專利名稱：：使用alk5調節劑控制眼內壓的制作方法
技術領域：
：本發明主要涉及對青光眼的治療，和更特別涉及選擇性調節活化素受體樣激酶5(ALK5、或1型TGF-P受體)從而降低眼內壓，例如與青光眼有關，的藥物。
背景技術：
：眼病青光眼的特征在于由于不可逆的破壞視神經導致視覺功能的永久損失。青光眼的幾種形式上或功能上的不同類型的典型特征在于眼內壓(IOP)的不良升高，其被認為引起相關疾病的病理過程。連續升高的眼內壓與視網膜的漸進損壞和視覺功能的損失有關。有時，眼高壓，一種眼內壓被升高的狀態，可以在不顯示出視覺功能的明顯損失的情況下存在。然而；具有;眼高壓的患者被認為是最終發展為與青光眼相關的視覺損失的高風險者。因此，降低眼內壓是對于治療青光眼病人和具有眼高壓的病人的可能的一個目標，用于降低潛在的，或嚴重的青光眼視網膜病。不幸地是，當使用現有的青光眼療法治療時許多個體沒有很好的應答。已知為壓力正常或低壓性青光眼的患者具有相對低的眼內壓，然而也呈現出青光眼視野損失。這些患者能受益于降低和控制眼內壓的藥物，因為早期檢測和迅速治療責光眼能降低和延緩視覺功能損失。傳統的已經證明對降低眼內壓有效的治療藥物包括減少房水產生的藥物和增加流出量的藥物兩種。這些藥物通常由兩種途徑中的一種給予；局部地直接應用到眼上，或口服。然而，這些藥物中的許多具有相應的使它們變得不適合作為眼睛治療藥物的副作用。轉化生長因子-P(TGF-p)族的細胞因子包括調節多種基因產物產生的多功能蛋白質，并從而控制多種細胞代謝過程。例如，其中TGF-P族成員涉及炎癥、傷口愈合、細胞外基質累積、骨形成、組織發育、細胞分化和腫瘤進展。[Barnardetal.,"/oc力/邊"/o/A^1990;Vol.1032:79—87;Spornetal.，1992;Vol.119:1017-1021;Yi一ingetal.，組i/reie"譜，2004;Vol.3:1011-1022;Janssensetai.，f/^crAer.，2005;(在印刷前的電子出版)]。迄今為止已經識別了三種哺乳動物亞型TGF-Pl、TGF-P2和TGF-p3，并且盡管是由不同基因編碼的，但這些亞型是結構近似的。[MassagueJ.，^mz/AerCe"S/o/.，1990;Vol.6:597-641]在從患有一種西方患者中最常見類型的青光眼原發性開角型青光眼(P0AG)的人眼中采集的房水(AH)中，各研究組已經報導與正常眼相比TGF-P2亞型有顯著的高水平。[Tripathietal.，,1994;Vol.59:723-727;Inatanietal.，Crfle尸e"rcA^r/^7力Ma7邊o厶，2001;Vol.239:109-113;Pichtetal.，Jrc力^7//7i^^7力^a/邊o/.，2001;Vol.239:199-207;Ochiaietal.，//w/&力，2002;Vol.46:249-253;Ozcanetal.，^力/^a/邁o/.，2004;Vol.25:19-22]。還才艮道了TGF-P2亞型增加細胞外基質(ECM)的產生。[Kottleretal.，f，2005;Vol.80:121-134〗。在原發性開角型青光眼中，在眼睛8的小梁網(TM)區域內細胞外基質的不相稱增生被認為給予了房水外流更大的阻力，導致眼內壓升高。[Rohenetal.，sA7/;^r/7OpA^fl7邊o/.，1972;Vol.183:251—266;Leeetal.，7rsi^^力Ma/邊o/Soc,1974;Vol.94:430-449]。因此，在房水中升高的TGFP2水平和升高的眼內壓之間可能存在著直接的聯系。發明概要本發明部分地涉及治療在人類患者或其他哺乳動物中青光眼的方法。本發明還涉及降低或控制在人類患者或其他哺乳動物中正常或升高的眼內壓的方法。本發明的實施方案通過調節ALK5受體的活性來控制眼內壓和治療青光眼。在體外試驗中，TGF-P2作用在ALK5(l型TGF-P受體)上導致在小梁網(TM)內細胞外基質(ECM)蛋白質的產生增加。因此推定在體內，TGF-P2誘導的在小梁網內細胞外基質產生的增加最終導致眼內壓增加。因此，對TGF-02介導反應作用的下調給出了降低和/或控制眼內壓和治療青光眼的潛在的方法。例如，ALK5活性的抑制預計將導致TGF-02介導的ECM累積的減少。因此，如果在這樣一個系統中引入一種抑制或選擇性調節ALK5受體的化合物，TGF-P2對眼內壓的不良作用將被減少或改善。更進一步，TGF-P亞型1、2和3是屬于經過跨膜絲氨酸/蘇氨酸激酶受體傳遞信號的細胞因子家族；這個超家族的其他成員包括活化素、抑制素、骨形態發生蛋白質、生長和分化因子和米勒抑制物質。TGF-beta亞型的受體被分組為兩種類型I型或活化素樣激酶(ALK5或ALK1)受體和II型受體。TGF-p信號傳遞是在存在TGF-P情況下經由II型受體磷酸化I型受體，例如，ALK5完成的。活化的ALK5，依次砩酸化胞質蛋白質Smad2和S咖d3。然后磷酸化的Smad2和Smad3蛋白質與另一種Smad蛋白質，Smad4，形成了一種復合物。產物Smad蛋白質復合物隨后移位進入細胞核并驅動基因轉錄。在這里使用時，術語"選擇性ALK5調節劑"或"選擇性調節劑"指一種試劑，除了抑制Smad蛋白質(例如，Smad6和Smad7)之外，其抑制ALK5自身的激活/磷酸化或抑制ALK5激活/磷酸化它的靶Smad蛋白質的能力。所述的藥物優先抑制ALK5受體，超過其他ALK類型受體，例如ALK3，其調節經由骨形態形成蛋白質的信號傳遞。與II型受體或其他信號傳遞激酶例如p38MAPK相比，所述的藥物也優先抑制ALK5受體。例如，已經報道與TGF-PII型受體和p38MAPK的磷酸化相比(I"分別為10jnM和9.5jliM)，GW-6604有效的抑制ALK5的磷酸化(IC50一0.14juM)。/戶Asr邁aco/.，2005;Vol.145:166-177。本發明的某些實施方案包括組合物或方法，所述組合物或方法包括或使用能選擇性調節ALK5受體活性從而調節眼內的眼內壓的化合物。細胞因子，例如TGF「P2，或其他化合物與ALK5受體的交互作用可以導致在小梁網內細胞外基質蛋白質產生的改變，從而調節眼內壓。因此，通過調節ALK5受體的活性，根據本發明某些實施方案的目標化合物有益于降低和/或控制在人類和其他恒溫動物內與正常張力青光眼、眼高壓和青光眼有關的眼內壓，所述青光眼包括原發性開角型青光眼。當在這種應用中使用時，化合物可以被配制在適合用于對眼睛局部給藥的藥物組合物中。在本發明的另一個實施方案中，一種體外的方法來篩選對于ALK5受體活性的選擇性調節劑。所述篩選能幫助選擇新的用于治療青光眼和控制眼內壓的化合物。所述方法包括在適當的生長培養基中培養小梁網細胞。所述培養的細弊被分成重復和/或實驗和/或對照組，向其中添加對照溶液或包含ALK5活性選擇性調節劑的實驗溶液。隨后測量在每種細胞培養組中的細胞外基質關聯蛋白，例如纖連蛋白、纖溶酶原激活物抑制劑I(PAI-1)、膠原、原纖蛋白、玻璃體結合蛋白、層粘連蛋白、血小板反應蛋白I、蛋白聚糖或整聯蛋白的水平。然后可以在組之間比較細胞外基質蛋白水平，以確定包含對ALK5活性的選擇性調節劑的實驗溶液的作用。上述概要大致的描述了本發明的某些實施方案的特征和技術效果。在隨后的
發明內容部分將描述另外的特征和技術效果。當結合所有的附圖考慮時，將從
發明內容更好的理解被認為是本發明特有的新穎的特征。然而，這里給出的圖是用來幫助理解發明或幫助發明理解的擴展，而不是用來定義發明的范圍。通過參考下列描述，連同附圖可以獲得對本發明和其優點更完整的理解，所迷附圖中同樣的引用編號代表同樣的特征，和其中圖1顯示注入TGF-P2對灌流人眼前房部分模型的眼內壓的作用與對照組相比的結果圖；圖2顯示ALK5抑制劑對在TGF-P2處理的灌流人眼前房部分模型中纖連蛋白水平的作用與對照組相比的結果圖；圖3給出圖，顯示添加不同濃度的ALK5抑制劑的體外小梁網細胞培養物中纖連蛋白和PAI一1的測量水平；和圖4給出圖，顯示在體外小梁網細胞培養物中前膠原I型C-肽(PIP)的測量水平。
發明內容本發明的某些實施方案包括化合物、組合物或方法，所述化合物、組合物或方法包括或使用能選擇性調節ALK5受體活性從而調節眼內的眼內壓的化合物。已經發現具有ALK5調節活性的具體典型化合物列于下面。在優選實施方案中，用于實施本發明方法的化合物包括如下所示的化合物1和2。在另一個實施方案中，可以使用下列化合物的一個或多個上面所示的某些化合物可以用廠商的命名來引用。這包括化合物1(SB-431542)，化合物2(LY-364947),化合物3(LY-550410)，化合物4(LY-580276),化合物5(SB-504124)，化合物12(GW-6604)，化合物13(A-83-01)，化合物14(SB-525334)和化合物15(SC-68376)。除上述化合物之外，或在其他實施方案中，可以使用列于下面組I和II中下列化合物的一種或多種組I:4-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基)-7-乙氧基喹啉；4-(3-吡啶-2-基-lH-吡唑-4-基)-7-乙氧基會啉；7-氟-4-[3-(6-甲基-吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；4-[3-(6-溴代吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基]-喹啉；4-[3-(6-[正-丁基氨基]吡啶-2-基)-IH-吡唑-4-基]-嗇啉；4-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；6-氯-4-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基]-喹啉；6-三氟甲基-4-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；7-甲基-4-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；6-甲氧基-4-[3-1H-吡唑-4-基]-喹啉；6-三氟甲氧基-4-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；4-[3-(3-氯苯基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；6-丁氧基-4-(3-吡啶-2-基-lH-吡唑-4-基)-*啉；6-仲-丁基-4-(3-吡啶-2-基-lH-吡唑-4-基)-喹啉；5-甲基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-4-(-4-氟苯基)-1H-吡唑；4-(4-甲氧苯基)-5-曱基-3-(6-曱基吡啶-2-基)-lH-吡唑；4-[5-甲基-3-(6-甲基吡咬-2-基)-1H-吡唑-4-基]-會啉；4-[3-(6-丙基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；3-環丙基-5-吡啶-2-基-4-喹啉-4-基-吡唑;3-(3-三氟甲基苯基)-4-喹啉-4-基-吡唑；1-苯甲基-3-(2-吡啶基)-4-(4-查啉基)吡唑；1-(4-苯丁基)-3-(2-吡啶基)-4-(4-查啉基)吡唑；2-(3-(2-吡咬基)-4-(4-*啉基)吡唑基)乙-l-醇；2-(3-(2-吡啶基)-4-(4-喹啉基)吡唑基)乙基曱磺酸酯；4-[2-(3-(2-吡啶基)-3-(4-會啉基)-吡唑基)乙基]嗎啉；苯基[2-(3-(2-吡啶基)-4-(4-喹啉基)-吡唑基)乙基]胺；4-(4-吡咬-2-基-lH-吡唑-3-基)-奮啉；和4-(3-吡咬-2-基-1H-吡唑-4-基)-喹啉。組II:5-[5-(6-甲基吡啶-2-基)-IH-[1，2，3]三唑-4-基]-苯并[1，2，5]噻二唑；5-[2-乙基-5-(—甲基吡啶-2-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基]-苯并[1,2,5]噻二唑；6-[5-(6-甲基吡啶-2-基)-IH-[1，2，3]三唑-4-基]-[l，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶；2-[5-(2，3-二氫苯并呋喃-5-基)-3H-[1，2，3]三唑-4-基]-6-甲基吡啶；2-[5-(2,3-二氫苯并[1，4〗二噁英-6-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基]-6-甲基吡啶；1-曱基-6-[5-(6-甲基吡啶-2-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基]-lH-苯并咪唑；6-(2-乙基-5-(6-甲基吡啶-2-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶；6-(2-甲基-5-(6-曱基吡啶-2-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶；2-[5-(4-甲氧苯基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基]-6-甲基吡啶;2-[5-(3-氟-4-甲氧苯基)-2H-[l，2，3]三唑-4-基]-6-曱基吡啶；和2-[5-(3-氯-4-甲氧苯基)-2H-[1，2，3〗三唑-4-基]-6-甲基吡啶。從上述化合物的集合中，下列可以通過商業來源獲得1、由Sigma,P.O.Box14508，St.Louis,M0，63178-9916市售;2、由MatrixScientific,P.O.Box25067，Columbia,SC，29224-5067市售；和15、由G.Scientific,Inc.,6450UskBlvd.SuiteE102,SanDiego,CA，92121市售。其他化合物可以按如下來源參考文獻所述來合成[格式化合物編號，合成參考文獻]:3和4,Sawyeretal.，"2'o0rgfl/7/cyf/i3f//c//7a/f7力e/p/stryZe〃ers，2004;Vol.14:3581-3584;5和14，WO2001/062756A1;6，W02004/026871;7，Gellibertetal.，/our/7a/of#ecf/c//7<2/C力e邊/Wiy，2004;Vol.47:4494-4506;8，WO2004/021989;9，WO2004/026307;10，WO2000/012497;11,WO2004/147574;16,Kimetal.,5ioo，"ica/zcftof/c/加/CAe/z//"r/Ze〃er《，2004;Vol.12:2013-2020;12，W02002/066462;13，Tojoetal.，"飾rScie/zce,2005;Vol.96:791-800;17-21,WO2004/016606;1522，美國專利申請公開號2004/116474;23和24，Sawyeretal.，/oi/r/7fl/oT#ef//c//7a/C力e邁/"r/，2003;Vol.46:3953-3956;組I化合物，WO2004/026302;和組II化合物，美國專利申請公開號US2004/152738。上述給出的化合物決不是打算限制本發明的范圍。本發明的范圍包括能被確定為具有選擇性控制、抑制或調節活化素受體樣激酶5(ALK5;或I型TGF-P受體)活性的能力的任何藥物。圖1是一幅顯示注入TGF-P2對灌流人眼前房部分模型作用的圖。在所述模型中使用的所有捐獻者眼睛都按照赫爾辛基宣言對于包括人體組織研究的規定來使用，并是在死后24小時內使用。已知沒有捐獻者具有青光眼或其他f艮疾病史。按照現有文獻的記栽來進行人眼灌流器官培養。[Tschumperetal.，Ci/rr^Fe紋，1990;Vol.9:363-369;Clarketal.，/歸"(/7/^力a/邊o/P7s5^/.，1995;Vol.36:478-489;Pangetal.，/67a,鵬，2000'，Vol.9:468-479;Pangetal.，@雄"邁0/r"Sc/.，2003;Vol.44:3502-3510]。簡要地說，眼前房部分被解剖并安裝到定制的樹脂玻璃培養室中，然后用無血清Dulbecco，s改良Eagle，s培養基灌流。每5秒鐘監測眼內壓并平均到每個小時。讓灌流組織在37。C和5%C02下平衡直到出現穩定的眼內壓基線，一般要2-4天；棄去眼內壓不穩定的組織。隨后，穩定的組織被進一步灌流包含所示試驗化合物的挎養基，并記錄眼內壓的變化。每天釆集洗出樣品用于纖連蛋白和PAI-1含量的酶聯免疫吸附(ELISA)分析。在每個研究的最后，組織被固定并通過光學和電子顯微鏡評價生存力/形態學。來源于不合格組織的數據被從結果中去除。"不合格"組織的標準包括發現例如在小梁網區域過量的碎片、小梁網橫梁的溶蝕、小梁網和/或鞏膜靜脈竇細胞的損失和鞏膜靜脈竇的破裂或塌陷。在圖1中顯示的結果表明用5ng/mL的TGF-p2輸注的灌流人眼前房部分模型在24小時內與對照組相比產生了眼內壓升高。在72小時后，接受TGF-P2灌流的模型的眼內壓幾乎是對照組的一倍。如上推定，具有選擇性ALK5調節活性的化合物的引入降低或改善了TGF-02誘導的細胞外基質產生的不良作用。在圖2中，給出的試驗結果顯示與僅用TGF-02灌流的對照模型相比，來自用TGF-P2和如下所示的化合物1處理的人眼前房部分的灌流液中纖連蛋白的水平降低了。化合物l完全地對抗了TGF-P2介導的在灌注液中纖連蛋白含量的增加。圖3顯示了使用培養的人小梁網細胞的研究的匯總結果圖。以前已經描述了GTM-3轉化細胞系的繁殖和表征(Pangetal.，6Y/rr^reie《.，1994;Vol.13:51「63)。簡要的說,保持生長培養基由補充了10°/o胎牛血清(Hyclone,Logan，UT)的具有GlutamaxI(Gibco/BRL:GrandIsland,NY)的Dulbecco，s改良Eagle，s培養基和50pg/mL慶大霉素(Gibco/BRL)組成。為了分析，培養物被胰蛋白酶化和接種到24孔盤(CorningCostar，Acton，MA)中，并讓其生長到單層達到大約90%融合，然后，培養基被替換為0.25mL包含適當試驗化合物的無血清和無抗生素培養基。細胞在5%C02和37。C下被培養24h。隨后，培養物上清液的等分試樣通過ELISA分析纖連蛋白和/或PAI-l含量。在圖3中顯示的研究結果揭示了ALK5調節化合物1和2對來自17人小梁網細胞培養物的上清液中由TGF-&2介導的纖連蛋白和？人1-1的含量增加的劑量依賴抑制作用。圖4顯示了在人小梁網細胞培養物中前膠原I型C-肽(PIP)的測量水平的匯總圖。對于所示試驗，培養的轉化GTM-3細胞(Pangetal.，Cwr"/e組，1994;Vol.13:51-63)生長在由補充了10%胎牛血清(Hyclone，Logan，UT)的具有GlutamaxI(Gibco/Invitrogeri，GrandIsland,NY)的Dulbecco，s改良Eagle，s培養基和50pg/mL慶大霉素(Gibco/Invitrogen)組成的生長培養基中。為了分析，培養物被酶化分離(TrypLEExpress;Gibco/Invitrogen)，然后接種至l)24孑L盤(CorningCostar，Acton，MA)中，并讓其生長到單層達到大約90%-95%融合。然后，培養基被替換為0.25mL包含適當試驗化合物的無血清和無抗生素培養基。細胞在5%C02和37°C下培養24h。然后培養物上清液的等分試樣被4吏用ELISA試劑盒(TaKaRaBio，Shiga,Japan)分析前膠原I型C-肽。)膠原由前膠原合成，大部分前膠原包含被稱為"前肽"的附加肽序列。前肽位于分子的N和C末端兩處。這些前肽用來促進在內質網內從前膠原形成成熟的膠原三鏈螺旋結構。隨后在分泌時前肽部分被從三鏈螺旋膠原分子裂解—因此游離前肽，例如PIP的濃度能被用于關聯到細胞合成的膠原數量的變化。與栽體組相比，兩個重復研究的結果顯示在TGF-^2處理的培養物中PIP水平被顯著的升高。然而，當使用TGF-P2和ALK5調節化合物1兩者處理培養物時，所述TGF-P2依賴性PIP升高被消除了。因此，圖4中給出的研究結果表明TGF-132介導的PIP水平增加被ALK5調節化合物1抑制。假定PIP水平與膠原生產直接相關，ALK5調節劑例如化合物l顯示出減少膠原生產，和因此將抑制在小梁網內的整體細胞外基質蛋白質生產。下述表1概括了測量TGF-P2在培養的小梁網細胞的各種林中對細胞外基質相關蛋白質水平(纖連蛋白，PAI-1)作用的研究結果。在培養物中TGF-P2的存在濃度為5ng/mL,并在24小時后測量蛋白質水平(平均數士標準誤(mean±s.e.m,)。表的結果表明在各種人小梁網細胞培養物中TGF-&2增加纖連蛋白和？人1-1的產生。表l:TGF-^2對人小梁網細胞分泌纖連蛋白和？人1-1的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>從上面概括的結果看，適當的結論是用包含和使用具有調節ALK5受體活性作用的化合物的組合物和方法可以有效的控制眼內壓和治療青光眼。根據本發明某些實施方案使用的選擇性調節化合物可以被加入各種類型的用于給藥的眼用制劑。所述化合物可以直接向眼睛給藥(例如局部眼用滴劑或軟骨；在盲管中或植入鄰近鞏膜或在眼睛內部的緩釋裝置；眼周的、結膜的、眼球嚢下、眼房內、玻璃體內或小管內的注射劑)。在某些實施方案中，化合物可以使用本領域技術人員已知的技術來全身給藥(例如口服；靜脈的、皮下的或肌肉注射；腸道外；皮膚或鼻給藥)。更進一步的期望本發明的試劑可以配制在眼內插入或植入裝置內。在優選實施方案中，根據本發明的選擇性調節化合物被加入到對眼睛給藥的局部眼用制劑中。所述化合物可以與眼用可接受的防腐劑、表面活性劑、粘性增強劑、滲透增強劑、緩沖液、氯化鈉和/或水結合來形成含水的、無菌眼用混懸液或溶液。可以通過把化合物溶解于生理可接受的等滲含水緩沖液中制備眼用溶液制劑。更進一步，所述眼用溶液可以包括眼用可接受的表面活性劑以幫助溶解化合物。所述眼用溶液還可以包含試劑來增加粘性，例如，羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等等，用以改善制劑在結膜囊內的保留。還可以使用膠凝劑，包括但不限于，吉蘭糖和黃原膠。為了制備無菌眼用軟骨制劑，選擇性調節化合物在適當的栽體中，例如，礦物油、液體羊毛脂或白凡士林與防腐劑結合。無菌眼用凝膠制劑可以通過懸浮所述化合物在親水基質中制備，所述親水基質根據已經公開的用于類似眼用的制劑的配方的綜合來制備，例如，carbopol-974等等；還可以加入防腐劑和張力試劑。在某些實施方案中，選擇性調節化合物優選被配制為局部眼用混懸液或溶液，具有約4到8的pH。通常所述化合物以重量/體積比百分之0.01到5("w/v%")的數量包含在這些制劑中，但優選在0.25到2w/v。/。數量內。根據熟練臨床醫師的判斷，典型的給藥方案將包括每天1到4次給予這些制劑的1到2滴到眼睛的表面。所述選擇性調節化合物還可以與其他用于治療青光眼的藥物結合使用，例如，但不限于，P-阻斷劑，前列腺素類似物，碳酸酐酶抑制劑，ar激動劑，縮瞳藥，和神經保護劑。本發明的某些實施方案包括體外篩選用于治療青光眼和控制眼內壓的ALK5受體活性選擇性調節劑的方法。通常，這些實施方案包括在合適的培養基中培養大量的小梁網細胞。在某些實施方案中，小梁網細胞可以根據在圖3中描述的小梁網培養步驟來培養。ALK5活性的選擇性調節劑被添加到培養細胞的第一群。在這些實施方案中，還制備了不具有選擇性調節劑的對照群。然后，對每個存在和不存在TGF-P2的細胞培養群測定細胞外基質蛋白質，例如纖連蛋白或PAI-1的水平。在本發明的實施方案中能測量任意細胞外基質蛋白質。然后比較第一群和對照群的測量水平。這種比較可以被用于篩選對于ALK5受體活性的選擇性調節劑，并用于確定是否所述選擇性調節劑將被用于治療青光眼和控制眼內壓。如下所示的是根據本發明實施方案的藥物組合物的幾個實施例。下列實施例是用來說明本發明的實用性，而不應被看作暗示對權利要求的任何限制。實施例1<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>已經詳細描述了本發明及其實施例。然而，本發明的范圍將不意圖被限于具體描述的任何工藝、制造、物質的組合、化合物、方式、方法和/或步驟。在不偏離本發明的精神和/或本質特征的條件下可以對公開的材料作出各種改良、替換和改變。因此，本領域普通技術人員將易于理解，可以根據本發明的所述相關實施方案使用新的改良、替換和/或改變，所述改良、替換和/或改變執行與本文所述的實施方案有基本相同的功能或實現基本相同的結果。因而，權利要求被用來涵蓋它們范圍內的對本文公開的工藝、制造、物質的組合、化合物、方式、方法和/或步驟的改良、替換和改變。權利要求1、一種用于治療青光眼和控制眼內壓的眼用藥物組合物，包含有效量的ALK5受體活性的選擇性調節劑。2、如權利要求1所述的組合物，其中所述選擇性調節劑選自4-(3-(6-曱基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基)-7-乙氧基喹啉；4-(3-吡啶-2-基-lH-吡唑-4-基)-7-乙氧基喹啉；7-氟-4-[3-(6-甲基-吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基]-會啉；4-[3-(6-溴代吡咬-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；4-[3-(6-[正-丁基氨基]吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基]-喹啉；4-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；6-氯-4-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；6-三氟甲基-4-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；7-甲基-4-[3-(6-曱基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；6-甲氧基-4-[3-1H-吡唑-4-基]-喹啉；6-三氟甲氧基-4-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基]-喹啉；4-[3-(3-氯苯基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；"丁氧基-4-(3-吡啶-2-基-lH-吡唑-4-基)-喹啉；6-仲-丁基-4-(3-吡啶-2-基-lH-吡唑-4-基)-喹啉；5-甲基-3-(6-曱基吡啶-2-基)-4-(-4-氟苯基)-1H-吡唑；4-(4-甲氧苯基)-5-甲基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-IH-吡唑；4-[5-甲基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；4-[3-(6-丙基吡啶-2-基)-lH-吡唑-4-基]-喹啉；3-環丙基-5-吡啶-2-基-4-喹啉-4-基-吡唑；3-(3-三氟甲基苯基)-4-喹啉-4-基-吡唑；1-苯甲基-3-(2-吡咬基)-4-(4-會啉基)吡唑；1-(4-苯丁基)-3-(2-吡啶基)-4-(4-喹啉基)吡唑；2-(3-(2-吡啶基)-4-(4-喹啉基)吡唑基)乙-l-醇；2-(3-(2-吡啶基)-4-(4-喹啉基)吡唑基)乙基甲磺酸酯；4-[2-(3-(2-吡啶基)-3-(4-喹啉基)-吡唑基)乙基]嗎啉；苯基[2-(3-(2-吡啶基)-4-(4-喹啉基)-吡唑基)乙基]胺；4-(4-吡啶-2-基-lH-吡唑-3-基)-喹啉；和4-(3-吡啶-2-基-lH-吡唑-4-基)-喹啉；5-[5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-苯并[1，2，5]噻二唑;5-[2-乙基-5-(6-甲基吡啶-2-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基]-苯并[1,2，5]噻二唑；6-[5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶；2-[5-(2，3-二氫苯并呋喃-5-基)-3H-[1，2，3]三唑-4-基]-6-曱基吡啶;2-[5-(2，3-二氫苯并[1，4]二噁英-6-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基]-6-甲基吡啶;l-甲基+[5-(6-曱基吡咬-2-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基]-lH-苯并咪唑;6-(2-乙基-5-(6-甲基吡啶-2-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基)-[l，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶；6-(2-曱基-5-(6-曱基吡啶-2-基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶；2-[5-(4-甲氧苯基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基]-6-甲基吡啶;2-[5-(3-氟-4-曱氧苯基)-2H-[l，2，3]三唑-4-基]-6-甲基吡啶；和2-[5-(3-氯-4-曱氧苯基)-2H-[1，2，3]三唑-4-基]-6-甲基吡啶。3、如權利要求l所述的組合物，包含所述選擇性調節劑的藥學上可接受的鹽。4、如權利要求l所述的組合物，進一步包含化合物，所述化合物選自眼用可接受的防腐劑、表面活性劑、粘性增強劑、滲透增強劑、膠凝劑、疏水基質、栽體、緩沖液、氯化鈉和水。5、如權利要求l所述的組合物，進一步包含青光眼治療藥物。6、如權利要求5所述的組合物，其中所述青光眼治療藥物選自P-阻斷劑，前列腺素類似物,碳酸酐酶抑制劑，a2激動劑，縮瞳藥和神經保護劑。7、如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物包含從約0.01%重量/體積到約5%重量/體積的所述化合物。8、如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物包含從約0.25%重量/體積到約2%重量/體積的所述化合物。9、如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物進一步包含防腐劑、張力試劑、抗氧化劑、穩定劑、潤濕劑、澄清劑或粘性增加試劑。10、體外篩選用于治療青光眼和控制眼內壓的ALK5受體活性的選擇性調節劑的方法，包括在合適的培養基中培養大量小梁網(TM)細胞；向所述小梁網細胞的第一群中添加所述選擇性調節劑；和比較在所述第一群和對照群中的細胞外基質相關蛋白質的測量水平。11、如權利要求10所述的方法，其中所述細胞外基質相關蛋白質選自纖連蛋白、纖溶酶原激活物抑制劑I(PAI-1)、膠原、原纖蛋白、玻璃體結合蛋白、層粘連蛋白、血小板反應蛋白I、蛋白聚糖和整聯蛋白。12、治療青光眼和控制眼內壓的方法，包括向患者受影響的眼睛應用治療有效量的包含ALK5受體活性選擇性調節劑的藥物組合物。13、如權利要求12所述的方法，其中所述應用包括應用權利要求2所述的組合物。14、如權利要求13所述的方法，其中所述的應用包括使用選自如下的技術眼周注射、結膜注射、眼球嚢下注射、眼房內注射、玻璃體內注射、小管內注射、在盲管中的植入給藥裝置、鄰近鞏膜的植入給藥裝置、在眼內的植入給藥裝置、口服給藥、靜脈內給藥、皮下給藥、肌肉給藥、腸胃外給藥、皮膚給藥和鼻給藥。15、如權利要求12所述的方法，其中所述藥物組合物包含防腐劑、張力試劑、抗氧化劑、穩定劑、潤濕劑、澄清劑或粘性增加試劑。全文摘要公開了一種治療青光眼和控制眼內壓的包含有效量ALK5受體活性選擇性調節劑的眼用藥物組合物。還公開了一種治療青光眼和控制眼內壓的方法，包括向患者受影響的眼睛應用包含ALK5受體活性選擇性調節劑的治療有效量的藥物組合物。文檔編號A61K31/519GK101330914SQ200680047352公開日2008年12月24日申請日期2006年12月15日優先權日2005年12月16日發明者A·F·克拉克,A·R·謝帕德,D·L·弗里諾爾,M·R·赫爾伯格,P·G·科里姆克,彭玉豪申請人:愛爾康公司