一種納米醒腦靜注射制劑及其制備方法

專利名稱：一種納米醒腦靜注射制劑及其制備方法
技術領域：
本發明屬于中藥制藥技術領域，具體涉及一種納米醒腦靜注射制劑及其制備方法。
背景技術：
納米中藥主要是指運用納米技術制造的，粒徑小于100納米的中藥有效成分、有效部位、原藥及復方制劑。生物機體對藥物的吸收、代謝是一個復雜的過程，中藥制劑產生的藥理效應不能僅僅歸之于藥物特有的化學組成還與該制劑的物理狀態密切相關。因此，改變藥物制劑的物理狀態是新藥研制的一種有效方法。在改變物理狀態方面，改變藥物的單元尺寸是十分有效的。當顆粒尺寸進入納米量級時由于量子尺寸效應和表面效應，納米粒子呈現出新奇的物理化學和生物學特性。這就是應用納米技術于中藥研究可能使藥物活性和生物利用度提高乃至產生新的特性依據所在。
納米中藥的制備是研究納米中藥最基礎的，也是最重要的問題。將納米技術引入中藥的研究時，必須考慮中藥組方的多樣性、中藥成分的復雜性，例如中藥單味藥可分為礦物藥、植物藥、動物藥和菌物藥等，中藥的有效部位和有效成分又包括無機化合物和有機化合物、水溶性成分和脂溶性成分等。因此，針對不同的藥物，在進行納米化時必須采用不同的技術路線。納米中藥與中藥新制劑關系十分密切，如何在中藥理論的指導下進行納米中藥新制劑的研究，將中藥制成高效、速效、長效、計量小、低毒、服用方便的現代制劑，也是進行中藥納米化時必須考慮的問題。
目前，納米技術在中藥研究中存在的問題也不能忽視的。第一，納米中藥的制備困難我國雖已制備一些納米級的中藥，可是由于中藥品種繁多，成分復雜，不同的成分由于其作用部位、作用機制及作用緩急的不同而要求其粒徑大小、載體成分及給藥劑量均有可能不同。同時納米中藥應該有它自己的一套質量標準，使其生產規范化。第二，納米中藥的毒副作用藥物制成納米微粒，其物理性質和化學性質均發生了顯著的變化，這些變化對人體是否有毒副反應均未有有關的研究報道。但由于納米材料的特殊性，除了可穿透皮膚，還會進入細胞器內，是否會直接參與或作為催化劑擾亂機體正常的化學反應，均未見有關報道。此外，納米中藥還可以通過機體的屏障系統，那它是否會影響中樞神經系統，精子的生成及其活力、胎兒的發育等，這些問題均無法回避。第三，中藥在納米級粉碎后，納米微粒表面積變大，由于納米微粒表面的活性使他們很容易團聚在一起，這給納米微粒的收集及其藥效的穩定性帶來很大的困難。第四，成本提高由于現有技術水平及設備的限制，造成納米中藥在制備中的花費比傳統中藥的制備要高出不少。
現代中藥的研究就是要在繼承中藥傳統的基礎上，充分利用現代科技手段，使中藥具有先進的生產工藝和現代劑型，做到“有效、安全、可控”，將納米技術應用于中藥領域是現代中藥發展的重要方向之一。納米中藥一般不是簡單地將中藥材進行粉碎至納米量級，而是針對組成中藥方劑的某味藥的有效部位甚至是有效成分進行納米技術加工處理，賦予傳統中藥以新的功能，如提高生物利用度，增強靶向性；降低毒副作用；呈現新的藥效，拓寬原藥的適應證；豐富中藥的劑型選擇；減少用藥量，節省中藥資源等。
同傳統中藥相比，納米中藥具有以下特點①提高了藥物的利用度，減少用藥量。②增強藥物的靶向性。③具有緩釋功能，將中藥納米粒進行一定的表面修飾后，可能使中藥具有緩釋作用。④呈現新的藥效，拓寬原藥適應癥，中藥加工至納米尺寸時，由于其量子尺寸等效應導致其物理、化學特性的改變，從而可使中藥呈現出新功能。⑤豐富中藥的劑型選擇，提升傳統給藥途徑。
徐輝碧等檢索了1998年～2000年美國專利中涉及納米科技的專利，發現該類專利與生物醫學相關的專利占總數的80％以上，楊孟君在2001年一年內申請了940多件納米中藥的專利，但其申請的大部分都是中藥原料藥進行納米粉碎，其專利實用性不強。
目前納米中藥的研究主要集中于利用納米技術對少數成分比較明確的單體有效成分進行納米處理制成納米制劑，或將原料藥直接粉碎成納米級，對大部分中藥的納米制劑研究還很少，主要是因為中藥有效成分和有效部位特別是中藥復方中有效部位本身就是一個“黑匣子”，中藥中真正起藥理作用的有效成分或有效部位研究本身就是一個難題，而且由于中藥成分比較復雜，所以將其制備成納米制劑需要克服的困難較多，因此，中藥納米制劑及技術是醫藥科研工作者的重要研究課題。
醒腦靜注射液是由祖國醫學傳統名方“安宮牛黃丸”經科學提取精制而成的新型中藥制劑，其主要成分有麝香、冰片、梔子和郁金等，具有醒腦開竅、清熱解毒等功效。臨床上用于治療高熱昏迷、腦血管病、顱腦外傷、腦炎、中毒性腦病及各種眩暈癥等療效滿意，近年來臨床已將醒腦靜注射液作為搶救急癥的必備藥品廣泛應用。但是，醒腦靜注射液穩定性較差，貯存一定時間后出現pH值改變，外觀色澤變深，甚至出現渾濁和沉淀等，澄明度不合格，影響該制劑在臨床的治療效果。本發明將其制成納米注射制劑的目的是要克服不良反應，發揮其緩釋作用和靶向作用，以達到起效快和維持良好的血藥濃度。
專利號01101993.X“納米醒腦靜制劑及其制備方法”是以納米麝香、納米郁金、納米冰片、納米梔子為原料，按比例配制，制成新的藥物制劑，該方法只是泛泛的將處方中所有的藥物都制成納米顆粒，并沒有考慮各個成分的特殊性質，所以實用性不強。

發明內容
基于上述原因，本發明研究人員經大量實驗研究，運用現在中藥納米技術，將醒腦靜注射液制備成本發明納米注射制劑，該方法簡便，易于大生產，采用本發明方法制備的制劑溶解性好、理化性質穩定、載藥量大并且制劑穩定性顯著提高，本發明制劑安全性更好、刺激性小，能顯著提高醒腦開竅、清熱涼血、解毒止痛等功效。藥理研究表明該制劑在興奮中樞、解熱、鎮痛、抑菌、抗炎、保肝的藥效等作用方面均有顯著性提高。
本發明旨在應用納米技術將中藥復方制備成納米注射制劑，使其療效顯著提高。
本發明還提供了納米醒腦靜注射制劑的制備方法。
本發明通過以下技術方案實現一、工藝制法(1)有效部位的制備取郁金、梔子藥材粉碎成粗粉，加水進行蒸餾，收集蒸餾液；將麝香加入上述蒸餾液中，并加蒸餾水進行蒸餾，收集蒸餾液，用相同體積的石油醚萃取5次，合并萃取液，減壓回收石油醚，得濃縮液；將冰片和濃縮液合并，用少量乙醇溶解，加入到飽和的羥丙基β-環糊精溶液中，恒溫攪拌，置4℃冰箱冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得到有效部位。
(2)處方組成為有效部位1-4重量份，藥用載體7-35重量份；(3)載體制備方法方法一取有效部位、乳化劑和脂質，在通氮氣條件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和poloxamer-188的水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮氣條件下用高壓乳勻機載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮氣分裝后，迅速冷卻形成主藥混懸液。
方法二稱取乳化劑、泊絡沙瑪F-68、吐溫80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取脂質加入到有效部位中，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續攪拌1h后超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。
方法三取有效部位，脂質和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑，微熱使溶成有機相；另取泊絡沙瑪F-68溶于水中，構成水相，將有機相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續加熱攪拌4h，使有機溶媒完全蒸發并使體系濃縮到半透明狀態，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，繼續攪拌2h，即得主藥混懸液。
方法四取有效部位，溶于30％-70％乙醇中；將脂質溶于烷烴，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉薄膜蒸發儀，控制壓力0.1-0.2個大氣壓，去除有機溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進行超聲處理，得到主藥混懸液。
方法五油相將油或有效部位的油溶液(聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯—乙交酯、殼聚糖、明膠中的一種或幾種)，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F-68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得主藥混懸液。
(4)制劑制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調等滲，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調整濃度，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發明醒腦靜粉針制劑。
本發明所用的脂質可以為脂肪酸甘油酯類(包括三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、Witepsol W35、Witepsol H35、Witepsol H42、單硬脂酸甘油酯)及脂肪酸類(如硬脂酸、棕櫚酸)等。
本發明所用乳化劑可以為磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及磷脂酰膽堿等)、Pluronic F-68、泊洛沙姆、聚山梨醇、膽酸鹽、四丁酚醛等。
本發明納米水針劑、納米輸液劑加入少量PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，可以提高制劑的穩定性。
本發明納米粉針制劑的賦形劑為甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖酐、葡聚糖中的一種或兩種。
本發明中輸液劑還可以用以下方法制備取豆磷脂、甘油與預熱至80℃的適量注射用水進行混合，轉入高速組織搗碎機內，以每分鐘20000轉攪拌3分鐘，反復3次，直至豆磷脂均勻分散，得到分散液；取郁金、梔子藥材粉碎成粗粉，加水進行蒸餾，收集蒸餾液；將麝香加入上述蒸餾液中，并加蒸餾水進行蒸餾，收集蒸餾液，用相同體積的石油醚萃取5次，合并萃取液，減壓回收石油醚，得濃縮液；將冰片和濃縮液合并，得到合并液；將預熱至80℃合并液加入到分散液中，轉入高速組織搗碎機內，以每分鐘20000轉攪拌3分鐘，反復3次，直至合并液均勻分散，得到初乳，將預熱至80℃的注射用水加入到初乳中使達全量，轉移至高壓乳勻機內，勻化3次，取樣鏡檢，至油滴在0.15μm以下；取上述乳劑灌封于50ml的輸液瓶中，充氮，105℃下滅菌45分鐘。
二、質量標準標準依據《中國藥典》2005年版附錄XIX E“微囊、微球與脂質體制劑指導原則”中的方法。H-7000型透射電鏡儀(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相關光譜儀(英國Malvern公司)；LC-10A高效液相色譜儀(日本島津)；TGL-18G型臺式高速離心機。
1.形態觀察及粒徑將本專利納米藥物在透射電鏡下進行形態觀察，可見呈圓球體，大小較均勻，表面光滑，無粘連。根據納米藥物的光學顯微照片測定了500個，平均粒徑為55±20nm，最大粒徑為110nm，最小粒徑為35nm，且粒徑分布符合正態分布規律。
2.包封率和載藥量測定采用反相高效液相色譜法進行含量測定，并用下述公式計算包封率和載藥量包封率(％)＝(投藥量-游離藥物量)/投藥量×100％；載藥量(％)＝(投藥量-游離藥物量)/納米藥物的重量×100％。
結果包封率為90.5％，載藥量為8％-15％。
3.穩定性考察將納米藥物分別置于小瓶內，密封。于冰箱(3-5℃)、室溫(20-25℃)和37℃(RH75％)的環境中放置，于0、1、2和3月觀測納米藥物的外觀、大小、再分散性等。結果均未見明顯變化，3種條件下的納米藥物再分散性保持良好，無聚合現象的發生。結果見表1。
表1 穩定性實驗結果

結論通過上述實驗表明，本專利納米藥物具有很好的穩定性，充分說明本發明工藝具有實際意義。
三、藥理實驗試藥與動物醒腦靜注射液(無錫山禾藥業股份有限公司)；本發明納米醒腦靜注射制劑(按本發明制備工藝制備，由廣東天之驕藥物開發有限公司實驗室制備)；新西蘭家兔，體重約2.5kg；大耳家兔，體重約2.5kg；昆明種小鼠，體重18-22g。
儀器YLS-LA多功能小鼠自由活動記錄儀(廣東天之驕藥物開發有限公司設備維修供應站)1.納米醒腦靜注射制劑對小鼠自由活動的影響取小鼠50只，體重18-22g，雌雄各半，隨機分成生理鹽水空白對照組、醒腦靜注射液和本發明納米醒腦靜注射制劑組，給藥前分別測定各鼠5min內活動次數，經比較，三組小鼠的活動無差異性，有可比性。各藥均按成人用量計算稀釋后每鼠均以0.2ml/10g的劑量ip給藥。給藥30min后用YLS-LA多功能小鼠自由活動記錄儀測定各鼠5min內的自由活動次數，計算各組的均值和標準差，用t檢驗，結果見表2。
表2 納米醒腦靜注射制劑對小鼠的自由活動的影響(n＝10，x±s)

注與空白對照組比較**P＜0.01，與陽性對照組比較#P＜0.05；結果顯示實驗組與對照組比較差異有顯著性意義，說明納米醒腦靜注射液能明顯提高小鼠的自由活動次數，實驗組與陰性對照組比較有顯著性意義，說明納米醒腦靜注射制劑在提高小鼠的自由活動次數比醒腦靜注射液的效果更加顯著。
2.納米醒腦靜注射制劑對小鼠驚厥作用的影響取小鼠50只，體重18-22g，雌雄各半，隨機分成生理鹽水空白對照組、醒腦靜注射液和本發明納米醒腦靜注射制劑組。各藥均按成人用量計算稀釋后每鼠均以0.2ml/10g的劑量ip給藥，用小鼠發生驚厥的只數的百分率作為觀察指標，結果見表3。
表3 納米醒腦靜注射制劑對小鼠驚厥的影響(n＝10)

注與空白對照組比較**P＜0.01，與陽性對照組比較#P＜0.05；
結果顯示實驗組與對照組比較差異有顯著性意義，說明納米醒腦靜注射液能明顯提高小鼠驚厥的發生率，實驗組與陰性組照組比較有顯著性意義，說明納米醒腦靜注射制劑在提高小鼠驚厥的發生率比醒腦靜注射液的效果更加顯著。
3.納米醒腦靜注射制劑對小鼠鎮痛作用的影響(扭體法)取小鼠50只，體重18-22g，雌雄各半，隨機分成生理鹽水空白對照組、醒腦靜注射液和本發明納米醒腦靜注射制劑組。各藥均按成人用量計算稀釋后每鼠均以0.2mL/10g的劑量ip給藥，30min后各鼠ip 0.6％冰醋酸溶液0.3ml/只，記錄15min內各鼠的扭體反應次數，計算各組的均值與標準差，進行t檢驗，結果見表4。
表4 納米醒腦靜注射制劑對小鼠致痛作用的影響(n＝10，x±s)

注與空白對照組比較**P＜0.01，與陽性對照組比較#P＜0.05；結果顯示實驗組與對照組比較差異有顯著性意義，說明納米醒腦靜注射液能明顯減少冰醋酸引起小鼠扭體反應次數，實驗組與陰性組照組比較有顯著性意義，說明納米醒腦靜注射制劑在減少冰醋酸引起小鼠扭體反應次數比醒腦靜注射液的效果更加顯著。
4.血腦屏障透過實驗取新西蘭家兔8只，體重約2.5kg，雌雄不限，分為2組。靜脈注射本發明制劑，原制劑，在不同時間抽取0.5ml左右腦脊液進行實驗，取樣時間分別為注射藥物后的5min、10min、20min、30min、60min、90min、120min。取腦脊液0.25ml加適量溶劑混懸15min后，靜置15min，以10000r/min離心1min，取上清液20μl進樣，含量測定方法參照醒腦靜注射液項下的含量測定方法，結果見表5。
表5 腦脊液中藥物濃度的測定(μg/ml)

上述結果表明醒腦靜注射液透過血腦屏障的量少，且消除迅速，30min后即難以檢測到有效成分，而本發明納米醒腦靜注射制劑通過血腦屏障的量顯著提高，且藥物維持時間更長。
5.溶血毒性考察2％紅細胞混懸液的制備取兔耳緣靜脈取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血。加10倍量的生理鹽水溶液，搖勻，離心，除去上清液，沉淀的紅細胞再用生理鹽水溶液洗滌2-3次，至上清液不呈紅色時為止。將所得的紅細胞用用生理鹽水配成濃度為2％的混懸液，即得。
試驗方法取試管6支，按表中的配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理鹽水溶液，混勻，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的藥液(以第6管為空白對照)，搖勻后，置37℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察1次，1小時后，每隔1小時觀察1次，共觀察2小時。結果見表6。
表6 各組別配比量

結果以第3試管為準，各管均未染有紅色，顯微鏡下觀察未見有紅細胞破裂，說明本品不溶血，安全性好。
6.急性毒性實驗取小鼠80只，體重18-22g，雌雄各半。禁食24h，隨機分4組，每組20只。稀釋成相同的生藥濃度，各組分別尾靜脈注射0.1ml/10g，每天給藥3次，連續7天，觀察小鼠死亡情況，記錄數據，結果見表7。
表7 小鼠用藥、存活情況比較

結論通過上述實驗表明，本專利納米醒腦靜注射制劑與醒腦靜注射液具有相同的安全性7.血管刺激性考察取健康大耳家兔9只，將動物固定于兔箱內，用酒精將皮膚消毒后，于右側耳緣靜脈處注射醒腦靜納米注射制劑，于另一側對應部位注射同一體積的等滲葡萄糖水作為對照。每日注射1次，連續3次，觀察兔耳緣靜脈反應。于末次給藥24h后將兔放血處死，取下兩耳，用10％甲醛溶液浸泡，距注射部位1-4cm處，解剖取出靜脈，做組織切片檢查，觀察注射部位的反應。
結果試驗過程中，肉眼觀察兩耳靜脈注射部位處，未見紅腫、熱等刺激表現。表明給藥組切片部位組織形態無明顯差異，未見本品毒性所致的病理形態學改變(血管結構正常，無內皮細胞損傷，無血栓形成及其他病理性變化)。
四、制備實施例實施例1
(1)有效部位的制備取郁金、梔子藥材粉碎成粗粉，加水進行蒸餾，收集蒸餾液；將麝香加入上述蒸餾液中，并加蒸餾水進行蒸餾，收集蒸餾液，用相同體積的石油醚萃取5次，合并萃取液，減壓回收石油醚，得濃縮液；將冰片和濃縮液合并，用少量乙醇溶解，加入到飽和的羥丙基β-環糊精溶液中，恒溫攪拌，置4℃冰箱冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得到有效部位。
(2)處方組成為有效部位10g，乳化劑為30g，脂質40g；(3)載體制備方法取有效部位10g、大豆卵磷脂30g和三月桂酸甘油酯40g，在通氮氣條件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油8g和poloxamer-188 40g的水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮氣條件下用高壓乳勻機載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮氣分裝后，迅速冷卻形成主藥混懸液。
(4)制劑制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調等滲，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入甘露醇，加注射用水調整濃度，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發明納米醒腦靜粉針制劑500瓶。
將上述納米制劑進行檢測，其納米粒徑為35-110納米

實施例2(1)有效部位的制備取郁金、梔子藥材粉碎成粗粉，加水進行蒸餾，收集蒸餾液；將麝香加入上述蒸餾液中，并加蒸餾水進行蒸餾，收集蒸餾液，用相同體積的石油醚萃取5次，合并萃取液，減壓回收石油醚，得濃縮液；將冰片和濃縮液合并，用少量乙醇溶解，加入到飽和的羥丙基β-環糊精溶液中，恒溫攪拌，置4℃冰箱冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得到有效部位。
(2)處方組成為有效部位5g，乳化劑為15g，脂質20g；(3)載體制備方法按處方稱取12g泊絡沙瑪F-68，3g吐溫80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯20g加入到有效部位中5g，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續攪拌1h后超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。
(4)制劑制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調等滲，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入乳糖，加注射用水調整濃度，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發明納米醒腦靜粉針制劑500瓶。
將上述納米制劑進行檢測，其納米粒徑為35-110納米實施例3(1)有效部位的制備取郁金、梔子藥材粉碎成粗粉，加水進行蒸餾，收集蒸餾液；將麝香加入上述蒸餾液中，并加蒸餾水進行蒸餾，收集蒸餾液，用相同體積的石油醚萃取5次，合并萃取液，減壓回收石油醚，得濃縮液；將冰片和濃縮液合并，用少量乙醇溶解，加入到飽和的羥丙基β-環糊精溶液中，恒溫攪拌，置4℃冰箱冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得到有效部位。
(2)處方組成為有效部位2.5g，乳化劑為7.5g，脂質10g；(3)載體制備方法取有效部位2.5g，三肉豆蔻酸甘油酯10g和丙酮適量加入容器中，超聲使充分溶解，加入磷脂酰膽堿，微熱使溶成有機相；另取20g泊絡沙瑪F-68溶于500ml水中，構成水相，將有機相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續加熱攪拌4h，使有機溶媒完全蒸發并使體系濃縮到約250ml，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的10ml水相，繼續攪拌2h，即得。
(4)制劑制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調等滲，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡萄糖，加注射用水調整濃度，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發明納米醒腦靜粉針制劑500瓶。
將上述納米制劑進行檢測，其納米粒徑為35-110納米實施例4(1)有效部位的制備取郁金、梔子藥材粉碎成粗粉，加水進行蒸餾，收集蒸餾液；將麝香加入上述蒸餾液中，并加蒸餾水進行蒸餾，收集蒸餾液，用相同體積的石油醚萃取5次，合并萃取液，減壓回收石油醚，得濃縮液；將冰片和濃縮液合并，用少量乙醇溶解，加入到飽和的羥丙基β-環糊精溶液中，恒溫攪拌，置4℃冰箱冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得到有效部位。
(2)處方組成為有效部位6g，乳化劑為18g，脂質24g；(3)載體制備方法取有效部位6g，溶于55％乙醇中；將三棕櫚酸甘油酯25g溶于烷烴，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉薄膜蒸發儀，控制壓力0.1-0.2個大氣壓，去除有機溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進行超聲處理，得到溶液。
(4)制劑制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調等滲，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜輸液制劑；
粉針制劑的制備取上述混懸液，加入右旋糖酐，加注射用水調整濃度，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發明納米醒腦靜粉針制劑500瓶。
將上述納米制劑進行檢測，其納米粒徑為35-110納米實施例5(1)有效部位的制備取郁金、梔子藥材粉碎成粗粉，加水進行蒸餾，收集蒸餾液；將麝香加入上述蒸餾液中，并加蒸餾水進行蒸餾，收集蒸餾液，用相同體積的石油醚萃取5次，合并萃取液，減壓回收石油醚，得濃縮液；將冰片和濃縮液合并，用少量乙醇溶解，加入到飽和的羥丙基β-環糊精溶液中，恒溫攪拌，置4℃冰箱冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得到有效部位。
(2)處方組成為有效部位8g，乳化劑為24g，脂質32g；(3)載體制備方法油相將有效部位8g的明膠溶液，同40ml無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑25g Pluronic F-68的500ml水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得。
(4)制劑制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調等滲，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡聚糖，加注射用水調整濃度，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發明納米醒腦靜粉針制劑500瓶。
將上述納米制劑進行檢測，其納米粒徑為35-110納米實施例6(1)有效部位的制備取郁金、梔子藥材粉碎成粗粉，加水進行蒸餾，收集蒸餾液；將麝香加入上述蒸餾液中，并加蒸餾水進行蒸餾，收集蒸餾液，用相同體積的石油醚萃取5次，合并萃取液，減壓回收石油醚，得濃縮液；將冰片和濃縮液合并，用少量乙醇溶解，加入到飽和的羥丙基β-環糊精溶液中，恒溫攪拌，置4℃冰箱冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得到有效部位。
(2)處方組成為有效部位4g，乳化劑為12g，脂質16g；(3)載體制備方法按處方稱取10g四丁酚醛，2g吐溫80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯16g加入到有效部位中4g，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續攪拌1h后超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。
(4)制劑制備水針制劑的制備取上述納米藥物，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜水針制劑；輸液制劑的制備取上述納米藥物，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調等滲，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜輸液制劑；粉針制劑的制備取上述納米藥物，加入甘露醇和乳糖，加注射用水調整濃度，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發明納米醒腦靜粉針制劑500瓶。
將上述納米制劑進行檢測，其納米粒徑為35-110納米實施例7取豆磷脂40g、甘油6g與預熱至80℃的適量注射用水進行混合，轉入高速組織搗碎機內，以每分鐘20000轉攪拌3分鐘，反復3次，直至豆磷脂均勻分散，得到分散液；稱取郁金、梔子各30g粉碎成粗粉，加1500ml水進行蒸餾，收集蒸餾液1000ml；將麝香加入上述蒸餾液中，并加蒸餾水250ml進行蒸餾，收集蒸餾液1000ml，取冰片加入到蒸餾液中，混勻，得到混勻液，將預熱至80℃混勻液加入到分散液中，轉入高速組織搗碎機內，以每分鐘20000轉攪拌3分鐘，反復3次，直至混勻液均勻分散，得到初乳，將預熱至80℃的注射用水加入到初乳中使達全量1000ml，轉移至高壓乳勻機內，勻化3次，取樣鏡檢，至油滴在0.15μm以下；取上述乳劑灌封于50ml的輸液瓶中，充氮，105℃下滅菌45分鐘。
權利要求
1.一種醒腦靜納米注射制劑，其特征在于該藥物的組成包括有效部位1-4重量份，藥用載體7-35重量份；其特征還在于納米醒腦靜注射制劑中納米粒徑為35-110納米。
2.權利要求1所述的一種納米醒腦靜注射制劑的制備方法，其特征包括以下步驟(1)有效部位的提取取郁金、梔子藥材粉碎成粗粉，加水進行蒸餾，收集蒸餾液；將麝香加入上述蒸餾液中，并加蒸餾水進行蒸餾，收集蒸餾液，用相同體積的石油醚萃取5次，合并萃取液，減壓回收石油醚，得濃縮液；將冰片和濃縮液合并，用少量乙醇溶解，加入到飽和的羥丙基β-環糊精溶液中，恒溫攪拌，置4℃冰箱冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得到有效部位。(2)納米載體的制備方法一取有效部位、乳化劑和脂質，在通氮氣條件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和poloxamer-188的水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮氣條件下用高壓乳勻機載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮氣分裝后，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二稱取乳化劑，泊絡沙瑪F-68，吐溫80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取脂質加入到有效部位中，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續攪拌1小時后超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取有效部位，脂質和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑，微熱使溶成有機相；另取泊絡沙瑪F-68溶于水中，構成水相，將有機相在攪拌下注入75±2℃水相中，繼續加熱攪拌4小時，使有機溶媒完全蒸發并使體系濃縮到約，將所得的半透明體系攪拌下快速溶解于0-2℃的水相，繼續攪拌2小時，即得。方法四取有效部位，溶于30％-70％乙醇中；將脂質溶于烷烴，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉薄膜蒸發儀，控制壓力0.1-0.2個大氣壓，去除有機溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進行超聲處理，得到主藥混懸液。方法五油相將油或有效部位的油溶液，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F-68的水溶液，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗過濾，即得主藥混懸液。(3)制劑制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調等滲，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發明納米醒腦靜輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調整濃度，調pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發明醒腦靜粉針制劑。
3.權利要求1所述的一種納米醒腦靜注射制劑中的輸液劑的制備方法，其特征還在于取豆磷脂、甘油與預熱至80℃的適量注射用水進行混合，轉入高速組織搗碎機內，以每分鐘20000轉攪拌3分鐘，反復3次，直至豆磷脂均勻分散，得到分散液；取郁金、梔子藥材粉碎成粗粉，加水進行蒸餾，收集蒸餾液；將麝香加入上述蒸餾液中，并加蒸餾水進行蒸餾，收集蒸餾液，用相同體積的石油醚萃取5次，合并萃取液，減壓回收石油醚，得濃縮液；將冰片和濃縮液合并，得到合并液；將預熱至80℃合并液加入到分散液中，轉入高速組織搗碎機內，以每分鐘20000轉攪拌3分鐘，反復3次，直至合并液均勻分散，得到初乳，將預熱至80℃的注射用水加入到初乳中使達全量，轉移至高壓乳勻機內，勻化3次，取樣鏡檢，至油滴在0.15μm以下；取上述乳劑灌封于50ml的輸液瓶中，充氮，105℃下滅菌45分鐘。
全文摘要
本發明公開了一種納米醒腦靜注射制劑及其制備方法，將郁金、梔子、麝香、分別提取后與冰片合并，用羥丙基β－環糊精溶液包合，再與適宜量的脂質、乳化劑與其它輔料采用本發明工藝方法制成納米載體，并制備成水針劑、粉針劑和輸液劑，本發明制劑穩定性好，易通過血腦屏障，藥理作用表明本發明納米注射制劑具有更好的療效且安全性好。
文檔編號A61P29/00GK1879840SQ200510077199
公開日2006年12月20日 申請日期2005年6月17日 優先權日2005年6月17日
發明者張晴龍 申請人:張晴龍