一種制備米糠菌種制劑及其用于飼料發酵的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及米糠保質及動物飼料技術領域，具體是一種制備米糠菌種制劑及其用于飼料發酵的方法。
【背景技術】
[0002]我國南方盛產稻米，米糠資源豐富，其主要成分是果皮、種皮、外胚乳、糊粉層和胚，含水率12-14%，富含各種營養素和生理活性物質；平均含蛋白質15%，脂肪16-22%，糖3-8%，還含有大量的維生素、植物醇、膳食纖維、氨基酸及礦物質等，歷來有用來養豬的傳統。但是米糠脂肪中主要的脂肪酸大多為油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸，因此很容易發生酸敗而變質，特別是南方夏天的氣候高溫高濕，5-7天就酸敗變質了。本發明利用產朊假絲酵母菌和乳酸乳球菌兩種益生菌在生長過程中對油脂具有代謝同化作用原理，以及它們生長過程中會產生生物活性物，如:抗菌肽、維生素、谷胱甘肽、酶系、生香物質以及菌體蛋等的特點。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在于提供一種制備米糠菌種制劑及其用于飼料發酵的方法，通過在新鮮米糠中接入產朊假絲酵母菌和乳酸乳球菌，經過發酵處理不但能使米糠的保質期大幅度提高到6-8個月，同時也能使其成為了一種富含生物活性物和大量益生菌的米糠菌種制劑。通過在飼料中加入米糠菌種制劑，經微生物的發酵作用，所生產的飼料也可富含益生菌，生物活性物和菌體蛋白等，飼料味香、適口性好，并能改善牲畜的腸道菌群，提高牲畜對疾病的抵抗力，在一定程度上起到了類似瘦肉精、抗生素和生長激素的正面作用，而又不存在安全問題和藥物殘留問題。
[0004]為實現上述目的，本發明提供如下技術方案:
一種制備米糠菌種制劑及其用于飼料發酵的方法，包括以下步驟:
1)按無菌操作規程，取出4°C冰箱保存備用的酵母菌和乳酸菌兩種斜面菌種，用接種鏟鏟下一鏟酵母菌菌苔接入麥芽汁培養液中，鏟下一鏟乳酸菌菌苔接入LB培養液中，一起置28-32°C, 160rpm震蕩培養18-24小時，得到兩種培養菌液；
2)按無菌操作規程，用上述步驟I)生產的培養菌液，按5wt%接種量分別接入各自對應的生產用麥芽汁培養液和生產用LB培養液，一起置28-32°C，160rpm震蕩培養18-24小時，得到兩種一級菌種；
3)將上述步驟2)生產的兩種一級菌種按酵母菌:乳酸菌=2:1的比例混合，得到聯合一級菌種；
4)將上述步驟3)生產的聯合一級菌種按6-8wt%接種量，用8-12wt%米糠分量、且含0.5-1.5wt%氮源物質的純凈水或自來水加以稀釋，再均勻地拌入新鮮米糠中，使得米糠含水量達到30-34wt%，用塑料膜覆蓋置28-32?恒溫室發酵3_5天，至總菌數計數達到108cfu/g數量級，即為二級固態菌種； 5)將上述步驟4)生產的二級固態菌種按8-12wt%的接種量，與16-20wt%米糠分量、且含0.5-1.5wt%氮源物質的純凈水或自來水一起，均勻拌入新鮮米糠中，使得米糠含水量達到30-34wt%，用塑料膜覆蓋或裝入塑料編織袋中，置28-32?恒溫室發酵5_7天，至總菌數計數達到108cfu/g數量級，即為米糠菌種制劑；
6)將上述步驟5)生產的米糠菌種制劑按15wt%的接種量均勻拌入常規飼料中，用塑料膜覆蓋或裝入塑料編織袋中，置溫室下保存一段時間進行飼料發酵，發酵時間隨室溫而定，約7-15天完成，即為發酵飼料。
[0005]作為本發明進一步的方案:所述步驟I)中使用的酵母菌是產朊假絲酵母菌，乳酸菌是乳酸乳球菌。
[0006]作為本發明進一步的方案:所述步驟2)中，產朊假絲酵母菌所用生產用麥芽汁培養液，為搗碎的干麥芽，加入4-5倍麥芽分量的水，在65°C水浴中糖化3-4小時，連同麥芽一起滅菌制得。
[0007]作為本發明進一步的方案:所述步驟3)中，產朊假絲酵母菌與乳酸乳球菌按2:
I的比例混合成聯合一級菌種。
[0008]作為本發明進一步的方案:所述步驟5)中，產朊假絲酵母菌和乳酸乳球菌是在28-32°C聯合固態發酵生成二級固態菌種。
[0009]作為本發明進一步的方案:所述步驟4)和5)中，米糠固態發酵接種時所補加的含
0.5-1.5wt%氮源物質的純凈水或自來水，既可以增加濕度，又可以增加氮元素營養，其中的氮源物質為尿素或者銨鹽，所述銨鹽包括硫酸銨和硝酸銨。
[0010]作為本發明進一步的方案:所述步驟5)中，米糠菌種制劑是經過連續二次固態發酵，逐次放大生產的。
[0011]作為本發明進一步的方案:所述步驟4)至步驟6)中，新鮮米糠和含0.5-1.5wt%氮源物質的純凈水或自來水無需滅菌或預處理，減少了能耗。
[0012]作為本發明進一步的方案:所述步驟3)至步驟6)無需按無菌操作規程進行。
[0013]作為本發明進一步的方案:所述步驟6)中，米糠菌種制劑按15wt%的加入量均勾拌入常規飼料中，固態發酵7-15天，制成發酵飼料。
[0014]作為本發明進一步的方案:所述步驟6)中，米糠菌種制劑發酵飼料可由用戶自己完成；就近發酵就近使用。
[0015]根據上述制備方法而需要的培養液和含氮源水，包括如下種類:
1、麥芽汁培養液；將干麥芽搗碎，加入4-5倍麥芽分量的水，在65°C水浴中糖化3-4小時，連同麥芽一起即為步驟2)所需的生產用麥芽汁培養液，糖化液攪拌煮沸后再過濾，將濾液稀釋到5-6波美度，即為步驟I)所需的麥芽汁培養液，均需置121°C滅菌30min。
[0016]2、LB培養液；蛋白胨10.0克、酵母浸膏份10.0克、氯化鈉5.0，加水溶解，調pH值至7，加水定容至1.0升，即為步驟I)和步驟2)所需的LB培養液，置121°C滅菌20min。
[0017]3、含0.5-1.5%氮源的純凈水或自來水:尿素，或者硫酸銨、硝酸銨……等銨鹽50-150克溶于10升的純水或自來水中，也可以用干凈的山泉水、井水代替純凈水和自來水，無需滅菌處理。
[0018]從上述制備方法和所需要的培養液可以看出，本發明制備米糠菌種制劑及用于飼料發酵的方法的有益效果: 1.培養液成份簡單、配制方便；
2.產品生物活性物質和益生菌含量高；
3.生產工藝簡單，從步驟3開始無需無菌操作；
4.貯存時間長達5-8個月。
[0019]與現有技術相比，本發明的有益效果是:
本發明通過在新鮮米糠中接入產朊假絲酵母菌和乳酸乳球菌兩種益生菌，經過聯合固態發酵，特別是對脂肪和脂肪酸的代謝或同化作用，極大地降低了米糠不飽和脂肪酸的含量，加上菌體代謝產生的生物活性物，如；抗菌肽、維生素、谷胱甘肽、酶系、生香物質和菌體蛋白，不但使米糠的保質期大幅度提高到6-8個月，同時也使之成為了一種富含生物活性物和大量益生菌的米糠，一種可用于飼料發酵的米糠菌種制劑。用其發酵的飼料味香、適口性好，并能改善牲畜的腸道菌群，提高牲畜對疾病的抵抗力。在一定程度上起到了類似瘦肉精、抗生素和生長激素的正面作用，而又不存在安全問題和藥物殘留問題。本發明使米糠原料得到充分利用，降低了發酵飼料成本和養殖成本。
[0020]本發明的培養液成份簡單、配制方便，米糠原料和含氮源水不需要滅菌等預處理，從步驟3)開始就無需按無菌操作規程進行操作了，所以生產工藝簡單粗放。
【具體實施方式】
[0021]下面將結合本發明實施例，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
[0022]實施例1
本發明實施例中，一種制備米糠菌種制劑及其用于飼料發酵的方法，具體步驟如下:
1)將100g干麥芽搗碎，加入4300ml的水，在65°C水浴中糖化3h，取出500ml混懸糖化液攪拌煮沸后再過濾，將濾液稀釋到5波美度，即為麥芽汁培養液，按2ml/支分裝10支玻璃試管，用500ml三角燒瓶分裝兩瓶，一瓶裝240ml，一瓶裝250ml并加入5g瓊脂粉即為麥芽汁培養基，剩下的連同麥芽一起用100ml三角燒瓶按470ml/瓶分裝8瓶，即為生產用麥芽汁培養液；
2)稱取24g蛋白胨、12g酵母浸膏粉和12g氯化鈉，加水溶解，用IN的NaOH調pH值至7，加水定容至2400ml，即為LB培養液，按2ml/支分裝至10支玻璃試管，用500ml三角燒瓶分裝兩瓶，一瓶裝120ml，一瓶裝250ml并加入5g瓊脂粉即為LB培養基，剩下的用100ml三角燒瓶按470ml/瓶分裝4瓶；
3)上述培養液或培養基連同六個茄子瓶、十塊培養皿一起封口或包裹，置高壓滅菌柜，在121°C下滅菌30min ；
4)滅菌后，待自然冷卻至45°C時取出，按無菌操作規程，將麥芽汁培養基和LB培養液基按30ml/瓶，各分裝3個茄子瓶，按12ml/皿，各分裝4塊培養皿，平放靜置凝固；連同上述培養液一起置37°C下培養18h，以確認培養基或培養液滅菌徹底且沒有操作染菌；
5)按無菌操作規程，分別將產朊假絲酵母菌和乳酸乳球菌保藏菌種，劃線接種在麥芽汁培養基和LB培養基平皿上，置28°C培養36h，挑選生長旺盛、形態正常的單菌落，接種在對應的培養液試管中，置28°C，160rpm震蕩培養18h，得到兩種菌的純培養菌液，取0.1ml加至茄子瓶培養基上，用涂布棒涂布均勻菌液，兩種菌各涂布茄子瓶3瓶，置28°C培養18h即為菌種斜面，置4°C冰箱保存備用，制作一次茄子瓶菌種可供多批次生產使用，一般2個月之內使用有效；
6)按無菌操作規程，從上述產生的產朊假絲酵母菌菌種斜面用接種鏟鏟下一鏟菌苔，接入240ml麥芽汁培養液中，同樣從乳酸乳球菌菌種斜面鏟下一鏟菌苔，接入120ml的LB培養液中，置28°C，160rpm