控制病原體的產品的制作方法

專利名稱：：控制病原體的產品的制作方法控制病原體的產品本發明涉及用于控制病原性疾病和對抗可能或易于引起感染的致病菌存在的制劑和其他產品。在病原性生物中，分為細菌、真菌和病毒。需要繼續尋求能夠控制游離狀態(即，可能存在于環境或外界中)和病原性生物侵入宿主體內導致與特定生物體相關的疾病癥狀的感染狀態的病原性生物的抗感染劑和消毒劑。一般地，許多起因于病原性生物的疾病狀態使用抗生素治療，抗生素是已被發現并商品化以用于治療這種感染的典型藥物。在醫院病房、或診所、手術室、診療室或類似環境中，商業可獲得的消毒劑用作預防措施來控制和特別是殺滅或除害病原體，例如可能存在于例如地板、墻壁、盆、門等表面的細菌。有許多往往是基于卣代/芳香烴的可廣泛獲得的消毒劑。其他化學類型也是已知的。商業可獲得的消毒劑也用于家庭和辦公室環境，例如醫務工作者的家庭和/或辦公室中。需要為醫院內或與醫院相關的環境提供感染控制系統。但是，目前存在對抗生素耐藥致病菌株的出現的關注，例如MRSA(甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌)；VRE(萬古霉素耐藥腸球菌)；耐克拉霉素幽門螺旋桿菌，甲硝唑僅指出少數幾種。由于這種獲得性耐藥性使得用常規的抗生素治療抗生素耐藥細菌是有問題的。相應地需要提供不依賴于目前或已發現的抗生素藥物的替代的治療和預防方案。也存在對與芳香卣代消毒劑相關的健康的關注，同樣需要研發替代的不依賴于閨代芳香組分的消毒劑和抗感染劑。在我們以前出版的WO01/15554申請中已經建議大量含有金屬離子的組合物在治療病原性生物中是有益的。我們現已驚奇地發現在我們所述的早期出版物中公開的組合物的選擇在抗特異病原性生物中是有用的，其中病原性生物是抗生素耐藥的或難于治療或控制，和/或可以存在于醫院、診療室、診所和手術室、家庭和環境中在治療方案下對活的人體細胞沒有顯著危害或有害作用的。我們也已發現這種有益合物中。我們也已驚奇地發現基質可以浸漬本文描述的組合物來荻得令人驚奇地有效和長效抗菌特性，例如，我們已經發現目前商業可獲得的用于清潔醫院表面的微纖維和/或超微纖維布料可以浸漬本文描述的組合物并用作強效廣譜抗菌和/或抗真菌消毒劑輔助物。我們也已發現這種微纖維布料可以洗滌、再浸漬和再使用很多次，具有顯著的經濟利益。我們也已意外地發現本文描述的含有離子修飾的銅的組合物可以同時有效地對抗多種不同病原體，并提供對抗這些多種不同病原性生物感染和再感染的保護。本文描述的組合物可以局部應用于患有感染的病人，例如局部應用于患者的皮膚來預防或治療MRSA和/或VRE。我們進一步研發了一種感染控制系統，其基于通過優選的微流體測定法檢測在表面或大氣環境內存在的至少一種病原性生物，檢測的結果顯示或其他表現，通過將一種或多種本文描述的類型的組合物應用于表面或大氣環境處理檢測的致病菌，重復檢測步驟并重復顯示步驟。這一過程的步驟可以組成實質的感染控制系統。組合物可以以噴霧、細霧或"霧"使用或應用來對抗致病菌。在這種應用中用作消毒試劑的組合物分散于小水滴上，其隨后用作細霧或霧來覆蓋暴露的和/或隱藏的表面，并進入建筑內部的裂縫和縫隙。一旦處于表面，絡合銅離子的消毒特性是有效的并在相當長時間內保持有效。可以使用不同的噴霧設置，小水滴的大小和應用組合物的濃度各異。表面活性劑可以包含于這些組合物中用作此目的。本發明也包含摻有本發明含銅組合物的清潔劑組合物。特別地，當用于洗滌醫務工作者或其他與患有感染的病人接觸的人穿著的衣服時，這種清潔劑會變成消毒的并能夠控制致病菌，例如細菌和耐藥的細菌。類似地這種消毒清潔劑可以用于洗滌患有感染的病人的衣服或床單。根據我們上文提及的專利申請概述的一般過程，方便地制備下文描述的組合物，除了在某些情況下酸的添加限于獲得在較低范圍起始的電解電勢外，例如至少高達150毫伏，但某些實施方案低于350mV。其中存在額外的成分，例如，幫助在表面清潔抗感染產品的表面活性劑，這顯示于表中。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>在其他具體實施方式中低濃度的銅是需要的，例如80-140g，例如90-130g或大約100-120g硫酸銅，假定其他組分的量相同。這對局部應用和對抗幽門螺旋桿菌感染是有用的。在上表中，組合物作為含銅水溶液，其中在來自溶解的銨試劑的銨離子水溶液的存在下并可能與之結合，銅作為溶解的金屬離子存在，并且組合物顯示明顯的至少150mV的電解電勢，雖然在某些優選具體實施方式大于300mV,例如至少350mV。我們已經驚奇地發現，當在低于100ppm的濃度下，例如50ppm應用于這些大腸桿菌細胞的培養物時，前述組合物可以高效對抗例如大腸桿菌頑固菌林的難以治療的菌林，同時對至少兩種不同的例如HT-29和U-937人細胞培養物缺乏細胞毒性。但是，在某些具體實施方式中預期高達1000ppm當量銅的濃度。優選組合物中銅當量濃度是大約10-50g/升，優選20-40g/升，更優選25-35g/升，溶劑相是蒸餾(與去離子相比)水。室溫下1分鐘至12小時、或1分鐘至6小時或0.25至3.0小時的時間內，用含有范圍0.01-100ppm當量銅的組合物治療目標病原性生物是優選的。但是，對于噴霧/霧化治療，由于噴霧劑可以短期內爆發，應用時間可以短些。本發明銅組合物可以在例如0.5-500ppm的當量銅下^f吏用來對抗幽門螺旋桿菌(H.pylori)和特別對抗耐藥幽門螺旋桿菌，二者是胃/消化性潰瘍的主要誘因。本發明銅組合物特別可治療的耐藥林是耐克拉霉素幽門螺旋桿菌、耐甲硝唑幽門螺旋桿菌和(雖然罕見)耐阿莫西林幽門螺旋桿菌。本發明銅組合物可以配制成可以應用于皮膚和粘膜表面的局部制劑例如乳劑、凝膠劑和噴霧溶液、浸漬敷料和灌洗溶液。本發明的銅組合物可以用于浸漬用于清潔表面以消毒該表面的吸收性基質。優選的基質是從JohnsonDiversity,Inc獲得的稱為微纖維和/或超微纖維(UMF)布料。如上文預示的，這種浸漬微纖維布料可以洗滌和再使用許多次。浸漬的這種布料提供了一種控制細菌生長和/或發展的簡便方式，例如抑制細菌生長和/或發展，例如抑制細菌生長和/或復制或至少抑制這種細菌的細菌活性。同時本發明的范圍廣泛至足以包含浸漬的微纖維基質與任何抗微生物劑的組合，本發明也包括用得自上表或落入本發明范圍內含銅組合物的銅組合物浸漬的微纖維基質的特定具體實施方案。將本發明基于銅的金屬離子殺蟲劑混合到例如微纖維或超微纖維布料的基質的一個優點是其可以預防表面的交叉污染，這是沒有它時真正的危險。特別地這種浸潰微纖維布料可以用于消毒表面(例如，在醫院、診療室、診所、手術室)來對抗難以治療的醫院感染MRSA(野生株)、ACCB(野生林)、VRE(野生林)、C.diff(孢子懸液)、本文隨后定義的LPn(軍團桿菌屬)和沙門氏菌。本發明組合物和浸漬其的基質能夠提供非常實質的和顯著的細菌活性的抑制，即能夠妨礙并籍此控制用常規的抗生素和/或常規的消毒方案迄今難以處理的這種醫院致病菌的生長、發展和/或復制。這種細菌致病活性的抑制可以令人驚訝地實現，而對周圍普遍的人細胞沒有顯著的并發的細胞毒性。在本文附帶的權利要求中限定本發明。為了說明本發明，使本發明更容易理解并易于被本領域技術人員實施，其具體實施方式現在只是以非限制實施例的方式給出，并參考附圖進行描述，其中圖1是在組合物20ppm當量銅下的MRSA時間-殺菌曲線，單獨的銅鹽和組合物剩余組分(本文俗語稱為'粘合劑，)作為對照，圖2是與圖1相似的MRSA時間-殺菌曲線，但是在150ppm當量銅下，圖3是在40ppm下與圖1相似的ACCB時間-殺菌曲線，圖4是在150ppm下與圖3相似的ACCB時間-殺菌曲線，圖5顯示使用標準EN12054實驗方法配制的含有CuAL42[A]和PurelTM[困]手部凝膠的X-凝膠水性介質對MRSA細菌存活的抗菌作用，圖6與圖5相似的視圖，但顯示使用相同制劑對ACCB存活的作用，圖7是與圖5和6相似的視圖，但顯示使用相同制劑對C.diff(芽胞)存活的作用，圖8A-8D是表示三種銅制劑和單獨的硫酸銅[口]對人小腸上皮HT-29細胞的細胞毒性作用的圖，圖9A-9D是與圖8A-8D相似的圖，但顯示三種銅制劑與單獨的石克酸銅[口]相比對人單核淋巴瘤U937細胞的細胞毒性作用的圖，圖10-14是顯示與幽門螺旋桿菌實施例12相關的舉例的銅制劑作用的圖，其中AL用作CuAL42的縮寫，PC用作CuPC33的縮寫，濃度以ppm給出，其中Q表示對照，圖15顯示使用舉例的編碼CuAL42的銅制劑獲得的和與糖尿病足潰瘍相關的8種細菌微生物的抑菌帶，圖16顯示與圖15中相似的抑菌帶，但使用編碼CuWB50的銅抗菌組合物，圖17-19是代表三種銅組合物在低劑量(lppm)下對抗許多難以處理和/或抗生素耐藥細菌的時間-殺菌曲線的圖表，圖20顯示與實施例13相關的手部凝膠殘留物的抗MRSA活性，其中根據本發明(X-凝膠)的凝膠類型水性介質與商業可獲得產品比較，圖21顯示通過三種配制的銅抗細菌組合物浸漬的與實施例14相關的MRSA-污染的UMF(超微纖維)布料的消毒作用，以及圖22是手部凝膠對A431人皮膚細胞系的細胞毒性與其它在實施例15中說明的相關產品的對比。實施例1介紹根據本文表l的實施方案l-8獲得的編碼CuAL42、CuPC33和CuWB50的三種銅金屬離子制劑用于測試對抗下列目標生物的活性曱氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA);醋酸鈣-鮑曼不動桿菌(ACCB);腸球菌(萬古霉素耐藥；VRE);艱難梭菌芽胞；嗜肺性軍團病桿菌。在用蒸餾水稀釋前，三種金屬離子制劑母液中當量元素銅的濃度是30.43g/升。三種銅制劑母液實質上各自用去離子水稀釋，隨后在當量元素銅百萬分之0.25、0.5和1.0(ppm)的最終稀釋后的濃度下測試對抗對數生長期的微生物。相同的組合物在lppm下也測試了對抗穩定期的微生物。縮寫ACCB，醋酸鉤-鮑曼不動桿菌；MRSA，甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌；PBS，磷酸鹽緩沖鹽水；VRE，腸球菌(萬古霉素耐藥)。材料和方法血瓊脂、營養肉湯和BYCE培養基由OxoidLtd(UK)購得。MRSA、ACCB和VRE在血瓊脂上純培養物中生長，單一菌落轉移至營養肉湯并在37匸振搖6小時培養。然后離心6小時的肉湯培養物(對數期細胞)使細胞沉淀，丟棄肉湯并洗滌細菌細胞，使用pH7.2的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)離心三次。在PBS中制備最終的混懸液，活細胞計數調節至試驗需要的接種量U.5xl08)。這些細胞隨后接觸最終濃度為0.25、0.5和1.0ppm的本發明舉例的銅制劑。在15、30、60和120分鐘從這些培養物中取樣，通過Miles和Misra技術測定活菌數。在15和120分鐘制備PBS樣品對照培養物以確保接種物的活性和穩定性。使用從24小時瓊脂平板培養物獲取的穩定期細胞在1.Oppm重復上述實施例，在初期的PBS洗滌后將其直接混懸于PBS中，接種物調節至1.5xl()8細胞/ml。通過混懸在血瓊脂上50:50乙醇生理鹽水中厭氧培養的5天的微生物培養物制備艱難梭菌孢子懸液。隨后對該混懸液進行Miles和Misra計數以測定活的芽胞的最終濃度，接種物最終調節至5xl(T芽胞/ml用于試驗。由PBS中BCYE培養基上5天的培養物制備嗜肺性軍團病桿菌的混懸液，使用活菌計數調節混懸液至5xl(T細胞/ml。使用營養肉湯中6小時的培養物作為刺激接種物測試所有三種銅制劑對抗MRSA、ACCB和VRE。結果所有三種銅制劑-CuAL42(表A)、CuPC"(表2)和C11WB50(表3)以劑量依賴性方式減少細菌數目。在lppm濃度下，所有3種銅制劑得到MRSA、ACCB和VRE的大約3對數抑制。CuAL42和CuPC33產生對艱難梭菌芽胞的2對數抑制，同時CuWB50產生對艱難梭菌芽胞的3對數抑制。CuAL42和CuWB50產生對嗜肺性軍團病桿菌的2對數抑制，CuPC33產生大約3對數抑制。如表4所示，當使用MRSA、ACCB和VRE時3種銅制劑對對數生長期和穩定期細胞的抑制作用是相似的。在其他試驗中細菌在PBS中生長并觀察到顯著的殺菌作用。如表5所示，當在營養肉湯中生長時MRSA、ACCB和VRE對殺菌作用較不敏感，表明蛋白質或其他組分抑制銅制劑的活性。由于在獲得細菌生長上的技術困難沒有對艱難梭菌和嗜肺性軍團病桿菌進行測試。討論這里顯示的結果顯示在直到lppm的濃度下所有3種銅制劑對致病菌是高度殺菌的。但是當細菌在營養肉湯中生長時這種活性多少會被中和，表明肉湯的蛋白質或其它組分降低銅制劑的功效。有趣地是，銅制劑對抗生長的細菌和穩定期的細菌是非常有效的，表明對細菌細胞的細胞毒性作用而非只是抑制作用。我們已經顯示了在0.lppm的CuAL42存在下生長10天的MRSA在接觸lppm的CuAL42時100%地被殺滅。表ACuAL42時間-殺菌曲線(硫酸銅/疏酸銨/疏酸)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>(d)腸球菌(萬古霉素耐藥，野生林)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表2CuWB50時間-殺菌曲線(硫酸銅/氯化銨/鹽酸))MRSA(野生抹)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>)不動桿菌(野生林)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>)艱難梭菌孢子懸液<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>(C)艱難梭菌孢子懸液<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(d)腸球菌(萬古霉素耐藥，野生林)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(e)嗜肺性軍團病桿菌NCTC<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表43種銅制劑(lppm)對穩定期細菌的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>初始接種量-lQSCFU/ml實施例2介紹根據本文表1的實施例1-8獲得的相同的三種金屬離子(銅)制劑編碼的CuAL42、CuPC33和CuWB50，當吸收至超微纖維(UMF)布料并隨后用于消除來自普通環境的醫院表面(層狀的操作臺表面)的高水平的活細菌接種物(MRSA、ACCB或Cdiff),用于研究其殺菌性質。縮寫ACCB，醋酸鈣-鮑曼不動桿菌；Cdiff，艱難梭菌(芽胞)；MRSA,甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌；PBS,磷酸鹽緩沖鹽水；ppm，百萬分率；UMF，超孩吏纖維布料。材料和方法用于研究的MRSA、ACCB和Cdiff(芽胞)生物是臨床分離菌。層狀表面接種100ju1含有2xl()6菌落形成單位(cfu)的MRSA或ACCB或3xl()5芽胞/ral的Cdiff的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)，使用無菌平的涂布器涂布超過100cm2的區域并允許千燥。干燥后區域接觸涂板以確保接種物的活力。然后用蒸餾水(對照)或最終濃度為75ppm的各個銅制劑濕潤至推薦的濕度限度的UMF清潔該區域。隨后區域再次接觸涂板來評價UMF消除的接種物。然后UMF裝于迷你手提袋中置于室溫下16小時以模擬去洗衣房或病房中的靜態儲存。16小時后UMF置于100mlPBS中并在Stomacher(勻漿器,SewardLtd,UK)中250rpm下攪拌3分鐘。對洗脫劑進行活菌計數，10ml的洗脫劑在3500rpm下離心10分鐘，沉積物在血瓊脂上培養。對任何環境污染測試板的本底計數和PBS計數。顯示的結果是三次單獨測定的平均值。結果如表6所示，接觸涂板顯示UMF非常有效地消除大量的活的接種物。但是，在銅制劑不存在時細菌在UMF布料上保持活力。所有三種銅制劑殺滅100。/D的不動桿菌和艱難梭菌芽胞并產生對MRSA的4對數殺滅。UMF-Cu制劑浸漬的布料的勻漿器洗脫劑中沒有可回收的不動桿菌或艱難梭菌細菌。討論這些研究調查了含和不含基于銅的抗細菌制劑的超微纖維布料清潔被污染的表面的能力。同時UMF布料顯示對從表面清除細菌是非常有效的，細菌在布料上保持活力至少16小時。當UMF布料用3種基于銅的制劑的任意一種預處理時，清潔效力不變，但在布料上ACCB和Cdiff芽胞的細菌存活完全被防止，MRSA減少4對數級。這些結果表明UMF布料對清潔被污染的表面是非常有效的，但根據本發明的實施例用基于銅的抗細菌制劑對布料的預處理極大地減少了這些致病菌在布料上的存活率，這在醫院和家庭是非常有益的。表6含或不舍基于銅的抗細菌制劑的超微纖維布料對被污染的表面的清潔<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>'環境污染物的檢查。"PBS的無菌檢查。實施例3介紹醫院中非常難以消滅的抗生素耐藥細菌的存在，例如甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)和萬古霉素耐藥腸球菌(VRE)、艱難梭菌芽胞，是日益嚴重的問題。這些微生物也可以寄居于護士的制服上，并且這代表了細菌在醫院傳播以及進入普通環境的一種方式。因此，采用本實施例來測定本文已證實在體外對抗MRSA、不動桿菌、大腸桿菌和艱難梭菌是有效的稱為CuWB50(如本文定義的)的基于銅的金屬離子制劑與和不與Ariel生物清潔劑在洗滌系統模型中是否具有活性。縮寫Cdiff，艱難梭菌；MRSA,曱氧西林耐藥金黃色葡萄球菌；ppffl，百萬分率；材料和方法在研究中使用的MRSA和Cdiff(芽胞)是臨床分離菌。Stomache,400循環器由SewardLtd(UK)購得。1.使用Arie1清潔劑和或不和本文稱為CuWB50的銅制劑的實施例的洗滌試驗設計。護士制服材料(100cm2)的樣品用MRSA或Cdiff芽胞污染并允許在室溫下干燥3小時。每個樣品添加至含有20ml水的塑料袋中，加入制造商推薦的濃度的Ariel清潔劑和或不和200ppm的CuWB50。每個樣品在室溫下循環勻漿器中240rpm處理15分鐘來才莫擬低溫洗涂周期。洗滌后，2ml的洗脫劑與2ml的富含鈣的林格溶液混合來中和任何遺留的CuWB50。當菌落在雙份板上計數時，中和的洗脫劑(0.lml)隨后涂布于血瓊脂板上并在37匸下在空氣中(MRSA)或無氧條件下(Cdiff芽胞)過夜培養。2.具有CuWB50加至沖洗周期中的洗滌試驗設計。護士制服材料(100cm2)的樣品用MRSA或Cdiff芽胞污染并允許在室溫下干燥3小時。每個樣品添加至含有20mL水的塑料袋中，然后在室溫下循環勻漿器中240rpm處理15分鐘來模擬低溫洗滌周期。在只用水洗周期后，用20ml含有200ppmCuWB5Q的水更換水，然后在勻漿器中再次處理5分鐘以模擬沖洗周期。2ml的洗脫劑與2ml的富含鈣的林格溶液混合來中和任何遺留的CuWB50。當菌落在雙份板上計數時，中和的洗脫劑(0.lml)隨后涂布于血瓊脂板上并在37X:下在空氣中(MRSA)或無氧條件下(Cdiff芽胞)過夜培養。結果如表7所示，當護士制服材料樣品只用Ariel清潔劑洗滌時，MRSA和C.diff的洗滌后回收量從初始的接種水平減少了2-3對數級。相反，當洗液含有Ariel和200ppm的CuWB50時會有完全的6對數殺滅。當護士制服材料樣品只在水中洗滌時，表8所示的每個實例中MRSA和Cdiff的洗滌后回收量只是輕微地減少了小于1對數級。但是，在含有200ppm的CuWB50水中沖洗5分鐘后所有殘留的微生物都被殺滅，沒有觀察到菌落。結論我們使用模型洗滌系統和被甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)或艱難梭菌芽胞(Cdiff)污染的護士制服材料樣品來評價用Ariel生物清潔劑與和不與CuWB50或將CuWB50加入沖洗周期的洗滌的抗菌作用。結果表明當Ariel減少2-3個對數級的細菌污染時，當加入洗滌或沖洗周期時CuWB50在消除/殺滅細菌中是100%有效的。根據本發明基于銅的金屬離子制劑的加入到醫院和家庭洗衣中可能是一種消毒衣物的經濟有效的方式。表7使用Ariel清潔劑和或不和CuWB50的洗滌實驗設計<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實施例4介紹糖尿病性潰瘍代表了難以治療的嚴重疾病，特別是感染了厭氧菌或抗生素耐藥細菌時。糖尿病足潰瘍經常致殘以及導致腳趾、腳、甚至是腿的截肢。糖尿病性潰瘍的感染通常與一種或多種下列微生物一起發生甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)、綠膿假單胞菌、醋酸鈣-鮑曼不動桿菌、肺炎克雷伯桿菌、脆弱擬桿菌、不解糖卟啉單胞菌、大芬戈爾德菌、厭氧消化鏈球菌[l-3]。本實施例的目的是測定已經證明抗MRSA、不動桿菌、大腸桿菌和艱難梭菌是有效的本文定義的稱為CuAL42、CuPC33和CuWB50的三種基于銅的金屬離子制劑是否也具有抗上述所列的糖尿病性潰瘍-相關的微生物的活性。材料和方法研究中使用的生物體是臨床分離菌。表l中使用的菌林的名稱和縮寫名如下甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)、A醋酸鈣-鮑曼不動桿菌(ACCB)、綠膿假單胞菌(Paerug)、肺炎克雷伯桿菌(Kpneum)、脆弱擬桿菌(Bfragilis)、不解糖卟啉單胞菌(Pasacch)、大芬戈爾德菌(Fmagna)、厭氧消化鏈球菌(Panaerob)。0.5ml的MacFarland標準混懸液由每種在緩沖生理鹽水中這些生物體制備。拭子浸蘸細菌混懸液并隨后使用旋轉板涂于血瓊脂上以在瓊脂板上培育細菌菌苔。含有不同濃度的CuAL42、CuPC33和CuWB50(以每紙盤元素銅的Mg數計算)紙盤置于瓊脂表面，板在DonWhitleyAnaerobic工作站中37'C下無氧培養24小時(厭氧菌)或37X:下空氣中培養24小時(需氧菌)。使用電子測徑器測量抑菌圏并記錄。表9所示的結果是平行測定的。結果如表9和圖15和16所示，所有三種銅制劑在超過100jLig元素銅的濃度下對抗所有8種微生物始終是非常有效的。觀察到某些細菌對3種不同制劑敏感性的一些輕度變異，例如，在50mg下醋酸鉀-鮑曼不動桿菌對CuAL42和CuPC33比對CuWB50更敏感，在50jag下肺炎克雷伯菌只對CuAL42敏感。MRSA、Bfragilis和不解糖卟啉單胞菌在測試的最低濃度10yg下對所有3種銅制劑是敏感的。討論很明顯紙盤上所有3種銅制劑超過100|ig元素銅的濃度對所有8種生物體產生顯著的抑菌圏。這些結果與在營養肉湯存在下需要至少75jag的銅制劑抑制細菌的使用試管稀釋試驗的研究一致，也與使用超微纖維75jjg的銅制劑完全殺滅在儲存的布料上的細菌的研究一致。如這些紙盤試驗中寬的抑菌圏顯示的，通常在糖尿病病人感染性潰瘍中發現的需氧菌和厭氧菌都對100jig或更高水平的銅敏感。在不同的銅制劑和某些生物的活性上有一些差異，但這些差異并不大。結果表明，由于其殺滅導致糖尿病性潰瘍持續和傳播的細菌的能力和加速皮膚愈合過程的能力，含有一種或多種例舉的銅制劑的洗劑、肥皂和凝膠在治療糖尿病性潰瘍中是有用的。表9三種銅金屬離子制劑和8種與糖尿病性潰瘍有關的微生物獲得的抑菌圏儲艦歸1ACCBPaerugKpne咖BfragilisPasacchFmagnaPanaerobL柳對的直徑(咖)CuAL421010.3900011.322.43005010.627.957.078.6920.9830.5515.349.8110010,8310.808.629.3825.1734.2618.3015.3520011.1213.4712.5011,2426.3739.1122.3417.6530012.3315,5115.0613.5529.1842.4624.1623.74CuPC33109.8000012.9118.307.205010.007.777.58018.1022.2914.8911.9810012.2810.059.497.8924.8930.6619.2115.8020013.4312.0512.429.9825.9140.9623.1020.0030023.61R5213.9913.7027.2842.6425.1126.44謹501013.1400011.3515.57005022.6906.83019.6620.7412,7210.9110023.598.567.377.7123.9329.5416.7615.3620023.1910.379.538.8425.8835.1225,1118.6530025.8214.2111.2911,0528.8039.5228.0322.13i縮寫顯示于材料和方法中。實施例5介紹目前少有證據證實HSG(95)18中給出的推薦的洗衣時間/溫度關系對在醫院內感染中特別關注的生物體是有效的。進一步，這些洗衣條件少有科學支持。因此，采用本實施例來定義在冷洗滌條件下導致受污染的亞麻制品減少的條件。冷洗循環被認為是抗菌銅制劑最苛刻的測試。另外，看起來可能日益增加的高能量花費導致在工業和家庭洗滌中較低洗滌溫度的使用，特別是如果能夠研發出足夠容易應用和經濟的并對織物也很"柔和，，的抗菌產品。本研究描述了使用被標記微生物污染的織物的洗滌去污染作用的研究。試驗材料是在Electrolux洗衣機中使用低溫(18")洗滌的稱為CuWB50的金屬離子(銅)制劑和兩種商業可獲得的洗滌清潔劑(指定為A和P)。縮寫ACCB,不動桿菌；BSA，牛血清白蛋白；cfu，菌落形成單位；MRSA，耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌；PBS，磷酸鹽緩沖液。方法和材料典型的醫院材質制服織物的商業可獲得的樣品由CarringtonCareer&WorkwearLtd(UK)提供。才羊品纟且合物是67%的聚脂/33%的195g/m'重的棉混紡織物。新的Claris控制系統升級的商業洗衣機購自Electrolux。ClarisClaris系統也提供記錄每個洗滌周期指標的電子數據輸出。Stomache^400循環器購自SewardLtd(UK)。洗滌清潔劑A和P購自當地超市。牛血清白蛋白(BSA)購自Sigma-Aldrich。所有孩吏生物試劑和瓊脂板購自OxoidLtd(UK)。PBS和BSA購自Sigma,在體積為2ml含有7。/。BSA的PBS中樣品各自用2乂108細菌接種量的甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)或多重耐藥不動桿菌(ACCB)的臨床分離菌污染。在洗滌研究使用之前，在室溫下干燥樣品。樣品附著于壓載亞麻織物得到每個冷水洗滌最終重量為5kg以模擬15升水中15分鐘標準洗滌時間的正常洗滌。使用兩種細菌林評價6種洗滌條件1.水單獨；2.水+清潔劑A;3.水+清潔劑P;4.水+CuWB50;5.水+清潔劑A+CuWB50;6.水+清潔劑P+CuWB50。C11WB50的濃度是100ppm，使用單一gelule的清潔劑A(50ml)或清潔劑P(25g)，除非另有說明。在每個洗滌的最后收集1升洗衣機洗后的水，100ml離心，細菌片狀沉淀物用于檢查菌落形成單位數(cfu)。以cfu計進行細菌污染的實際測定的洗過的污染的樣品(n-3)、對照未污染的(清潔的)樣品(n-2;用于評價在洗滌中細菌從污染的樣品的轉移)、和污染的、未洗滌的樣品(與初始接種量相反，因此在干燥期間控制生物體活力的損失)，各自置于含有20ml的PBS的塑料袋中并在室溫下于均漿器中振搖15分鐘。得到的均漿細菌混懸液的10倍稀釋液和洗衣機洗過的水涂板于雙份的瓊脂板上，在37X:下24小時培養階段后對cfu計數。結果在下列各表中結果顯示的是(i)對照污染的樣品-以cfu計初始細菌接種量，(ii)洗過的污染的樣品-洗滌后在污染的樣品上殘留的細菌的cfu,(iii)洗滌后洗衣機洗脫液-在15分鐘洗滌周期結束時洗衣水中游離細菌的cfu數，和(iv)洗滌后清潔的樣品-洗滌后未污染的樣品上細菌的cfu(表示洗滌期間細菌的轉移)。表IO中的結果表明冷水洗滌引起污染樣品上cfu數目的適度的減少-ACCB減少2個對數級和MRSA減少4個對數級。洗滌后機器洗脫液中ACCB和MRSA的cfu對兩種細菌是相似的，并且轉移到清潔的樣品上的細菌cfu比洗滌后殘留在污染的樣品上的cfu水平低大約2個對數級。這些結果表明只用冷水的15分鐘的洗滌周期可以使污染樣品上的部分細菌進入水中，在洗滌循環中這些游離細菌中的一些可以附著在清潔的樣品上。表ll中的結果表明使用任一清潔劑的冷水洗滌引起污染樣品上不動桿菌cfu數目的適度地減少-比使用清潔劑A減少的2個對數級略大，比清潔劑P減少的2個對數級略小。清潔劑A洗滌后機器洗脫液中ACCB的cfu比清潔劑P略大，雖然在實施例中清潔劑A的初始接種量也略高。轉移到清潔的樣品的細菌cfu比洗滌后殘留在污染的樣品上的cfu水平低大約2個對數級。這些結果表明用冷水和清潔劑的15分鐘的洗滌周期可以使污染樣品上的部分不動桿菌進入水中，在洗滌循環中這些游離細菌中的一些可以附著在清潔的樣品上。但是，該結果與表10所示的只用水的結果不是非常不同的，表明這些清潔劑對不動桿菌沒有抗菌活性。表12中的結果顯示使用兩種清潔劑的冷水洗滌引起污染樣品上MRSA的cfu實質上5-6個對數減少，表明兩種清潔劑對MRSA都具有強的抗菌作用。洗滌后機器洗脫液中和轉移到清潔的樣品上的MRSA的cfu水平非常低，這支持了清潔劑對MRSA具有強的抗菌作用的觀點。這些結果表明兩種清潔劑對MRSA具有強的抗菌作用，未見對不動桿菌的作用(表ll)。表13中的結果顯示只用CuWB50的冷水洗滌在廣泛的濃度范圍內在降低細菌污染上是高效的。不動桿菌對CuWB50更敏感并且在100和15ppm濃度下被完全殺滅。在l-10ppm的CuWB50濃度下仍具有相當的抗菌作用，不動桿菌的cfu減少3-5個對數。在幾乎所有的CuWB50濃度下，不動桿菌不能在機器洗脫液中存活或轉移至清潔的樣品上。CuWB50對MRSA也是有效的，在l-100ppm的濃度下引起4-5個對數級殺滅。與不動桿菌一樣，在CuWB50任何的濃度下在機器洗脫液或清潔的樣品上幾乎檢測不到MRSA。這些結果表明兩種細菌林都對CuWB50高度敏感，不動桿菌比MRSA稍微更敏感。表14中的結果清楚地顯示100ppm的CuWB50與清潔劑A或P組合導致不動桿菌和MRSA的完全殺滅，在洗滌后的樣品中沒有可檢測到的cfu。表ll的結果表明任一清潔劑單獨對不動桿菌幾乎沒有殺菌作用(2個對數級殺滅)，同時表13的結果表明100ppm的CuWB50完全殺滅不動桿菌，這解釋了上述結果。表12的結果表明兩種清潔劑單獨對MRSA都是十分有效的，產生5個對數級殺滅，表13中的結果表明CuWB50對MRSA也十分有效(5個對數級殺滅)。因此，上述結果表明CuWB50對清潔劑的附加作用導致MRSA的完全殺滅。表15所示的結果證實了表14的結果，表明與清潔劑A組合的100ppm的CuWB50在冷洗滌條件下完全殺滅不動桿菌和MRSA。進一步地，表15的結果表明清潔劑A和在降至低達5ppm的濃度下的CuWB50對殺滅兩種細菌是非常有效的。MRSA也會被清潔劑A加2ppm的CuWB50完全殺滅，同時不動桿菌對這個濃度較不敏感，只有2個對數級殺滅。這些結果表明5ppm和更高的濃度的CuWB50與清潔劑A組合形成有效的抗菌制劑組合，甚至是在低洗滌溫度下使用。討論^使用工業Electrolux洗衣才;L評價殺滅生物的銅化合物，CuWB50，與和不與2種商業洗滌清潔劑對MRSA-或不動桿菌污染的護士制服織物樣品冷水洗滌的作用。單用冷水洗滌引起污染樣品上MRSA和ACCB的cfu的2-3個對數級減少(表10),但在機器洗滌后洗脫液和無菌樣品上檢測到釋放的細菌。單獨使用的兩種商業清潔劑從污染的樣品上清除MRSA(cfu減少5-6個對數級；表12)比ACCB(cfu減少1-2個對數級；表11)更有效。在兩種情況中，在機器洗滌后洗脫液中和無菌樣品上檢測到活的細菌，但在MRSA中回收的細菌數減少了，表明清潔劑對這個細菌林中等的抗菌作用。如表13所示，在IOO和15ppm下CuWB50單獨完全殺滅ACCB并在低達lppm的濃度下減少3-4個對數級的cfu。在l-100ppm下CuWB50單獨減少4-5個對數級的MRSAcfu。在兩種情況中，在機器洗滌后洗脫液中和無菌樣品上回收的細菌數目實質上減少，表明在冷水洗滌中甚至在低濃度下CuWB50單獨的抗菌作用。在機器洗滌后洗脫液中和無菌樣品上，100ppm的CuWB50與任一清潔劑組合導致污染的樣品上ACCB和MRSA10(^的殺滅(表14)。由于100ppm的CuWB50單獨對抗MRSA不是完全有效的(表13)以及兩種清潔劑顯示其殺滅MRSA能力的一些差異性(表l2)，很明顯存在兩種產品一起導致完全殺毒作用的附加作用。ACCB對兩種清潔劑單獨都相對耐藥(表ll)，但對CuWB50非常敏感(表13)，CuWBSO與任一清潔劑的組合導致ACCB的完全殺滅。事實上，CuWB50和清潔劑A的組合在C11WB50的所有濃度(2-100ppm)下抗MRSA和CuWB50的5-100卯m濃度下抗ACCB是非常有效的。在所有情況中，在機器洗滌后洗脫液中或無菌樣品上沒有回收到活的細菌。總之，這些結果表明單獨用清潔劑冷水洗滌護士制服不可能有效地消除所有的細菌污染。添加5-10ppm的CuWBSO和任一清潔劑使用冷水洗滌造成MRSA-和ACCB-污染的樣品和才;L器洗滌后洗脫液和無菌樣品的完全殺菌。通過向15升洗液加入5ml配制的組合物母液制得10ppm濃度的CuWB50并考慮這些試驗中使用的樣品中細菌污染的高水平(大約108cfu)，這些結果表明機器洗液中加入CuWB50和普通量的商品洗滌清潔劑能有助于顯著減少所有醫院洗衣房的細菌污染。雖然沒有測試C.difficile芽胞，我們此處的結杲表明C.difficile芽胞也可以通過CuWB50/清潔劑組合被有效地殺滅。表IO單獨冷水洗滌從污染樣品消除不動桿菌(ACCB)和MRSA的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>NT-沒有測試表11使用清潔劑A或P的冷水洗滌從污染樣品消除不動桿菌的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表12使用清潔劑A或P的冷水洗滌從污染樣品消除MRSA的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>表14使用C11WB50(lOOppm)和2種清潔劑(A和P)的冷水洗滌從污染樣品消除不動桿菌(ACCB)和MRSA的效果C<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>實施例7介紹在醫院衛生學中一個重要的因素是手部的清潔。PurellTM(GojoIndustriesInc，USA)是目前在英國醫院中廣泛為護理人員使用的基于醇的手部凝膠。本文已經顯示銅金屬離子組合物CuAL42對5種普通致病菌林具有有效的殺滅活性。因此，基于蘆薈的無醇手部凝膠和含有314ppm的CuAL42稱為Xgel已被制備并在本實施例中與Purell進行比較。使用的試驗設計基于EN(歐洲標準)12054(1997)，其為試驗產品必須在60秒內產生4個對數級殺滅以獲得需要的標準的標準化過程。縮寫ACCB，不動桿菌；BSA，牛血清白蛋白；cfu,菌落形成單位；MRSA,耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌；PBS，磷酸鹽緩沖液；結果如圖5-7所示，就MRSA和ACCB分別而言，Purel^和Xgel在60秒內都取得需要的4個對數殺滅。但是，在兩種情況下Xgel比Purell更相當有效，因為Xgel殺滅100°/。的兩種菌林。就艱難梭菌芽胞而言，Purell是無效的，而同時Xgel在60秒內幾乎取得(3000-倍殺滅)需要的4個對數級殺滅。材料和方法遵循標準EN12054(1997)試驗設計。簡要地，9ml的試驗手部凝膠接種lml的細菌混懸液并混合。然后在30和60秒時取1毫升等份樣品并與9ml的林格溶液混合5分鐘。當對CFU計數時，取一部分涂布于瓊脂板上并過夜培養。討論在醫院衛生學中手部清潔是非常重要的，因為細菌或其芽胞可以很容易地通過手部接觸在醫院傳播。Purel1是目前在英國醫院中廣泛為衛生工作者使用的基于醇的手部凝膠。本研究的結果清楚地顯示Xgel，含314ppm的CuAL42的基于蘆薈的手部凝膠，對抗3種重要的致病菌-MRSA、不動桿菌和艱難梭菌芽胞-比PurelTM相當更有效。在這方面，注意到艱難梭菌變成比MRSA對病人的健康更大的威脅是重要的，現在更多的病人正死于艱難梭菌感染而非M亂Purell,像所有基于醇的手部凝膠，已知反復、延長使用會引起皮膚干燥和開裂。相反，作為不含醇并具有蘆薈基質的Xgel對手更加溫和。進一步地，我們初步的研究表明當醇蒸發后PurelTM留下的殘留物仍可以支持MRSA和不動桿菌的生長至少3個小時，而Xgel殘留物絲毫不會容許細菌存活。實施例8MRSA和不動桿菌(ACCB)抗銅組合物編碼的CuAL42、CuPC33和CuWB50，它們的粘合劑組分和硫酸銅溶液的時間-殺菌曲線(TK)的報告介紹我們已經指出(參見圖17-19)低濃度的這些銅制劑(CuAL42、CuP。3和CuWB50)在lppm時在2小時內獲得3-4個對數級殺滅。我們在最小殺菌濃度(MBC)下使用RPMI-1460介質通過MIC/MBC試管法進行了一系列的時間殺菌試驗并且在15Oppm下(如實驗環境清潔情形中使用的)也進行了試驗。MIC/MBC測定每個化合物、相關的粘合劑和硫酸銅的MIC/MBC是通過在RPMI-1460介質中(Sigma)制備從100ppm到下至lppm的最終濃度并隨后每試管接種2xl()5接種量的細菌測定的。所有試管37C下過夜培養，MIC作為顯示無生長的第一個試管，從lppm往上讀數。通過次培養所有不顯示生長的試管至血瓊脂，37r過夜培養，讀數任何存活的菌落的生長測定MBC。MBC被作為第一個顯示血瓊脂上無生長的試管(從最低濃度向上讀數)。時間殺菌曲線時間殺菌曲線是4吏用RPMI-1460介質(Sigma)完成的。在組合物、粘合劑和石危酸銅為20ppm和150ppm下對MRSA進行測試(參見圖1和2)。在組合物、粘合劑和硫酸銅為"ppm和1S0ppm下對ACCB進行測試(參見圖3和4)。每個試驗的生長對照組僅由RPMI-1460和測試生物體組成。每個反應試管由10ml包含需要濃度的組合物、粘合劑和硫酸銅的RPMI-1460組成，接種2xl(^的生物體并迅速在37t:培養。在0、15、30、60、120、360和960分鐘的時間點取樣，活菌計數三次，使用四分之一濃度的林格溶液作為稀釋劑和中和劑，接種于血瓊脂上37匸過夜培養。對菌落計數，存活數以菌落形成單位表示。菌落計數的對數值對每個時間點作圖，生成每個生物體在各個化合物、粘合劑和硫酸銅的每個濃度下的TK曲線。生長對照曲線繪制于各自曲線系列上以比較生長率。本文俗稱的術語粘合劑用于包含除銅化合物自身之外的存在于銅組合物中的組分。結果概述MRSA的MIC/MBC測定結果是10/20ppm。ACCB的MIC/MBC測定結果是20/40ppm。時間殺菌曲線抗MRSA:在20ppm下CuAL42和CuWB50在6小時內獲得4個對數級殺滅，在6和16小時期間的一些時間獲得6個對數級殺滅。CuPC33的對數殺滅分別是3個對數級和6個對數級。在150ppm下CuAL42和CuWB50在60分鐘后荻得6個對數級殺滅，CuPC33在120分鐘后獲得6個對數級殺滅。所有的粘合劑和硫酸銅具有某些活性但細菌恢復。抗ACCB:在40ppm下三種制劑都在6小時后獲得4個對數級殺滅，在6和16小時期間獲得6個對數級殺滅。在150ppm下三種組合物都在60分鐘后獲得6個對數級殺滅。所有粘合劑和硫酸銅都幾乎沒有初始活性但細菌恢復。附圖1-4顯示在0、15、30、60、120和360分鐘和960分鐘后(26小時培養)記錄的每種組合的生長曲線。實施例9包含基于銅的殺蟲劑的無醇手部凝膠的消毒效能通過應用為特定目的制作的手部凝膠的手部消毒對感染控制是必要的。目前大多數手部凝膠包含異丙醇，其賦予凝膠殺蟲和快速千燥的特性。醇對手和環境都不友好，并且吸收進入血流。我們配制了4種無醇蘆薈手部凝膠，三種包含三種無機殺蟲劑之一(CuWB50、CuAL42和CuPC33)，殺蟲劑包含300ppm的區域，例如314ppm的有效銅，研究這些凝膠是否能像商業制劑一樣有效消毒手部。106CFU或MRSA、或Ecoli，應用于志愿者的手部，然后迅速提取掌/指印。然后四種手部凝膠之一擦于手部，隨后在時間間隔取印。與蘆薈對照不同，在使用后即刻和之后任何時間沒有MRSA可以從含有CuAL42或CuWB50的凝膠中恢復。MRSA可以從CuPC33治療15分鐘的手部恢復。與對照組不同，E.coli在任何時間都不能從含有CuAL42的凝膠處理的手部恢復；對其他兩種凝膠生物體的完全消失只在更遲的時間觀察到。我們認為含有CuAL42的凝膠快速和有效地從手部消滅活的生物體，并可以提供對含醇凝膠更人性和生態學上可接受的替代。結果顯示于圖5、6和7中。實施例10CuAL42、CuPC33和CuWB50的安全性組織培養物中對活的人體細胞細胞毒性的研究背景、目標和目的本文的其他實施例已經確定這些組合物具有顯著的抗菌活'峻，意外地優于單個組分。本實施例旨在研究CuWB50、CuPC33和CuAL42對細菌病原體的抗菌和毒性特性是否會延伸于哺乳動物(人類)細胞。材料和方法提供三種含銅抗菌溶液-CuPC33、CuAL42和CuWB50，每種含有30.43g/L的銅離子。石危酸銅對照溶液在蒸餾水中制備為相同濃度。兩種人類細胞系用于本實施例HT-29,腸道上皮細胞系，和U937,單核細胞淋巴瘤。合適的完全培養基中各種濃度的含銅抗菌溶液或石危酸銅的樣品被加入以建立細胞培養物，細胞進一步培養24或48小時。通過顯微鏡檢查后細胞隨后被固定并染色以使用磺酰羅丹明(sulforhodamine)(SRB)細胞毒性測定法定量測定細胞毒性，在國立癌癥研究院研發和驗證。在含有5%或25^胎牛血清(FCS)的培養基中使用HT-29細胞在24和48小時的時間點評價CuPC33(■)、CuAL42(A)、CuWB50(T)和硫酸銅()的細胞毒性百分比。所有試驗培養物一式三份。結果顯示于圖8中。在含有5%或25%胎牛血清(FCS)的培養基中使用U937細胞在24和48小時的時間點評價CuPC33(■)、CuAL42(A)、CuWB50(T)和硫酸銅()的細胞毒性百分比。所有試驗培養物一式三份。結果顯示于圖9中。結果顯微鏡檢查沒有發現在l-100卯ffi濃度下含銅離子的抗菌溶液或硫酸銅對用5°/。或25%FCS培養的任一細胞系有明顯的毒性作用。但是，在含有25%FCS的培養基中1000卯m的含銅抗菌i^液和石克酸銅引起HT-29細胞聚集，而含5%FCS的培養基中HT-29細胞顯示明顯的細胞死亡的跡象(粒狀細胞質聚集和折射性喪失)。這些作用在24和48小時培養物中是相似的。含有5%或25%FCS的培養基中HT-29生長的同樣地好(參見圖8說明中的對照光密度值)，增加的血清濃度產生對含銅抗菌溶液的細胞毒性作用的一些保護作用。U937細胞在含有25%FCS的培養基中比在含有5%FCS的培養基中生長地更好(參見圖9說明中的對照光密度值)，但顯示與HT-29相似的含銅抗菌溶液和石克酸銅的細胞毒性模式。SRB測試結果證實3種含銅金屬離子的抗菌溶液的任意一種或石克酸銅高至100ppm的濃度下對HT-29細胞(圖8)或U937細胞(圖9)沒有顯著地細胞毒性。lOOOppm的所有三種含銅抗菌溶液對24和48小時的兩種細胞系培養物通常都具有80-100%的細胞毒性。增加的血清濃度的適度的保護作用不能通過SRB測定加以區別，這強調了細胞顯微鏡評價的價值。在含有25%FCS的培養基中硫酸銅對HT-29和U937細胞是相當小的毒性的(圖8和9，組C和D)。結論3種含銅抗菌溶液CuPC33、CuAL42、CuWB50和石危酸銅在l-100ppm的濃度下對2種不同的人細胞系沒有顯著的細胞毒性。在1000ppm的濃度下3種含銅抗菌溶液對2種人細胞系具有非常強的細胞毒性(80-100%)，培養基中更高地FCS水平只能有限地減少該作用。lOOOppm的石充酸銅對2種人細胞系也是非常有毒性的，雖然增加血清濃度實質上減少該毒性并且通過SRB測定可以使其直觀化。結果表明，考慮到其對細菌而非哺乳動物(人)細胞的作用，所有三種銅組合物的毒性存在非常大的生物學安全窗口。該結論是基于組合物在l-100ppm的濃度范圍內明顯的抗菌作用，在此濃度下沒有檢測到對人細胞系的細胞毒性。實施例11CuAL42、CuWB50和CuPC33減少或消除污染的清潔布料上存在的細菌生物負荷的能力背景、目標和目的最常使用基于濕環的專有技術或更現代(和有效的)的基于孩i纖維的布料使細菌從表面消除。基于超微纖維的布料(UMF)從硬表面消除細菌是特別有效的。這些布料最好與不含清潔劑的水一起使用。在醫院環境使用后，這些布料成為一種生物公害，因為它們包含數百萬如果不是十億的活的^t生物，已知至少其中一些至少是醫院獲得性感染的原因。由于這些布料最好用水浸濕使用，我們研究了CuWB50、CuAL42和CuPC33加入水中是否會減少或消除被布料攜帶的這些生物體的活力。材料和方法層狀表面使用含有合適濃度的MRSA、不動桿菌或艱難梭菌芽胞的緩沖鹽水接種，使用無菌平的涂布器涂布于超過100平方厘米面積并允許干燥。該區域接觸涂板以確保活的、有生機的致病生物滿意的沉淀。該區域隨后使用濕潤至推薦的濕度范圍并且具有最終濃度為75ppm的各個銅組合物的超微纖維布料(IMF)清潔。然后該區域再次接觸涂板來評價UMF消除的接種量。UMF隨后裝于迷你手提袋中，置于室溫下16小時模擬去洗衣房。16小時后UMF置于100ml磷酸鹽緩沖液中，勻漿器(設計用于從織物和糧食中釋放活的生物體的設備)中250rpm攪拌3分鐘。洗脫液進行活菌計數，10ml的洗脫液3500rpm下離心IO分鐘，沉積物在血瓊脂上培養。對任何的環境污染測試板的本底計數和PBS計數。結果顯示于下表16中。表16<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>結論接觸涂板顯示被UMF有效消除的有活力的接種物。所有三種銅組合物在16小時的時間范圍內獲得對不動桿菌和艱難梭菌芽胞的完全殺滅以及對MRSA的4個對數殺滅(99.99%)。不動桿菌或艱難梭菌UMF-Cu布料的洗脫液的離心沉積物中沒有可恢復的細菌。該實施例顯示所有三種組合物以75ppm存在時，當與目前被NHS評價和應用的布料清潔技術結合使用時，是非常有效的殺生物劑。同時其他滅菌劑(例如季胺類化合物、囟化物等)在本文中同樣有效，可能目前對其消除環境原因的傾向會產生對更安全選擇的需要。本文顯示的數據支持了這些銅金屬離子組合物可能提供這樣一種選擇的預測。實施例12銅抗菌劑CuAL42和CuPC33對抗H.pylori的效力在這個實施例中使用標準NCCLS方法進行測試，使用菌林NCTCCagA陽性、NCTCCagA陰性和ACTCJ5(基因組序列已知)。臨床分離菌是UK1曱硝唑耐藥和Bl克拉霉素耐藥的。使用1og7cfu/ml的最終接種量(每毫升菌落形成單位數)。在本方法中，每個抗菌產品在0.5、1.0、5.0和12ppm的濃度下的標準殺菌曲線通過在15、30、60和120分鐘取樣獲得。使用的中和劑(neuturaliser)是l/4的林格乳酸鹽。至于量化，制備十倍稀釋液，IOO微升涂板。板在CampyGen產生的大氣中37匸培養5天。結果如附圖10-14描述，CuAL42比CuPC33更有效。5ppm的CuAL42在120分鐘內減少5-6對數的活菌數。12ppm的CuAL42在30分鐘內減少5-6對數的活菌數并導致60-120分鐘內沒有生長。CagA狀態或對曱硝唑或克拉霉素的耐藥對兩種銅離子組合物的效力沒有任何影響。實施例13手部凝膠殘留物抗MRSA活性方法手部凝膠以每10cm21毫升涂布于層狀表面板上，在室溫下允許干燥過夜。0.lml的MRSA的PBS混懸液(106CFU/ml)小心地涂布于每個10cm'標記的區域(各個時間點每個手部凝膠殘留物的正方形)并允許干燥10分鐘。正方形立刻(t-0小時)并隨后在高至24小時的不同時間點接觸涂板。接觸涂板培養24小時，對菌落形成單位數進行計數(CFUs)。結果如圖20所示，在任何時間點Xgel殘留物中沒有CFUs，推測是由于殘留物中CuAL42存在的緣故。相反，在高至3小時的任何時間點Purell殘留物中都檢測到CFUs，雖然這些以時間依賴方式減少，表明殘留物中防腐劑和一些其他成分具有適度的抗菌活性。這不是由于Purell殘留物中存在乙醇，因為其在過夜干燥階段已經蒸發了。結論Xgel殘留物在所有時間點都預防MRSA的存活和生長，同時Purell殘留物支持MRSA存活至少3小時。據NHS估計每月每床使用1升的Purell。由于1升的Purell含有70%的乙醇然后每月會在每個床存放約300ml的殘留物，這可能潛在地支持了MRSA的存活(初步結果顯示與抗生素耐藥的不動桿菌相似的結果)。相反，Xgel殘留物不支持MRSA的存活(或不動桿菌-初步結果)并且因此有助于在醫療保健設置中防止細菌的生長和存活。實施例14使用7Sppm的三種銅組合物消毒MRSA污染的UMF布料方法PBS中MRSA(2xl06)涂布于層狀表面板(50cm2)并允許干燥10分鐘。正方形立即用超孩t纖維(UMF)布料擦拭、stomached、涂板、24小時后菌落形成單位(CFU)計數以確定接種物正確并且被UMF布料完全吸收。其他板用水浸濕的對照UMF或含有75ppm的3種銅纟且合物的水浸濕的UMFs擦拭。這些污染的UMFs置于塑料袋中16小時，然后stomached、涂板和24小時后計數CFUs。結果如圖21所示，接種對照組含有2xl(T的CFUs，表明UMF布料吸收了所有的MRSA細菌。僅用水浸濕并儲存16小時的對照UMF布料含有lxl()S的MRSA，而用3種銅化合物浸濕的UMF布料儲存16小時后不含活的細菌。結論這些結果清楚地顯示了UMF布料從層狀表面消除MRSA是非常有效的，例如醫院中應用的那些。但是，UMF布料上細菌的存活是非常好的，這些布料的棄置或洗滌引發了向各處傳播細菌的嚴重風險。因此，用銅化合物浸濕的UMF布料16小時后不含殘存的MRSA的事實是非常重要的。這種由3種銅組合物觀察到100%有效的消毒作用在需要從表面消除可能危險的細菌的醫院和其他地方是非常有價值的。實施例15手部凝膠對A431人皮膚細胞系的細胞毒性方法人鱗狀上皮細胞系A431在添加了10%FCS、2g/L碳酸氫鈉和2mM的L-谷氨酰胺(完全培養基)的RPMI1640培養基中，75cm2組織培養瓶中增濕培養箱中37匸下含5。化02的大氣中進行培養。對細胞毒性試驗，A431細胞于200n1的完全培養基中以每孔5x104細胞數涂布于平底96孔板的孔中并且允許生長融合。試驗當天，吸取衰竭的培養基并用100U1新鮮的完全培養基替換。手部凝膠的樣品在完全培養基中稀釋使圖中顯示的濃度加倍，100pl的各種樣品添加于隨后進一步培養24小時的細胞中。顯微鏡檢查后，細胞固定并染色以如下所述定量測定的細胞毒性。磺酰羅丹明(sulforhodamine)B(SRB)細胞毒性測定法在國立癌癥研究院研發和驗證。筒要地，細胞用RPMI培養基(無FCS)洗滌兩次然后在4。C下用10%的三氯乙酸固定一小時。用自來水洗滌兩次后，在室溫下細胞用SRB(l。/。的醋酸中0.4%w/vSRB)染色30分鐘。用自來水洗滌兩次后，剩余染料溶解于10mM的Tris堿中，在540nm下DynatechMultiplateELISAreader中測定孑L的光密度(0.D.)。細胞存活的百分數通過試驗0.D.除以對照0.D.乘以100計算。結果如附圖22顯示，Xgel基質(用黃原膠和檸檬酸作為增稠劑的蘆薈凝膠)在任何測試的濃度下對A431細胞存活沒有顯著的作用。Xgel是含有具有314ppm的銅基殺蟲劑CuAL42的Xgel基質的無醇手部凝膠；該產品在最高濃度下減少大約25%的細胞存活，但在低濃度下沒有作用。10%的乙醇減少大約50%的A431細胞存活但在低濃度下沒有作用。Purell是目前醫院中用于手消毒的基于醇的手部凝膠。Purell含有62%的變性醇加十四(烷)酸異丙酯、丙二醇、醋酸維生素E、ammonomethyl丙醇，在10%的濃度下其殺滅超過95%的A431細胞，但在低濃度下沒有作用。Spirigel和Softalind也是含醇的手部凝膠，但Spirigel同時具有與Purel1相似的特性，Softalind在只是1%的濃度下殺滅大約50%的A431細胞。但是，Softalind含有變性醇和丙醇的混合物以及PEG-6辛酸/癸酸甘油酯和二異丙基己二酸酯，這大概解釋了對A431細胞顯著更多的毒性作用。Nexan是含有0.2%的三氯生加清潔劑的手部凝膠，它是非常細胞毒性的，在所有測試濃度下殺滅A431細胞。在高濃度下(#)Nexan實際上溶解A431細胞(顯微鏡觀察)，這最可能歸因于清潔劑的作用。最后，2種含有季銨化合物的清潔產品CBC和Activ8對A431細胞也是非常細胞毒性的。在較高的濃度下(')這些產品粘附死亡的A431細胞于塑料盤(顯微鏡觀察)上，給出細胞存活改善的假象。結論結果顯示含有醇的手部凝膠對培養物中A431皮膚上皮細胞具有適度的細胞毒性作用。但是，在這些產品被醫務人員使用到手部的1/10或更低的濃度下觀察到這些細胞毒性作用，例如，有文獻證明頻繁日常使用Purell會引起皮膚干燥或開裂。Xgel在1/10正常強度下也表現非常適中的細胞毒性-大約與Purell在1/33正常強度下的作用相同-這大概是由于CuAL42滅菌劑存在的作用，因為Xgel基質在任何濃度下對A431沒有顯著的作用。這些結果表明Xgel會比Purell對皮膚更溫和。進一步地，其他研究已顯示在殺滅MRSA、抗生素耐藥的不動桿菌和艱難梭菌芽胞方面Xgel比Purell是相當更有效的。事實上，Purell對艱難梭菌芽胞是完全無效的，并且由于可能引起致命的腹瀉的這種細菌現在是醫院中比MRSA更大的死亡原因，使用Xgel而非Purell會是更合理的選擇。Nexan包含0.2%的三氯生和清潔劑，它在所有測試的濃度下完全殺滅A431細胞。令人驚異地，Nexan在意大利的醫院中被醫務人員用作標準的手部凝膠。包含季銨化合物作為其活性成分的2種清潔產品CBC和Activ8對A431也是非常細胞毒性的，但是由于這些產品假定被戴有橡皮手套的人使用，它們不會引起皮膚問題。實施例163種銅組合物對由醫院暴發分離的不同細菌物種敏感性的測定目的測定三種銅組合物對例如腸桿菌、假單胞菌、葡萄球菌和腸球菌等一系列細菌的活性概要使用MIC測定法測試總計170種不同細菌菌株(22種不動桿菌、18種腸道細菌、27種克雷白桿菌、26種腸球菌、IO種假單胞菌、37種粘質沙雷菌和45種葡萄球菌)對三種銅組合物的敏感性。區域從11-31mm大小不等，不顯示耐藥的類型。材料1)使用的銅組合物，如本文定義和編碼的由表1實施方案1-8得到的CuAL42、CuWB50和CuPC332)Isosensitest瓊月旨(ISO瓊脂)3)Isosensitest肉湯(ISO肉湯)4)抗菌敏感性測試盤(0X0IDCT0998B)5)由商店獲得的無菌拭子6)過夜生長的細菌培養物方法抗菌敏感性測試盤(OXOIDCT0998B)用20ul的每個銅組合物飽合，分別在熱氣干燥箱中干燥2小時，儲存于4x:。細菌培養物接種于適當的培養基上(營養瓊脂或MacConkey)并過夜培養。用環蘸取5孔分離的菌落并接種于5ml的Isosensitest肉湯中(ISO肉湯)。肉湯在36<€-/+20匸下有氧過夜培養。接種物通過渦旋過夜的肉湯，用長的塑料巴斯德吸管向5ml的ISO肉湯中移取"x"滴過夜培養物如下制備腸桿菌1滴假單胞菌1滴腸球菌5滴葡萄球菌2滴無菌拭子浸入渦旋的接種物混懸液、靠壓管壁并旋轉除去過多的液體。使用旋轉接種器接種涂板。使用無菌鑷子使板置于涂板上以佳L它們完全與瓊脂接觸。一旦應用就不移除板。讀數測定組合物抑制生長的抑制區域。記錄結果。A=CuAL42B-CuWB50C-CuPC33區域的大小以mm計結果。金黃色葡萄球菌ABCEMRSA-15H040220409E15Bl262223H040220408E15B3272222H040340351E15B3262626H061500550E15B5272527H061500522E15B7312527H061440332E15Bl302727H061520148E15B17222219,1520592E15B8242525HO61780511E15Bl201718H061780562E15B2302725H061880414E15B3201919H062040630E15B3242021EMRSA-16,5180281E16Al302825,0220405E16A16252221H053000200E16A14252221H055140586E16A12232120H060620616E16A16242220H060620609E16A2222223H060780341E16All222219,1620087E16A7242220H061700478E16A29272219H060780344E16A1212121H060440423E16A14232220H060200417E16A16201918EMRSA-1H043980582GOS262626EMRSA-17,1940150S'hampton262626H053100245S'hampton262625Irish-1H042280049Belfast252525H054360295Craigavon252422Irish-2H052080391Craigavon272624CA-MRSAH043880199ST1PVL-252422H060180184ST5PVL+252525H045260142ST8PVL+272422H044300316ST22PVU221917H060640427ST30PVL+272524H060660187ST59PVL+242322H054960270ST80PVL+252525H052320141ST88PVL+252525MSSAs55/348880/81;PVL+272726H051680084Distinct262522H051760098組II242423MSSAH051660517組II242424MSSAH05126016Q組II272425MSSAH051640376WSS-96272726H052260557DisPVL+272524H060940449NTPVL+262212屎腸球菌H062940352H062940351H06276023OH062920531H062940372H063000437H063000438H062740365H062980090H062940548H062940550H062940547H062940549H062940322H062980250糞腸球菌麵3000"90H062980583H062380292H062960351302730,2960251302832鵓雞腸球菌H062980247293129陰溝腸桿菌ABCH062680089171620H062760216191819cBAE性性4生生4Ej^i歐性Si性性;v曰曰曰曰曰月月性性性曰tfl曰i生性月曰月<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>H062920245151414H062920257121414綠膿假單胞菌暴發菌林HPA86圣喬治醫院ABCH062880427201725H062880428171723H062680429171723H061820407201824H061420徹181621H062500552211824H062500553191723H053940608201724H053940608201724H0539福09181723粘質沙雷氏桿菌暴發菌林圣瑪麗兒童醫院ABC畫28803U191724H062880312181820H062880313201820H062880314201823H062880315191820H062880316201820H062880317202220鮑氏不動桿菌ABCA/3009SEclone222023,3260547SEclone222022,1340585SEclone181821A/3214OXA-23clone201622,4640092OXA-23clone202023畫0謂607OXA-23clone191820H044220140NWstrain212127H034940173Tstrain221920H052600376Tstrain201922H060560322Tstrain2118253/A/3311Sporadic1171419H043860186Midlands2161317H060980542Sporadic3201716A/2875/1Wstrain111113躍2034Wstrain131116H060800430賺C-1121112OXA-23cloneU1012H0345601772……0XA-23clone""",22206352111112,2900157Sporadic2121113H04120019824AC-1222023結論總計170種菌林、22種不動桿菌、18種腸道細菌、27種克雷白桿菌、26種腸球菌、IO種假單胞菌、37種粘質沙雷菌和45種葡萄球菌測試對抗三種銅組合物。沒有耐藥性。區域從11-31薩大小不等。權利要求1、一種抗菌制劑，包含(a)至少一種能夠在水性介質中分解形成銅離子的水溶性銅化合物；(b)至少一種能夠在水性介質中分解形成銨離子的水溶性銨試劑；(c)至少一種水溶性酸，和(d)組分(a)、(b)和(c)溶于其中的水溶性介質，所述制劑具有(e)酸性pH和(f)超過50毫伏的電解電勢。2、如權利要求1所述的制劑，其中(a)包含一種或多種無機銅鹽，例如硫酸銅、氯化銅、硝酸銅。3、如權利要求1或2所述的制劑，其中(b)包含至少一種無機銨鹽或氫氧化物。4、如任一前述權利要求所述的制劑，其中(c)包含一種或多種無機酸，例如鹽酸、石克酸、硝酸和磷酸中的一種。5、如權利要求l-3任一所述的制劑，其中(c)包含一種或多種酸，其選自檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、乙酸、乳酸組成的組。6、如任一前述權利要求所述的制劑，其中水溶性介質包含純的蒸餾水或基本上由純的蒸餾水組成。7、如任一前述權利要求所述的制劑，其中pH值(e)小于5，優選小于4，更優選小于3，最優選小于2.5。8、如權利要求7所述的制劑，其中pH值(e)是2或更小。9、如任一前述權利要求所述的制劑，其中電解電勢值(f)超過100毫伏，優選超過150毫伏，更優選超過200毫伏，甚至更優選超過300毫伏，例如在300-400毫伏的范圍內。10、如任一前述權利要求所述的抗菌制劑，其中水性介質包含凝膠基質。11、如權利要求IO所述的制劑，其中凝膠基質包含,薈和一種或多種增稠劑。12、如權利要求11所述的制劑，其中增稠劑包含至少一種黃原膠。13、如權利要求10-12任一所述的制劑，其中銅化合物(a)是有才幾鹽，并且以25-500ppm、優選50-400ppm、更優選100-350ppm的濃度存在。14、如任一前述權利要求所述的制劑，其基本上由其中所述的組分組成。15、如權利要求14所述的制劑，除任何不可避免的雜質可能存在外，其由其中所述的組分組成。16、如任一前述權利要求所述的制劑，其中銅化合物U)是水合的結晶硫酸銅，酸(c)包含一種酸，選自硫酸、鹽酸和磚酸，銨試劑(b)包含一種銨化合物，選自硫酸銨、氯化銨和磷酸銨。17、用于控制細菌生長和/或繁殖的任一前述權利要求所述的抗菌制劑。18、如權利要求17所述的制劑，其中細菌難以治療或是持續性細菌。19、如權利要求18所述的制劑，其中細菌是醫院內細菌或耐藥性細菌。20、用于制備處理細菌或細菌感染的藥物的任一前述權利要求所述的制劑。21、如權利要求20所述的制劑，其中細菌難以治療或是持續性細菌，例如醫院內細菌或耐藥性細菌。22、任一前述權利要求所述的制劑作為抗細菌制劑的用途。23、一種處理含有例如醫院內或耐藥性細菌的細菌的表面或材料的方法，包含將權利要求1-21任一所述的制劑應用于所述的表面或材料。24、如權利要求1-21任一所述的抗菌制劑，與至少一種清潔劑組合。25、一種清潔劑組合物，包含與如權利要求l-21任一所述的抗菌制劑結合的一種或多種清潔劑。26、一種浸漬至少一種如權利要求1-21任一所述的抗菌制劑的材料基質。27、如權利要求26所述基質，其為組織材料。28、如權利要求26所述基質，其為紡織或織物材料。29、如權利要求28所述基質，其為布材料。30、如權利要求29所述基質，其為微纖維布材料。31、如權利要求30所述基質，其為超^t纖維布材料。32、一種抗菌制劑，包含權利要求1-21任一所述的制劑和其可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。33、一種消毒表面的方法，其包括將權利要求26-31任一所述的材料基質應用于表面。34、一種洗滌含有細菌的材料的方法，其包括使用權利要求24所述的制劑或權利要求25所述的清潔劑組合物洗滌材料。35、如權利要求1-21任一所述的抗菌制劑，以乳劑、肥皂、洗劑、噴霧溶液、敷料溶液、灌洗液或噴霧制劑的形式。36、一種消毒表面的方法，通過使表面與權利要求1-21或35任一定義的抗菌組合物的噴霧或霧接觸。37、一種細菌感染控制系統，其涉及(i)檢測細菌，(ii)顯示檢測的結果，(iii)通過表面應用或噴霧權利要求1-21或35任一定義的組合物處理檢測到的細菌，(iv)重復檢測步驟并重復顯示步驟。38、如權利要求37所述的感染控制系統，其中檢測步驟(i)是通過孩l流體檢測法完成的。全文摘要一種抗菌制劑，包含(a)至少一種能夠在水性介質中分解形成銅離子的水溶性銅化合物；(b)至少一種能夠在水性介質中分解形成銨離子的水溶性銨試劑；(c)至少一種水溶性酸，和(d)組分(a)、(b)和(c)溶于其中的水溶性介質，所述制劑具有(e)酸性pH和(f)超過50毫伏的電解電勢。文檔編號A61P31/00GK101360533SQ200680051202公開日2009年2月4日申請日期2006年11月17日優先權日2005年11月17日發明者S·S·希考克申請人:治療研究有限公司