個以上培養基儲藏容 器20。由此，除了能夠儲藏2倍量同樣的培養基之外，通過分別儲藏不同的培養基，還可以 向培養容器10以各種變更方式供給培養基。
[0044] 細胞注入容器30是裝有在培養開始時必要的細胞和培養基的容器。將該容器 的內容物移至培養容器10,開始培養。加入細胞注入容器30的細胞和培養基優選總量約 250ml左右，但并不限于此。
[0045] 另外，由于細胞注入容器30是加入細胞和培養基的容器，因此優選與培養容器10 同樣地具有透氣性。另外，還優選具有低細胞毒性、低溶出性等。因此，作為細胞注入容器 30的材料，優選使用與培養容器10同樣的材料。
[0046] 該細胞注入容器30具備至少1個接口。然后，通過該接口從細胞注入容器30向 培養容器10輸送培養開始時的細胞和培養基。
[0047] 細胞回收容器40是在培養結束后，用于從培養容器10回收培養的細胞和培養基 的一部分的容器。因此，細胞回收容器40也優選具有與培養容器10同樣的特性，作為其材 料優選使用與培養容器10同樣的材料。
[0048] 細胞回收容器40具備至少1個接口，通過該接口從培養容器10向細胞回收容器 40輸送細胞和培養基的一部分。
[0049] 取樣容器50是在細胞的培養中、培養結束后，用于將培養容器10中的細胞懸浮液 的一部分轉移并進行取樣的容器。作為向該取樣容器50轉移的樣品，優選例如10ml左右 的量，但并不限于此。
[0050] 取樣容器50具備2個接口，其中一個接口上連接著與培養容器10連接的導管 (管），從而細胞懸浮液可從培養容器10向取樣容器50輸送。另外，另一個接口是為了提 取取樣容器50內的細胞懸浮液的一部分來進行各種分析而使用的。另外，還可以形成具備 均進行這些的1個接口的構成、具備3個以上接口并可以進行多次分取的構成。
[0051] 接著，對本實施方式的細胞培養用試劑盒中的連接各容器的導管進行說明。這些 導管的材料優選根據使用目的適宜選擇適當的材料。可以使用例如硅酮樹脂、軟質氯乙烯 樹脂、聚丁二烯樹脂、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、聚氨酯系熱塑性彈性體、聚酯系熱塑性彈 性體、娃酮系熱塑性彈性體、苯乙烯系彈性體，例如SBS (苯乙烯-丁二烯-苯乙烯）、SIS (苯 乙烯-異戊二烯-苯乙烯）、SEBS (苯乙烯-乙烯-丁烯-苯乙烯）、SEPS (苯乙烯-乙烯-丙 烯-苯乙烯）、聚烯烴樹脂、氟系樹脂等。
[0052] 另外，在本實施方式的細胞培養用試劑盒中，導管可以使用大致分為2種的不同 導管。
[0053] S卩，用于連接培養容器10和培養基儲藏容器20的培養基供給用管、和連接其他容 器的組合之間的培養基轉移用管。
[0054] 作為用于連接培養容器10和培養基儲藏容器20的培養基供給用管，特別優選使 用包含聚烯烴或硅酮樹脂的管。培養基供給用管是在培養期間一點點將培養基轉移至培養 容器10的管，因此特別優選具有優異的低細胞毒性、低溶出性等。另一方面，該培養基供給 用管在培養工序中沒有特別熔斷（溶斷）的必要性。因此，考慮到這些，優選使用包含上述 材料的管。
[0055] 圖1中，假定培養基儲藏容器連接管22由這樣的培養基供給用管構成，可以適宜 使用例如內徑3. 5mm、外徑6. 0mm的娃管等。
[0056] 連接其他容器的組合之間的培養基轉移用管不是持續長時間轉移培養基的管，因 此，沒有必要使用在低細胞毒性、低溶出性等方面具備高度功能的管。另外，理想的是可以 通過熔斷導管，在將細胞注入容器、細胞回收容器（廢液容器）、取樣容器保持封閉系統的 狀態下從本實施方式的細胞培養用試劑盒中取出使用。
[0057] 因此，作為與這些容器連接的培養基轉移用管，優選使用至少一處由熱塑性樹脂 形成的管。另外，也可以使培養基轉移用管的全體由熱塑性樹脂形成。
[0058] 另外，作為熱塑性樹脂，可以使用例如軟質氯乙烯樹脂，但并不限于此。
[0059] 圖1中，假定細胞注入容器連接管31、細胞回收容器連接管41、及取樣容器連接管 51由這樣的培養基轉移用管構成，可以優選使用例如內徑3. 3mm、外徑5. 0mm的氯乙烯管 等。
[0060] 另外，在形成用于從本實施方式的細胞培養用試劑盒的外部將培養基供給至培養 基儲藏容器20的培養基填充口 21的接口上，優選連接包含熱塑性樹脂的管，特別優選連接 包含軟質氯乙烯樹脂的管。這是由于，通過無菌接合裝置從該培養基填充口 21對培養基儲 藏容器20填充培養基，但現在與該無菌接合裝置的連接中主要使用軟質氯乙烯樹脂。另 夕卜，對于管的前端處理，除了使用本實施方式的二段密封以外，還可以應用螺旋接頭（luer connector)、無針接頭、隔板（七7。夕 Λ )等構件。
[0061] 本實施方式的細胞培養用試劑盒如圖1所示，是在培養容器10上僅具備1個接口 的1接口方式。
[0062] 即，在本實施方式的細胞培養用試劑盒中，在培養容器10上具備第一接口 12,在 該第一接口 12上通過培養基儲藏容器連接管22連接有培養基儲藏容器20。而且，形成在 該培養基儲藏容器連接管22上連接著其他容器的構成。
[0063] 即，細胞注入容器30通過細胞注入容器連接管31與培養基儲藏容器連接管22連 接。另外，細胞回收容器40通過細胞回收容器連接管41與培養基儲藏容器連接管22連接。 另外，取樣容器50通過取樣容器連接管51與培養基儲藏容器連接管22連接。而且，管泵 僅在培養基儲藏容器連接管22上具備。
[0064] 此處，細胞注入容器30優選與培養基儲藏容器連接管22中的培養容器10的近旁 連接。這是由于，若這樣設置，則在培養開始時，從培養基儲藏容器20向培養容器10注入 培養基的過程中，可以將培養基儲藏容器連接管22內的空氣進入培養容器10的量抑制到 最小限度。
[0065] 具體來說，首先從培養基儲藏容器20向細胞注入容器30輸送培養基，從而連接培 養基儲藏容器20和細胞注入容器30之間的導管的內部充滿培養基。此時，該導管的內部 存在的空氣移動到細胞注入容器30的內部。接著，從細胞注入容器30向培養容器10輸送 細胞和培養基時，可以使細胞注入容器30內的空氣移動到上部，而僅將細胞和培養基從細 胞注入容器30向培養容器10送出。
[0066] 因此，進入培養容器10的空氣僅在從連接細胞注入容器30的培養基儲藏容器連 接管22的近旁到培養容器10之間存在。因此，通過使細胞注入容器30連接在培養基儲藏 容器連接管22中盡量靠近培養容器10的位置，可以在不妨礙細胞的觀察、撮影的程度上將 輸送至培養容器10的空氣抑制到最小限度。
[0067] 另外，至少對于培養基儲藏容器20和細胞注入容器30,優選在細胞培養用試劑盒 中能夠取下地構成。這是由于，在使用前培養基儲藏容器20中填充有培養基，細胞注入容 器30中填充有細胞和培養基，在使用時使它們與細胞培養用試劑盒連接來使用。它們以外 的培養容器10、細胞回收容器40、取樣容器50和附屬于它們的管類優選在使用前（制造 時）作為一體地構成。另外，后述的廢液容器60也可以在使用前作為一體地構成。
[0068] 而且，優選在各管上具備夾子，或者用電磁閥等控制各管中的培養基等的轉移。
[0069]另外，培養基儲藏容器連接管22中的連接部分可以使用帶帽或帶蓋的螺旋接頭 (無針接頭）等。
[0070] 而且，本實施方式的細胞培養用試劑盒中，培養基儲藏容器連接管22使用硅管， 除此之外使用氯乙烯管，根據需要使用連接管（例如內徑5. 3mm、外徑7. 0mm)，但本發明并 不限于類似于這些的具體的構成。
[0071] 本實施方式的細胞培養用試劑盒可以采用例如類似于以下的方法使用。
[0072] 首先，在圖1所示細胞培養用試劑盒中，連接填充有培養基的培養基儲藏容器20 的培養基儲藏容器連接管22中的接頭，并且通過接頭連接填充有細胞和培養基的細胞注 入容器30的細胞注入容器連接管31。
[0073] 接著，從培養基儲藏容器20通過培養基儲藏容器連接管22和細胞注入容器連接 管31將培養基轉移至細胞注入容器30。此時，進入培養基被轉移的部分的管的空氣進入細 胞注入容器30。
[0074] 接著，從細胞注入容器30向培養容器10轉移細胞和培養基。此時，通過使細胞注 入容器30的接口朝下側堅立，使進入細胞注入容器30的空氣集中在上部等，可以不將空氣 輸送至培養容器10,而僅將細胞和培養基轉移至培養容器10。
[0075] 接著，從培養基儲藏容器20通過培養基儲藏容器連接管22將培養基轉移至培養 容器10。另外，從細胞注入容器30將細胞和培養基轉移至培養容器10的時機不限于上述， 還可以在例如從培養基儲藏容器20向培養容器10轉移一部分或全部培養基的時候進行。
[0076] 然后，若在培養容器10中填充有規定量的培養基和細胞，則進行適宜振動、攪拌， 進行一定期間細胞的培養。在細胞培養中，通過將樣品從培養容器10向取樣容器50適宜 轉移，可以用于調查、分析。
[0077] -定期間的細胞培養一結束，就進行細胞的回收。此時，培養基儲藏容器20作為 廢液容器使用。
[0078] S卩，首先使培養容器10靜止將細胞沉淀到下部后，將細胞懸浮液的上清液從培養 容器10向培養基儲藏容器20轉移。由此，可以濃縮培養容器10中的細胞懸浮液，可以降 低向細胞回收容器40轉移的液量。接著，將該濃縮的細胞懸浮液從培養容器10回收至細 胞回收容器40。
[0079] 像這樣，通過使用本實施方式的細胞培養用試劑盒，可以在封閉系統中進行細胞 培養。
[0080] 如上所述，根據本實施方式的細胞培養用試劑盒，在使用培養容器的細胞培養中， 可以將從細胞注入到培養基追加、取樣、回收在試劑盒內在保持封閉系統的同時自動進行。 另外，本實施方式的細胞培養用試劑盒是1接口方式，因此送液用管泵有1個即可，可以簡 化裝置。
[0081] [第二實施方式]
[0082] 接著，參照圖2對本發明的第二實施方式進行說明。該圖為表示本實施方式的細 胞培養用試劑盒的構成的圖。
[0083] 本實施方式的細胞培養用試劑盒在形成2接口方式的方面與第一實施方式不同， 在其他方面上形成與第一實施方式的細胞培養用試劑盒同樣的構成。即，本實施方式的細 胞培養用試劑盒優選具備培養容器110、培養基儲藏容器20、細胞注入容器30、細胞回收容 器40,而且優選具備取樣容器50。
[0084] 本實施方式的細胞培養用試劑盒中的培養容器110如圖2所示，具備第一接口 112 和第二接口 113。
[0085] 在第一接口 112上，與第一實施方式同樣，培養基儲藏容器20通過培養基儲藏容 器連接管22連接。在第二接口 113上，細胞回收容器40通過細胞回收容器連接管41連 接。在培養基儲藏容器連接管22及細胞回收容器連接管41中，分別使用管泵，分別進行培 養基、細胞懸浮液的轉移。
[0086] 另外，細胞注入容器30通過細胞注入容器連接管31與培養基儲藏容器連接管22 連接，取樣容器50通過取樣容器連接管51與培養基儲藏容器連接管22連接。
[0087] 本實施方式的細胞培養用試劑盒的使用方法可以作為直到細胞的培養結束為止 與第一實施方式同樣的方法。而且，在細胞的回收時，可以不經由培養基儲藏容器連接管 22,而經由第二接口 113和細胞回收容器連接管41，通過管泵將細胞懸浮液回收至細胞回 收容器40。
[0088] 根據本實施方式的細胞培養用試劑盒，如上所述，可以在細胞的回收時，不經由培 養基儲藏容器連接管22,通過專用的管泵將細胞懸浮液從培養容器110回收至細胞回收容 器40。因此，可以更高效地進行細胞的回收。本實施方式為2接口方式的一例，也可以代替 細胞回收容器40而通過第二接口 113和取樣容器連接管51連接取樣容器50。
[0089][第三實施方式]
[0090] 接著，參照圖3對本發明的第三實施方式進行說明。該圖為表示本實施方式的細 胞培養用試劑盒的構成的圖。
[0091] 本實施方式的細胞培養用試劑盒在形成3接口方式的方面與第一實施方式不同， 在其他方面上形成與第一實施方式的細胞培養用試劑盒同樣的構成。即，本實施方式的細 胞培養用試劑盒優選具備培養容器210、培養基儲藏容器20、細胞注入容器30、細胞回收容 器40、廢液容器60,另外優選具備取樣容器50。另外，作為培養基儲藏容器20,具備培養基 儲藏容器20a和20b這兩個。
[0092] 本實施方式的細胞培養用試劑盒中的培養容器210如圖3所示，具備第一接口 212、第二接口 213、及第三接口 214。
[0093] 本實施方式中，取樣容器50和廢液容器60分別通過取樣容器連接管51、廢液容器 連接管61連接于第一接口。另外，在這些管發生合流的管部分使用管泵，分別進行細胞懸 浮液向取樣容器50的轉移、以及上清液向廢液容器60的轉移。
[0094] 另外，在第二接口 213上，通過培養基儲藏容器連接管22 (22a、22b)，連接著培養 基儲藏容器20a、20b。通過像這樣使用多個培養基儲藏容器，可以組合不同組成的培養基， 并向培養容器10轉移，可以使供給的培養基的組成、時機等具有不同變換方式。另外，在培 養基儲藏容器連接管22使用管泵，進行培養基向培養容器210的轉移。
[0095] 另外，在第三接口 214上，細胞回收容器40通過細胞回收容器連接管41連接，通 過管泵，細胞懸浮液從培養容器210向細胞回收容器40轉移。
[0096] 本實施方式的細胞培養用試劑盒的使用方法首先直到開始細胞的培養為止，可以 采用與第一實施方式同樣的方法。另外，圖3中，出于記載空間的限制，細胞注入容器連接 管31連接在培養基儲藏容器連接管22的中途，但實際上為了抑制在培養容器210中進入 空氣，其優選連接在第二接口的近旁。
[0097] 另外，在細胞培養中，通過將樣品從培養容器210向取樣容器50適宜轉移，可以用 于調查、分析。
[0098] 進一步，在細胞培養結束后，可以將細胞懸浮液的上清液從培養容器210向廢液 容器60通過廢液容器連接管61進行轉移，從而濃縮培養容器210中的細胞懸浮液。最后， 將該濃縮的細胞懸浮液從培養容器210回收至細胞回收容器40。
[0099] 根據本實施方式的細胞培養用試劑盒，可以同時進行多項操作。尤其是在培養基 儲藏容器20、培養基儲藏容器連接管22還殘留有培養基的情況下，也可以進行向取樣容器 50的取樣，可以靈活調整培養基的供給和取樣的時機。
[0100][第四實施方式]
[0101] 接著，參照圖4?圖6對本發明的第四實施方式進行說明。這些圖是表示本實施 方式的細胞培養用試劑盒的構成的圖。
[0102] 本實施方式的細胞培養用試劑盒的特征在于，在第一實施方式?第三實施方式的 構成的基礎上，還具備用于調整培養基的溫度的溫度調節容器70及溫度調節容器連接管 71。對于其他構成，可以形成與第一實施方式?第三實施方式中的構成同樣的構成。
[0103] 以下，采用表示對第一實施方式的細胞培養用試劑盒追加溫度調節容器70及溫 度調節容器連接管71的本實施方式的細胞培養用試劑盒的圖4進行說明，但對于圖5、6中 的溫度調節容器70及溫度調節容器連接管71也和圖4同樣。
[0104] 溫度調節容器70是在從培養基儲藏容器20向培養容器10轉移培養基時，用于暫 時儲存轉移的培養基、調整培養基的溫度的容器。轉移的培養基的量沒有特別限定，可以為 培養基儲藏容器20內的培養基的一部分或全部。另外，在細胞培養用試劑盒中具備多個培 養基儲藏容器20的情況下，在其中一部分培養基儲藏容器20中儲藏用于向培養容器10的 培養中的培養基追加的生理活性物質、細胞活素、其他各種物質而不是培養基時，還可以通 過溫度調節容器70使這些升溫。溫度調節容器70的容器優選具有與培養基儲藏容器20 同樣的氣體阻隔性。
[0105] 溫度調節容器70上具備至少1個接口，接口上連接有溫度調節容器連接管71，溫 度調節容器連接管71與連接培養基儲藏容器20和培養容器10的培養基儲藏容器連接管 22連接。即，溫度調節容器70從連接培養基儲藏容器20和培養容器10的管分支，以保持 封閉系統的形式在細胞培養用試劑盒中具備。溫度調節容器連接管71和培養基儲藏容器 連接管22也可以是一體地形成的。
[0106] 另外，溫度調節容器70優選由軟包材料構成，還優選具有除氣的構成。若在溫度 調節容器70中培養基升溫，則在培養基中溶解的氣體逸出。此時，通過使溫度調節容器70 的接口朝下，可以使氣體集中在溫度調節容器70的上部，可以僅將培養基送液至培養容器 10。因此，可以培養容器10內不混入多余氣泡地轉移培養基。
[0107] 溫度調節容器70優選在配置有培養容器10的恒溫箱的內部配置。在這種情況下， 溫度調節容器70內的培養基可以調節到與培養容器10內的培養基相同的溫度。作為該溫 度，可以設為例如37°C。
[0108] 另外，還優選將溫度調節容器70配置于恒溫箱的外部，例如通過其他加溫裝置對 溫度調節容器70加溫，調整溫度調節容器70內的培養基溫度。這種情況下，可以調整到例 如30?37 °C等溫度范圍。
[0109] 而且，通過將溫度調節容器70配置于恒溫箱的外部，不設置特別的加溫裝置而使 其靜置，由此也可以使溫度調節容器70內的培養基溫度回到常溫（室溫）。
[0110] 另外，在本實施方式的細胞培養用試劑盒中，也可以具備2個以上溫度調節容器 70。由此，可以同時調節2倍量以上的培養基、其他物質的溫度。
[0111] 由于溫度調節容器連接管71在培養期間將培養基一點點向培養容器10轉移，所 以特別理想的是具有優異的低細胞毒性、低溶出性等，另外在培養工序中，沒有特別熔斷的 必要性。因此，溫度調節容器連接管71優選設為與連接培養容器10和培養基儲藏容器20 的培養基儲藏容器連接管22同樣的管。
[0112] 如上所述，根據本實施方式的細胞培養用試劑盒，可以將用于轉移至培養容器的 必要的量的培養基加入溫度調節容器并升溫后，送液至培養容器。
[0113] 因此，培養容器內的培養基溫度不降低，可以阻止細胞的增殖障礙。
[0114] 另外，由于可以像這樣通過溫度調節容器使培養基升溫，培養基儲藏容器內的培 養基可以如之前一樣冷藏保存，可以防止培養基的加熱時間變長時細胞的培養效率降低這 樣的問題的發生。
[0115] 而且，由于通過升溫溶于培養基的氣體逸出，因此可以從溫度調節容器向培養容 器僅轉移培養基，可以防止氣泡混入培養容器內。
[0116] 本發明不限于以上的實施方式，在本發明的范圍內，各種變更實施當然是可能的。
[0117] 例如實施方式中示出使用特定大小的管的例子，還使用特定的接頭，但在本發明 的技術的范圍內，能夠使用可以得到同樣功能的其他部件等進行適宜變更。另外，也可以將 填充完用于向培養中的培養基中追加的生理活性物質、細胞活素、其他各種物質的容器預 先附加安裝在實施方式的試劑盒中。
[0118] 產業上的可利用性
[0119] 本發明在需要培養大量細胞的生物醫藥、再生醫療、免疫療法等領域中，可以優選 地利用。
【權利要求】
1. 一種細胞培養用試劑盒，其特征在于，其是用于培養細胞的封閉系統細胞培養用試 劑盒， 分別具有至少1個以上用于培養細胞的培養容器、用于預先儲藏培養基等的培養基儲 藏容器、用于注入細胞的細胞注入容器和回收培養后的細胞懸浮液的細胞回收容器， 所述培養基儲藏容器還作為回收培養后的培養基的廢液容器使用， 所述培養容器、所述培養基儲藏容器、所述細胞注入容器及所述細胞回收容器通過導 管連接。
2. 如權利要求1所述的細胞培養用試劑盒，其特征在于， 具有至少1個以上能夠對培養中的細胞懸浮液的一部分進行取樣的取樣容器， 所述取樣容器通過導管與所述培養容器連接。
3. 如權利要求1或2所述的細胞培養用試劑盒，其特征在于， 除所述培養基儲藏容器之外，還具有至少1個以上回收培養中或培養后的培養基的廢 液容器， 所述廢液容器通過導管與所述培養容器連接。
4. 如權利要求1?3中任一項所述的細胞培養用試劑盒，其特征在于， 具有2個所述培養基儲藏容器，分別填充有同樣的或不同的培養基。
5. 如權利要求1?4中任一項所述的細胞培養用試劑盒，其特征在于， 用于調節培養基等的溫度的溫度調節容器從連接所述培養容器和所述培養基儲藏容 器的導管分支設置。
6. 如權利要求5所述的細胞培養用試劑盒，其特征在于， 在所述培養基儲藏容器中冷藏的培養基等的一部分或全部被轉移至所述溫度調節容 器并升溫到規定溫度后，被轉移至所述培養容器。
7. 如權利要求1?6中任一項所述的細胞培養用試劑盒，其特征在于， 所述各容器由可撓性材料形成為袋狀。
8. 如權利要求1?7中任一項所述的細胞培養用試劑盒，其特征在于， 所述培養基儲藏容器在23°C - 80% RH條件下具有1000ml/m2 ·天· atm以下的二氧 化碳透過率，所述培養容器在37°C - 80% RH條件下具有5000ml/m2 ·天· atm以上的氧氣 透過率。
9. 如權利要求1?8中任一項所述的細胞培養用試劑盒，其特征在于， 所述培養基儲藏容器具有至少2條導管，未與所述培養容器連接的導管由軟質氯乙烯 樹脂形成。
10. 如權利要求2?9中任一項所述的細胞培養用試劑盒，其特征在于， 通向所述細胞注入容器、所述細胞回收容器、所述取樣容器及所述廢液容器的導管的 至少一處由熱塑性樹脂形成。
11. 一種細胞培養用試劑盒，其特征在于， 所述培養基儲藏容器、及所述細胞注入容器中的至少任意一個能夠從權利要求1?10 中任一項所述的細胞培養用試劑盒上取下。
12. 如權利要求1?11中任一項所述的細胞培養用試劑盒，其特征在于， 所述培養基儲藏容器與所述培養容器之間的導管為聚烯烴或硅酮樹脂。
13. 如權利要求1?12中任一項所述的細胞培養用試劑盒，其特征在于， 所述細胞注入容器從連接所述培養基儲藏容器和所述培養容器的導管中的所述培養 容器的近旁分支。
14. 一種細胞培養用試劑盒的使用方法，其特征在于，其是用于培養細胞的封閉系統細 胞培養用試劑盒的使用方法， 在所述細胞培養用試劑盒中，分別具有至少1個以上用于培養細胞的培養容器、用于 預先儲藏培養基等的培養基儲藏容器、用于注入細胞的細胞注入容器、回收培養后的細胞 懸浮液的細胞回收容器、和用于調節培養基等的溫度的溫度調節容器， 所述培養基儲藏容器還作為回收培養后的培養基的廢液容器使用， 所述培養容器、所述培養基儲藏容器、所述細胞注入容器、所述細胞回收容器及所述溫 度調節容器通過導管連接， 在所述培養基儲藏容器中冷藏有培養基等， 該冷藏的培養基等的一部分或全部從所述培養基儲藏容器被轉移至所述溫度調節容 器， 在所述溫度調節容器中，培養基等升溫到規定溫度， 調節過溫度的培養基等被轉移至所述培養容器。
【文檔編號】C12N5/071GK104093827SQ201380007337
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2013年1月28日 優先權日:2012年2月1日
【發明者】田中鄉史, 戶谷貴彥, 石崎庸一 申請人:東洋制罐集團控股株式會社