專利名稱：：寡核糖核苷酸及其應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及免疫刺激性RNA寡核香酸(RNAoligonucleotide,ORN)。具體而言，所述ORN具有直接或間接地與3'多-G模體和任選的5'多-G模體側面相接(flanked)的免疫刺激性ORN模體。本發明還涉及使用所述ORN的方法(包括治療方法和篩選方法)及相關試劑盒。
背景技術：
：Toll樣受體(TLR)是一類識別與病原體相關的分子模式(PAMP)的高保留模式識別受體(PRR)多肽，并且在哺乳動物的天然免疫中扮演關鍵角色。目前已鑒定出至少十個家族成員，它們被稱為TLRi-TLRIO。各種TLR的細胞質域由Toll-白細胞介素1受體(TIR)域來表征。見MedzhitovR等，(1998)Mo/Ce//2:253-8。TLR對微生物侵襲的識別引發在果蠅和哺乳動物中進化保守(evolutionarilyconserved)的信號級聯的激活。據報道，含TIR域的銜接蛋白MyD88與TLR結合，且將白細胞介素1受體結合激酶(IRAK)和腫瘤壞死因子(TNF)受體結合因子6(TRAF6)補充到所述TLR中。人們認為，MyD88依賴性信號傳導途徑導致NF-KB轉錄因子和c-JunNH2端激酶(Jnk)、促分裂素激活的蛋白激酶(MAPK)的激活，這是免疫激活和炎性細胞因子產生的關鍵步驟。有關綜述參見AderemA等，(2000)Wafwe406:782-87和AkiraS等，(2004)淑及ev/畫謹/4:499-511。已鑒定出許多特異性TLR配體。TLR2的配體包括肽聚糖和脂肽。見YoshimuraA等，(1999)J/mmw"o/163:1-5;AliprantisAO等，(1999)5We"ce285:736-9。脂多糖(LPS)是TLR4的配體。見PoltorakA等，(1998)5We"ce282:2085-8;HoshinoK等，(1999)/mmw"o/162:3749-52。細菌鞭毛蛋白是TLR5的配體。見HayashiF等，(2001)7V"/wre410:1099-1103。據報道，肽聚糖不僅是TLR2的配體，還是TLR6的配體。見OzinskyA等，(2000)/VocA^/^cad5W"f/5^97:13766-71;TakeuchiO等，(2001)/mmimo/13:933-40。近來報道了某些低分子量合成化合物，如咪唑并喹啉類喹咪莫特(imiquimod)(R-837)和雷西莫特(resiquimod)(R-848)是TLR7和TLR8的配體。見HemmiH等，(2002)淑/畫歸/3:196-200;JurkM等，(2002)淑/麵畫/3:499。從對未甲基化的細菌DNA及其合成類似物(CpGDNA)是TLR9的配體的近期發現開始(HemmiH等，(2000)A^we408:740-5;BauerS等，(2001)PracAto"caaft/S^498，9237-42),已有報道稱某些TLR的配體包括某些核酸分子。近來，已有報道稱某些類型的RNA以非序列依賴性或序列依賴性形式具有免疫刺激性。另外，已有報道稱這些不同免疫刺激性RNA刺激TLR3、TLR7和TLR8。
發明內容本發明大體上涉及含有某些RNA模體的免疫刺激性寡核糖核苷酸(ORN)，還涉及含所述ORN的免疫刺激性組合物，并且涉及使用所述ORN和組合物的方法。本發明的ORN可用于要求刺激或增加免疫應答的任何設置或應用。如下文所公開的，本發明的ORN具體可用于制備用于治療包括感染、癌癥、過敏和哮喘在內的各種疾病狀態的藥物組合物，所述藥物組合物包括佐劑、疫苗和其它藥劑。因此本發明在某些方面涉及包含本發明的ORN的組合物及其使用方法。另外如下文所公開的，本發明的ORN和組合物具體可用于激活免疫細胞、給受試者預防接種、治療患免疫系統缺陷的受試者、治療被感染的受試者、治療患自體免疫性疾病的受試者、治療患癌癥的受試者、治療有過敏性疾病的受試者、治療患哮喘、氣道重塑、促進表位擴展(promotingepitopespreading)及抗體依賴性細胞毒性的受試者的方法。正如下文所詳細^^開的，本發明的免疫刺激性ORN的特征是它們包含至少一個序列依賴性免疫刺激性RNA模體。所述序列依賴性免疫刺激性RNA模體通常為短RNA序列，盡管在某些實施方式中，該模體也可以包括一個或多個修飾，如經修飾的核苦酸間磷酸鍵、經修飾的核堿基、經修飾的糖、核苷酸類似物、脫氧核糖核苷酸、間隔子、非核苷酸連接子或上述物質的任何組合。在一個實施方式中，免疫刺激性RNA模體出現在較長的本發明的免疫刺激性ORN的環境中。所述免疫刺激性RNA模體還可以出現在嵌合DNA:RNAA核酸分子的環境中。公開了所述序列依賴性免疫刺激性RNA模體和含有這類模體的ORN是TLR7而不是TLR8的激動劑。根據本發明的某些方面，提供了長度為8-100個核糖核苷酸的免疫剌激性RNA寡核苷酸(ORN)。所述ORN包括與多-G模體相連的免疫刺激性ORN模體，其中所述多-G模體對所述免疫刺激性ORN模體來說是3'。所述多-G模體包含至少4個G。在其它實施方式中，所述多-G模體可以是5、6、7、8、9或IO個G。G是鳥香或其衍生物。在某些實施方式中，所述ORN不是下列之一5'GGGGUUUUGGGGG3'(SEQIDNO:33)、5'GGGUUUU3'、5'GGGGUUUUGGGG3'(SEQIDNO:34)、GUUUUUG(SEQIDNO:35)、GGGGGGGUUGUGUGGGGG(SEQIDNO:36)、CCCCUUUUGGGGG(SEQIDNO:37)、GUUUGUGUGGGG(SEQIDNO:38)、GUUGUGUGGGGG(SEQIDNO:39)、UUUUUUGGGGG(SEQIDNO:40)、UUUUUGGGGG(SEQIDNO:41)、UUUUGGGGG(SEQIDNO:19)或UUUUGGGG(SEQIDNO:15)。在某些實施方式中，所述免疫刺激性ORN模體是TLR8模體。所述TLR8模體在本發明的某些方面是N-U-R^-R2。N是核糖核苷酸，且N不包括U。在某些實施方式中，N是腺苷或胞嘧啶CC)或它們的衍生物。U是尿嘧啶或其衍生物。R是核糖核苷酸，其中Ri和R2中至少之一是腺苷(A)或胞嘧啶或它們的衍生物。除非N-U-RrR2包括至少2個A,否則R不是U。本發明的ORN包含至少一個且在某些實施方式中，包含多于一個(即，2、3或4)免疫刺激性模體，N-U-RrR2。包含TLR8模體的ORN可任選地還包含TLR7/84莫體。在某些實施方式中，N-U-RrR2可包含至少3個A或至少2個C。任選地，N-U-RrR2包含至少1個G或C。在其它實施方式中，非核苷酸連接子將所述TLR8模體與5'核糖核苷酸分隔開。在其它實施方式中，非核香酸連接子將所述TLR8模體與3'核糖核苷酸分隔開。任選地，非核苷酸連接子將所述TLR8模體與5'和3'核糖核苷酸分隔開。在其它實施方式中，所述TLR8模體包含至少一個AU。在其它實施方式中，所述TLR8模體包含至少一個CU。在其它實施方式中，所述免疫刺激性ORN模體是TLR7/8模體。TLR7/8模體包含，例如，核糖核香酸序列，如(i)5'-C/U-U-G/U-U-3',(ii)5'-R-U-R-G畫Y-3',(iii)5'-G-U-U-G-B-3',(iv)5'-G-U-G陽U-G/U-3',和(v)5'-G/C-U-A/C-G-G-C-A-C-3'。C/U是胞嘧啶(C)或尿嘧啶(U)。G/U是鳥噤呤(G)或U。R是噤呤。Y是嘧啶。B是U、G或C。G/C是G或C。A/C是腺噪呤(A)或C。在不同實施方式中，5'-C/U-U-G/U-U-3'是CUGU、CUUU、UUGU或UUUU。在不同實施方式中，5'-R-U-R-G-Y-3'是GUAGU、GUAGC、GUGGU、GUGGC、AUAGU、AUAGC、AUGGU或AUGGC。在一個實施方式中，所述堿基序列是GUAGUGU。在不同實施方式中，5'-G-U-U-G-B-3'是GUUGU、GUUGG或GUUGC。在不同實施方式中，5'-G-U-G-U-G/U-3'是GUGUG或GUGUU。在一個實施方式中，所述堿基序列是GUGUUUAC。在不同實施方式中，5'-G/C-U-A/C-G-G-C-A-C-3'是GUAGGCAC、GUCGGCAC、CUAGGCAC或CUCGGCAC。在某些方面，本發明的ORN是長度為10-100個核糖核苷酸的ORN,其包括GG(R,)n(U)4國2。(R2)mGGGG(SEQIDNO:29)、GG(R,)n(U)5—2。(R2)mGGGG(SEQIDNO:30)或GG(R,)"U)4(R2)mGGGG(SEQIDNO:31)。R,和R2是核糖核苷、脫氧核糖核苷、間隔子或非核苷酸連接子。U是尿苷或其衍生物。G是鳥苷或其衍生物。n=0-20,且m-0-20。在某些實施方式中，當(R丄不是GG時，(R2)m不是G或m不等于0。在其它實施方式中，所述ORN不包含本文中式(i)、(ii)、(iii)或它們的任何組合所述的特定的經修飾的磷酸鍵。在某些實施方式中，所述ORN是rG*rG*rG*rG*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:4)、rG*rG*rG*rGrU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*ru*rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:5)、rG*rG*rG*rG*rU*rU*rA*rU*rU*rA*rU*rU*rA*rU*rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:6)、rG*rG*rG*rG-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:8)、rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*dG*dG*dG*dG*dG(SEQIDNO:10)、rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:23)、rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:24)、rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*rG*rG(SEQIDNO:25)、rU*rU*rG*rU*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:26)、rU*rU*rU*rU*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:27)或rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:21)。任選地，所述式的組成部分由下列的一個或多個定義(RA是GG,(R2)m是GGG,(UV2o是UUUUU，(11)4.20是UUUUUUU,(U)4.20是UUUUUUUUUU(SEQIDNO:32),GG和(R,)n直接相連，GG和(R^通過3'-3'鍵(linkage)相連或GG和(R,)n通過間隔子相連。在某些實施方式中，所述間隔子是非核苷酸間隔子，如D間隔子或連接子。所述組合物還可包含無菌載體。所述ORN可為單鏈或雙鏈或部分雙鏈。在某些實施方式中，所述ORN不是siRNA或反義寡核苷酸。所述ORN可包含至少一個硫代磷酸酯鍵。在某些實施方式中，所述ORN的所有核苷酸間鍵都是硫代磷酸酯鍵。在某些實施方式中，所述ORN包含至少一個類石粦酸二酯4建(phosphodiester-likelinkage)。4壬選地，所述類磷酸二酯鍵是磷酸二酯鍵。在本發明的一個方面中，提供了一種包含本發明的免疫刺激性ORN和佐劑的免疫刺激性組合物。在不同實施方式中，所述佐劑為產生儲器效果(depoteffect)的佐劑、免疫刺激性佐劑、或者產生儲器效果并刺激免疫系統的佐劑。在一個實施方式中，根據本發明這一方面的免疫刺激性組合物是免疫刺激性ORN和佐劑的共軛體。在一個實施方式中，根據本發明這一方面的免疫刺激性ORN與佐劑共價連接。在其它實施方式中，它們不共軛。本發明的組合物可任選地包含抗原。因此，在本發明的一個方面中提供了疫苗，其中所述疫苗包含本發明的免疫剌激性ORN和抗原。在本發明的一個方面中提供了包含本發明的免疫刺激性ORN和抗原的共軛體的疫苗。在一個實施方式中，根據本發明這一方面的共扼體包含與所述抗原共軛連接的免疫刺激性ORN。在其它實施方式中，它們不共軛。在不同實施方式中，所述抗原可以是抗原本身。所述抗原可以是任何抗原，包括癌抗原、微生物抗原或過敏原。在本發明的一個方面中提供了包含本發明的免疫刺激性ORN和親脂性部分的共軛體的免疫剌激性組合物。在一個實施方式中，所述免疫刺激性ORN與所述親脂性部分(lipophilicmoiety)共價連接。在一個實施方式中，所述親脂性部分選自膽甾醇基、棕櫚酰基和脂肪酰基。在一個實施方式中，所述親脂性部分是膽固醇的衍生物，例如，膽甾醇基。在一個實施方式中，所述免疫刺激性ORN包含至少一個脫氧核糖核苷酸。所述至少一個脫氧核糖核苷酸通常能夠出現在所述免疫刺激性RNA模體外的任何地方。在不同實施方式中，所述至少一個脫氧核糖核苷酸為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個連續的脫氧核4唐核苷酸。本發明也設想了包含非連續脫氧核糖核苷酸的免疫刺激性ORN。在不同實施方式中，所述至少一個脫氧核糖核苷酸為所述免疫刺激性ORN的5'端、3'端、或者既為5'端也為3'端。所述至少一個脫氧核糖核苷酸還對應于嵌合DNA:RNA分子的DNA部分。在一個實施方式分包含CpG核酸，即TLR9激動劑。在一個實施方式中，所述嵌合DNA:RNA分子的DNA部分和RNA部分通過核苷酸間磷酸鍵共價連接。在另一實施方式中，所述嵌合DNA:RNA分子的DNA部分和RNA部分通過連接子如非核苷酸連接子而共價連接。在一方面中，本發明提供了包含共價閉合且部分單鏈的啞鈴形核酸分子的免疫刺激性組合物，其中所述分子的至少一個單鏈部分包含本發明的免疫刺激性RNA模體。在一方面中，本發明提供了一種包括本發明上述任何方面所述的組合物以及輸送載劑和任選的可藥用載體的藥物組合物，所述輸送載劑的例子是陽離子脂質、脂質體、螺旋體、病毒顆粒、刺激免疫的配合物(immune-stimulatingcomplex,ISCOM)、《鼓顆4立、樣O求體、納米J求體、單層嚢泡(LUV)、多層嚢泡、水包油乳液、油包水乳液、乳化體(emulsome)、多陽離子肽。在本發明這一方面的一個實施方式中，所述藥物組合物包含抗原。輸送載劑的更多例子在下文中說明。所述ORN可以在霧化器或吸入器中配制，如定量吸入器或粉末吸入器。在某些實施方式中，所述ORN還包含其它組分，如化療劑、抗病毒劑或可藥用載體。所述可藥用載體可以配制用于注射或經粘膜施用。另外，根據本發明的這些和其它方面，在不同實施方式中，所述免疫刺激性ORN能夠任選地包含至少一個5'-5'核苷酸間鍵、至少一個3'-3'核香酸間鍵、至少一個包含連接子部分的5'-5'核苷酸間鍵、至少一個包含連接子部分的3'-3'核苷酸間鍵、或者上述核苷酸間鍵的任何組合。在一個實施方式中，連接子部分是非核苷酸連接子部分。另外，根據本發明的這些和其它方面，在不同實施方式中，所述免疫刺激性ORN可以任選地包含至少一個2'-2'核苷酸間#:、至少一個2'-3'核苷酸間鍵、至少一個2'-5'核苷酸間鍵、或上述核苷酸間鍵的任何組合。在優選實施方式中，所述至少一個2'-2'核苷酸間鍵、至少一個2'-3'核苷酸間鍵或至少一個2'-5'核苷酸間鍵出現在所述免疫刺激性RNA4莫體外部。另外，根據本發明的這些和其它方面，在一個實施方式中，所述免疫刺激性ORN可以具有倍增子單元。因此，在某些實施方式中，本發明的免疫刺激性ORN可具有分枝結構。分枝組合物可包含3'-5'、5'-5'、3'-3'、2'-2'、2'-3'或2'-5'核苷酸間鍵的任何組合。在一個實施方式中，所述免疫刺激性ORN包含至少兩個倍增子單元，從而產生所謂的樹枝狀高分子(dendrimer)。另外，在某些實施方式中，本發明的免疫刺激性ORN可包含兩個和更多個免疫刺激性RNA模體，它們例如以沿線性ORN前后排列、在分枝組合物的不同臂上排列、或者既沿線性ORN前后排列又在分枝組合物的不同臂上的排列。包括樹枝狀高分子在內的分枝結構能夠任選地包含至少一個免疫刺激性CpG核酸，例如，作為分枝結構的單獨的臂。另外，根據本發明的這些和其它方面，在一個實施方式中，所述免疫刺激性ORN包含至少一個2'-0-烷基修飾的G、2'-氟-阿拉伯酸修飾的G或LNA修飾的G。另外，根據本發明的這些和其它方面，在一個實施方式中，所述免疫刺激性ORN不包含CGDNA或RNA二核苷酸。在另一方面中本發明提供了調節受試者的免疫應答的方法。根據本發明這一方面的方法包括對受試者施用有效量的本發明的組合物的步驟。在某些實施方式中，所述ORN可^^輸送給所述受試者以治療所述受試者的自體免疫性疾病或氣道重塑。可對受試者施用所述ORN,同時施用或不施用抗原。任選地，所述ORN通過諸如口服、經鼻、舌下、靜脈內、皮下、經粘膜、經呼吸道、直接注射和經真皮的途徑來輸送。所述ORN可以以有效誘導細胞因子表達(如IFNa)的量輸送給所述受試者。在一方面，本發明提供了一種對受試者接種疫苗的方法。根據本發明這一方面的方法包括對受試者施用抗原和本發明的免疫刺激性ORN的步驟。在一方面，本發明提供了一種治療患有傳染病或具有患傳染病風險的受試者的方法。4艮據本發明這一方面的方法包括對所述受試者施用有效量的本發明的組合物的步驟。在一個實施方式中，所述方法包括對所述受試者施用有效量的本發明的免疫刺激性ORN的步驟。在一個實施方式中，所述受試者患有病毒感染。所述病毒感染可以是，例如，乙型肝炎或丙型肝炎。還可對所述受試者施用抗病毒劑。任選地，所述抗病毒劑與所述ORN相連。在一方面，本發明提供了一種治療患有癌癥或具有患癌癥風險的受試者的方法。根據本發明這一方面的所述方法包括對所述受試者施用有效量的本發明的組合物的步驟。在一個實施方式中，所述方法包括對所述受試者施用有效量的本發明的免疫刺激性ORN的步驟。在一個實施方式中，還對所述受試者施用化療或放療。在一方面，本發明提供了一種治療患有過敏性疾病或具有患過敏性疾病風險的受試者的方法。根據本發明這一方面的所述方法包括對所迷受試者施用有效量的本發明的組合物的步驟。在一個實施方式中，所述方法包括對所述受試者施用有效量的本發明的免疫刺激性ORN的步驟。在一個實施方式中，所述受試者患有過敏性鼻炎。在一方面，本發明提供了一種治療患有譯喘或具患嗜喘風險的受試者的方法。根據本發明這一方面的所述方法包括對所述受試者施用有效量的本發明的組合物的步驟。在一個實施方式中，所述方法包括對所述受試者施用有效量的本發明的免疫刺激性ORN的步驟。在一個實施方式中，所述哞喘是因病毒感染而加劇的哮喘。所述ORN可以與抗原一起或者不與抗原一起施用。在另一方面，本發明提供了一種治療患有氣道重塑的受試者的方法。4艮據本發明這一方面的方法包括所述方法包括對所述受試者施用有效量的本發明的免疫刺激性ORN的步驟。在一方面，本發明提供了一種增加抗體依賴性細胞毒性(ADCC)的方法。根據本發明這一方面的方法包括對需要增加ADCC的受試者施用有效量的本發明的免疫刺激性ORN和抗體以增加ADCC。在一個實施方式中，所述抗體是癌抗原或由癌細胞表達的其它抗原的特異性抗體。在一個實施方式中，所述抗體是IgG抗體。本發明在一方面提供了增強表位(epitope)擴展的方法。根據本發明這一方面的方法包括將免疫系統的細胞與抗原接觸并隨后將所述細胞與至少兩劑本發明的免疫刺激性ORN接觸的連續步驟。在一個實施方式中，所述方法在體內進行。在一個實施方式中，所述方法包括對受試者施用包含抗原和佐劑的疫苗并隨后對該受試者施用至少兩劑有效誘導多重表位特異性免疫應答的量的本發明的免疫刺激性ORN的步驟。在一個實施方式中，所述方法涉及應用下述治療方案該方案使得受試者的免疫系統抗原暴露，接著施用至少兩劑有效誘導多重表位特異性免疫應答的量的本發明的免疫刺激性ORN。在不同實施方式中，所述治療方案是手術、放療、化療、其它癌癥藥物、疫苗或癌癥疫苗。在一個實施方式中，所述至少兩劑免疫刺激性ORN的施用彼此相隔至少一天到一周。在一個實施方式中，所述至少兩劑免疫刺激性ORN的施用彼此相隔至少一周到一個月。在一個實施方式中，所述至少兩劑免疫刺激性ORN的施用彼此相隔至少一個月到六個月。在一方面，本發明是一種通過將表達TLR7的細胞與有效刺激IFN-a產生的量的本發明的RNA寡核香酸(ORN)相接觸來刺激IFN-a產生的方法，且其中應答所述ORN的IFN-y或IL-12的產生與背景相比沒有被顯著誘導。在某些實施方式中，所述表達TLR7的細胞是位于體外或體內的。在一個實施方式中，所述ORN是與多-G模體連接的免疫刺激性ORN模體，其中所述多-G模體對所述免疫刺激性ORN模體來說是3',且所述多-G模體包含至少4個G。在其它實施方式中所述ORN是GG(R，)n(U)4-2o(R2)mGGGG，其中R,和R2表示核糖核苷、脫氧核糖核苷、間隔子或非核苷酸連接子，其中n=0-20,其中m=0-20,U表示尿苷或其衍生物，G表示鳥苷或其衍生物。本發明的每個限制都可包括本發明的不同實施方式。因此，可以發明的每個方面中。本發明在其應用上不限于構建細節和在后續說明中陳述或附圖中說明的成分的安排。本發明可以以其它實施方式實施且能以不同方式來實踐或完成。另外，本文所用措辭和名詞術語旨在描述說明而不應視為限制。"包含"、"包括"或"具有"、"含有"、"涉及"和它們在本文中的變化意在包括列舉于其后的項目和它們的等價物以及額外項目。附圖僅為說明性的，而非實現本文公開的發明所必需的。圖1是顯示在將細胞與寡核糖核苷酸(ORN)相接觸之后人PBMC的細胞因子生成的兩幅圖表。將ORN(起始濃度2pM+50jig/mLDOTAP)與人PBMC—起溫育，在24小時之后用ELISA對上清液的細胞因子濃度進行檢測。所示為TLR7/8免疫刺激性ORN(SEQIDNO:l和2)和3個測試序列(SEQIDNO:4、5和8，見表1)。y軸是單位為pg/mL的IFN-a(圖1A)或IL-Up40(圖1B)的濃度，而x軸是單位為(aM的ORN濃度的對數。圖2是顯示在將細胞與寡核糖核苷酸(ORN)相接觸之后人PBMC的細胞因子生成的兩幅圖表。將ORN(起始濃度2|aM+50嗎/mLDOTAP)與人PBMC—起溫育，在24小時之后用ELISA對上清液的細胞因子濃度進行檢測。所示為TLR7/8免疫刺激性ORN(SEQIDNO:l和2)和3個測試序列(SEQIDNO:3、6和7,見表1)。y軸是以pg/mL為單位的IFN-a(圖2A)或IL-12p40(圖2B)的濃度，而x軸是以|iM為單位的ORN濃度的對數。圖3是顯示將細胞與寡核糖核苷酸(ORN)相接觸之后人PBMC的細胞因子生成的兩幅圖表。將ORN(起始濃度2|uM+50昭/mLDOTAP)與人PBMC—起溫育，在24小時之后用ELISA對上清液的細胞因子濃度進行檢測。所示為TLR7/8免疫刺激性ORN(SEQIDNO:l)和4個測試序列(SEQIDNO:9-12)。y軸是以pg/mL為單位的IFN-a(圖3A)或IFN-y(圖3B)的濃度，而x軸是以為單位的ORN濃度。圖4是顯示將細胞與寡核糖核香酸(ORN)相接觸之后人PBMC的IFN-a生成的圖表。將ORN(起始濃度2+50嗎/mLDOTAP)與人PBMC—起溫育，在24小時之后用ELISA對上清液的細胞因子濃度進行檢測。所示為SEQIDNO:10和帶有經修飾的G(7-脫氮-rG)的等效序列，兩者都帶或不帶DOTAP(DO)。y軸是以pg/mL為單位的IFN-a濃度，而x軸是以為單位的ORN濃度。圖5是顯示在將細胞與帶有各種3'修飾的寡核糖核苷酸(ORN)接觸之后人PBMC的IFN-a生成的圖表。將ORN(起始濃度2+50嗎/mLDOTAP)與人PBMC—起溫育，在24小時之后用ELISA對上清液的細胞因子濃度進行抬二測。所示為SEQIDNO:12和10個測試序列。y軸是以pg/mL為單位的IFN-a濃度，而x軸是以(iM為單位的ORN濃度。圖6是顯示在將細胞與寡核糖核苷酸(ORN)相接觸之后人PBMC的細胞因子生成的兩幅圖表。將ORN(起始濃度2(iM+50嗎/mLDOTAP)與人PBMC—起溫育，在24小時之后用ELISA對上清液的細胞因子濃度進行檢測。所示為SEQIDNO:21和5個測試序列，以及TLR7/8免疫刺激性ORNSEQIDNO:1。圖7是顯示在將細胞與寡核糖核苷酸(ORN)相接觸之后人PBMC的細胞因子生成的三幅圖表，證明了具有多rG的ORN刺激了缺乏TLR8的pDC中TLR7依賴性IFN-a的生成。用SEQIDNO:14(4^M)、免疫刺激性CpGODNSEQIDNO:28(0.511M)或SEQIDNO:12(0.5piM)在DOTAP(20嗎/mL)存在下對人PBMC(n=2)(圖7A)、單核細胞(圖7B)或pDC(圖7C)刺激24h,并測量IFN-a。y軸是所測試的ORN、ODN或培養基，而x軸是以pg/mL為單位的IFN-a濃度。圖8是顯示細胞因子生成在小鼠樹突狀細胞中的刺激的四幅圖。收集小鼠CDll+脾細胞，并用ORN處理20h。用ELISA分析上清液的IFN-a(圖8A)、IL-6(圖8B)、IL-12p40(圖8C)和IP-10(圖8D)濃度。用下述物質來處理細胞已知的帶DOTAP(DO)的TLR7/8刺激性ORN(SEQIDNO:48)、刺激TLR7/8的小分子R-848、膽固醇標記的和3'G延伸修飾的SEQIDNO:12的ORN(分別為SEQIDNO:ll和12，兩者都帶或不帶DOTAP)、以及帶DOTAP的SEQIDNO:12。y軸是以pg/mL為單位的細胞因子濃度，而x軸是以nM為單位的治療劑濃度。圖9是顯示體內細胞因子生成的刺激的四幅圖。對svl29小鼠靜脈注射未修飾的ORN(SEQIDNO:12)、膽固醇修飾的相同序列的ORN(SEQIDNO:ll)、相同序列和3'多-G延伸的ORN(SEQIDNO:21)或R-848。將所有ORN與DOTAP以2:1的重量比配制。對小鼠采血，并用ELISA分析血清的IFN-a(圖9A)、IL-12p40(圖9B)、IP-10(圖9C)和TNF-a(圖QD)濃度。y軸是以pg/mL為單位的細胞因子濃度，而x軸是以nM為單位的治療劑濃度。圖10是顯示體內細胞因子生成的刺激的兩幅圖。對svl29小鼠靜脈注射。在注射后3h對血清進行檢測以確定在用ORN刺激后小鼠中的細胞因子生成。圖10A顯示了30ngSEQIDNO:21+DOTAP、僅30嗎SEQIDNO:21、或者僅DOTAP或水的刺激。x軸是所給劑量，而y軸是以pg/mL為單位的IP-10濃度。圖10B顯示了在用未修飾ORN(SEQIDNO:12)、膽固醇修飾的相同序列的ORN(SEQIDNO:11)或具有相同序列和3'多-G延伸的ORN(SEQIDNO:21)注射后的IP-10濃度。x軸是以昭為單位的治療劑量，而y軸是以pg/mL為單位的IP-10濃度。圖11是顯示在將細胞與具有各種3'修飾的寡核糖核苷酸(ORN)相接觸之后人PBMC的IFN-a生成的圖。將ORN(起始濃度2+50嗎/mLDOTAP)與人PBMC—起溫育，在24小時用ELISA對上清液的細胞因子濃度進行;險測。所示為TLR7/8刺激性ORNSEQIDNO:48(帶或不帶DOTAP)和6個具有修飾的3'端的測試序列(無DOTAP)。y軸是以pg/mL為單位的IFN-a濃度，而x軸是以logpM為單位的ORN濃度。具體實施例方式已描述了顯示以TLR7和/或TLR8依賴性方式刺激人免疫系統的免疫刺激性寡核糖核苷酸(ORN)。例如，帶有缺乏多-G端的富GU和富CU模體的ORN顯示作用于TLR7和TLR8。帶有缺乏多-G端的富AU模體的ORN顯示僅作用于TLR8，因為其刺激與TLR9激活有關的細胞因子如TNF-a、IL-12和IFN-丫，而不刺激與TLR7激活有關的IFN-a。例如，單核細胞的激活很可能是直接的由TLR8介導的影響，因為單核細胞顯示表達TLR8而非TLR7，并且在ssRNA刺激下分泌TNF-a，然而產生IFFN-a的pDC表達TLR7而非TLR8。近來本發明的ORN。這些ORN中的一些不誘導人PBMC的IFN-a生成，而是誘導顯著量的TNP-a、IL-12和IFN-y,這表明主要是TLR8刺激而無顯著TLR7刺激。這些ORN至少在美國專利申請第11/603,978號中描述。本發明涉及下述意料不到的發現具有特定模體的ORN能誘導被稱作TLR7介導的由RNA介導的pDC免疫應答(如IFN-a生成)，而不會誘導實質量(substantialamount)的TLR8介導(即，由表達TLR8的細胞產生的細胞因子(如來自單核細胞的TNF-a)的生成)的免疫激活。如本文所用的，"實質量"應指，當與由ORN(如上文所述的帶有缺乏多-G端的富GU和富CU模體的ORN或者顯示刺激TLR8的其它ORN誘導)相比，所誘導的水平最小化。因此，本發明的ORN誘導了較少的對于RNATLR8或7/8配體(如促炎細胞因子TNF-a、IL-6)來說典型的細胞因子。本文描述的ORN類包括直接或間接地與3'多-G模體和任選的5'多-G模體側面相接的免疫刺激性ORN模體，并且與作為類TLR7免疫應答的幾乎專門性激活的表征的免疫特征(immuneprofile)相關。例如，如圖1所示，本發明的ORNSEQIDNO:4、SEQIDNO:8和SEQIDNO:5當與DOTAP—起配制時誘導了非常大量的IFN-a，同時對其它應答如IFN-y或IL-12無明顯誘導。相反，已知既能刺激與TLR7相關的細胞因子又能刺激與TLR8相關的細胞因子的正對照ORN，SEQIDNO:l和SEQIDNO:2，誘導了大量IFN-a和大量IL-12p40。非常令人驚奇的是，根據本發明還發現，當向ORN中引入一個或多個多-G模體時，免疫刺激性ORN纟莫體如介導TLR7/8和TLR8應答的免疫刺激性ORN模體產生TLR7免疫特征。根據本發明某些方面的免疫刺激性RNA模體是與多-G模體相連的免疫刺激性ORN模體，其中所述多-G模體對所述免疫刺激性ORN模體來說時3'，且所述多-G模體包含至少4個G。在某些而非所有實施方式中，所述ORN特別地包括TLR7/8和/或TLR8模體。TLR7/8模體可包含例如核糖核苷酸序列如5'-C/U-U隱G/U畫U-3'、5'-R-U-R-G隱Y陽3'、5'-G-U-U-G-B-3'、5'-G畫U-G-U-G/U誦3'或5'-G/C-U-A/C-G-G-C-A-C畫3'。C/U是胞嘧啶(C)或尿嘧啶(U),G/U是鳥嘌呤(G)或U，R是嘌呤，Y是嘧啶，B是U、G或C，G/C是G或C，且A/C是腺嘌呤(A)或C。所述5'-C/U-U-G/U-U-3'可以是CUGU、CUUU、UUGU或UUUU。在不同實施方式中，5'-R-U-R-G-Y-3'為GUAGU、GUAGC、GUGGU、GUGGC、AUAGU、AUAGC、AUGGU或AUGGC。在一個實施方式中，所述石威基序列為GUAGUGU。在不同實施方式中，5'-G-U-U-G-B-3'為GUUGU、GUUGG或GUUGC。在不同實施方式中，5'-G-U-G-U-G/U-3'為GUGUG或GUGUU。在一個實施方式中，所述堿基序列為GUGUUUAC。在不同其它實施方式中5'-G/C-U-A/C-G-G-C-A-C-3'為GUAGGCAC、GUCGGCAC、CUAGGCAC或CUCGGCAC。TLR8模體是，例如，N-U-R廣R2，其中N為核糖核苷酸且N不包括U,U為尿嘧啶或其衍生物，且其中R為核糖核苷酸，其中R,和R2中至少一個是l^苷(A)或胞嘧啶或它們的^f汙生物。除非N-U-R廣R2包括至少2個A,否則R不是U。在某些實施方式中，N表示腺苷或胞香(C)或它們的衍生物。任選地，所述ORN包含多于一個N-U-R廣R2模體。在某些實施方式中，所述ORN特別地不含TLR7/8和/或TLR8模體。所述ORN可具有下述結構GG(R!)n(U)4-2。(R2)mGGGG(SEQIDNO:29)。在其它方面，所述RNA模體是GG(R0n(U)5.2。(R2)mGGGG(SEQIDNO:30)。在其它方面，所述RNA模體是GG(R^(U)4(R2)mGGGG(SEQIDNO:31)，其中當(R丄為GG時，(R2)m不是G或m不為0。多U指至少4個U的片段。多G指至少2個G的片段。R,和R2是核糖核苷、脫氧核糖核苷、間隔子或非核香酸連接子。在某些實施方式中，(R,)n為GG。在其它實施方式中，(R2)m為GGG。U是尿嘧啶或其衍生物。(11)4-2()或(11)5.2()可以是，例如，UUTJUU、UUUUUUU或UUUUUUUUUU(SEQIDNO:32)。G是烏。票呤或其衍生物。n=0-20。m=0-20。在某些實施方式中，所述RNA才莫體為SEQIDNO:4-6和8-12中^壬一個的ORN。在某些實施方式中，所述ORN不是5'GGGGUUUUGGGGG3'(SEQIDNO:33)，5'GGGGUUUUGGGG3'(SEQIDNO:34),GUUUUUG(SEQIDNO35)，GGGGGGGUUGUGUGGGGG(SEQIDNO:36),CCCCUUUUGGGGG(SEQIDNO:37)，GUUUGUGUGGGG(SEQIDNO:38),GUUGUGUGGGGG(SEQIDNO:39),UUUUUUGGGGG(SEQIDNO:40)，UUUUUGGGGG(SEQIDNO:41),UUUUGGGGG(SEQIDNO:19),或UUUUGGGG(SEQIDNO:15)。在其它實施方式中，所述ORN不包含經修飾的磷酸酯鍵(phosphatelinkage),所述經修飾的磷酸酯鍵選自下式(i)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>式I其中R1是氫(H)、COOR、OH、C1畫C18烷基、C6H5或(CH2)m誦NH-R2，其中R是H或曱基、丁基、曱氧基乙基、特戊酰氧基曱基、特戊酰氧基芐基或S-特戊酰疏基乙基；R2是H、C1-C18烷基或C2-C18酰基；且m為1-17;X是氧(O)或硫(S);且每個Nu和Nu'獨立地是核苷或核苦類似物；條件是如果R1是H,則X是S;(ii)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>式n其中X是O或S;Xi是OH、SH、BH3、OR3或NHR3，其中R3是C1-C18烷基；每個乂2和乂3獨立地是0、S、CH2或CF2;且每個Nu和Nu'獨立地是核苷或核苷類似物；條件是(a)X、x2和x3中至少之一不是0或Xi不是OH,(b)如果X'是SH,則X、X2和X3中至少之一不是0，(c)如果X和xZ是0且如果Xi是OH，則xS不是S且Nu是3TSfu且Nu'是5TSfu'，且(d)如果乂1是81^3,則X、X和XS中至少之一是S;和(iii)(i)和(ii)的任意組合或如式IIIA或式IIIB提供的至少一個核苷酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>式niA式niB其中R4是.H或OR,其中R是H或C1-C18烷基；B是核堿基，修飾的核堿基，或H;X和XS各自獨立的是O或S;且X4是0H、SH、曱基或NHR5，其中R5是C1-C18烷基；且每條虛線獨立地代表與相鄰單元、氫或有機自由基相連的任選的鍵；條件是至少X和乂5之一不是O或X4不是OH。ORN可以是單鏈或雙鏈的。根據本發明的方法，經修飾的ORN并未設計為包含與人細胞中編碼序列互補的序列，因此不被視為反義ORN或沉默RNA(siRNA)。"非互補，，的ORN是不包含能夠與目標細胞中一個特定編碼域強雜交的序列的ORN。因此，本文所用的非互補ORN的施用不會造成基因沉默，尤其是因為本發明所述的ORN與用作沉默RNA的雙鏈分子相比是單鏈的。在某些實施方式中，本發明的ORN長度為10-30個核苷酸。在某些實施方式中，本發明的ORN長度為10-50個核苷酸。在某些實施方式中，本發明的ORN長度為10-100個核苷酸。在某些實施方式中，ORN具有可被穩定化的骨架。在一個實施方式中，所述骨架是包含至少一個硫代磷酸酯鍵的糖磷酸酯骨架。在一個實施方式中，所述骨架完全為硫代磷酸酯。所述ORN可包含至少一個類磷酸二酯鍵。在某些情形中，所述類磷酸二酯鍵是磷酸二酯鍵。對于本發明的ORN和具有TLR7/8模體(即，含GU的重復(repetition))或TLR8模體(即含AU的重復)的ORN，觀察到IFN-a的產生與其它促炎細胞因子如IFN-y和IL-12的產生之間的明顯區別。本發明的ORN具有多G-多U-多G模體，例如SEQIDNO:4-6和8-12，其揭示了在PBMC和pDC剌激下的IFN-a細胞因子生成，而非IFN-y和IL-12。因此，本發明的ORN具有誘導免疫應答的能力，所述免疫應答誘導相對于背景的顯著量的IFN-a或與IFN-a相關的分子。相對于背景的顯著量的IFN-a或與IFN-a相關的分子優選為IFN-a或與IFN-a相關的分子的水平相對于背景變化超過20%。在某些實施方式中，其為超過15%、10%、9%、8%、7%、60/。、5%、4%、3%、2%或1%。在其它實施方式中，由本發明的ORN誘導的IFN-a量為超過或等于20%的由TLR7/8ORN或TLR8ORN誘導的IFN-a。本發明的ORN誘導的IFN-a的量任選地在體外試驗中可超過300pg/mL或具有大于1.5|iM的EC50。本文所用的與IFN-a相關的分子是與IFN-a表達有關的細胞因子或因子。這些分子包括但不限于MIPl-p、IP-10和MIPl-a。本發明大體上涉及包含一個或多個免疫刺激性RNA模體的免疫刺激性寡核糖核苷酸、含一個或多個本發明的免疫刺激性ORN的免疫刺激性組合物、以及使用本發明的免疫刺激性ORN和免疫刺激性組合物的方法。如本文所用，術語"RNA"應指由3'-5'磷酸二酯#;共價連接在一起的兩個或更多個核糖核苷酸(即，各自包含與磷酸酯基團并與嘌呤或嘧啶核;威基(例如，鳥噪呤、腺嘌呤、胞嘧。定或尿嘧啶)相連的核糖的分子)。在不同實施方式中，包含所述免疫刺激性RNA模體的免疫刺激性ORN可包含單一模體或一個以上的免疫刺激性RNA模體。據信在是一個優勢，例如，如果所述模體被分隔以便使所述免疫刺激性ORN可以4吏兩個或更多個TLR參與。例如，所述免疫刺激性ORN可使兩個或更多個TLR7受體參與從而放大或修飾了所造成的免疫刺激效果。當在所述免疫剌激性ORN中有多于一個免疫刺激性RNA模體時，所述模體通常可沿所述免疫剌激性ORN而出現在任何位置。例如，當有兩個模體時，它們可以各自出現在所述免疫刺激性ORN的一端。另一種可選方式，一個模體可以出現在一端，而另一模體可以在其兩端與所述免疫刺激性ORN的至少一個額外核香酸側面相連。在另一實施方式中，每個模體都可在其兩端與所述免疫刺激性ORN的至少一個額外核苦酸側面相連。免疫刺激性ORN包括但不限于下列序列，所示從左到右以從5'到3'閱讀rG*rG*rG*rGrU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rUrG*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:4)、rG*rG*rG*rGrU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rUrG*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:5)、rG*rG*rG*rGrU*rU*rA*rU*rU*rA*rU*rU*rA*rU*rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:6)、rG*rG*rG*rG-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:8)、rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*dG*dG*dG*dG*dG(SEQIDNO:10)、rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:21)、rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*G*G*G*G*G(SEQIDNO:42)。其它免疫刺激性ORN序列及對照序列可在下表1中找到。如上所述,RNA是通過3'-5'磷酸二酯鍵相連的核糖核苷酸的高分子。在某些實施方式中，本發明的免疫刺激性ORN是RNA。然而，本發明的免疫刺激性ORN不限于RNA,如下文所說明。在一個實施方式中，本發明的免疫刺激性ORN可包含一個或多個經修飾的核堿基，即，A、C、G和U的衍生物。這些經修飾的核堿基的具體實施方式包括但不限于5-取代胞嘧啶(例如，5-曱基胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-氯胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、5-碘胞嘧啶、5-羥基胞嘧咬、5-羥曱基胞嗜咬、5-二氟曱基胞嘧啶和非取代或取代的5-炔基胞嘧啶)、6-取代胞嘧啶、N4取代胞嘧啶(例如，N4-乙基胞嘧啶)、5-氮雜胞嘧啶、2-巰基胞嘧咬、異胞嘧啶、偽胞嘧啶、帶稠環體系的胞嘧啶類似物(例如，N,N，-亞丙基胞嘧啶或吩惡。秦)、以及尿嘧啶及其衍生物(例如，5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-溴乙烯基尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-羥基尿嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶)、胸腺嘧啶書f生物(例如，2-硫代胸腺嘧啶、4-硫代胸腺嘧咬、6-取代胸腺嘧啶)、鳥苷衍生物(7-脫氮鳥。票呤、7-脫氮-7-取代鳥。票呤(諸如7-脫氮-7-(C2-C6)炔基鳥。票呤)、7-脫氮-8-取代鳥噪呤、次黃嘌呤、N2-取代鳥嘌呤(例如N2-曱基鳥。票呤)、8-取代鳥嘌呤(例如8-羥基鳥噪呤和8-溴鳥噤呤)和6-硫代鳥嘌呤)或腺芬衍生物(5-氨基-3-曱基-3H,6H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2,7-二酮、2,6-二氨基。票呤、2-氨基噤呤、噪呤、巧l哚、腺噪呤、取代腺噤呤(例如，N6-曱基腺噪呤、8-氧代腺噤呤))。所述堿基還可被通用堿基(例如，4-曱基吲哚、5-硝基巧l咮、3-硝基p比咯、P-堿和K-堿)、芳香環體系(例如苯并咪唑或二氯苯并咪唑、l-曱基-lH-[l，2，4]三唑-3-羧酸酰胺)芳香環體系(例如氟苯或二氟苯)或氫原子(dSpacer)取代。優選的堿基修飾是尿嘧啶和7-脫氮鳥。票《曰付。經修飾的G核堿基的具體實施方式包括N、二曱基鳥噪呤、7-脫氮鳥噪呤、8-氮雜鳥噪呤、7-脫氮-7-取代鳥嘌呤、7-脫氮-7-(C2-C6)炔基鳥噤呤、7-脫氮-8-取代鳥噪呤、8-羥基鳥。票呤和6-硫代鳥嘌呤。在一個實施方式中，所述經修飾的G核堿基是8-羥基鳥嘌呤。這些經修飾的G核堿基和它們的相應核糖核苷可以從供應商處獲得。在某些實施方式中，至少一個P-核糖單元可以被P-D-脫氧核糖或經修飾的糖單元所替代，其中所述經修飾的糖單元是例如選自(3-D-核糖、a-D-核糖、卩-L-核糖(例如，在"Spiegelmers"中)、a-L-核糖、2，-氨基-2，-脫氧核糖、2，-氟-2，-脫氧核糖、2'-0-(Cl-C6)烷基核糖，優選的是2，-0-(Cl-C6)烷基核糖為2，-0-甲基核糖、2'-0-(C2-C6)烯基核糖、2，-[O(Cl-C6)烷基-0-(Cl-C6)烷基]-核糖、LNA和a-LNA(NielsenP等，(2002)C72em&^7匿y4五wra/ea"Jow"a/8:712-22)、P-D-呋喃木糖、a陽呋喃阿拉伯糖、2，-氟呋喃阿拉伯糖、以及碳環和/或開鏈的糖類似物(例如Vandendriessche等，(1993)7^ra/zec/raw49:7223中所述)和/或雙環糖類似物(例如TarkovM等，(1993)He/vOh7mJcto76:481中所述)。本發明的免疫刺激性ORN的個別核糖核苷酸和核糖核苦還可以通過非核苷酸連接子連接，特別是通過無堿基連接子(dSpacer)、三乙二醇(triethyleneglycol)單元或六乙二醇(hexaethyleneglycol)單元來連接。其它連接子為烷氨基連接子，如C3、C6和C12氨基連接子；還有烷基硫醇連接子，如C3或C6硫醇連接子。本發明的免疫刺激性ORN的個別核糖核苷酸和核糖核苷還可通過芳香性殘基來連接，所述芳香性殘基可進一步被烷基或取代烷基基團取代。RNA是由3'-5'磷酸二酯鍵連結的核糖核苷酸的高分子。本發明的免疫剌激性ORN的核苷酸也可由3'-5'磷酸二酯鍵連結。然而，本發明還包括具有異常核苷酸間鍵的免疫刺激性ORN,這些異常核苦酸間鍵具體包括5'-5'、3'漏3'、2'-2'、2'-3'和2'-5'核苷酸間鍵。在一個實施方式中，這種異常鍵不包含在免疫刺激性RNA模體中，即使一個或多個這種鍵可能出現在所述免疫刺激性ORN的其它地方。對于有自由端的免疫刺激性ORN，包含一個3'-3'核苷酸間鍵能產生具有兩個自由5'端的免疫刺激性ORN。相反，對于具有自由端的免疫刺激性ORN來說，包含一個5'-5'核苷酸間鍵能產生具有兩個自由3'端的免疫刺激性ORN。單元連接的免疫刺激性RNA模體。所述核苷酸間鍵可以是3'-5'、5'-5'、3'-3'、2'-2'、2'-3'或2'-5'鍵。因此，2'-5'命名是根據核糖的碳原子選擇的。所述異常核苷酸間鍵可以是磷酸二酯鍵，但它還可被修飾為硫代磷酸酯或本文所述的任何其它經修飾的鍵。下式顯示了經由核苷酸分枝單元而分枝的本發明的免疫刺激性ORN的一般結構。由此，NUl、Nii2和Nu3可通過3'-5'、5'-5'、3'-3'、2'-2'、2'-3'或2'-5'鍵而相連。免疫刺激性ORN的分枝還可涉及非核苷酸連接子和無堿基間隔子的使用。在一個實施方式中，Nim、Nii2和Nu3代表相同或不同的免疫刺激性RNA模體。在另一實施方式中，Nu,、Nii2和Nu3包括至少一個免疫刺激性RNA模體和至少一個免疫刺激性CpGDNA模體。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>所述免疫刺激性ORN可含有二倍子單元或三倍子單元(GlenResearch,Sterling,VA)，特別是那些帶3'-3'鍵的免疫刺激性ORN。在一個實施方式中，二倍子單元可基于1,3-二-[5-(4，4'-二甲氧基三苯曱氧基)戊酰胺基]丙基-2-[(2-氰乙基)-(N,N-二異丙基)]-亞磷酰胺。在一個實施方式中，三倍子單元可基于對三-2,2,2-[3-(4,4'-二曱氧基三苯曱氧基)丙氧基曱基]乙基-[(2-氰乙基)-(N,N-二異丙基)]-亞磷酰胺的包含。通過多個二倍子單元、三倍子單元或其它倍增子單元的免疫刺激性ORN的分枝(branching)產生了作為本發明另一個實施方式的樹枝狀高分子。分枝的免疫剌激性ORN可導致免疫刺激性RNA(如TLR3、TLR7和TLR8)的受體的交聯以及與所述免疫刺激性ORN的非分枝形式相比的明顯免疫效果。另外，分枝的免疫刺激性ORN或多體免疫刺激性ORN可以使RNA對降解穩定，并且能夠使弱RNA序列或部分有效的RNA序列發揮治療有用水平的免疫活性。所述免疫刺激性ORN還可含有由多肽修飾劑或寡核苷酸修飾劑(GlenResearch)產生的連接子單元。另外，所述免疫刺激性ORN可以含有一個或多個通過肽(酰胺)鏈與所述高分子相連的中性或非天然氨基酸殘基。本發明的組合物包括有或沒有二級結構或更高級結構的高分子。例如，在一個實施方式中，所述高分子包含核苷酸、核苷酸類似物、或者核苷酸與核苷酸類似物的組合的序列，所述序列能夠形成由至少兩個相鄰的氫鍵連接的堿基對所提供的二級結構。在一個實施方式中，所述由至少兩個相鄰的氫鍵連接的堿基對涉及兩組、每組至少3個連續的堿基。相關堿基的連續特性對形成所謂的夾鉗(clamp)在熱力學上是有利的。然而，連續堿基不是必需的，特別是當有高GC含量和/或擴展序列時。通常會有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16個堿基對。在一個實施方式中，由氫鍵連接的堿基對可以是經典的Watson-Crick堿基對，即G-C、A-U或A-T。在其它實施方式中，氫鍵連接的堿基對可以是非經典的堿基對，諸如G-U、G-G、G-A或U-U。在其它實施方式中，氫鍵連接的堿基對可以是Hoogsteen堿基對或其它;成基對。在一個實施方式中，所述二級結構是莖-環二級結構(stem-loop)。鍵連接的分子間堿基配對而產生。所述互補或至少部分互補的序列分別代表完美序列或中斷倒置重復序列(interruptedinvertedrepeatrs叫uence)。例如，具有由5'-X廣X2-X3…X3'-X2'-Xt'-3'提供的堿基序列的高分子可以包含完美序列或中斷倒置重復序列，并且有自體折疊并形成莖-環二級結構的潛力，其中Xi和X厶X2和X2'以及X3和X/可以各自形成由氫鍵連接的堿基對。可以理解的是，具有由5'-X,-X2-X3...X3'-X2'-X卩-3'提供的堿基序列的高分子還有通過由氫鍵連接的分子間堿基對來形成分子間復合物的潛力，其中Xi和X,'、X2和X2'以及乂3和X3'可以各自形成由氫鍵連接的堿基對。當有兩個或更多個倒置重復時，個別高分子還能相互作用，以便不僅形成二聚的分子間復合物，還能形成更高級的分子間復合物或結構。本領域內技術人員會認識到，可以選擇條件和/或序列以便相對于一種二級結構而言更有利于形成另一種二級結構。所述3'-5'、5'-5'、3'-3'、2'-2'、2'-3'和2'-5'核苷酸間鍵可以是直接或間接的。另夕卜，所述多U模體可以直接或間接地與所述多-G模體相連。另外，所述ORN結構式的任何核苷酸可以與彼此直接或間接地相連。例如GG和(R!)n可以直接地相連。該直接鍵可以是3'-3'鍵。另一種可選方式是，GG和(R,)n可以間接地相連，即，通過間隔子或非核苷酸連接子相連。"直接地連接，，在本文中指不具有插入的連接子部分的如本文所披露的磷酸酯鍵或經修飾的磷酸酯鍵。插入的連接子部分是與本文所披露的磷酸酯鍵或經修飾的磷酸酯鍵不同的有機部分，其可包括，例如,聚乙二醇、三乙二醇、六乙二醇、dSpacer(即，無i威基脫氧核苷酸)、二倍子單元或三倍子單元。間接鍵包括核苷酸和非核苷酸連接子和間隔子。在某些實施方式中，所述免疫刺激性ORN與另一實體共軛以提供共軛體。例如，所述免疫刺激性ORN可以與多肽、蛋白、小分子量配體、脂質部分或核酸共軛。如本文所用的，共軛體指通過包括疏水相互作用和共價耦合在內的物理化學方法來互相結合的任何兩個或更多個實體的組合。在另一實施方式中，所述免疫刺激性ORN可與被免疫刺激性受體識別的小分子量配體共軛。這種受體優選是TLR家族的成員，如TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8或TLR9。例子包括但不限于刺激TLR7或TLR8的R-848(雷西莫特)、R-837(壹咪莫特；ALDARA,3MPharmaceuticals)、7-脫氮鳥苦、7-硫代-8-氧代鳥苦和7-烯丙基-8-氧代鳥苷(Loxoribine)。D-吡喃葡萄糖衍生物，如3D-MPL(TLR4配體)，也可與所述免疫刺激性ORN共軛。Pam3-Cys是能夠與免疫刺激性ORN共軛的TLR2配體的例子。含CpG模體的寡脫氧核苷酸是TLR9配體，且它們也能夠與本發明的免疫剌激性ORN共軛。在一個實施方式中，至少一個對刺激TLR9信號傳導有效的包含CpG模體的寡脫氧核苷酸與本發明的免疫刺激性ORN共軛。不同TLR配體與同一分子的共軛可導致配體多元聚合，配體多元聚合導致免疫剌激增強或產生與單一此類配體所產生者不同的免疫刺激特征。在其它實施方式中，CpGODN在治療方法中非共軛地共混，或者共同施用。在一方面，本發明提供了一種本發明的免疫刺激性ORN與親脂性部分的共軛體。在某些實施方式中，所述免疫刺激性ORN與親脂性部分共價連接。所述親脂性部分通常出現在具有自由端的免疫刺激性ORN的一個或多個端點，盡管在某些實施方式中，所述親脂性部分可沿所述免疫刺激性ORN而出現在其它地方，因此不需要所述免疫刺激性ORN具有自由端。在一個實施方式中，所述免疫剌激性ORN有3'端，且所述親脂性部分與所述3'端共價相連。所述親脂性部分通常可以是膽甾醇基、經修飾的膽甾醇基、膽固醇衍生物、還原膽固醇、取代膽固醇、膽甾烷、C16烷基鏈、膽汁酸、膽酸、牛磺膽酸、脫氧膽酸鹽、油酰石膽酸、油酰膽烷酸、糖脂、磷脂、鞘脂、類異戊二烯如類固醇、維生素如維生素E、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、脂肪酸酯如三甘油酯、芘、紫菜堿、德州卟啉、金剛烷、吖啶、生物素、香豆素、熒光素、若丹明、德州紅、洋地黃毒苷、二曱氧基三苯曱基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、花菁染料(如Cy3或Cy5)、Hoechst33258染料、補骨脂素或異丁苯丙酸。在某些實施方式中，所述親脂性部分選自膽甾醇基、棕櫚酰基和脂肪酰基。在一個實施方式中，所述親脂性部分是膽甾醇基。據信在本發明的免疫刺激性ORN內包含一個或多個此類親脂性部分會為其賦予對被核酸酶降解的額外穩定性。當在一個本發明的免疫刺激性ORN內有兩個或更多個親脂性部分時，每個親脂性部分的選擇可與任何其它親脂性部分的選擇無關。在一個實施方式中，所述親脂性部分與所述免疫剌激性ORN的核苷酸的2'位連接。另外可選地或另外，親脂性基團可被連接到所述免疫刺激性ORN的核苷酸的雜環核堿基上。所述親脂性部分可通過任何適當的直接或間接鍵與所述免疫刺激性ORN共價相連。在一個實施方式中，所述鍵是直接鍵，其可以是酯或酰胺。在一個實施方式中，所述鍵是間接鍵，且包含間隔子基團，例如一個或多個無堿基核苷酸殘基、低聚乙二醇如三乙二醇(間隔子9)或六乙二醇(間隔子l8)、或烷基二醇如丁二醇。在一個實施方式中，本發明的免疫剌激性ORN與陽離子脂質相混合。陽離子脂質被認為能夠有助于將所述免疫刺激性ORN攜帶入內體腔(在所述內體腔內發現了TLR7)。在一個實施方式中，所述陽離子脂質是DOTAP(N-[l-(2,3-二油酰氧基)丙基]-N，N,N-三曱基(曱硫酸)銨)。DOTAP被認為能夠將高分子運載入細胞，并特異性地帶入所述內體腔，在所述內體腔中DOTAP能以pH依賴性方式釋放所述高分子。一旦進入所述內體腔，所述高分子可與特定細胞內TLR相互作用，引發由TLR介導的參與產生免疫應答的信號傳導途徑。可以使用具有相似性質的其它試劑來替代DOTAP或作為補充。其它脂質配方包括，例如，EFFECTENE(帶特殊DNA縮合增強因子的非脂質體脂質)和SUPERFECT(新型樹枝狀分子技術)、SMARTICLES(給當其穿過細胞膜時帶正電的可逆顆粒充電)和采用脂質雙層的穩定核酸脂質顆粒(SNALP)。市售脂質體來自GibcoBRL,例如，由陽離子脂質如N-[l-(2,3-二油酰氧基)-丙基]-N,N，N-三曱基氯化銨(DOTMA)和二曱基二(十八烷基)溴化銨(DDAB)形成的LIPOFECTIN和LIPOFECTACE。制備脂質體的方法在本領域內是眾所周知的，并且已在許多出版物中il明。在GregoriadisG(1985)7e"A歷otec/mo/3:235-241也對脂質體進行了綜述。在其它實施方式中，本發明的免疫刺激性高分子與微粒、環糊精、納米顆粒、類脂嚢泡、樹枝狀大分子、多陽離子肽、病毒顆粒和類病毒顆粒或ISCOMS⑧混合。在其它實施方式中，所述ORN不帶陽離子脂質載體。本發明的ORN的一個優點是它們不需要這類載體。在一個實施方式中，本發明的免疫刺激性ORN的形式為具有一級和二級結構的共價閉合的啞鈴形分子。如下所述，在一個實施方式中，此類環狀寡核糖核苷酸包含由插入的雙鏈片段來連接的兩個單鏈環。在一個實施方式中，至少一個單鏈環包含本發明的免疫刺激性分子，其中，例如，雙鏈片段至少部分是DNA(例如，同源二聚dsDNA或異源二聚DNA:RNA),且至少一個單鏈環包含本發明的免疫刺激性RNA模體。另一種可選方式，所述嵌合分子的雙鏈片段為RNA。在某些實施方式中，所述免疫刺激性ORN是孤立的。孤立分子是完全純凈的，且不含通常與其一同發現于自然界中的其它物質或在體內系統中在一定程度上實用和適用于其預期用途的程度的分子。具體而言，所述免疫刺激性ORN是足夠純凈的，且充分地不含細胞的其它生物組分，以致可用于例如生產藥物制品。由于孤立的本發明的免疫刺激性ORN可與可藥用載體共混于藥物制品中，所述免疫刺激性ORN可以夂(又占所述制品的小重量百分比。盡管如此，由于所述免疫刺激性ORN與在生命體中可能與其相關的物質完全分離，因此所述免疫刺激性ORN是完全純凈的。為用于本發明，本發明的免疫刺激性ORN可使用或改良本領域內熟知的許多方法來從頭合成。例如，P-氰乙基亞褲酰胺法(BeaucageSL等，(1981)refra/z^/ra"丄故22:1859);核苷H-膦酸酯法(GareggP等，(1986)似raW謂27:4051-4;FroehierBC等，(1986)池c/ies14:5399-407;GareggP等，(1986)7^ra/ze^w227:4055-8;GaffneyBL等，(1988)r"ra/z^ro"丄欲29:2619-22)。可以用市售的自動核酸合成儀來實施這些化學方法。在UhlmannE等，(1990)C7zemAev90:544-84和GoodchildJ(1990)5/ocow>gWeC/zem1:165中公開了對本發明有用的其它合成方法。寡核糖核苷酸的合成可以在溶液中進行，或者可在固相基材上進行。在溶液中，優選模塊偶聯反應(二聚體、三聚體、四聚體等)，而固相合成優選使用單體模塊以分步工藝進行。不同化學方法如磷酸三酯法、H-膦酸酯法和亞^岸酰胺法已有描述(EcksteinF(1991)Wgo"wc/eo/油s朋d^wof/ogwas，^戶rac"'ca/^fp/7roac/，IRLPress,Oxford)。盡管在磷酸三酯法中，反應活性的磷基團處于+V氧化態下，但根據所述亞磷酰胺和H-膦酸酯方法，在偶聯反應中使用了更具反應活性的+III磷衍生物。在后兩種方法中，磷在偶聯步驟之后被氧化，以生成穩定的P(V)衍生物。如果氧化劑為碘/水/堿，則在脫保護后得到磷酸二酯。相反，如果氧化劑是碌L化劑，如Beaucage試劑，則在脫保護后得到硫代磷酸酯。寡核糖核苷酸合成的有效方法是使用亞磷酰胺化學與固相合成的組合，所述亞磷酰胺化學最初由MatteucciandCaruthers.MatteucciMD等，(1981)J^wC7zem5bc103:3185說明用于寡脫氧核苦酸。寡核糖核苦酸的合成與寡脫氧核苷酸相似，區別在于寡核糖核苷酸中存在的2'-羥基基團必須用適當的羥基保護基團來保護。所述RNA單體一莫塊中的單體可由例如2，-0-叔丁基二甲基曱硅烷基(TBDMS)基團保護。然而，有報道稱，使用含2'-0-三異丙基曱硅烷氧基曱基(TOM)基團(TOM-Protecting-GroupTM)單體的RNA合成能產生更高的偶聯效率，因為所述TOM保護基展示了與所述TBDMS基團相比更低的空間位阻。所迷TBDMS保護基使用氟化物去除，而在室溫時對所述TOM基團使用曱胺的乙醇/水溶液實現了更快的脫保護。在寡(核糖)核苷酸的合成中，優選從3'端到5'端的增鏈，這可通過將有3'-磷(in)基團的核糖核苷酸單元或其活化衍生物與另一核苷酸單元的自由5'-羥基基團偶聯來實現。可使用自動DNA/RNA合成儀來方便地進行合成。從而，可使用所述合成儀供應商推薦的合成循環。對于核糖核苷亞磷酰胺單體，偶聯時間與脫氧核苷單體相比更長(例如，400s)。作為固體基材，可使用500-1000A受控多孔玻璃(CPG)基材或有機高分子基材如引物基材PS200(Amersham)。所述固體基材通常含有通過其3'端連接的第一核苷，如5'-0-二甲氧基三苯甲基-N-6-苯曱酰基腺苷。在用三氯乙酸切去5'-0-二甲氧基三苯甲基基團后，使用例如5'-0-二曱氧基三苯曱基-N-保護-2'-0-叔丁基二甲基甲硅烷基-核苷-3'-0-亞磷酰胺來實現增鏈。在連續重復循環后，通過在30。C用濃氨水/乙醇(3:1,體積:體積)處理24h來將完成的寡核糖核苷酸從基材上切下并脫保護。最后用三乙胺/HF將TBDMS阻斷基團切去。寡核糖核苷酸粗品可用離子交換高效液相色譜(HPLC)、離子對反相HPLC或聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)純化并用質譜儀表征。5'-共軛體的合成通過在固相合成中將待結合分子的亞磷酰胺與末端核苷酸的5'-羥基偶聯而直接進行。各種此類配體(如膽固醇、吖啶、生物素、補骨脂素(psoralene)、乙二醇或氨基烷基殘基)的亞磷酰胺衍生物都是商品化的。另一種可選方式，可在固相合成期間引入氨基烷基官能團，所述氨基烷基官能團允許通過活化的共軛分子(如活性酯、異疏氰酸酯或碘代乙酰胺)來進行合成后衍生化。3'端共軛體的合成通常通過使用相應的經修飾的固體基材(如例如市售的膽固醇衍生的固體基材)來實現。然而，共軛也能在核苷酸間鍵、核堿基或在核糖殘基處(如核糖的2'位處)完成。對于環寡核糖核普酸，所述寡核苦酸鏈的增長可使用標準亞磷酰胺化學方法在核苷酸PS固體基材(GlenResearch)上進行。然后使用磷酸三酯偶聯法(Alazzouzi等，(1997)A^c/eos/cfesA^c/eo"&s16:1513-14)在所述固體基材上完成環化反應。在用氫氧化銨最終脫保護后，基本進入溶液的唯一產物就是所需的環寡核苷酸。本發明的環寡核苷酸包含RNA的閉合環狀形式，并且可包含帶或不帶雙鏈RNA的單鏈RNA。例如，在一個實施方式中，所述環寡核苷酸包含雙鏈RNA,且呈現帶有由插入的雙鏈片段連接的兩個單鏈環的啞鈴構象。在美國專利第6,849,725號中說明了共價閉合的啞鈴形CpG寡脫氧核苷酸。在另一實施方式中，所述環寡核苷酸包含雙鏈RNA，并且呈現帶有由插入的雙鏈片段連接的三個或多個單鏈環的構象。在一個實施方式中，免疫刺激性RNA才莫體位于一個或多個單鏈片段中。本發明的免疫刺激性ORN可單獨使用，或者與其它試劑如佐劑組合使用。本文所用的佐劑是指提高應答于抗原(例如體液和/或細胞免疫應答)的免疫細胞激活的非抗原物質。佐劑用于提高疫苗(即，用于誘導對抗原的保護性免疫的含抗原的組合物)。佐劑可通過兩個一般機理起作用，且給定佐劑或佐劑配方可由一種或兩種機理發揮作用。第一機理是物理地影響抗原在發展抗原特異性免疫應答的細胞或位點的分布，其可以是改變所述抗原的生物分布(包括靶向特定區域或細胞類型)的輸送載劑，或產生儲器效果以便使抗原在體內緩慢釋放從而延長免疫細胞在抗原中暴露的輸送載劑。這類佐劑包括但不限于明礬(例如，氫氧化鋁、磷酸鋁)；基于乳液的制劑，包括由礦物油或非礦物油制成的油包水或水包油乳液。它們可以是水包油乳液，如MontanideISA720(Seppic，AirLiquide,Paris,France)、MF-59(由Span85和Tween80a穩定的角鯊烯在水中的乳液；ChironCorporation,Emeryville,Calif.)和PROVAX(穩定化表面活性劑禾口月交束開》成劑；IDECPharmaceuticalsCorporation,SanDiego,Calif.)。它們也可以是油包水乳液，如MontanideISA50(二縮甘露醇油酸酯和礦物油的油性組合物，Seppic)或MontanideISA206(二縮甘露醇油酸酯和礦物油的油性組合物，Seppic)。第二佐劑機理是作為免疫應答調節劑或免疫刺激劑。它們造成免疫細胞激活以更好地出現于、識別或應答抗原，由此增強了對于動力學、幅度、基因型或記憶的所述抗原特異性應答。免疫應答調節劑通常通過特定受體如Toll樣受體或幾種其它非TLR途徑(例如，RIG-I)之一而起作用，然而某些途徑仍是未知的。此類佐劑包括但不限于從皂皮樹(Q.sa;o""n'a)樹皮中提純的皂苷類，如QS21(用HPLC分離時第21個峰中洗出的糖脂；Antigenics，Inc.,Worcester,Mass.)、聚[二(羧基苯氧基)石粦腈(PCPP高分子；VirusResearchInstitute,USA)、Flt3配體和利什曼原蟲(Leishmania)增長因子(純化利什曼原蟲蛋白；CorixaCorporation,Seattle,Wash.)。許多佐劑通過TLR起作用。通過TLR4作用的佐劑包括脂多糖衍生物，如單磷酸脂A(MPL;RibiImmunoChemResearch,Inc.,Hamilton,Mont.)和胞壁酰二肽(t-MDP;Ribi)、OM174(脂A相關的氨基葡萄糖二糖；OMPharmaSA,Meyrin,Switzerland)。鞭毛蛋白是通過TLR5作用的佐劑。雙鏈RNA通過TLR3作用。通過TLR7和/或TLR8作用的佐劑包括單鏈RNA或寡核糖核苷酸(ORN)、以及識別和激活所述TLR的合成低分子量化合物包括咪唑并喹啉胺(例如，p奎咪莫特、雷西莫特；3M)。通過TLR9作用的佐劑包括病毒源或細菌源DNA，或合成寡脫氧核香酸(ODN)，諸如CpGODN。既有物理效果又有免疫刺激效果的佐劑是具有上文鑒定的兩種功能的化合物。此類化合物包括但不限于ISCOMS(含混合的鬼芬、脂質并形成帶有能夠容納抗原的孔的病毒尺寸的顆粒的免疫刺激復合物；CSL,Melbourne,Australia)、Pam3Cys、SB-AS2(作為含MPL和QS21的水包油乳液的SmithKlineBeecham佐劑體系弁2;SmithKlineBeechamBiologicals[SBB],Rixensart,Belgium),SB-AS4(含明石凡和MPL的SmithKlineBeecham佐劑體系#4;SmithKlineBeechamBiologicals[SBB],Rixensart，Belgium),形成膠束的非離子嵌段共聚物如CRL1005(這些共聚物含有與聚氧乙烯鏈側面連接的直鏈疏水性聚氧丙烯，Vaxcel，Inc.,Norcross,Ga.)和Syntex佐劑配方(SAF,含Tween80和非離子嵌段共聚物的水包油乳液；SyntexChemicals,Inc.,Boulder,Colo.)、MontanideIMS(例如，IMS1312,與可溶性免疫刺激劑混合的水性納米顆粒，Seppic)以及許多下文所述的輸送載劑。還提供了包含本發明的免疫刺激高分子加另一佐劑的組合物，其中所述另一佐劑為陽離子多糖如殼聚糖、或陽離子肽如魚精蛋白、聚酯、聚乳酸、聚羥基乙酸或一個或多個上述物質的共聚物。還提供了包含本發明的免疫刺激性ORN加另一佐劑的組合物，其中所述另一佐劑為細胞因子。在一個實施方式中，所述組合物是本發明的免疫刺激性ORN和所述細胞因子的共軛體。細胞因子是由許多類型的細胞所產生的介導炎癥反應和免疫反應的可溶性蛋白和糖蛋白。細胞因子介導免疫系統的細胞之間的通訊，其局部及系統性地發揮作用以補充細胞并調節其功能和增殖。細胞因子的種類包括天然免疫的介導劑和調節劑、獲得性免疫的介導劑和調節劑以及造血促進劑。細胞因子中包括白細胞介素(例如，IL-l、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-IO、IL-ll、IL-12、IL-13、IL-M、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18及白細胞介素19-32(IL-19-IL-32)等)、趨化因子(例如，IP-IO、RANTES、MIP陽la、MIP-ip、MIP-3a、MCP-l、MCP-2、MCP-3、MCP-4、嗜酸性細胞趨化因子(Eotaxin)、I-TAC和BCA-1等)及其它細胞因子(包括1型干擾素(例如，IFN-a和IFN-J3)、2型干擾素(例如，IFN-丫)、腫瘤壞死因子？t(TNF-a)、轉化生長因子卩(TGF-卩)及各種集落刺激因子(CSF)(包括GM-CSF、G-CSF和M-CSF))。的組合物。在一個實施方式中，所述組合物是本發明的免疫刺激性ORN和所述CpG核酸的共軛體，例如RNA:DNA共輒體。本文所用的免疫刺激性CpG核酸指包含CpG模體且刺激免疫系統細胞的激活或增殖的天然或合成DNA序列。在許多已發布專利、已公布專利申請和其它出版物中已經說明了免疫刺激性CpG核酸，包括美國專利第6,194,388號、第6,207,646號、第6,214,806號、第6,218,371號、第6,239,116號和第6,339,068號在一個實施方式中，所述免疫刺激性CpG核酸是長度為6-100個核苷酸的CpG寡脫氧核苷酸(CpGODN)。在一個實施方式中，所述免疫刺激性CpG核酸是長度為8-40個核芬酸的CpG寡脫氧核苷酸(CpGODN)。在某些實施方式中，所述ORN包括CG二核苷酸。在其它實施方式中，所述ORN不含CG二核苷酸。免疫刺激性CpG核酸包括不同類的CpG核酸。一類可有力地激活B細胞，但對誘導IFN-a和NK細胞激活相對較弱；這一類稱為B類。B類CpG核酸通常是完全穩定的，且在某些優選44基環境中包含未甲基化的CpG二核苷酸。參見例如美國專利第6，194，388號、第6,207,646號、第6,214,806號、6,218,371、第6,239,116和第6,339,068號。另一類可有力地-漆導IFN-ot和NK細胞激活，但對刺激B細胞相對較弱；這一類稱為A類。A類CpG核酸通常具有由至少6個核苷酸組成的回文結構的含磷酸二酯CpG二核苷酸的序列和位于5'和3'端之一或同時位于5'和3'端的穩定化多-G序列。參見，例如，已^^布的國際專利申請WO01/22990。還有一類CpG核酸激活B細胞和NK細胞并誘導IFN-a;這一類稱為C類。最初表征的C類CpG核酸通常為完全穩定的，并且包括B類型序列和富GC的回文結構或近似回文結構。此類已在已公布的美國專利申請2003/0148976中說明，本文中通過參考引用其全部內容。免疫刺激性CpG核酸還包括所謂軟CpG核酸和半軟CpG核酸，如已/〉布的美國專利申請2003/0148976中所公開的，本文中通過參考引用其全部內容。這類軟CpG核酸和半軟CpG核酸加入了抗核酸酶核普酸間鍵和對核酸酶敏感的核普酸間鍵的組合，其中所述不同類型的鍵根據特定規則定位。本發明在一方面提供了包含本發明的免疫刺激性ORN和抗原的疫苗。本文所用的"抗原"指能被T細胞抗原受體或B細胞抗原受體識別的任何分子。該術語廣泛包括被寄主免疫系統識別為外來體的任何類型分子。抗原通常包括但不限于細胞、細胞提取物、蛋白、多肽、肽、多糖、多糖共軛體、多糖的肽和非肽模擬物以及其它分子、小分子、脂質、糖脂質、多糖、碳水化合物、病毒和病毒提取物，以及多細胞生物體如寄生生物，以及免疫原。對于是蛋白、多肽或肽的抗原，此類抗原可包括編碼此類抗原的核酸分子。抗原更具體地包括^a不限于包含癌細胞和在癌細胞之內或之上表達的分子的癌抗原；包含微生物和在微生物之內或之上表達的分子的微生物抗原；過敏原，及其它疾病相關分子如自體反應性T細胞。于是，本發明在某些實施方式中，提供了用于癌癥、傳染病、過敏、成癮、異常折疊的蛋白引起的疾病、自體免疫性疾病和膽固醇控制的疫苗。抗傳染病疫苗可以是預防性或治療性的。所述疫苗中的抗原可以是全活(減毒)、全滅/滅活、重組活減毒、亞單位純化、亞單位重組體、或者是肽。所述疫苗還可包含額外的佐劑或佐劑組合。所述額外的佐劑可以是具有儲器效杲的佐劑(例如，明礬)和免疫修飾劑(例如，另一TLR激動劑或通過非TLR途徑作用的激動劑)或具有上述兩種效果的佐劑如免疫刺激復合物(ISCOM⑧)。下文將對佐劑詳細說明。抗癌疫苗也可以是預防性或治療性的。所述癌抗原可以是全細胞(個別DC疫苗)或一種或多種多肽或肽。它們通常被附著于載體分子上。所述疫苗還可包含額外的佐劑或佐劑組合如上述佐劑或佐劑組合。下文將對癌抗原詳細i兌明。對于治療過敏的疫苗，所述抗原為過敏原或過敏原的一部分。所述過敏原可以包含在輸送載劑內或者附著于輸送載劑(deliveryvehicle)上。所述過敏原可以與所述免疫刺激性ORN連接。下文將對過敏原-洋細"i兌明。治療成癮的疫苗可用于治療例如尼古丁成癮、可卡因成瘊、曱基苯丙胺成癮或海洛因成癮。這些情形中的成癮分子是天然分子或半抗原。用于加入抗成癮疫苗中的"抗原"通常為小分子，并且可與載體蛋白或其它載體顆粒共軛，或者可以將其加入類病毒顆粒中。治療由異常折疊蛋白引起的疾病的疫苗可用于治療如傳染性海綿狀腦病[克雅病(Creutzfeld-Jakobdisease)的變種]之類的疾病。該情形中的"抗原"是能附著到載體蛋白或活減毒載體上的瘙癢病朊蛋白。抗老年癡呆癥疫苗的一個例子是例如靶向p淀粉樣肽或蛋白的疫苗。還提供了治療自體免疫性疾病的疫苗。這些疫苗可用于治療其中自體免疫細胞識別的分子已被鑒定的自體免疫性疾病。例如，下述疫苗將用于治療多發性硬化所述疫苗是針對對髓鞘具有應答的自體反應性T細^>的。還提供了可用于治療心血管疾病和疾病狀態的疫苗。所述疫苗可靶向已知對所述疾病的病因有貢獻的分子，諸如脂蛋白、膽固醇和與膽固醇代謝有關的分子。控制膽固醇的疫苗將包含，例如，作為抗原的膽固醇酯轉移蛋白(CETP)。CETP有利于膽固醇從含抗動脈硬化載脂蛋白A-I的HDL顆粒到含致動脈硬化載脂蛋白B的VLDL和LDL的交換。這種疫苗可用于治療高膽固醇或減緩動脈粥樣硬化進程。所述疫苗可用于治療其中目標分子已知的其它心血管疾病和疾病狀態。本發明在一個方面提供了本發明的免疫剌激性ORN在制備用于對受試者接種的藥物中的用途。本發明在一方面提供了一種制備疫苗的方法。所述方法包括將本發明的免疫刺激性ORN與抗原和任選的可藥用載體緊密結合的步驟。在某些實施方式中，所述免疫剌激性ORN和所述抗原或過敏原共軛。所述抗原和所述免疫刺激性ORN可直接共軛，或它們可通過連接子而間接共輒。在不同實施方式中，所述抗原為微生物抗原、癌抗原或過敏原。本文所用"孩i生物抗原"是微生物的抗原，并且包括但不限于病毒、細菌、寄生生物和真菌。這類抗原包括無損微生物及其天然分離物和片導對該微生物特異的免疫應答。如果化合物誘導對天然微生物抗原的免疫應答(體液和/或細胞的)，則該化合物與天然微生物抗原相似。這類抗原常規用于本領域內，且為本領域內普通技術人員所熟知。病毒是通常含有核酸核心和蛋白外殼的感染劑(infectiousagent),但不是獨立的活生物體。病毒還可以是缺乏蛋白的感染性核酸形式。當不存在病毒可在其中復制的活細胞時，所述病毒不能存活。病毒通過胞吞作用或DNA的直接注射(噬菌體)來進入特定活細胞并繁殖，造成疾病。然后，所繁殖的病毒可以被釋放并感染其它細胞。某些病毒是含DNA的病毒，而其它病毒是含RNA的病毒。在某些方面，本發明還意圖治療在疾病進程中牽涉朊蛋白的疾病，如，例如牛海綿狀腦病(即瘋牛病，BSE)或動物的瘙癢病感染(scrapieinfection),或人克雅病。病毒包括但不限于腸道病毒屬(包括但不限于小核糖核酸病毒科(p/comavzWfibe),如脊骨逸灰質炎病毒(poliovirus)、柯薩奇(Coxsackie)病毒、艾牙牛病毒(echovirus))、專侖狀病毒(rotavirus)、&,病毒和肝炎病毒(如曱肝、乙肝、丙肝、丁肝、戊肝)。在人中發現的病毒的具體例子包括但不限于逆轉錄病毒科(ie/rav/n'^^)(例如，人免疫缺乏病毒，如HIV-1(也稱作HTLV-ni、LAV、HTLV-III/LAV或HIV-m);和其它分離體，如HIV-LP);小核糖核酸病毒科(尸z'cowflWn'obe)(例如，脊髓灰質炎病毒、曱肝病毒、腸道病毒、人柯薩奇病毒、鼻病毒、埃可病毒)；Cfl/c/vzW&e(例如，造成胃腸炎的變種)；披蓋病毒科(rogawWcfee)(例如，馬腦炎病毒、風滲病毒)；黃病毒一牛(F/av/v/nW"e)(例如，登革熱病毒、腦炎病毒、黃熱病病毒)；冠狀病毒科(CorawavzW(^e)(例》口，冠卄犬病毒)；彈^夫病毒牙牛(i/wZ^ovfn'dae)(例^口，水泡性口炎病毒、狂犬病病毒)；絲狀病毒科(W/ov/nWae)(例如，埃博拉病毒)；副粘病毒科(i^raw7xovzW^3e)(例如，副流感病毒、膽、腺炎病毒、麻滲、呼吸道合胞病毒)；正粘病毒科(OAcwy/xov/W&e)(例如，流感)；布尼亞病毒科(萬w"yawW(iae)(例如，漢坦(Hantaan)病毒、布尼亞病毒、白蟲令熱病毒和Nairo病毒)；沙1犬病毒一牛04re"aWnWae)(例如，出血熱病毒)；呼腸孤病毒科(ieov/nWae)(例如，呼腸孤病毒、環狀病毒和輪狀病毒)；雙核糖核酸病毒科(歷w"wW&e);肝病毒科(//e/a(iwflv/n'Gtoe)(如J^口，乙肝病毒)；纟田小病毒-牛(Parvovz'nViae)(侈'J^口，細小病毒)；乳多泡病毒科(PapovaWnWae)(例如，乳頭瘤病毒屬，多瘤46病毒屬)；腺病毒科(^cfewoWn'o^e)(例如，大多數腺病毒)；皰滲病毒科(/7e^amWdae)(例如，單純皰滲病毒(HSV)1和2、帶狀皰滲病毒、巨細胞病毒(CMV》；痘病毒科(Poxviridae)(例如，天花病毒、痘苗病毒、痘病毒)；虹彩病毒科(Iridoviridae)(例如，非洲豬瘕病毒)；以及其它病毒急性喉氣管支氣管炎病毒、曱病毒、卡波西氏肉瘤相關皰滲病毒、新城疫病毒、尼帕(Nipah)病毒、諾瓦克(Norwalk)病毒、乳頭瘤病毒、副流感病毒、禽流感、SARs病毒、西尼羅(WestNile)病毒。細菌是通過二分分裂來無性繁殖的單細胞生物體。根據細菌的形態學、染色反應、營養和代謝需求、抗原結構、化學成分和遺傳同源性對細菌分類和命名。根據細菌的形態學形式，可以把細菌分為3組，即，球狀(球菌)、直桿狀(桿菌)和曲桿或螺旋桿狀(弧菌、彎曲桿菌、螺旋菌和螺旋體)。細菌還更通常根據其染色反應而表征為兩類生物體，即革蘭氏陽性和革蘭氏陰性。革蘭氏(Gram)指通常在微生物學實驗室中操作的染色方法。革蘭氏陽性生物體在染色操作后保留了染色并呈現深紫色。革蘭氏陰性生物體不保留染色但吸收復染色并因此呈現粉紅色。感染性細菌包括但不限于革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌。革蘭氏陽性菌包括j旦不限于CPa"ewe〃a)屬、巴斯德菌(Stop/^/ococc/)屬和鏈球菌(5^印tococcw力屬。革蘭氏陰性菌包括但不限于大腸桿菌(Eyc/zehc/H'aco")、假單胞菌CPsewctomo"as)屬和沙門氏菌(^/附0;^//力屬。感染性細菌的具體例子包括但不限于幽門螺旋桿菌(//6/&0^"^;^/0&)、伯氏5乾蟲累》走菌(J5o,re/Z(36w/^fifo/^n')、退ii軍人病4干菌(丄egz'o"e〃a/7wewmo;/n7z'a)、分才支斥干菌sps(AfycoZ7"cfen.as/w)(侈寸長口，纟吉^t分才支4干菌(M/i^ercw/os&)、鳥分枝桿菌CM(3v/ww)、胞內分4支4干菌(M/wfrace〃w/(3re)、堪薩斯分枝桿菌(Mkwm")、戈登分枝桿菌(Mgo^o"ae))、金黃色葡萄5求菌(&"p/;y/ococcwjG",ew》、淋J求菌(7Vez-xsenVjgo"o;r/zoeae)、月鹵月莛炎奈瑟菌(A^^en'awem'"g&Vfc)、單核纟田胞增生李斯特氏菌(i^fen'"moMOcy、化膿性4連3求菌(5^e/fococcws/yogew&s，A組4連3求菌)、無乳鏈球菌(5^eptococcwaga/ac"ae,B組鏈球菌)、草綠色組鏈球菌(&，tococc叫viridansgroup)、糞鏈球菌(浙，ococcwy^ecofo)、牛鏈球菌(5y，fococcM"oW力、厭氧鏈球菌、(ieptococcMspwe畫om'ae)、至丈病彎曲#干菌屬(03^2/^/0^>。(:化;-5p.)、腸5求菌屬(五wtorococcus濟b感p耆血4干菌(T/aewc^/zZ/ws/"y7we"z"e)、炭疽才干菌(^7c/〃w"w//2rac&)、白口侯片干菌(Cb^ywe6acte〃.wmc^p/^/zer/ae)、才奉4干菌屬(C"o/^"e6acfen'wms/.)、豬丹毒4干菌(E)yj7^^/o/Z^/xr/2M7'o/7a//'ae)、產氣莢膜沖炎菌(C/oWn'd/m/wpe^/H"ge"s)、破傷風梭菌(C7osW(i/膽fetom〕、產氣腸桿菌(五她ra6a"er、月申炎克雷伯菌(A7eZw'e〃apwewmom-ae)、多殺性巴氏4干菌(戶"Wwe〃a附w/toc,(ib)、才以才干菌屬(5acferaz'(iessp.)、才亥4立才炎4干菌(尸wso6(3Cfen'm附"mc/^2m附)、念3朱4犬鏈4于菌(^SVre//c^"c/〃wj附o"z./z》rw")、對每毒蟲累S走體(7Ve/o"ewopa///cwm)、才及纟田密蟲累S走體(r邵cwemflpe他wwe)、鉤端蟲累旋體(丄，ospz'ra)、立克次體WcA:eto/a)和以色歹'J氏放線菌(Jc""0m3;c^s"rae〃/)。寄生生物(parasite)是依賴于其它生物體以生存的生物體，因此必須進入或感染另一生物體以繼續其生命周期。被感染的生物體，即寄主，為寄生生物提供營養和棲息地。盡管從最廣泛意義而言，術語寄生生物可包括所有感染性主體(即，細菌、病毒、真菌、原生動物和蠕蟲)，一般而言，該詞用于單指原生動物、蠕蟲和體外寄生節肢動物(例如，蜱、螨等)。原生動物是特別在血液、腸道或組織的細胞外基質中既可在細胞內又可在細胞外復制的單細胞生物體。蠕蟲是基本總是在細胞外的多細胞生物體(旋毛蟲屬(7Hc/n'"e〃asp.)例外)。蠕蟲一般需要離開第一寄主并傳播到第二寄主以便復制。與上述類型相反，體外寄生節肢動物與寄主身體的外表面形成寄生關系。寄生生物包括細胞內寄生生物和專性細胞內寄生生物。寄生生物的例子包括但不限于惡性疰原蟲CP/wmoAwm/a/c^flrww)、卵形瘧原蟲(尸/osmcxiz'wmova/e)、三日癡原蟲(戶/asmo(^z'wm附a/an'ae)、間日癡原蟲(/Vasmodz'wmv/vax)、i若氏疾原蟲(尸/aswod/wwA77cw/es/)、孩么小巴貝蟲(Sfl^ey/"、分4支巴貝蟲CSa6ew'aAVerge"s)、克氏錐蟲(7>y/awwcwacrwz7')、弓形蟲(7ba:cip/as7nago"d")、^走毛蟲(7Wc/2/we〃(3s戸'rafe)、碩大利什曼原蟲(Le^/zwam'a、杜氏利什曼原蟲(丄e/s/2Wflm'a(iowovam')、巴西利fl"曼原蟲(丄e^/zwam'a6razz7z.e"w》、熱帶利"f十曼原、蟲(Xe/s/wzam'afrap/ca)、岡比亞4,蟲(7)j/a"ayom"gaw&e似e)、羅德西亞4,蟲(7)j/"wc^cw"r/zO(ies7'erae)和曼氏血吸蟲(/Sb/z/stoso"7a48在脊推哺乳動物內造成感染。由于真菌是真核細胞生物體，它們與原核細胞細菌在尺寸、結構組織、生命周期和繁殖機理上有顯著差異。通常根據形態特征、生殖模式和培養特性將真菌分類。盡管真菌可在受試者內造成不同類型的疾病，例如，吸入真菌抗原后的呼吸道過壽l、由于4聶取有毒物質[如有毒蘑菇產生的毒傘毒素p/w〃o/。festoxin)和毒蕈肽，以及曲霉菌屬產生的黃曲霉毒素]引起的真菌中毒，并非所有真菌都造成感染性疾病。感染性真菌能造成系統性或淺表性感染。原發性系統性感染可出現在正常健康受試者中，而機會性感染大多頻繁發現于免疫低下的受試者中。造成原發性系統性感染的最普通的真菌體包括芽生菌屬(S/as/cwycej)、5求孑包菌屬(CoccW/oz'cfes)和纟且織月包漿菌屬(///Wc;p/as附a)。在免疫低下或免疫抑制的受試者中造成機會性感染的普通真菌包括但不卩艮于白色念玉朱菌(Cawd/daa/6/c(3w)、新生隱J求菌(Oy/tococcw恥0/0WWra)和各種曲霉菌(Aj!7Wg/〃W)屬。系統性真菌感染是對內部器官的侵襲性感染。所述生物體通常經肺、消化道或靜脈內導管進入體內。這些類型的感染可由原發性致病真菌或機會性真菌造成。淺表性真菌感染涉及真菌在外表面的生長而不侵入內部組織。典型淺表性真菌感染包括涉及皮膚、頭發或指曱的皮膚真菌感染。與真菌感染有關的疾病包括曲霉菌病、芽生菌病、念珠菌病、著色芽生菌病、球孢子菌病、隱球菌病、眼真菌感染、頭發、指甲和皮膚真菌感染、組織胞漿菌病、鏈狀芽生菌病、足菌腫、耳真菌病、類球孢子菌病、播散性馬爾尼菲青霉菌病、暗色絲孢霉病、鼻孢子菌病、孢子絲菌病、和接合菌病。其它醫學相關微生物已在文獻中詳細說明，例如，參見C.G.AThomas,ikfoiZca/Af/c/xh.o/ogy,BailHereTindall,GreatBritain1983,本文通過參考引用其全部內容。上述各列表均為說明性的，而非意圖為限制性的。如本文所用的，術語"癌抗原"和"腫瘤抗原"可互換地用于指代諸如肽、蛋白或糖蛋白等與腫瘤或癌細胞有關的化合物，所述化合物當在主要組織相容性復合物(MHC)分子環境中在抗原呈遞細胞表面表達時能引發免疫應答。由癌細胞差異性表達的癌抗原可因此被利用來輩巴向癌細胞。癌抗原是能夠潛在地刺激顯性肺瘤特異性免疫應答的抗原。某些此類抗原由正常細胞編碼，盡管不一定由正常細胞表達。此類抗原可以描述為通常在正常細胞中沉默(即不表達)的抗原、僅在細胞分化的特定時期表達的抗原和暫時性表達的抗原，如胚胎抗原和胎兒抗原。其它癌抗原由諸如癌基因(例如，活化ras癌基因)、抑制劑基因(例如，突變體p53)、因內刪除或染色體易位形成的融合蛋白的突變細胞基因編碼。還有其它癌抗原能被病毒基因諸如RNA和DNA腫瘤病毒攜帶的病毒基因編碼。癌抗原可通過制備癌細胞的粗提物如CohenPA等，(1994)Owceri^s54:1055-8中所說明、將所述抗原部分提純、重組技術或者對已知抗原的從頭合成從癌細胞制備。癌抗原包括但不限于重組表達抗原、抗原的免疫原部分或其全腫瘤或癌或細胞。這類抗原可經重組或本領域內任何其它已知方法來分離或制備。腫瘤抗原的例子包括MAGE、MART-1/Melan-A、gp100、二肽肽水解酶IV(DPPIV)、腺苷脫氨酶結合蛋白(ADAbp)、親環蛋白b、大腸相關抗原(CRC)-C017-1A/GA733、癌胚抗原(CEA)及其免疫原表位CAP-l和CAP-2、etv6、amll、前列腺特異性抗原(PSA)及其免疫原表位PSA-1、PSA-2和PSA-3、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、T細胞受體/CD3-;鏈、腫瘤抗原MAGE族(例如，MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE陽A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-AIO、MAGE-A11、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE隱Xp4(MAGE-B4)、MAGE-C1、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)、腫瘤抗原GAGE族(例如，GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE畫6、GAGE-7、GAGE畫8、GAGE-9)、BAGE、RAGE、LAGE-1、NAG、GnT-V、MUM畫1、CDK4、酪氨酸酶、p53、而C族、HER2/neu、p21ras、RCAS1、a-曱胎蛋白、E-鈣粘蛋白、a-連接蛋白、卩-連接蛋白和Y-連接蛋白、pl20ctn、gpl00Pmdll7、PRAME、NY-ESO-l、cdc27、腺瘤性息肉蛋白(APC)、胞襯蛋白、間隙連接蛋白37、Ig-獨特型、p15、gp75、GM2和GD2神經節苷脂、病毒產品諸如人乳頭瘤病毒蛋白、腫瘤細胞Smad族、lmp-l、P1A、EBV編碼核抗原(EBNA)-1、腦糖原磷酸化酶、SSX-1、SSX-2(HOM誦MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-l和CT-7，以及c-erbB-2。該列表并非限制性的。本文所用"過敏原"是能引發以產生IgE為特征的免疫應答的分子。過敏原還是能在易感對象中誘導過敏反應或孝喘反應的物質。因此，在本發明上下文中，詞語過敏原是指能引發由IgE抗體介導的過敏反應的特定類型抗原。過敏原的列表龐大，并可包括花粉、昆蟲毒液、動物毛皮屑、真菌孢子和藥物(例如，青霉素)。天然動物和植物過敏原的實力包括對下列種類特異的蛋白犬屬(家犬)、塵螨屬(例如，粉塵螨)、貓屬(家貓)、豚草屬(美洲豚草)、黑麥草屬(例如，多年生黑麥草和一年生黑麥草)、柳杉屬(日本柳杉)、鏈格孢屬(鏈格孢菌)、榿木屬、赤楊屬(赤楊)、樺木屬(白樺)、櫟木屬(白櫟)、洋橄欖屬(油橄欖)、蒿屬(艾草)、車前屬(例如，長葉車前草)、墻草屬(例如，藥用墻草和歐蓍草)、姬蠊屬(例如，德國小蠊)、蜜蜂屬(例如，^^w"/^/7wmw)、柏木屬(例如，絲柏、綠干柏和金冠柏)檜屬(例如，/w"^emssa6/"oz'(i^、鉛筆柏、歐洲刺柏和Jwm;pen^os/ze/)、金4中柏屬(例^口，7Tw少aon'e"to/、扁柏屬(例^口，曰本扁柏)、大蠊屬(例如，美洲大蠊)、冰草屬(例如，匍旬水草)、黑麥屬(例如，黑麥)、小麥屬(例如，小麥)、鴨茅屬(例如，鴨茅)、羊茅屬(例如，牛尾草)、早熟禾屬(例如，草地早熟禾和加拿大早熟禾)、燕麥屬(例如，燕麥)、絨毛草屬(例如，絨毛草)、黃花茅屬(例如，黃花茅)、燕麥草屬(例如，花葉燕麥草)、剪股穎屬(例如，小糠草)、梯牧草潙(^6^，梯牧草)、篛草^(^"/如，鶄草)、雀稗屬(例如，百喜草)、高粱屬(例如，假高粱)和雀麥屬(例如，無芒雀麥)。本發明在一方面提供了本發明的免疫刺激性ORN和抗原的共軛體。在一個實施方式中，本發明的免疫刺激性ORN與所述抗原共價連接。所述免疫刺激性ORN和所述抗原之間的共價鍵可以是任何適當類型的共價鍵，條件是所述免疫刺激性ORN和所述抗原在如此連接時保持了各單獨成分的可測功能活性。在一個實施方式中，所述共價鍵是直接的。在另一實施方式中，所述共價鍵是間接的，即通過連接子基團。所述共價連接的免疫刺激姓ORN和抗原可在細胞內處理51以便將一者從另一者釋放。與如果作為單一制劑或單一成分施用時的輸送相比，以這種方式進行的任一成分到細胞的輸送將得到提高。在一個實施方式中，所述抗原是抗原本身，即它是預制抗原。物組合物。在不同實施方式中，所述輸送載劑可以選自陽離子脂質、脂質體、螺旋體、病毒顆粒、免疫刺激復合物(ISCOM㊣)、微粒、微球、納米球、單層嚢泡(LUV)、多層嚢泡、乳化粒(emulsome)、多陽離子肽、脂復合物、多聚復合物、脂多聚復合物、油包水(w/o)乳液、水包油(o/w)乳液、水包油包水(W/0/W)多重乳液、二徵乳液、納米乳液、膠束、樹枝狀大分子、病毒顆粒、類病毒顆粒、高分子納米顆粒(諸如納米球或納米膠嚢)、高分子微粒(諸如微球或微膠囊)、殼聚糖、環糊精、類脂嚢泡、或ISCOM⑧以及任選的可藥用載體。下面討論可藥用載體。本發明的藥物組合物還可包含抗原。使用進行物理結合。免疫刺激組合物可以包含在輸送載劑內部，或存在于輸送載劑的溶劑接觸表面上或與該表面結合。在一個實施方式中，免疫剌激性ORN存在于輸送載劑的溶劑接觸表面上或與該表面結合，且抗原當存在時包含在輸送載劑的內部。在另一實施方式中，免疫刺激性ORN和抗原均存在于輸送載劑的溶劑接觸表面上或與該表面結合。在另一實施方式中，抗原存在于輸送載劑的溶劑接觸表面上或與該表面結合，而免疫刺激性ORN包含于輸送載劑內部。在另一實施方式中，免疫刺激性ORN和當包含抗原時的抗原都包含于輸送載劑內部。面本發明提供了激活免疫細胞的方法。根據本發明這一方面的方法包括將體外或體內的免疫細胞與有效量的本發明的組合物接觸以激活所述免疫細胞的步驟。本發明的組合物可任選地包含抗原。本文所用"免疫細胞，，指能參與天然免疫應答或獲得性免疫應答的任何骨髓衍生細胞。免疫系統的細胞包括但不限于樹突狀細胞(DC)、自然殺傷(NK)細胞、單核細胞、巨噬細胞、粒細胞、B淋巴細月包、漿細胞、T淋巴細胞和它們的前體細胞。在某些實施方式中，所述免疫細胞是表達TLR7的細月包。如本文所用，術語"有效量，，指帶來所需生物學效果所必需或足夠的物質的量。有效量可以是但不限于單一用藥所施用的量。如本文所用，術語"激活免疫細胞，，指誘導免疫細胞進入與免疫應答有關的激活狀態。術語"激活免疫細胞"既指誘導也指提高免疫應答。如本文所用，術語"免疫應答"指能將免疫細胞的激活反射為增殖、執行效應因子免疫功能或產生參與免疫應答的基因產物的天然或獲得性免疫應答的任何方面。參與免疫應答的基因產物可包括分泌產物(例如，抗體、細胞因子和趨化因子)以及免疫功能的特征性細胞內和細胞表面分子(例如，某些分化群(CD)抗原、轉錄因子和基因轉錄本)。術語"免疫應答"可應用于單個細胞或細胞群體。細胞因子的生成可由本領域內熟知的幾種方法之一進行評價，所述方法包括生物應答片企測、酶聯免疫吸附測定(ELISA)、細胞內焚光激活細胞分類(FACS)分析和反轉錄酶/聚合酶鏈式反應(RT-PCR)。在一個實施方式中，所述免疫應答涉及IFN-a的生成。在一個實施方式中，所述免疫應答涉及免疫細胞激活的細胞表面標記諸如CD25、CD80、CD86和CD154的上調。測量此類標記的細胞表面表達的方法熟知于本領域內且包括FACS分析。對于在細胞的細胞或細胞群中免疫應答的測量，在一個實施方式中，所述細胞或細胞群表達TLR7。所述細胞能天然地表達TLR,或可通過在該細胞內引入TLR的適當表達載體來才喿控該細胞以表達所述TLR。在一個實施方式中，細胞的細胞或細胞群作為表達TLR的細胞系獲取。在一個實施方式中，細胞的細胞或細胞群作為表達所述TLR的過渡轉染子獲取。在一個實施方式中，細胞的細胞或細胞群作為表達所述TLR的穩定轉染子獲取。另外對于在測量細胞的細胞或細胞群中免疫應答的使用，方便的是向所述細胞的細胞或細胞群內引入通過TLR對細胞內信號傳導產生應答的報道子構建體。在一個實施方式中，該報道子是在NF-KB啟動子控制下的基因。在一個實施方式中，在所述啟動子的控制下的基因是熒光素酶。在適當激活條件下，熒光素酶報道子構建體被表達，并且釋放能夠用光度計來定量測量的可檢測光信號。這類報道子構建體和其它適合的報道子構建體是商品化的。本發明還設想了使用無細胞方法來檢測TLR激活。本發明在某些方面涉及用于治療的組合物和方法。本發明的免疫刺激性組合物可以單獨使用或與其它治療劑聯合使用。所述免疫刺激性組合物和其它治療劑可同時施用或相繼施用。當本發明的免疫刺激性組合物和其它治療劑同時施用時，它們可在相同或不同配方中施用，但它們在同一時間施用。另外，當本發明的免疫刺激性組合物和其它治療劑同時施用時，它們可通過相同或不同施用途徑施用，但它們在同一時間施用。當本發明的免疫刺激性組合物的使用與其它治療劑的施用暫時分開時，本發明的免疫刺激性組合物和另一治療劑相繼施用。這些化合物的施用之間的分隔時間可以是以分鐘計或更長。在一個實在一個實施方式中，本發明的免疫刺激性組合物在其它治療劑施用之后施用。另外，當本發明的免疫刺激性組合物和其它治療劑相繼施用時，它們可通過相同或不同施用途徑施用。所述其它治療劑包括但不限于佐劑、抗原、疫苗以及用于治療感染、癌癥、過敏和哮喘的藥物。在一方面本發明提供了一種對受試者接種的方法。根據本發明這一方面的方法包括對受試者施用抗原和本發明組合物的步驟。在一個實施方式中，抗原的施用包括施用編碼所述抗原的核酸。本文所用的"受試者"是指脊推動物。在不同實施方式中，所述受試者是人、非人靈長類動物或其它哺乳動物。在某些實施方式中，所述受試者是小鼠、大鼠、豚鼠、兔、貓、狗、豬、綿羊、山羊、牛或馬。對于在對受試者接種的方法中的應用，在一個實施方式中，本發明的組合物包括抗原。抗原可與本發明的ORN分離或與其共價連接。在一個實施方式中，本發明的組合物本身不包括所述抗原。在該實施方式中，所述抗原可以與本發明的組合物分開施用，或者與本發明的化合物一起施用。分開施用包括時間上分開、施用部位或途徑上分開、或者在時間上和在施用部位或途徑上均分開。當本發明的組合物與抗原在時間上分開施用時，所述抗原可在本發明的組合物之前或之后施用。在一個實施方式中，抗原在施用本發明組合物之后48小時至454周時施用。所述方法還設想了在抗原和組合物的初始施用之后再進行一次或多次加強劑量的單獨的抗原、單獨的組合物、或抗原和組合物。本發明還設想了通過對受試者施用本發明的組合物來為所述受試者將來遭遇未知抗原作準備，其中所述組合物不包含抗原。根據該實施方式，對所述受試者的免疫系統進行準備以便為對所述受試者后來遭遇的抗原(例如，通過環境接觸或職業接觸)設置更強力的應答。該方法可用于，例如，易接觸微生物體的旅行者、醫學工作者和士兵。在一方面本發明提供了一種治療具有免疫系統缺陷的受試者的方法。根據本發明這一方面的方法包括對受試者施用有效量的本發明的組合物以治療該受試者的步驟。本文所用"免疫系統缺陷"指免疫系統對抗原設置免疫應答的能力異常降低。在一個實施方式中，免疫系統缺陷是下述疾病或病癥其中受試者的免疫系統不以正常能力發揮功能，或其中有用的是提升受試者的免疫應答以便，例如，消除所述受試者內的腫瘤或癌癥或者感染。本文所用的"具有免疫缺陷的受試者"指下述受試者其中該受試者的免疫系統對抗原設置免疫應答的能力降低。具有免疫缺陷的受試者包括具有獲得性免疫缺陷的受試者以及具有先天性免疫系統缺陷的受試者。具有獲得性免疫缺陷的受試者包括但不限于具有慢性炎癥疾病狀態的受試者、具有慢性腎功能不全或腎功能衰竭的受試者、被感染的受試者、患有癌癥的受試者、接受免疫抑制藥物的受試者、接受其它免疫抑制治療的受試者、以及營養不良的受試者。在一個實施方式中，所述受試者具有受抑制的CD4+T細胞群體。在一個實施方式中，所述受試者被人免疫缺陷病毒(HIV)感染或患有獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)。根據本發明這一方面的方法因此提供了提高免疫應答或提高需要更強力免疫應答的受試者中設置免疫應答的能力的方法。本發明的組合物和方法可以單獨使用或與其它用于治療感染的試劑或方法聯合使用。在一方面本發明提供了治療被感染的受試者的方法。根據本發明這一方面的方法包括對被感染的受試者施用有效量的本發明的組合物以治療該受試者的步驟。在一方面本發明提供了一種治療被感染的受試者的方法。根據本發明這一方面的方法包括對被感染的受試者施用有效量的本發明的組合物和感染藥物以治療該受試者的步驟。在一方面本發明提供了本發明的免疫刺激性ORN在制備治療受試者的感染的藥物的應用。在一方面本發明提供了一種可用于治療感染的組合物。根據此方面的組合物包括本發明的免疫刺激性ORN和感染藥物。如本文所用的，當在涉及患有疾病或疾病狀態的受試者時使用的術語"治療"應該意指預防、改善或消除該受試者的所述疾病或疾病狀態的至少一個指標或癥狀。"被感染的受試者"是具有因感染性微生物對該受試者的淺表性、局域性或系統性侵襲而引發的病癥的受試者。所述感染性微生物可以是病毒、細菌、真菌或寄生生物，如上所述。感染藥物包括但不限于抗細菌劑、抗病毒劑、抗真菌劑和抗寄生生物劑。短語諸如"抗感染劑"、"抗生素"、"抗細菌劑"、"抗病毒劑"、"抗真菌劑"、"抗寄生生物劑"和"殺寄生生物藥"對本領域內普通技術人員具有公認含義，且在標準醫學教材中有定義。簡言之，抗細菌劑殺滅或抑制細菌，并且包括抗生素以及其它有相似功能的合成或天然化合物。抗病毒劑能從天然來源中分離，并且可用于殺滅或抑制病毒。抗真菌劑用于治療淺表性真菌感染以及機會性和原發性系統性真菌感染。抗寄生生物劑殺滅或抑制寄生生物。許多抗生素是由細胞如微生物所產生的作為二級代謝物的低分子量分子。一般而言，抗生素干預對所述微生物有特異性并且不存在于寄主細胞中的一個或多個功能或結構。抗感染治療的問題之一是在接受抗感染劑治療的寄主中出現的副作用。例如，許多抗感染劑能夠殺滅或抑制廣語的微生物，并且不會對特定類型物種具有特異性。用這些抗感染劑治療導致殺滅寄主內生存的正常微生物群以及感染性微生物。微生物群的損失能夠導致疾病并發癥，并且使寄主易受其它病原體的感染，因為微生物群與感染性病原體竟爭且充當感染性病原體的屏障。其它副作用可能作為這些化學體在寄主的非微生物細胞或組織上的特異性或非特異性影響的結果出現。抗感染劑的廣泛使用的另一問題是對微生物的耐抗生素變種的發展。抗萬古霉素腸球菌(e"feTOCOCC/)、抗青霉素肺炎雙球菌(p"ewwococc/)、多抗金黃色葡萄球菌和多抗結核變種已經進化產生且正成為主要的臨床問題。抗感染劑的廣泛使用可能會產生細菌的許多耐抗生素變種。結果，將需要新的抗感染策略來對抗這些微生物。可有效殺滅或抑制大范圍的細菌的抗細菌抗生素稱作廣語抗生素。其它類型的抗病毒抗生素主要對于革蘭氏陽性類或革蘭氏陰性類細菌有效。這類抗生素稱作窄譜抗生素。對于單一生物體或疾病而非其它細菌類型有效的其它抗生素稱作限制譜抗生素。抗細菌劑有時根據其主要作用模式分類。一般而言，抗細菌劑是細胞壁合成抑制劑、細胞膜合成抑制劑、蛋白合成抑制劑、核酸合成或功能化抑制劑以及竟爭性抑制劑。細胞壁合成抑制劑抑制細胞壁合成過程中的一步，且通常在細菌肽聚糖合成中。細胞壁合成抑制劑包括卩-內酰胺抗生素、天然青霉素、半合成青霉素、氨千青霉素、克拉維酸、頭孢菌素和桿菌肽。(3-內酰胺是抑制肽聚糖合成的最后步驟的含四元{3-內酰胺環的抗生素。(3-內酰胺抗生素可以是合成或天然的。青霉(pemW〃/"m)生成的所述P-內酰胺抗生素是天然青霉素，諸如青霉素G或青霉素V。它們經黃青霉(尸em'c/〃/wmc/zo^ogewwm)的發酵生成。天然青霉素具有窄譜活性，且通常對鏈球菌(5^eptococcw力、淋球菌(Go"ococc^s)和葡萄球菌(&。;^;;/ococc附)有效。對革蘭氏陽性菌也有效的其它類型天然青霉素包括青霉素F、X、K和O。半合成青霉素通常為由霉菌產生的6-氨基青霉烷酸分子的改造體(modification)。6-氨基青霉烷酸可通過添加側鏈進行^f'務飾從而產生具有比天然青霉素更廣譜的活性或各種其它優良性質的青霉素。某些類型的半合成青霉素具有對革蘭氏陽性菌核革蘭氏陰性菌的廣譜，但會被青霉素酶滅活。這些半合成青霉素包括氨芐青霉素、羧芐青霉素、苯峻青霉素、阿洛西林(azlocillin)、美洛西林(mezlocillin)和哌拉西林(piperacillin)。其它類型半合成青霉素具有對革蘭氏陽性菌較窄的活性，但開發了不被青霉素酶滅活這樣的性質。這些包括，例如，甲氧西林(methicillin)、雙氯西林(didoxacillin)和乙氧萘青霉素。某些廣譜半合成青霉素可以與P-內酰胺酶抑制劑諸如克拉維酸和舒巴坦57(sulbactam)組合使用。(3-內酰胺酶抑制劑沒有抗微生物作用，但它們有抑制青霉素酶的功能，因此保護半合成青霉素不被降解。另一類P-內酰胺抗生素是頭孢菌素。它們對細菌P-內酰胺酶的降解敏感，并因此并非總是獨自有效的。然而頭孢菌素耐青霉素酶。它們對許多革蘭氏陽性菌和革蘭氏陽性菌有效。頭孢菌素包括但不限于頭孑包"塞p分(cephalothin)、頭孑包p比石克(cephapirin)、頭孑包氨卡(cephalexin)、頭孢孟多(cefamandole)、頭孢克洛(cefaclor)、頭孢哇啉(cefazolin)、頭孢呔辛(cefuroxine)、頭孑包西丁(cefoxitin)、頭孑包p塞將(cefotaxime)、頭孑包磺咬(cefsulodin)、頭孢他美(cefetamet)、頭孢克肟(cefixime)、頭孢曲松(ceftriaxone)'頭孑包p底酉同(cefoperazone)、頭孑包4也口定(ceftazidine)和4立氧頭孑包(moxalactam)。桿菌肽是另一類抗生素，其通過抑制胞壁肽亞單元或肽聚糖從將所述亞單元輸送到細胞膜外的分子中釋放來抑制細胞壁的合成。盡管桿菌肽對革蘭氏陽性菌有效，但其使用因其高毒性而一般限于體表施用。碳青霉烯是另一種能抑制細胞壁合成的廣譜(3-內酰胺抗生素。碳青霉烯的例子包括但不限于亞胺培南(imipenem)。單胺菌素也是廣譜p-內酰胺抗生素，且包括euztreonam。由鏈霉菌生成的抗生素，萬古霉素，通過抑制細胞膜合成也對革蘭氏陽性菌有效。抗細菌劑的另一類是作為細胞膜抑制劑的抗細菌劑。這些化合物瓦解細菌膜的結構或抑制其功能。作為細胞膜抑制劑的抗細菌劑的一個問題是，由于細菌膜和真核細胞膜的內磷脂的相似性，它們在真核細胞和細菌中都產生影響。因此這些化合物很少具有足夠的特異性以允許它們系統性地使用，并且在局部施用時阻止了高劑量的使用。多粘菌素是一種臨床有效的細胞膜抑制劑。多粘菌素(polymyxin)通過與膜磷脂結合來干預膜功能。多粘菌素主要對革蘭氏陰性菌有效，并且通常用于嚴重的假單胞菌感染，或用于對較低毒性的抗生素具有抗性的假單胞菌感染。與該化合物的系統性施用相關的嚴重副作用包括對腎臟和其它器官的損害。其它細胞膜抑制劑包括主要用在系統性真菌感染和念珠菌(Om^/a)酵母感染的治療中的抗真菌劑，兩性霉素B(AmphotericinB)和制霉菌素(Nystatin)。咪唑類是另一類作為細胞膜抑制劑的抗生素。咪唑類用作抗細菌劑和抗真菌劑，例如用于酵母感染、皮膚寄生生物感染和系統性真菌感染的治療。咪唑類包括但不限于克霉唑(clotrimazole)、口米康口坐(miconazole)、酉同康p坐(ketoconazole)、j尹曲康"坐(itraconazole)禾口氟康峻(fluconazole)。許多抗細菌劑是蛋白合成抑制劑。這些化合物防止細菌合成結構蛋白和酶，因此造成對細胞生長或功能的抑制或導致細胞死亡。一般而言，這些化合物干預轉錄或翻譯過程。阻斷轉錄的抗細菌劑包括但不限于利福平(Rifampin)和乙胺丁醇。抑制RNA聚合酶的利福平具有廣鐠活性，且對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌以及結核分枝桿菌(Aco6a"en'wmfw6ercw/ow》有效。乙胺丁醇對結核分枝桿菌有效。阻斷翻譯的抗細菌劑干預細菌核糖體以防止mRNA被翻譯為蛋白。一般而言，該類化合物包括但不限于四環素類、氯霉素、大環內酯類(例如，紅霉素)和氨基糖苷類(例如，鏈霉素)。氨基糖苷類是由鏈霉菌屬細菌生成的一類抗生素，如例如鏈霉素、卡那霉素、妥布霉素、阿米卡星和慶大霉素。氨基糖苷類已被用于對抗由革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌造成的多種細菌感染。鏈霉素已廣泛用作治療肺結核的主要藥物。慶大霉素用來對抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的許多變種，包括假單胞菌感染，尤其是與妥布霉素組合。卡那霉素用來對抗許多革蘭氏陽性菌，包括耐青霉素的葡萄球菌GStop/^/ococc/)。限制氨基糖苷類的臨床使用的一個副作用是，據顯示，在有效力所必須的劑量下長期使用會損害腎功能且對聽覺神經造成傷害導致失聰。另一類翻譯抑制劑抗細菌劑是四環素類。四環素類是一類廣譜且對多種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌有效的抗生素。四環素類的例子包括四環素、米諾環素、強力霉素和氯四環素。它們對治療許多細菌類型很重要，但在萊姆病的治療中特別重要。作為其低毒性和極小直接副作用的結果，四環素類被醫學界過度使用和誤用，導致許多問題。例如，它們的過度使用已導致抗藥性廣泛發展。抗細菌劑如大環內酯類可逆地與50S核糖體亞單元結合，并抑制肽酰轉移酶對蛋白的增長或防止不帶電荷的tRNA從細菌核糖體中的釋放或者兩者均有。這些化合物包括紅霉素、羅紅霉素、克拉霉素、竹桃霉素和阿奇霉素。紅霉素對大多革蘭氏陽性菌、淋球菌、軍團菌和嗜血桿菌有活性，但不對腸桿菌科有活性。阻斷蛋白合成期間肽鍵形成的林可霉素和克林霉素用來對抗革蘭氏陽性菌。另一類翻譯抑制劑是氯霉素。氯霉素與70S核糖體結合，抑制細菌酶肽酰轉移酶從而防止蛋白合成期間的多肽鏈生長。與氯霉素相關的一個嚴重副作用是再生障礙性貧血。再生障礙性貧血在對治療小部分(l/50,000)患者中細菌的有效氯霉素劑量下產生。由于貧血造成的死亡，曾經是大量開方的抗生素的氯霉素現在很少使用。出于其有效性它仍在危及生命的情形中(例如，傷寒)使用。某些抗細菌劑干擾核酸合成或功能，例如與DNA或RNA結合以使它們的信息不能被讀取。這些抗細菌劑包括但不限于喹諾酮類和增效磺胺曱基異惡唑(co-trimoxazole)(兩者均為合成化學物質)，以及天然或半合成化學物質利福霉素(rifamydn)。喹諾酮類通過抑制細菌生成其環狀DNA必需酶的DNA促旋酶來阻斷細菌DNA復制。它們是廣譜的，且例子包括諾氟沙星、環丙沙星、依諾沙星、萘啶酸和替馬沙星。萘啶酸是結合到DNA促旋酶(拓樸異構酶)從而抑制DNA促旋酶活性的殺菌劑，所述DNA促旋酶對DNA復制很重要，且允許超螺旋弛豫并重新形成。萘啶酸主要用于下尿路感染(UTI)的治療中，因為它對通常為UTI成因的數類革蘭氏陰性菌如大腸桿菌、產氣腸桿菌、肺炎克雷伯菌和變形桿菌有效。增效磺胺甲基異惡唑是磺胺曱惡唑和曱氧芐咬的組合，它阻斷制備DNA核苷酸必需的葉酸的細菌合成。利福平(rifampicin)是對革蘭氏陽性菌(包括結核分枝桿菌和腦膜炎奈瑟菌造成的腦膜炎)和某些革蘭氏陰性菌有活性的利福霉素(rifamycin)衍生物。利福平與聚合酶的卩亞單元結合并阻斷激活所述聚合酶所必需的第一核苷酸的添加，從而阻斷mRNA合成。另一類抗細菌劑是作為細菌酶的竟爭性抑制劑而發揮作用的化合物。所述竟爭性抑制劑大多與細菌生長因子結構性相似并竟爭結合，但不在細胞中執行代謝功能。這些化合物包括磺胺類和具有更高和更廣抗細菌活性的磺胺類的化學修飾形式。所述磺胺類(例如，磺胺異惡唑和曱氧千啶)可用于肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌和大腸桿菌的60治療，且已用于大腸桿菌造成的簡單UTI的治療以及腦膜炎球菌性腦膜炎的治療中。抗病毒劑是防止細胞受病毒或該病毒在細胞內的復制品的感染的化合物。抗病毒藥比抗細菌藥要少得多，因為病毒復制過程與寄主細胞內的DNA復制非常緊密相關，以至于非特異性抗病毒劑常常對寄主是毒性的。在病毒感染過程中有幾個階段能被抗病毒劑阻斷或抑制。這些階段包括，病毒對寄主細胞的附著(免疫球蛋白或結合肽)，病毒的脫殼(例如，金剛烷胺)，病毒mRNA的合成或翻譯(例如，干擾素)，病毒RNA或DNA的復制(例如，核苷類似物)，新病毒蛋白的成熟(例如，蛋白酶抑制劑)，以及病毒的出芽和釋放。抗病毒劑的另一類型是核苷類似物。核苷類似物是與核苷相似但具有不完整或異常脫氧核糖或核糖基團的合成化合物。一旦核苷類似物進入細胞，它們將被磷酸化，產生與正常核苷酸竟爭以加入所述病毒DNA或RNA的三磷酸形式。一旦核苷類似物的三磷酸形式加入成長核酸鏈中，它將造成與聚合酶的不可逆結合，并因此造成鏈終止。瘆病毒的治療)、丙氧鳥苷(可用于呼吸道合胞病毒的治療)、雙脫氧肌苷、雙脫氧胞苷和齊多夫定(疊氮胸苷)。抗病毒劑的另一類包括細胞因子如干擾素。干擾素是由受病毒感染的細胞及免疫細胞所分泌的細胞因子。干擾素通過與被感染細胞相鄰的細胞上的特異性受體結合從而造成保護該細胞不受所述病毒感染的細胞內變化來發揮功能。a干擾素和卩干擾素還在被感染細胞表面上誘導I類和II類MHC分子的表達，造成對寄主免疫細胞識別的提高的抗原呈遞。a干擾素和卩干擾素可作為重組形式使用，且已用于慢性乙肝和丙肝感染的治療。在對抗病毒治療有效的劑量下，干擾素有嚴重副作用，如發熱、全身乏力和體重減少。免疫球蛋白治療用于病毒感染的預防。用于病毒感染的免疫球蛋白治療不同于細菌感染，因為免疫球蛋白治療通過與細胞外病毒體結合并防止病毒體附著和進入易受所述病毒感染的細胞中發揮作用，而不是作為抗原特異性來發揮功能。該治療可用于在所述抗體存在于寄主體內的時間段內對病毒感染的預防。一般而言有兩類免疫球蛋白治61療，正常免疫球蛋白治療和超免疫球蛋白治療。正常免疫球蛋白治療利用從正常獻血者的血清中制備并匯集的抗體產物。該匯集產物含有低效價的廣泛范圍的人病毒如曱肝病毒、細小病毒、腸道病毒(尤其在新生兒中)的抗體。超免疫球蛋白治療利用從具有對特定病毒高效價抗體的個體的血清中制備的抗體。這些抗體然后用來對抗特定病毒。超免疫球蛋白的例子包括帶狀皰滲免疫球蛋白(可用于對免疫低下兒童和新生兒中水痘的預防)、人狂犬病免疫球蛋白(可用于被患狂犬病動物咬傷的受試者的接觸后預防)、乙肝免疫球蛋白(可用于乙肝病毒的預防，尤其在接觸了該病毒的受試者中)以及RSV免疫球蛋白(可用于呼吸道合胞病毒感染的治療)。抗真菌劑可用于對感染性真菌的治療和預防。有時抗真菌劑通過其作用機理分類。某些抗真菌劑作為細胞壁抑制劑通過抑制葡萄糖合成酶而發揮功能。這些抗真菌劑包括但不限于basiungin/ECB。其它抗真菌劑通過動搖膜的完整性來發揮功能。這些抗真菌劑包括但不限于咪唑類如克霉唑、舍他康唑、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、咪康唑和伏立康唑，以及FK463、兩性霉素B、BAY38-9502、MK991、帕地霉素pradimicin、UK292、布替奈芬和特比奈芬。其它抗真菌劑通過破壞曱殼質(例如，曱殼質酶)或免疫抑制(501乳膏)來發揮功能。殺寄生生物劑是直接殺滅寄生生物的試劑。這些化合物在本領域內已知，且通常是商品化的。可用于人施用的殺寄生生物劑的例子包括但不限于阿苯達唑、兩性霉素B、苯并乙唑、石克雙二氯酚、鹽酸氯喹、磷酸氯喹、克林霉素、去氫土根堿、乙胺嗪、糖酸二氯尼特、依氟鳥氨酸、呋喃唑酮、糖皮質激素類、卣泛群、雙碘喹啉、伊維菌素、曱苯咪唑、曱氯喹、葡甲胺銻酸鹽、硫胂密胺、美曲膦酯(敵百蟲)、曱硝唑、氯硝柳胺、硝呋莫司、羥氨喹、巴龍霉素、羥乙磺酸戊烷脒、哌。秦、吡喹酮、磷酸伯氨喹、氯胍、噻嘧啶、磺胺乙胺嘧啶、磺胺多辛乙胺嘧啶、鹽酸阿的平、硫酸阿的平、葡萄糖酸奎尼丁、螺旋霉素、葡萄糖酸銻鈉、蘇拉明、四環素、強力霉素、噻苯咪唑、替硝唑、復方新諾明和4,蟲胂胺。所述ORN還可用于治療和預防自體免疫性疾病。自體免疫性疾病是其中受試者的自體抗體與寄主組織反應或其中免疫效應因子T細胞對內源性自體肽有自體反應性并造成組織破壞的一類疾病。因此免疫應答被設置為對抗受試者自身的抗原(稱作自體抗原)。自體免疫性疾病包括但不限于類風濕性關節炎、克羅恩病、多發性硬化、系統性紅斑狼瘡(SLE)、重癥肌無力(MG)、橋本氏甲狀腺炎、肺出血腎炎綜合癥、天皰瘡(例如，尋常性天皰瘡)、格雷夫斯病(Grave，sdisease)、自體免疫性溶血性貧血、自體免疫性血小板減少紫癜、抗膠原抗體硬皮病、混合性結締組織病、多發性肌炎、惡性貧血、特發性艾迪生病(idiopathicAddison'sdisease)、與自體免疫相關的不孕癥、腎小球腎炎(例如，新月體腎炎、增生性腎小球腎炎)、類天皰瘡、修格連氏癥候群、胰島素抵抗和自體免疫性糖尿病。本文所用的"自體抗原，，指正常基質組織的抗原。正常寄主組織不包括癌細胞。因此在自體免疫性疾病的環境下，設置來對抗自體抗原的免疫應答是非必要免疫應答，且會導致正常組織的破壞與損害，然而，設置來對抗癌抗原的免疫應答是需要的免疫應答，且有助于腫瘤或癌癥的^t壞。因此，在針對治療自發免疫疾病的本發明某些方面，推薦的是將所述ORN與自體抗原尤其是那些所述自發免疫疾病的目標抗原一起施用。在其它情形中，所述ORN可與低劑量自體抗原一起輸送。許多動物研究已表明抗原的低劑量粘膜施用能造成免疫反應低下或"耐受性"。活性機理似乎是由Thl應答向主要為Th2和Th3(即TGF-卩主導的)應答的細胞因子介導的免疫偏離。用^f氐劑量抗原輸送的活性抑制也能抑制對自體免疫性疾病如類風濕性關節炎和SLE治療相當有利的無關免疫應答(旁側抑制)。旁側抑制涉及促炎細胞因子和Thl細胞因子以抗原特異性或抗原非特異性方式釋放的區域性環境中的Thl反調節抑制細胞因子的分泌。本文所用"耐受性"用于指代這一現象。事實上，口腔耐受性在許多動物自體免疫性疾病的治療中有效，所述疾病包括實驗性自體免疫性腦脊髓炎(EAE)、實驗性自體免疫性重癥肌無力、膠原誘導關節炎(CIA)和胰島素依賴型糖尿病。在這些模型中，對自體免疫性疾病的預防和抑制與在抗原特異性體液和細胞應答中從Thl應答到Th2/Th3應答的轉移有關。63它試劑和方法聯合使用。在一方面本發明提供了治療患有癌癥的受試者的方法。根據本發明這一方面的方法包括對患有癌癥的受試者施用有效量的本發明的組合物以治療該受試者的步驟。在一方面本發明提供了治療患有癌癥的受試者的方法。根據本發明這一方面的方法包括對患有癌癥的受試者施用有效量的本發明的組合物和抗癌治療以治療該受試者的步驟。在一方面本發明提供了本發明的免疫刺激性ORN在制備治療受試者的癌癥的藥物中的應用。在一方面本發明提供了可用于治療癌癥的組合物。根據此方面的組合物包括本發明的免疫刺激性ORN和癌癥藥物。患有癌癥的受試者是具有可檢測的癌性細胞的受試者。所述癌癥可以是惡性或非惡性癌癥。本文所用"癌癥"指影響身體器官和系統的正常功能化的不受控細胞生長。從其起源位置和起始生命器官遷移的癌癥能通過受影響器官的功能化惡化而最終導致受試者的死亡。造血癌癥，如白血病，能勝過受試者內的正常造血對應體，從而導致最終造成死亡的造血衰竭(形式為貧血、血小板減少和中性粒細胞減少)。轉移性病灶是與原發性腫瘤位置不同的癌細胞區域。在診斷原發性腫瘤塊時，可監測該受試者的腫瘤轉移的存在。腫瘤轉移最常通過除監測特異性癥狀外的單一或組合使用磁共振成像(MRI)掃描、計算機斷層(CT)掃描、血液和血小板計數、肝功能檢查、胸X射線和骨掃描來才企測。癌癥包括但不限于基底細胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦癌和中樞神經系統(CNS)癌、乳腺癌、宮頸癌、絨毛膜癌、結腸癌和直腸癌、結締組織癌、消化系統癌、子宮內膜癌、食管癌、眼癌、頭頸癌、表皮內腫瘤、腎癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌(例如小細胞和非小細胞)、淋巴癌包括霍奇金和非霍奇金淋巴癌、黑色素瘤、骨髓瘤、神經母細胞瘤、口腔癌(例如，唇、舌、口和咽)、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、直腸癌、呼吸系統癌、肉瘤、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、曱狀腺癌、子宮癌、泌尿系統癌以及其它癌、Ai癌和肉瘤。本發明的免疫刺激性組合物還可與抗癌治療聯合施用。抗癌治療包括癌癥藥物、放射和外科手術。如本文所用，"癌癥藥物，，指以治療癌癥為目的而對受試者施用的試劑。如本文所用，"治療癌癥，，包括防止癌癥發展、減少癌癥癥狀和/或抑制已確立癌癥的生長。在其它方面，癌癥藥物在發展癌癥的風險下以降低發展所述癌癥風險為目的而對受試者施用。本文中說明了用于癌癥治療的不同類型藥物。出于本說明書的目的，癌癥藥物分為化療劑、免疫治療劑、癌癥疫苗、激素治療和生物反應調節劑。化療劑可選自但不限于曱氨蝶呤、長春新堿、阿霉素、順鉑、不含糖的氯乙基亞硝脲、5-氟尿嘧啶、絲裂霉素C、博萊霉素、阿霉素、氮烯咪胺、紫杉醇、fragyline、MeglamineGLA、戊柔比星、卡莫司汀/poliferposan、MMI270、BAY12-9566、RAS法尼基轉移酶抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑、MMP、MTA/LY231514、LY264618/洛美曲索、Glamolec、CI-994、TNP-470、和美新/托泊替康、PKC412、伐司樸達/PSC833、米托蒽醌、Metaret/蘇拉明、巴馬司他、E7070、BCH-4556、CS-682、9畫AC、AG3340、AG3433、Incel/VX-710、VX國853、ZD0101、IS腿、ODN698、TA2516/Marmistat、BB2516/Marmistat、CDP845、D2163、PD183805、DX8951f、LemonalDP2202、FK317、Picibanil/OK-432、AD32/戊柔比星、美他特龍/鍶衍生物、泰道/替莫唑胺、Evacet/阿霉素脂質體、Yewtaxan/太平洋紫杉醇、紫杉醇/太平洋紫杉醇、希羅達/卡培他濱、氟鐵龍/去氧氟尿苷、Cyclopax/口服太平洋紫杉醇、口服紫杉烷、SPU-077/順鉑、HMR1275/Flavopirido1、CP-358(774)/EGFR、CP-609(754)/RAS癌基因抑制劑、BMS-182751/口服柏、UFT(替加氟/尿嘧啶)、左旋咪唑、乙炔尿嘧啶/776C85/5FU增強劑、開普拓/左S走口米峻、CamptosarAf尹立替康、Tumodex/Ralitrexed、Leustatin/克拉屈濱、Paxex/太平洋紫杉醇、Doxil/阿霉素脂質體、Caelyx/阿霉素脂質體、Fludara/氟達拉濱、泛艾霉素/表柔比星、脂質體阿糖胞苷、ZD1839、LU79553/二萘二甲酰亞胺、LU103793/海兔毒素、Caetyx/阿霉素脂質體、Gemzar/吉西他濱、ZD0473/Anormed、YM116、碘粒子、CDK4和CDK2抑制劑、PARP抑制劑、D4809/Dexifosamide、Ifes/Mesnex/異環磷酰胺、Vumon/替尼泊苷、卡鉑、Plantinol/順鉑、Vepeside/足葉乙戒、ZD9331、Taxotere/多烯紫杉醇、鳥噤呤阿拉伯糖65苷前藥、Taxane類似物、亞硝脲、烷基化劑如melphelan和環磷酰胺、氨魯米特、天冬酰胺酶、白消安、卡鉑、苯丁酸氮芥、鹽酸阿糖胞苷、更生霉素、鹽酸更生霉素、雌二醇氮芥磷酸鈉、足葉乙戒(VP16-213)、氟尿苷、氟尿嘧啶(5-FU)、氟他胺、羥脲(羥基脲)、異環磷酰胺、干擾素Alfa-2a、Alfa-2b、醋酸亮丙瑞林(LHRH釋放因子類似物)、洛莫司汀(CCNU)、鹽酸氮芥(氮芥)、巰基嘌呤、美司鈉、米托坦(o.p'-DDD)、鹽酸米托蒽醌HC1、奧曲肽、普卡霉素、鹽酸甲基節肼、鏈脲霉素、擰檬酸三苯氧胺、硫鳥嘌呤、塞替派、硫酸長春花堿、安吖啶(m-AMSA)、阿扎胞苷、促紅細胞生成素、六曱蜜胺(HMM)、白細胞介素2、丙脒腙(甲基-GAG、曱基乙二醛二脒腙、MGBG)、噴司他丁(2'脫氧助間型霉素)、司莫司汀(曱基-CCNU)、替尼泊苷(VM-26)和硫酸長春地辛。免疫治療劑可以選自但不限于3622W94、4B5、ANAAb、抗FLK-2、抗VEGF、ATRAGEN、AVASTIN(貝代單抗；Genentech)、BABS、BEC2、BEXXAR(托西莫單抗；GlaxoSmithKline)、C225、CAMPATH(阿來組單抗；GenzymeCorp.)、CEACIDE、CMA676、EMD-72000、ERBITUX(西妥昔單抗；ImCloneSystems,Inc.)、Gliomab畫H、GNI-250、HERCEPTIN(曲妥珠單抗；Genentech)、IDEC-Y2B8、ImmuRAIT-CEA、iorc5、ioregf.r3、iort6、LDP-03、LymphoCide、MDX-ll、MDX-22、MDX-210、MDX國220、MDX-260、MDX-447、MELIMMUNE-1、MELIMMUNE-2、Monopharm-C、NovoMAb-G2、Oncolym、OV103、Ovarex、Panorex、Pretarget、Quadramet、Ributaxin、RITUXAN(利妥普單抗；Genentech)、SMARTlD10Ab、SMARTABL364Ab、SMARTM195、TNT和ZENAPAX(達利珠單抗；Roche)。癌癥疫苗可選自但不限于EGF、抗獨特型癌癥疫苗、Gp75抗原、GMK黑色素瘤疫苗、MGV神經節苷脂共軛疫苗、Her2/neu、O酉ex、M-Vax、O-Vax、L-Vax、STn扁KHLTheratope、BLP25(而C隱1)、脂質體獨特型疫苗、Mdacine、肽抗原疫苗、毒素/抗原鴨茅、基于MVA的疫苗、PACIS、BCG疫苗、TA-HPV、TA-CIN、DISC-virus和ImmuCyst/TheraCys。本發明的組合物和方法可單獨使用或與可用于過敏治療的其它66試劑和方法聯合使用。在一方面本發明提供了治療具有過敏疾病狀態的受試者的方法。根據本發明這一方面的方法包括對具有過敏疾病狀態的受試者施用有效量的本發明的組合物以治療該受試者的步驟。在一方面本發明提供了治療具有過敏疾病狀態的受試者的方法。根據本發明這一方面的方法包括對具有過敏疾病狀態的受試者施用有效量的本發明的組合物和抗過壽文治療以治療該受試者的步驟。在一方面本發明提供了本發明的免疫刺激性ORN在制備治療受試者的過萄丈疾病狀態的藥物中的應用。此方面的組合物包括本發明的免疫刺激性ORN和過敏藥物。"具有過敏疾病狀態的受試者"應指正在經歷或此前已經歷過應答過敏原的過敏反應的受試者。"過敏疾病狀態"或"過敏"指對于物質(過敏原)的獲得性超敏反應。過敏疾病狀態包括但不限于濕瘆、過敏性鼻炎或鼻感冒、花粉癥、過敏性結膜炎、支氣管哞喘、蕁麻疹和食物過敏、其它特異性疾病狀態包括特異性皮炎、過敏反應、藥物過敏和血管性水腫。過敏通常是與來自特定類別的對抗過敏原的免疫球蛋白IgE的抗體的產生相關的表位疾病狀態(episodiccondition).對普通氣源性過敏原的由IgE介導的應答的發展也是表明對哮喘發展的易感性的因素。如果過敏原遭遇結合到嗜堿細胞(在血液中循環)或肥大細胞(分散在固體組織中)表面的IgEFc受體(FcsR)的特異性IgE，所述細胞被激活，造成介導劑如組胺、5-羥色胺和脂質介導劑的產生和釋放。當組織敏化的IgE類免疫球蛋白與外來過敏原反應時，過敏反應發生。所述IgE抗體與肥大細胞和/或嗜堿細胞結合，然后這些專門化化學介導劑(血管活性胺)。組胺、血小板活化因子、花生四烯酸代謝物和5-羥色胺是人過敏反應的最著名的介導劑。組胺和其它血管活性胺一般儲存于肥大細胞和嗜堿性白細胞中。所述肥大細胞分散于動物組織中，而所述嗜堿細胞循環在血管系統中。這些細胞在該細胞內制造并儲存組胺，除非發生涉及IgE結合的專門化事件序列來引發其釋放。67過敏反應的癥狀各異，取決于所述IgE與所述抗原在體內反應的位置。如果所迷反應沿呼吸道上皮發生，所述癥狀通常為打噴咬、咳嗽和哮喘反應。如果所述反應在消化道內發生，如食物過敏的情形，通常為腹痛和腹瀉。系統性過敏反應，例如在蜂蜇或對過敏受試者施用青霉素后，可能很嚴重且經常危及生命。過敏與至少部分由Th2細胞因子IL-4和IL-5表征的Th2型免疫應答以及抗體同位型轉換為IgE有關。Thl和Th2免疫應答是互相反調節的，以致將免疫應答傾向Thl型免疫應答能防止或減輕Th2型免疫應答(包括過敏)。因此，本發明的免疫剌激性ORN本身可用于治療具有過敏疾病狀態的受試者，因為所述免疫刺激性ORN可以將免疫應答傾向Thl型免疫應答。可替代地或另外，本發明的免疫刺激性ORN能與過敏原組合用于治療具有過敏疾病狀態的受試者。本發明的免疫刺激性組合物還可與抗過敏治療聯合施用。治療或預防過敏的傳統方法涉及了過敏藥物或脫敏治療。治療或預防過敏的某些進化治療包括中和性抗IgE抗體的使用。阻斷所述過敏反應的化學介導劑的效果的抗組胺和其它藥物幫助調節過敏癥狀的嚴重性但不能預防所述過敏反應且對后續過敏響應沒有效果。脫敏治療通常通過皮下注射經給以小劑量過敏原以便誘導對抗該過敏原的IgG型應答。據信IgG抗體的存在幫助中和了IgE抗體誘導所產生的介導劑。最初，對受試者用非常低劑量的所述過敏原治療以避免誘導嚴重反應然后緩慢增加劑量。這類治療因對所述受試者施用了造成所述過敏應答的化合物且可能出現嚴重過每文反應而有危險。過敏藥物包括但不限于抗組胺類、糖皮質激素類和前列腺素誘導劑。抗組胺類是中和由肥大細胞或嗜堿細胞釋放的組胺的化合物。這些化合物熟知于本領域內，且常用于過敏治療。抗組胺類包括但不限于阿4戈斯汀(acrivastine)、阿司。米唾(astemizole)、阿々L他定(azatadine)、斯汀(azelastine)、(betatastine)、溴苯那壽丈(brompheniramine)、布克力口秦(buclizine)、西替利嗪(cetirizine)、西替利。秦類似物、樸爾敏、氯馬斯汀(clemastine)、(CS560)、賽庚咬(cyproheptadine)、地氯雷他定(desloratadine)、右氯苯刃卩壽文(dexchlorpheniramine)、依巴其斤^T(ebastine)、依匹斯汀(epinastine)、非索非那定(fexofenadine)、HSR609、羥口秦(hydroxyzine)、左卡巴斯汀(levocabastine)、氯雷他定(loratadine)、東荒菪石咸(methscopolamine)、咪哇斯汀(mizolastine)、去曱阿斯咪哇(norastemizole)、苯茚胺(phenindamine)、異丙口秦(promethazine)、p比4立明(pyrilamine)、特非那定(terfenadine)和曲尼司特(tranilast)。糖皮質激素類包括但不限于甲基強的松龍(methylprednisolone)、強的+〉龍(prednisolone)、；發尼(prednisone)、倍氣米+〉(beclomethasone)、布地奈德(budesonide)、地塞米松(dexamethasone)、氟尼縮松(flunisolide)、丙酸氟替卡松(fluticasonepropionate)和去炎松(triamcinolone^盡管地塞米松是有抗炎作用的糖皮質激素，因為它被高度吸收且在有效劑量下具有長期抑制副作用故此它不常規化用于過敏或以吸入形式用于哞喘的治療。然而，地塞米松可根據本發明用于治療過敏或哮喘，因為當將它與本發明的組合物聯合施用時可以將其以低劑量施用以降低所述副作用。與糖皮質激素使用有關的某些副作用包括咳嗽、發聲困難、口瘡(念珠菌病)，以及在高劑量時的系統性效果諸如腎上腺抑制、葡萄糖耐受不良、骨質疏松、無菌性骨壞死、白內障形成、生長抑制、肌肉無力、皮膚細化和易于瘀傷。Barnes&Peterson(1993)爿wWevias;^￡fc148:S1-S26;和KamadaAK等，(1996)血CWfCoreMed153:1739-48。本發明的組合物和方法可以單獨使用或與可用于哮喘治療的其它試劑和方法聯合使用。在一方面本發明提供了治療患有哮喘的受試者的方法。根據本發明這一方面的方法包括對患有哮喘的受試者施用有效量的本發明的組合物以治療該受試者的步驟。在一方面本發明提供了治療患有哞喘的受試者的方法。根據本發明這一方面的方法包括對患有哮喘的受試者施用有效量的本發明的組合物和抗哞喘治療以治療該受試者的步驟。在一方面本發明提供了本發明的免疫刺激性ORN在制備治療受試者的哮喘的藥物中的應用。在一方面本發明提供了一種可用于哮喘治療的組合物。根據此方面的組合物包括本發明的免疫刺激性ORN和哮喘藥物。本文所用"哮喘，，指特征為氣道發炎和狹窄以及氣道對吸入劑反應性提高的呼吸系統障礙。哮喘往往盡管不是專有地與特應性情況或過敏疾病狀態有關。嗜喘癥狀包括氣流阻塞引起的喘氣、氣促、胸悶和咳嗽的反復發作。與哞喘相關的氣道炎癥可通過對一系列生理學變化的觀察來檢查，所述生理學變化諸如氣道上皮的剝蝕、基底膜下膠原沉積、水腫、肥大細胞激活、炎癥細胞浸潤包括中性粒細胞、嗜酸細胞和淋巴細胞。作為氣道炎癥的結果，哞喘患者常常體驗氣道超反應性、氣流限制、呼吸道癥狀和疾病慢性化。氣流限制包括急性支氣管收縮、氣道水腫、粘膜堵塞形成和氣道重塑，常常導致支氣管阻塞的特征在某些哞喘情形中，可能出現亞基底膜纖維化，導致肺功能持續性異常。過去幾年的研究揭示了在炎癥細胞、介導劑和其它位于氣道內的細胞核組織的復雜相互作用很可能造成譯喘。肥大細胞、嗜酸細胞、上皮細胞、巨噬細胞和活化T細胞都在與哮喘相關的炎癥過程中扮演重要角色。DjukanovicR等，(1990)爿wievia/^￡fe142:434-457.據信這些細胞能通過預先形成和新合成的介導劑的分泌影響氣道功能，所述介導劑能直接或間接在局部組織上起作用。還認識到的是T淋巴細胞(Th2)亞群在通過釋放選擇性細胞因子并造成疾病慢性化來調節氣道內過敏炎癥中扮演重要角色。RobinsonDS等，(1992)A^"gZ/MW326:298-304.哮喘是在發展的不同時期出現的復雜障礙且可基于癥狀程度分為急性、亞急性或慢性。急性炎癥應答與氣道內早期細胞補充相關。亞急性炎癥應答涉及造成更持續的炎癥情況的細胞補充以及本地細胞激活。慢性炎癥應答特征為可能在氣道內造成永久異常的持續性細胞損害水平和進行中修復進程。"患有哮喘的受試者，，是患有特征為氣道炎癥和狹窄以及氣道對吸入劑反應性增加的呼吸系統障礙的受試者。與哮喘的引發有關的因素包括但不限于過敏原、低溫、運動、病毒感染和S02。如上所述，哞喘可以與至少部分由Th2細胞因子IL-4和IL-5表征的Th2型免疫應答以及抗體同位型轉換為IgE相關。Thl和Th2免疫應答是互相反調節的，以致將免疫應答傾向Thl型免疫應答能防止或減輕Th2型免疫應答包括過敏。因此，本發明的經修飾的寡核糖核苷酸類似物本身可用于治療患有哮喘的受試者，因為所述類似物可以將免疫應答傾向70Thl型免疫應答。替代性地或另外，本發明的修飾寡核糖核苷酸類似物能與過敏原組合用于治療患有哮喘的受試者。本發明的免疫刺激性組合物還可與啤喘治療聯合施用。治療或預防哮喘的傳統方法涉及抗過敏治療(如上所述)和許多其它試劑包括吸入劑的使用。用于哮喘治療的藥物通常分為兩類，即，快速緩解藥物和長期控制藥物。嗜喘患者每日服用長期控制藥物以達到和保持對持續性哮喘的控制。長期控制藥物包括抗炎劑，如糖皮質激素類、色甘酸鈉和奈多羅米(nedocromil);長效支氣管擴張劑，如長效p2激動劑和甲基黃嘌呤類；以及白三烯修飾劑。快速緩解藥物包括短效(32激動劑、抗膽堿能類和系統性糖皮質激素類。這些藥物每種都與許多副作用相關且沒有任何所述藥物能單獨或組合來預防或治愈譯喘。哮喘藥物包括但不限于PDE-4抑制劑、支氣管擴張劑/p2激動劑、K+通道開放劑、VLA-4拮抗劑、烯丙異戊酰脲拮抗劑、血栓素A2(TXA2)合成抑制劑、黃嘌呤、花生四烯酸拮抗劑、5脂氧合酶抑制劑、TXA2受體拮抗劑、TXA2拮抗劑、5-lipox激活蛋白抑制劑和蛋白酶抑制劑。支氣管擴張劑/P2激動劑是造成支氣管擴張或平滑肌松弛的一類化合物。支氣管擴張劑/(32激動劑包括但不限于沙美特羅(salmeterol)、沙丁胺醇(salbutamol)、沙丁胺醇(albuterol)、特布他林(terbutaline),D2522/福莫特羅(formotero1)、非諾特羅(fenoterol)、比托特羅(bitolterol)、p比布特羅甲基黃噤呤類(pirbuterolmethylxanthines)和奧西那林(orciprenaline)。長效(32激動劑和支氣管擴張劑是用于除所述抗炎治療以外長期預防癥狀的化合物。長效(32激動劑包括但不限于沙美特羅(salmeterol)和沙丁胺醇(albuterol)。這些化合物經常與糖皮質激素類組合使用且通常不在無任何炎癥治療時使用。它們與副作用諸如心動過速、骨骼肌戰栗、血鉀過低和過量時QTc間隙的延長有關。甲基黃嗓呤類包括例如茶堿用于癥狀的長期控制和預防。這些化合物造成磷酸二酯酶抑制和可能地腺苷拮抗導致的支氣管擴張。劑量相關的急性毒性是這類化合物的重要問題。結果，必須監測常規血清濃度以解釋因代謝清除率的個體差異產生的毒性和窄治療范圍。副作用包括心動過速、快速性心律失常、惡心嘔吐、中樞神經系統刺激、頭痛、癲癇發作、嘔血、血糖過高和血鉀過低。短效p2激動劑包括但不限于沙丁胺醇(albuterol)、比托特羅(bitolterol)、吡布特羅(pirbuterol)和特布他林(terbutaline)。與短效|32激動劑施用有關的某些不良影響包括心動過速、骨骼肌戰栗、血鉀過低、乳酸增多、頭痛和血糖過高。色氨酸鈉和奈多羅米(nedocromil)用作主要用于預防由運動或過敏原？!發過敏癥狀引發的津喘癥狀的長效控制藥物。據信這類化合物可通過干預氯離子通道功能來阻斷與過敏原的早期和晚期反應。它們還穩定肥大細胞膜并抑制來自嗜酸性白細胞和上皮細胞的介導劑的激活與釋放。通常需要四到六周的施用周期以達到最大效果。抗膽堿能類通常用于急性支氣管痙攣的緩解。據信這些化合物可通過毒蕈堿受體的竟爭性抑制來發揮功能。抗膽堿能類包括但不限于異丙托溴胺。這些化合物僅反轉膽堿能介導的支氣管痙攣但不修飾任何對抗原的反應。副作用包括口干和呼吸道分泌物、某些個體喘氣增加和如果噴入眼內時的^L覺沖莫糊。本發明的免疫刺激性ORN還可用于治療氣道重塑。氣道重塑因氣道內平滑肌細胞增殖和/或粘膜下增厚造成，且最終造成氣道狹窄導致氣流受限。本發明的免疫刺激性ORN可防止進一步重塑，甚至可能減少所述重塑過程造成的組織積累。本發明的免疫刺激性ORN還可用于改善樹突狀細胞的存活、分化、激活和成熟。所述免疫刺激寡核糖核苷酸具有促進樹突狀細胞的細胞存活、分化、激活和成熟的獨特能力。本發明的免疫剌激性ORN還增加了自然殺傷細胞溶解活性和抗體依賴的細胞毒性(ADCC)。使用免疫刺激性ORN與對細胞靶點諸如癌細胞特異的抗體的組合可進行ADCC。當對受試者施用與所述抗體聯合的所述免疫刺激性ORN,該受試者的免疫系統被誘導來殺滅所述對細胞耙點特異的許多這類抗體已在本領域內說明且已商品化。在一個實施方式中，所述抗體是IgG抗體。在某些方面，本發明提供了一種增強表位擴展的方法。本文所用"表位擴展，，指導向對抗自體或外來蛋白的從初始集中的顯性表位特異性免疫應答到該蛋白上(分子內擴展)或其它蛋白(分子間擴展)上的亞顯性和/或隱性表位的表位特異性多樣化。表位擴展導致多重表位特異性免疫應答。免疫應答由初始的放大階段和后期的向下調節階段組成，所述初始放大階段可能是有害的(如在自體免疫性疾病中)或有益的(如在疫苗接種中)，且所述后期的向下調節階段使免疫系統回復到體內平衡并產生記憶。表位擴展可能在兩個階段都是重要成分。在腫瘤環境下的表位擴展增強使得受試者的免疫系統可以確定其它的靶向表位，所述靶向表位在開始時并未被應答初始治療方案的免疫系統所識別，同時降低在腫瘤群中逃逸變異體的可能性并因此影響疾病進程。本發明的寡核糖核苷酸可用于促進在治療性受益適應癥如癌癥、病毒和細菌感染及過敏中的表位擴展。一個實施方式中的方法包括對受試者施用包含抗原和佐劑的疫苗并隨后對該受試者施用至少兩劑有效量的本發明的免疫刺激性ORN以誘導多重表位特異性免疫應答的步驟。一個實施方式中的方法包括對受試者施用包含癌抗原和佐劑的疫苗并隨后對該受試者施用至少兩劑有效量的本發明的免疫刺激性ORN以誘導多重表位特異性免疫應答的步驟。一個實施方式中的方法涉及應用下述治療方案該方案使免疫系統抗原暴露于受試者，隨后至少兩次施用本發明的免疫刺激性寡核糖核苷酸以誘導多重表位特異性免疫應答，即，促進表位擴展。在不同實施方式中，所述治療方案是手術、放療、化療、其它癌癥藥物、疫苗或癌癥疫苗。所述治療方案除后續免疫刺激劑治療外可與免疫刺激劑聯合施行。當所述治療方案為疫苗時，它可與佐劑聯合施用。所述疫苗與所述佐劑的組合可以是混合物或分開施用，即注射(即相同引流區域)。施用不必為同時。如果使用非同時注射，時間選擇可能包括在所述疫苗配方之前預先注射所述佐劑。當所述治療方案施行后，開始免疫刺激性單一治療。最優化頻率、周期和施用位點將取決于目標和其它因素，但可以是例如在六個月至兩年的時間段中每月或每兩個月施用。另一種可選方式，施用可以是每曰、每周或每兩周的，或施用可以是每天、每周或每月多次。在某些情形中，施用的持續時間可取決于治療的療程，例如其可在一周、73一月、一年或數年后結束。在其它情形中，所述單一治療(monotherapy)可以是連續性的，如使用靜脈滴注。免疫刺激劑可施用于目標的普通引流區域。對于在治療中應用，不同劑量對于受試者的治療可能是必要的，并且取決于化合物的活性、施用方式、免疫作用的目的(即預防性或治療性)、病癥的特性和嚴重性、受試者的年齡和體重。給定劑量的施用可通過以獨立劑量單元或幾個較小劑量單元的形式單一施用。以一定周或一定月的間隔分開的多劑量施用對提升抗原特異性免疫應答是常用的。結合本文提供的教導，通過從各種活性化合物中選擇和衡量諸如效力、相對生物利用度、患者體重、不良副效果的嚴重性和施用的優選模式，可以設計有效的預防性或治療性治療方案，所述治療方案不造成實質性毒性然而對治療具體受試者完全有效。對任何具體應用的有效量可取決于諸如待治療的疾病或疾病狀態、所施用的具體治療劑、受試者的體形、或者疾病或疾病狀態的嚴重性的因素而變化。本領域的普通技術人員能經驗地確定特定核酸和/或其它治療劑的有效量而不必進行過多實驗。本文所述化合物的受試者劑量典型地是在約0.1(ig-lO,OOOmg范圍內，更典型地是約1(ig/日-8000mg，最典型地是10mg-100mg。以受試者體重而言，典型劑量的范圍是約0.1ng-20mg/kg/周(通常可每周給予一劑，或分成兩劑或多劑分開數日給予)，更典型地是約0.1-10mg/kg/周，而最典型地是約1-5mg/kg/周。含核酸和/或其它化合物的藥物組合物可通過任何適當的藥物施用途徑來施用。有多種施用途徑可用。所選的具體模式當然將取決于具體試劑或所選試劑、待治療的具體疾病狀態和治療功效所需的劑量。一般而言，本發明的方法可使用醫學可用的任何施用模式來實現，所述醫學可用的任何施用模式指產生有效水平的免疫應答而不造成無法接受的臨床性反效果的任何模式。本文討論了優選的施用模式。為用于治療中，有效量的核酸和/或其它治療劑可通過將所述試劑輸送到所需表面例如粘膜表面和系統性表面的任何模式對受試者施用。本發明的藥物組合物的施用可通過本領域熟練技術人員已知的方法完成。施用途徑包括但不限于口服、腸胃外、靜脈內、月幾肉內、腹膜內、經鼻、舌下、氣管內、吸入、皮下、眼、陰道和直腸。對于治療或預防哮喘或過敏，所述化合物優選的是被吸入、吞咽或通過系統性途徑施用。系統性途徑包括口服和腸胃外。吸入藥物在某些實施方式中(主要在哮喘患者中)因其直接輸送到作為炎癥位點的肺而優選。幾類裝置常用于吸入施用。這些裝置類型包括計量吸入器(MDI)、呼吸引發型MDI、干粉吸入器(DPI)、與MDI組合的分離/存儲藥盒(spacet/holdingchamber)、以及霧化器。本發明的治療劑可以在媒介物的幫助下輸送到特定組織、細胞類型或免疫系統或上述兩者。從最廣義而言，媒介物是能協助組合物到目標細胞的轉移的任何運載器。媒介物通常將所述免疫刺激性核酸、抗體、抗原和/或對病癥具有特異性藥物輸送到目標細胞，同時與在不存在媒介物的情況下將會導致的降解程度相比具有降低的降解。一般而言，可用于本發明的媒介物(vector)分為兩類生物媒介物和化學/物理媒介物。生物媒介物和化學/物理媒介物可用在本發明的治療劑的輸送和/或攝取中。大多數生物媒介物用于核酸的輸送，這對免疫刺激核酸治療劑或包含免疫刺激核酸的治療劑的輸送是最合適的。除本文討論的生物媒介物外，化學/物理媒介物可用來輸送包括免疫刺激核酸、抗體、抗原和對病癥具有特異性藥物的治療劑。如本文所用的，化學/物理J某介物指并非由細菌來源或病毒來源所衍生的、能夠輸送所述核酸和/或其它藥物的天然或合成分子。本發明優選的化學/物理媒介物為膠體分散體系。膠體分散體系包括脂質體系，所述脂質體系包括水包油乳液、膠束、混合膠束和脂質體。本發明優選的膠體體系是脂質體。脂質體是可用作體內或體外輸送載劑的人工膜容器。據顯示，尺寸在0.2-4.0iam范圍內的大多層嚢泡(LUV)能封裝大分子。RNA、DNA和完整病毒粒子可以被封裝在水相內部，并以生物活性形式輸送到細胞。Fraley等，(1981)7>e"A所0c/7ew6:77。脂質體可以通過將所述脂質體與特定配體如單克隆抗體、糖、糖脂或蛋白結合來靶向特定組織。可用于將脂質體靶向免疫細胞的配體75包括但不限于與免疫細胞特異性受體和分子相互作用的完整分子或片段，諸如與免疫細胞的細胞表面標記相互作用的抗體。這類配體可易于通過本領域技術人員熟悉的結合測試來鑒定。在另一實施方式中，所述脂質體可通過自己與上文討論的免疫治療抗體之一結合來靶向癌癥。另外，所述媒介物可與核目標肽結合，將所述媒介物導向寄主細胞核。市售的轉染用脂配方來自QIAGEN,例如EFFECTENETM(帶特定DNA縮合增強子的非脂質體脂)和SUPERFECTTM(新型樹枝狀分子技術)。商品化脂質體來自GibcoBRL，例如，由陽離子脂質類如N-[l-(2，3-二油酰氧基)-丙基]-N，N，N-三曱基氯化銨(DOTMA)和二甲基二(十八烷基)溴化銨(DDAB)形成的LIPOFECTINtm和LIPOFECTACEtm。制備脂質體的方法熟知于本領域內，且已在許多出版物中說明。在GregoriadisG(1985)7>e/WsB/o&c/wo/3:235-241中也對脂質體進行了綜述。某些陽離子脂質類，具體包括N-[l-(2,3二油酰氧基)-丙基]-N,N,N-三曱基(曱硫酸)銨(DOTAP),似乎當與本發明的經修飾的寡核糖核苷酸類似物混合時尤其有優勢。在一個實施方式中，所述媒介物是適于植入或施用到哺乳動物受體的生物相容性微粒或植入體。在PCT國際申請第PCT/US/03307號(/>開號W095/24929,標題為"PolymericGeneDeliverySystem")中說明了可根據此方法使用的示例性可生物侵蝕的植入體。PCT/US/03307說明了用于在適當啟動子控制下包含外源性基因的生物相容的、優選可生物降解的高分子基質。所述高分子基質優選具有微粒如微球(其中所述核酸和/或其它治療劑徹底分散在固體高分子基質中)或微膠嚢(其中所述核酸和/或其它治療劑儲存在高分子外殼的核中)的形式。用于包含所述治療劑的高分子基質的其它形式包括薄膜、涂層、凝膠、植入體和支架。選擇所述高分子基質裝置的尺寸和組成，以便在向其中引入所述基質的組織內得到有利的釋放動力學。另外所述高分子基質的尺寸可根據待用的輸送方法來選擇，所述待用的輸送方法典型地是注射到組織內或通過氣溶膠將懸浮液施用到鼻部和/或肺部。當使用氣溶膠途徑時，優選所述高分子基質與所述核酸和/或治療劑包含在表面活性劑媒介物內。所述材料形成，以便在當所述基質施用到受損的鼻表面和/或肺表面時進一步增加輸送有效性。所述基質組合物也可選擇為不降解而是通過擴散在延長的時間周期中釋放。在某些優選實施方式中，所述核酸通過植入體施用給受試者，而所述其它治療劑急性施用。適用于輸送如口腔輸送或粘膜輸送的生物相容性微球公開于Chickering等，(1996)5/ofec/52:96-101和MathiowitzE等，(1997)A^fww386:410-414及PCT專利申請WO97/03702中。非生物可降解和生物可降解的高分子基質都可用來將所述核酸和/或治療劑輸送給受試者。優選生物相容性基質。這些高分子可以是天然或合成高分子。所述高分子根據釋放所需要的時間周期來選擇，所述時間周期通常為數小時至一年或更長。通常最合適的是經過從數小時到三至十二個月的時間來釋放，尤其是對于所述核酸劑。所述高分子任選地具有能吸收多達其重量90%的水的水凝膠的形式，且還任選地與多價離子或其它高分子交聯。特別有利的生物粘附性高分子包括生物可侵蝕性水凝膠，其在H.S.Sawhney,C.P.PathakandJ.A.HubellinMacrawo/ecwfes1,(1993)26:581-587進行了說明，本文引用了其教導。它們包括聚透明質酸、酪蛋白、明膠、明膠蛋白、聚酸酐、聚丙烯酸、藻酸鹽、殼聚糖、聚甲基丙烯酸曱酯、聚曱基丙烯酸乙酯、聚曱基丙烯酸丁酯、聚曱基丙烯酸異丁酯、聚甲基丙烯酸己酯、聚曱基丙烯酸異癸酯、聚甲基丙烯酸十二烷酯、聚曱基丙烯酸苯酯、聚丙烯酸曱酯、聚丙烯酸異丙酯、聚丙烯酸異丁酯和聚丙烯酸十八烷酯。如果所述治療劑是核酸，則壓實劑(compaction)的使用也是有利的。壓實劑還能單獨使用或與生物載體或化學/物理載體組合使用。本文所用"壓實劑"指中和核酸上的負電荷并從而允許所述核酸壓實成為小顆粒的試劑如組胺。所述核酸的壓實有助于目標細胞對所述核酸的攝取。所述壓實劑可以單獨使用，即以能更有效地被細胞攝取的形式輸送核酸，或更優選的是與一個或多個上述載體組合使用。能用于協助核酸的攝取的其它示例性組合物包括磷酸鈣和細胞77內輸送的其它化學介導劑、微注射組合物、電穿孔和同源重組組合物(例如，用于將核酸整合到目標細胞染色體內部的預選位置)。所述化合物可以單獨施用(例如，在生理鹽水或緩沖液中)或使用本領域內已知的任何輸送載劑施用。例如，說明了下列輸送載劑螺旋體、Emulsomes、ISCOM、活細菌載體(例如，沙門氏菌(Sa/wo"e〃a)、大腸4干菌、卡介苗(Bcrc〃/w51Ca/me"e-Gwe'n力)、志、賀菌(57z/ge//a)、乳酸桿菌(丄flcto6a"7/w))、活病毒載體(例如，痘苗、腺病毒、單純皰瘆病毒)、微球、核酸疫苗、高分子(例如，羧曱基纖維素、殼聚糖)、高分子環、蛋白體、氟化鈉、轉基因植物。在本發明的某些實施方式中所述輸送載劑是脂質體、pH敏感性脂質體(例如，OctoPlus)、膜融合性脂質體、類脂嚢泡、脂復合物、多聚復合物、脂多聚復合物、油包水(W/0)乳液、水包油(o/w)乳液、水包油包水(w/o/w)多重乳液、微乳液、納米乳液、膠束、樹枝狀大分子、病毒顆粒、類病毒顆粒、高分子納米顆粒如納米球或納米膠嚢、高分子微粒如微球或微膠嚢。本發明的配方在可藥用溶液中施用，所述溶液可常規性地含有可藥用濃度的鹽、緩沖劑、防腐劑、相容性載體、佐劑和任選的其它治療成分。在某些實施方式中，所述組合物是無菌的。術語可藥用載體是指適合對人或其它脊推動物施用的一個或多個相容性固體或液體填料、稀釋劑或封裝物質。術語載體指與活性成分組合以促進應用的天然或合成的有機或無機成分。藥物組合物的成分還能與本發明的化合物以沒有會明顯損害所需藥用效率的相互作用的方式4皮此共混。對于口服施用，所述化合物(即，核酸、抗原、抗體和其它治療劑)可以通過將所述活性化合物與本領域內熟知的可藥用載體組合而容易地配制。這些載體使本發明的化合物能被配制為片劑、丸劑、糖丸劑、膠嚢劑、液劑、凝膠劑、糖漿劑、漿料劑、懸浮劑等而#支待治療的受試者口服吞咽。用于口服的藥物制劑可作為固體賦形劑而獲得，任選地研磨所得混合物，在需要時加入適當助劑，其后加工所述顆粒混合物以獲得片劑或糖丸劑的片核(core)。適當賦形劑具體為填料，如糖類，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制劑，如例如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、土豆淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基曱基纖維素、羧曱基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解劑如交聯聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或者海藻酸或其鹽如海藻酸鈉。任選地，還可將所述口服制劑在生理鹽水或緩沖液中配制以中和內部酸性環境，或者所述口服制劑可以不帶任何載體使用。為糖丸劑的片核提供了適當的包衣。出于此目的可以使用濃縮糖溶液，所述濃縮糖溶液可選地含有阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦以及適當有機溶劑或溶劑混合物。可以在所述片劑或糖丸劑的包衣中添加染料或色素以鑒定或表征活性化合物劑量的不同組合。可口服使用的藥物制劑包括由明膠制成的推入配合膠嚢以及由明膠和增塑劑如甘油或山梨醇制成的密封軟膠嚢。所述推入配合膠嚢可含有與填料如乳糖、粘合劑如淀粉和/或潤滑劑如滑石粉或硬脂酸鎂以及任選的穩定劑共混的活性成分。在軟膠嚢中，所述活性化合物可以溶解或懸浮于適當液體如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇中。另外可以加入穩定劑。還可使用配制用于口服施用的微球。這類微球在本領域內已詳細定義。口服施用的所有配方都應為適用于該施用的劑量。對于經口腔施用，所述組合物可采用以傳統方式配制的片劑或鎮:劑形式。對于吸入施用，本發明所用化合物可以作為氣溶膠噴霧形式的形式而使用適當推進劑如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適當氣體從加壓包或霧化器便利地輸送。在加壓氣溶膠情況下，通過提供定量輸送閥門可確定劑量單元。用于吸入器或吹入器中的例如明膠膠嚢和藥筒可以配制為包含所述化合物和適當粉末基質如乳糖或淀粉的粉末混合物。當理想的是將所述化合物系統性輸送時，所述化合物可以配制為經注射例如團注(bolusinjection)或持續輸注的腸胃外施用。注射制劑可以與添加的防腐劑一起以單元劑量形式存在，例如在安瓿中或多劑量容器中。所述組合物可以采取這樣的形式如油性或水性載體中的懸浮液、溶液或乳液，且可以包含配制劑如懸浮劑、穩定劑和/或分散劑。腸胃外施用的藥用配方包括水溶形式的活性化合物的水溶液。另外，所述活性化合物的懸浮液可以制備成為合適的油性注射懸浮液。適當的親脂性溶劑或載體包括脂肪油如芝麻油、或合成脂肪酸酯如油酸乙酯或三酸甘油酯類、或脂質體。水性注射懸浮液可以包含增加懸浮液粘度的物質，如羥甲基纖維素鈉、山梨醇或右旋糖苷。任選地，所述懸浮液還可含有適當穩定劑或增加所述化合物溶解性的試劑以允許制備高度的濃縮溶液。另一種可選方式，所述活性化合物可以是粉末形式以在使用前與適當載劑如無菌無熱源水混合。所述化合物還可配制為直腸或陰道組合物，如例如包含傳統栓劑基質如可可脂或其它甘油酯的栓劑或保留灌腸。除上述配方外，所述化合物還可配制為儲器制劑(depotpreparation),這類長效配方可與適當高分子材料或疏水材料(例如作為可用性油中的乳液)或離子交換樹脂一起配制，或作為微溶衍生物如微溶鹽來配制。所述藥物組合物還可包含適當固相或膠凝膠相載體或賦形劑。這類載體或賦形劑的例子包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖類、淀粉類、纖維素衍生物、明膠和高分子如聚乙二醇。適當的液體或固體藥用制劑形式為，例如，吸入用水溶液或鹽水溶液、微膠嚢封裝的、螺旋體封裝的、涂覆于微觀金顆粒上、包含于脂質體中、霧化的、氣溶膠、用于在皮膚內植入的藥丸或在尖銳物體上干燥以被刮擦進入皮膚。所述藥物組合物還可包括顆粒劑、粉劑、片劑、包衣片劑、(微)膠嚢劑、栓劑、糖漿劑、乳液劑、懸浮劑、乳膏劑、滴劑或延緩釋放活性化合物的制劑，在所述制劑中通常如上所述使用了賦形劑和添加劑和/或助劑如崩解劑、粘合劑、涂布劑、膨脹劑、潤滑劑、增味劑、甜味劑或溶解化劑。所述藥物組合物適用于許多藥物輸送體系中。關于藥物輸送方法的簡短綜述，參見LangerR(1990)Scfe"ce249:1527-1533,本文通過參考？1入其內容。核酸和任選的其它治療劑和/或抗原可以以本身(純)施用或以可藥用鹽的形式施用。當用于藥物中時所述鹽應為可藥用的，但非可藥用鹽可以方便地用來制備其可藥用鹽。這類鹽包括但不限于，從下列80頁酸制備的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、馬來酸、乙酸、水楊酸、對曱苯磺酸、酒石酸、檸檬酸、曱烷磺酸、曱酸、丙二酸、琥珀酸、萘磺酸和苯磺酸。另外，這類鹽還可制備成為堿金屬鹽或堿土金屬鹽，諸如羧酸基團的鈉、鉀或4丐鹽。適當的緩沖劑包括乙酸和鹽(1-2%重量/體積)；檸檬酸和鹽(1-3%重量/體積)；硼酸和鹽(0.5-2.5%重量/體積)；和磷酸和鹽(0.8-2%重量/體積)。適當防腐劑包括苯扎氯銨(0.003-0.03%重量/體積)；氯丁醇(0.3-0.9%重量/體積)；對羥基苯曱酸類(0.01-0.25°/。重量/體積)和硫汞撒(0.004-0.02°/。重量/體積)。所述組合物可以方便地以單元劑量形式呈現，且可由藥物學領域內熟知的任何方法制備。所有方法都包括將所述化合物與包含一個或多個附加成分的載體結合的步驟。一般而言，通過將所述化合物物均勻緊密地與液體載體、磨碎的固體載體或上述兩者相結合，然后如果有必要將產品塑形來制備所述組合物。液體劑量單元為管或安瓿。固體劑量單元為片、膠嚢和栓。其它輸送體系可包括按時釋放、延遲釋放或持續釋放輸送體系。這些體系能避免所述化合物的重復施用，增加對受試者和醫生的方便。許多類型的釋放輸送體系是本領域內普通技術人員已知和可利用的。它們包括基于高分子的體系諸如聚丙交酯乙交酯、共聚草酸酯、聚己內酯、聚酯酰胺、聚原酸酯、聚羥基丁酸和聚酸酐。在例如美國專利第5,075,109號中也說明了含有藥物的上述高分子的微膠嚢。輸送體系還包括非高分子體系脂質，包括甾醇類如膽固醇、膽固醇酯和脂肪酸或中性脂肪如單、二和三甘油酯；水溶膠釋放體系；硅橡膠體系；肽基體系；蠟包衣；使用傳統粘合劑和賦形劑的壓縮片劑；部分融合植入體以及類似物。具體例子包括但不限于(a)侵蝕體系，其中本發明的試劑包含于諸如美國專利第4,452,775號、第4,675,189號和第5，736，152號中說明的基質內的形式中，和(b)擴散體系，其中活性成分從諸如美國專利第3,854,480，5，133，974and5，407，686號中說明的高分子中以受控速率滲透出。另外，可使用泵硬件輸送體系，某些被改良用于植入。通過下列實施例對本發明進行進一步說明，不應將它們視為對本發明的進一步限制。在此通過參考特地引入本申請所引用所有參考(包括文獻、已頒布專利、已公布專利申請和審理中專利申請)的全部內容。實施例材料和方法寡核糖核香酸所有ORN均購自Biospring(Frankfbrt,Germany)或由ColeyPharmaceuticalGmbH(Duesseldorf,Germany)提供，由ColeyPharmaceuticalGmbH控制其特性和純度，且經Limulus分析(BioWhittaker，Venders,Belgium)測量具有檢測不到的內毒素水平(O.lEU/mL)。將ORN分散在無菌無DNA酶和RNA酶的dH20(LifeTechnologies,Eggenstein，Germany)中并在無菌情況下儲藏和操作以防止微生物和內毒素感染。所有稀釋均使用無內毒素的Tris-EDTA或無DNA酶和RNA酶的dH20進行。ORN序列提供于下表1中。細胞純化實施例1-7和10:從UniversityofDiisseldorf(Germany)血庫獲取來自健康人捐獻者的外周血白血球衣制劑，通過在Ficoll-Hypaque(Sigma)上離心來純化PBMC。將細胞在37°C在濕潤的培養箱中在RPMI1640培養基中培養，所述RPMI1640培養基中添加了5%(體積/體積)的熱滅活人AB血清(BioWhittaker)或10%(體積/體積)熱滅活FCS、2mML-谷氨酰胺、100U/mL青霉素和100嗎/mL鏈霉素(均來自Sigma)。用BDCA-4pDC或CD14單核細胞分離試劑盒(Miltenyi)分離PDC和單核細胞。實施例8:從首次用于實驗的(naive)svl29小鼠中收集脾臟。用來自Myltenyi的磁珠(CDllc+)純化樹突狀細胞(DC)。細胞在37°C在濕潤的培養箱中培養20小時。細胞因子檢測實施例1-6和10:將PBMC以約5xl0"田胞/mL的濃度重新分散并加到96孔圓底板(250pl/孔)。PBMC與不同ORN濃度(在DOTAP存82在下50mg/mL和2pMORN)ORN—起培養并在24小時后收集培養清液(SN)。如不立即使用，在不需要前將SN在-20。C保存。實施例7:用SEQIDNO14(4pM)、SEQIDNO:28(0.5pM)或SEQIDNO12(0.5^M)在DOTAP(20pg/ml)存在下刺激人PBMC(n=2)、單核細胞或pDC24小時并測量IFN-a。實施例8:在96孔板中，純化后DC以3xl05細胞/孔接種，并由在200jiL體積中5jiM、1nM、200nM、40nM、8nM或1.6nM的與DOTAP—起配方的特定試劑激活。細胞在37°C在濕潤的培養箱中培養20小時并收集SN。使用用于IL-12p40的商品化ELISA試劑盒(來自BDBiosciences,Heidelberg,Germany)、用于IFN-y的商品化ELISA試劑盒(來自Diaclone,Besan90n,France)或用于IFN-a的用商品化抗體(PBL,NewBrunswick,NJ,USA)開發的自制ELISA試劑盒來評價SN中的細胞因子(IFN-a、IFN-y或IL-12p40)的量。為了對廣泛細胞因子和趨化因子的分析，使用來自Bio-Rad(Munich,Germany)的luminex系統和來自Biosource(Solingen,Germany)的Multiplex試劑盒進4亍復合分沖斤。體內細胞因子誘導用ORN或與DOTAP以2:l(重量/重量)比例配方的小分子對sv129小鼠(每組3只)靜脈注射。注射3小時候收集血漿并進行ELISA測試。引言本發明在某些方面涉及對通過TLR7作用的某些序列特異性RNA模體相對于作用于TLR7和TLR8(缺乏多-G端的富GU和富CU模體)或僅作用于TLR8(缺乏多-G端的富AU模體)的其它模體具免疫刺激性的發現。優選含有直接或間接與多-G模體側面連接的免疫刺激性ORN模體的ORN通過TLR7而不是TLR8刺激免疫應答。在這些不同類型ORN中，例如含有含AU重復和含GU重復但缺乏多-G端的ORN以及本發明的ORN,觀察到了IFN-a、TNF-a、IFN-丫和IL-12的產生之間的差異。有趣的是發現了本發明的免疫刺激性ORN產生強烈IFN-a應答^(旦不刺激其它類型細胞因子，例如應答TLR8刺激而誘導的細胞因子。非常令人吃驚的是，還發現在本發明中免疫刺激性ORN模體如介導TLR7/8和TLR8應答的模體在一個或多個多-G模體加入所述ORN時產生了TLR7免疫特征。實施例1:本發明的ORN誘導大量IFN-a而不誘導IL-12p40為檢測本發明的ORN的免疫刺激能力，在DOTAP存在下將PBMC與ORN—起培養。24小時后對上清液測試IFN-a(圖1A)或IL-12p40(圖1B)的存在。本發明的ORN，SEQIDNO:4、SEQIDNO:8和SEQIDNO:5(表1),誘導了極大量的TLR7相關細胞因子IFN-a但沒有對TLR8相關細胞因子IL-12p40的顯著誘導。相反，TLR7和TLR8相關應答的已知激活劑，對照SEQIDNO:l和2既誘導了大量IFN-a又誘導了大量IL-12p40。實施例2:富U序列是細胞因子產生所必需的為檢測所述ORN與所述多-G區域側面連接的區域的序列要求，檢測了含富U序列的ORN(帶磷酸二酯(PO)或硫代磷酸酯(PS)骨架)誘導細胞因子生成的能力(圖2),所述富U序列嵌于在5，和3，端處的寡(rG)片段內。帶有與G片段側面連接富U序列的ORN,SEQIDNO:6，誘導了大量IFN-a(圖2A)但沒有誘導顯著量的IL-12p40(圖2B)。序列中不帶U的ORN，SEQIDNO:3和7，沒有誘導細胞因子產生。實施例3:帶3，端的寡(dG〗片段的ORN誘導TLR7相關細胞因子為確定5'寡(rG)片段是否為誘導類TLR7免疫應答所必須，檢測了帶寡(rA)3，端(SEQIDNO:9)、寡(dG)3'端(SEQIDNO:IO)、3，膽固醇標記的(SEQIDNO:ll)和無尾(SEQIDNO:12)的ORN的誘導類TLR7細胞因子應答和類TLR8細胞因子應答的能力。如圖3所示，僅含3，寡(dG)(SEQIDNO:10)片段的ORN誘導了類TLR7免疫應答。SEQIDNO:IO誘導了大量IFN-a(圖3A)而非IFN-y(圖3B)。正對照(SEQIDNO:l)和SEQIDNO:9誘導了類TLR7/8免疫應答，然而SEQIDNO:ll和12誘導了類TLR8免疫應答。實施例4:IFN-a誘導效率與三級結構的形成相關已知寡核苷酸中的(G)n片段導致分子間集合體的產生，其中n^4。帶(G)n片段的寡核苷酸的攝取比非集合寡核苷酸高出20-40倍，并且似乎其細胞內定位也有不同。尚不理解的是這些觀察如何與生物活性相關。為確定是否集合的形成在由ORN對類TLR7免疫應答的激活中扮演重要角色，將人PBMC與SEQIDNO:10-13在有或沒有DOTAP存在下培養并測量IFN-a。SEQIDNO:13與SEQIDNO:IO序列相同但有一個7-脫氮rG中斷了所述聚dG片段。所述修飾ORN在攝取增強子存在和不存在時都造成了細胞因子生成降低。SEQIDNO:IO對IFN-a的誘導比被修飾的SEQIDNO:13要強得多，表明集合的形成在TLR7誘導的IFN-a生成中起著重要作用。實施例5:3，端寡(rG)和寡(dG)足以誘導類TLR7免疫應答為比較ORN在用不同3，標記修飾時誘導IFN-a的能力，將SEQIDNO:12的活性與具有相同序列帶3'聚rA片段(SEQIDNO:9)、3，聚dG片段(SEQIDNO:10)、3，膽固醇標記(SEQIDNO:ll)、3，三乙二醇(SEQIDNO:14)、3，吖啶標記(SEQIDNO:16)、3，熒光素標記(SEQIDNO:17)、3，生物素標記(SEQIDNO:18)、3，十六烷基甘油(SEQIDNO:20)和3，聚rG片段(SEQIDNO:21)的ORN活性比較。人PBMC與相應ORN在不存在DOTAP時培養24h并測量IFN-a。在所用的3"'務飾中，僅帶寡(rG)和寡(dG)和某種程度上帶聚rA的ORN在DOTAP不存在時導致IFN-a產生。實施例6:G殘基的數量決定IFN-a的增加相對TNF-a的減少和其它細胞因子產生為比較帶不同數量3，G殘基的ORN誘導IFN-a和TNF-a的能力，將SEQIDNO:21的活性與具有相同序列帶一個額外3，rG(SEQIDNO:23)、刪除一個3，rG(SEQIDNO:24)和刪除3個3，rG(SEQIDNO:M)比較(圖6)。還測試了帶有帶3，聚rG片段的免疫刺激模體(UUGU)的ORN(SEQIDNO:26)和有UUUU模體帶3，聚rG片段的ORN(SEQIDNO:27)。853，G的減少導致IFN-a水平的P條4氐，以致其IFN-a水平與未々務飾的ORNSEQIDNO:l相比僅稍有增強。另外，多-G尾鏈的減少也導致了TLR8相關的細胞因子TNF-a的表達，且該效果取決于聚rG數量。似乎最少2個G足以增加IFN-a并減少其它影響。實施例7:帶聚rG的ORN刺激缺乏TLR8的pDC中TLR7依賴性IFN-a的產生'為說明帶3，聚rG片段的ORN通過TLR7作用，在DOTAP(20pg/ml)存在下用SEQIDNO14(4pM)、SEQIDNO:28(0.5pM)或SEQIDNO12(0.5nM)刺激人PBMC、單核細胞或pDC24h并測量IFN-a。發現了ORN和CpGODN刺激PBMC中的IFN-a。此應答在極少表達或不表達TLR7的單核細胞中極大降低。然而，在表達TLR7的pDC中觀測到了強IFN-a產生，盡管其水平較CpGODN要低一些。然而，該水平仍然比在PBMC中所觀測到的高出5倍。實施例8:刺激小鼠樹突狀細胞中的細胞因子產生測試了本發明的ORN在小鼠樹突狀細胞(DC)中誘導細胞因子產生的能力。收集小鼠CDll+脾細胞并用ORN處理20小時。上清液用ELISA分析其IFN-a(圖8A)、IL-6(圖8B)、IL-12p40(圖8C)和IP-10(圖8D)濃度。細胞用已知TLR7/8刺激的ORN(SEQIDNO:48)與DOTAP(DO)、刺激TLR7/8的小分子R-848、膽固醇標記和3，G片l^務飾的SEQIDNO:12的ORN(分別為SEQIDNO:ll和12,都帶和不帶DOTAP)以及SEQIDNO:12帶DOTAP處理。與DOTAP配制的SEQIDNO:21和48誘導大量IFN-a。未配制的SEQIDNO:21在稍高劑量下誘導了大量IFN-a。當與DOTAP—起配制時，SEQIDNO:21和SEQIDNO:48都誘導了IL-12p40、IL-6和IP-10。這正如預期，因為小鼠沒有與人TLR8相當的已知功能性TLR8,單從小鼠TLR7誘導的細胞因子特性與在人中由TLR7/8激活劑誘導的相似。實施例9:體內細胞因子誘導測試了本發明的ORN在體內誘導細胞因子產生的能力(圖9)。對86svl29小鼠靜脈注射未修飾ORN(SEQIDNO:12)、相同序列的膽固醇修飾的ORN(SEQIDNO:ll)、有相同序列和3，多-G片段的ORN(SEQIDNO:21)或R-848。所有ORN都與DOTAP以2:1的比例(重量/重量)一起配制。對小鼠取血并用ELISA分析血清的IFN-ot(圖9A)、IL-12p40(圖9B)、IP-10(圖9C)和TNF-a(圖9D)濃度。SEQIDNO:21比膽固醇修飾或未修飾的ORN誘導IFN-a的程度更大。在更高劑量時，SEQIDNO:21誘導了IP-10且誘導了比R-848(單獨或帶DOTAP)更高水平的IFN-a。由于體內應答稍弱于體外應答，在該測試中SEQIDNO:21沒有誘導顯著量的IL-12p40或TNTF-a。注射3小時后檢測血清IP-10濃度。如圖10A所示，與DOTAP—起配制的SEQIDNO:21比SEQIDNO:21單獨誘導的IP-10程度更大。然而，如圖10B所示，SEQIDNO:21比膽固醇修飾的ORNSEQIDNO:ll誘導的IP-10稍少。實施例10:3，多-G修飾的ORN在未配制時刺激TLR7為了說明3，多-G修飾ORN在沒有配制時刺激TLR7，對SEQIDNO:48的堿模體列進行了3，變更，其中從3，端去除5個堿基并代以5個dG(SEQIDNO:42)、4dG殘基和3陽曱基-dG(SEQIDNO:43)、5dG殘基和dT(SEQIDNO:44)、5dG殘疾和倒置dT(SEQIDNO:45)、4dG殘基和3-曱基-dG且磷酸二酯核苷酸間鍵替代硫代磷酸酯鍵(SEQIDNO:46)或4dG殘基和rG殘基(SEQIDNO:47)。如圖11所示，所有未配制的修飾多-GORN誘導了比SEQIDNO:48更高水平的IFN-a，盡管達不到SEQIDNO:48+DOTAP的水平。表l:ORN和ODN序列SE序列QID#1rC*rC*rG*rU*rC*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*rG*rA*rC*rU*rC2rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU3rG*rG*rG*rG*rA*rA*rA*rA*rA*rA*rA*rA*rA*rArG*rG*rG*rG*rG*rG*rG4rG*rG*rG*rG*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG5rG*rG*rG*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG6rG*rG*rG*rGr*U*rU*rA*rU*rU*rA*rU*rU*rA*rU*rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG7rG*rG*rG*rG-rA-rA-rA-rA-rA-rA-rA-rA-rA-rA-rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG8rG*rG*rG*rG-rU-rU-rU-rU-rU-rtJ-rU-rU-rU-rU-rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG879rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*rA*rA*rA*rA*rA10rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*dG*dG*dG*dG*dG11rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU-chol12rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU13rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*G*E*G*G*G14rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU-teg16rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU-acr17rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU-fam18rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU-biot20rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU-hex21rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*rG*rG*rG*rG*rG22chol-rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU23rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*rG*rG*rG*rG*rG*rG24rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*rG*rG*rG*rG25rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*rG*rG26rU*rU*rG*rU*rG*rG*rG*rG*rG27rU*rU*rU*rU*rG*rG*rG*rG*rG28dT*dC*dG*dT*dC*dG*dT*dT*dT*dT*dC*dG*dG*dC*dG*dC*dG*dC*dG*dC*dC*dG42rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rtJ*rG*rU*rU*rG*rU*G*G*G*G*G43rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*G*G*G*G*3mG44rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*G*G*G*G*G*T45rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*G*G*G*G*G-iT46rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU-G-G-G-G-3mG47rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*G*G*G*G*rG48rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU<table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table>對本發明至少一個實施方式的幾方面"^兌明完之后，應該理解的是本領域內技術人員可以輕易發現許多變化、修正和改進。這些變化、修正和改進應該是本公開的一部分，且應該在本發明的范圍之內。于是，上述說明和附圖僅作為例子。權利要求1.一種長度為10-100個核糖核苷酸的RNA寡核苷酸，所述RNA寡核苷酸包括GG(R1)n(U)4-20(R2)mGGGG(SEQIDNO29)，其中R1和R2是核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸、間隔子或非核苷酸連接子，U是尿苷或其衍生物，G是鳥苷，其中n＝0-20，其中m＝0-20。2.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核苷酸不是5'GGGGUUUUGGGGG3'(SEQIDNO:33)或5'GGGGUUUUGGGG3'(SEQIDNO:34)。3.—種長度為10-100個核糖核苷酸的RNA寡核苷酸，所述RNA寡核苷酸包括GG(RO"U)5-2o(R2)mGGGG(SEQIDNO:30)，其中R,和R2是核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸、間隔子或非核苷酸連接子，U是尿苷或其衍生物，G是鳥苷，其中11=0-20，其中m-0-20。4.一種長度為10-100個核糖核苷酸的RNA寡核苷酸，所述RNA寡核苷酸包括GG(R^(U)4(R2)mGGGG(SEQIDNO:31)，其中R!和R2是核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸、間隔子或非核苷酸連接子，U是尿苷或其衍生物，G是鳥苷，其中11=0-20，其中m-0-20,且其中當(R0n是GG時，(R2)m不是G或m不等于0。5.—種長度為10-100個核糖核苷酸的RNA寡核苷酸，所述RNA寡核苷酸包括GG(R!)n(U)4-2o(R2)mGGGG(SEQIDNO:29),其中&和R2是核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸、間隔子或非核苷酸連接子，U是尿苷或其衍生物，G是鳥苷，其中11=0-20,其中m-0-20，且其中所述RNA寡核苷酸不包含選自下組的經修飾的磷酸酯鍵<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>式I其中Rl是氫(H)、COOR、OH、C1-C18烷基、C6H5或(CH2)m-NH-R2,其中R是H或曱基、丁基、曱氧基乙基、特戊酰氧基曱基、特戊酰氧基節基或S-特戊酰硫基乙基；R2是H、Cl-C18烷基或C2-C18酰基；且m為l-17;X是氧(O)或硫(S);且每個Nu和Nu'獨立地是核苷或核苷類似物；條件是如果R1是H，則X是S;<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>式n其中X是O或S;乂}是0H、SH、BH3、OR3或NHR3，其中R3是C1-C18烷基；每個乂2和乂3獨立地是0、S、CH2或CF2;且每個Nu和Nu'獨立地是核苷或核苷lW^;條件是(a)X、X2和X3中至少之一不是0，或X'不是OH，(b)如果X!是SH，則X、X2和X3中至少之一不是0，(c)如果X和X2是O且如果X1是OH,則X3不是S且Nu是3Wu且Nu'是5Wu'，且(d)如果Xi是BH3，則X、X^和XS中至少之一是S;和(iii)(i)和(ii)的任意組合；或者如式IIIA或式IIIB所提供的至少一個核苦酸類似物R4是H或OR，其中R是H或Cl-C18烷基；B是核堿基、修飾的核堿基或H;X和XS各自獨立地是O或S;且X4是0H、SH、甲基或NHR5，其中R5是C1-C18烷基；且每條虛線獨立地代表與相鄰單元、氫或有機基團的任選化學鍵；條件是X和X5中至少之一不是O或X4不是OH。6.如權利要求1所述的RNA寡核普酸，其中所述RNA寡核苷酸不包括5'GGGUUXJU3'模體。7.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其還包含無菌載體。8.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核苷酸與脂質載體一起配制。9.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核苷酸是單鏈的。10.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中所述寡核香酸不是siRNA或反義寡核苷酸。11.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核苷酸包括至少一個硫代磷酸酯鍵。12.如權利要求1所述的RNA寡核芬酸，其中所述RNA寡核苦酸的所有核苦酸間鍵都是硫代磷酸酯鍵。13.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核苷酸包括至少一個類磷酸二酯鍵。14.如權利要求13所述的RNA寡核普酸，其中所述類磷酸二酯鍵是磷酸二酯鍵。15.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其還包含至少一個5f-5'核苷酸間鍵。16.如權利要求15所述的RNA寡核苷酸，其中所述5'-5'核苷酸間鍵包括連接子。17.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其還包含至少一個3'-3'核苷酸間鍵。18.如權利要求17所述的RNA寡核苷酸，其中所述3'-3'核苷酸間鍵包括連接子。19.如權利要求l所述的RNA寡核苷酸，其還包含至少一個2'-0-烷基修飾的G、2-氟-阿拉伯酸修飾的G或LNA修飾的G。20.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核苷酸不包含CG二核苷酸。21.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核苷酸包含至少一個未曱基化的CpG二核芬酸。22.如權利要求1所述的RNA寡核普酸，其中所述RNA寡核香酸包含能夠形成由至少兩個相鄰的氫鍵結合的堿基對提供的二級結構的核苷、核苷類似物或者核苷與核苷類似物的組合的序列。23.如權利要求22所述的RNA寡核香酸，其中所述二級結構是莖-環二級結構。24.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中(R,)n是GG。25.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中(R2)m是GGG。26.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中(U)4-2o是UUUUU。27.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中(U)4-2o是uuuuuuu。28.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中(11)4.20是UUUUUUUUUU(SEQIDNO:32)。29.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中GG和(R^直接相連。30.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中GG和(R丄通過3'-3'鍵相連。31.如權利要求1所述的RNA寡核苷酸，其中GG和(R,)n通過間隔子相連。32.如權利要求31所述的RNA寡核苷酸，其中所述間隔子是非核苦酸間隔子。33.如權利要求32所述的RNA寡核苦酸，其中所迷非核芬酸間隔子是D-間隔子。34.如權利要求32所述的RNA寡核芬酸，其中所述非核苷酸間隔子是連接子。35.—種RNA寡核苷酸，其包括rG*rG*rG*rG*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rU*rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:4)。36.—種RNA寡核苷酸，其包括rG*rG*rG*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rU*rG*rU*rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:5)。37.—種RNA寡核苷酸，其包括rG*rG*rG*rG*rU*rU*rA*rU*rU*rA*rU*rU*rA*rU*rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:6)。38.—種RNA寡核苷酸，其包括rG*rG*rG*rG-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rU-rG*rG*rG*rG*rG*rG*rG(SEQIDNO:8)。39.—種RNA寡核苷酸，其包括rG*rU*rU*rG*rU*rG*rU*dG*dG*dG*dG*dG(SEQIDNO:10)。40.—種長度為8-100個核糖核苷酸的免疫刺激性RNA寡核苷酸，所述RNA寡核普酸包括與多-G模體連接的免疫刺激性RNA寡核苷酸模體，其中所述多-G模體對所述免疫刺激性RNA寡核苷酸模體來說是3',且所述多-G模體包含至少4個G,其中G為鳥苷。41.如權利要求40所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核苷酸不是下列之一5，GGGGUUUUGGGGG3'(SEQIDNO:33)、5'GGGGUUUUGGGG3'(SEQIDNO:34)、GUUUUUG(SEQIDNO:35)、GGGGGGGUUGUGUGGGGG(SEQIDNO:36)、CCCCUUUUGGGGG(SEQIDNO:37)，GUUUGUGUGGGG(SEQIDNO:38)、GUUGUGUGGGGG(SEQIDNO:39)、UUUUUUGGGGG(SEQIDNO:40)、UUUUUGGGGG(SEQIDNO:41)、UUUUGGGGG(SEQIDNO:19)或UUUUGGGG(SEQIDNO:15)。42.如權利要求40所述的RNA寡核苷酸，其中所述免疫刺激性RNA寡核苷酸模體是TLR8模體。43.如權利要求42所述的RNA寡核苷酸，其中所述TLR8模體是N-U-RrR2，其中N為核糖核苦酸且N不包括U,U為尿嘧，定或其衍生物，且其中R是核糖核苷酸，其中R,和R2中至少之一是腺苷(A)或胞嘧啶或其衍生物；除非N-U-RrR2包括至少兩個A,否則R不是U。44.如權利要求43所述的RNA寡核苷酸，其中N為腺苷或胞嘧啶(C)或它們的衍生物。45.如權利要求43所述的RNA寡核苷酸，其還包含第二個N-U-R,-R2模體。46.如權利要求40所述的RNA寡核苷酸，其中所述免疫刺激性RNA寡核苷酸模體是TLR7/8模體。47.如權利要求46所述的RNA寡核苷酸，其中所述TLR7/8模體包含選自下組的核糖核苷酸序列(i)5'-C/U-U-G/U-U-3'，(ii)5'畫R畫U-R-G畫Y-3',(iii)5'-G-U-U-G畫B隱3',(iv)5'-G-U-G-U-G/U-3'，和(v)5'-G/C-U畫A/C-G畫G-C-A-C陽3',其中C/U是胞嘧啶(C)或尿嘧啶(U)，G/U表示鳥。票呤(G)或U,R是嘌呤，Y是嘧啶，B是U、G或C，G/C是G或C,且A/C是腺噤呤(A)或C。48.如權利要求40所述的RNA寡核苷酸，其中所述多-G模體是6個G。49.如權利要求40所述的RNA寡核苷酸，其中所述多-G模體是7個G。50.如權利要求40所述的RNA寡核苷酸，其中所述免疫刺激性RNA寡核苷酸模體和所述多-G模體直接相連。51.如權利要求40所述的RNA寡核苷酸，其中所述免疫刺激性RNA寡核苦酸模體和所述多-G模體通過連接子而間接連接，所述連接子為間隔子、核苷酸連接子或非核苷酸連接子。52.如權利要求40所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核普酸包含至少一個硫代磷酸酯鍵。53.如權利要求40所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核苷酸的所有核芬酸間鍵都是硫代磷酸酯鍵。54.如權利要求52所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核普酸包含至少一個類磷酸二酯鍵。55.如權利要求l、3、4、5或35-40中任一項所述的RNA寡核普酸，其中所述RNA寡核苷酸與選自脂質、小分子、多肽或蛋白的分子共軛。56.如權利要求55所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核苦酸和所述分子直接共軛。57.如權利要求55所述的RNA寡核苷酸，其中所述RNA寡核香酸和所述分子通過連接子共輒。58.—種刺激IFN-oi產生的方法，所述方法包括將表達TLR7的細胞與有效刺激IFN-a產生的量的RNA寡核苷酸相接觸，所述RNA寡核苷酸包含與多-G模體連接的免疫刺激性RNA寡核香酸模體，其中所述多-G模體對所述免疫刺激性RNA寡核苷酸模體來說是3',且所述多-G模體包含至少4個G，其中G為鳥苷；且其中應答所述RNA寡核苷酸的IFN-y或IL-12的產生與背景相比未被顯著誘導。59.如權利要求57所述的方法，其中所述RNA寡核苷酸是GG(R,MU)4-2o(R2)mGGGG,其中和尺2是核糖核苷、脫氧核糖核苷、間隔子或非核苷酸連接子，其中n-0-20，其中m-0-20，U是尿苷或其衍生物，G是鳥苷。60.如權利要求58所述的方法，其中所述表達TLR7的細胞是mDC。61.如權利要求58所述的方法，其中所述表達TLR7的細胞位于體外。62.如權利要求58所述的方法，其中所述表達TLR7的細胞位于體內。63.—種治療癌癥的方法，所述方法包括對需要治療的受試者施用有效治療所述癌癥的量的權利要求1-57中任一項所述的RNA寡核苷酸。64.如權利要求63所述的方法，其還包括對所迷受試者施用化療。65.如權利要求64所述的方法，其還包括對所述受試者施用放療。66.—種治療哮喘的方法，所述方法包括對需要治療的受試者施用有效治療所述津喘的量的權利要求1-57中任一項所述的RNA寡核苷酸。67.—種治療過敏的方法，所述方法包括對需要治療的受試者施用有效治療所述過4文的量的權利要求1-57中任一項所述的RNA寡核香酸。'68.如權利要求67所述的方法，其中所述受試者患有過敏性鼻炎。69.—種調節受試者的免疫應答的方法，所述方法包括對需要調節的受試者施用有效調節所述免疫應答的量的權利要求1-57中任一項所述的RNA寡核苷酸。70.如權利要求69所述的方法，其中所述RNA寡核苷酸被輸送給所述受試者以治療所述受試者的自體免疫性疾病。71.如權利要求69所述的方法，其中所述RNA寡核苷酸被輸送給所述受試者以治療所述受試者的氣道重塑。72.如權利要求69所述的方法，其中對所述受試者施用所述RNA寡核苷酸，而不對該受試者施用抗原。73.如權利要求69所述的方法，其中所述RNA寡核苷酸通過選自口服、經鼻、舌下、靜脈內、皮下、經粘膜、經呼吸道、直接注射和經真皮的途徑來輸送。74.如權利要求69所述的方法，其中所述RNA寡核苷酸以有效量輸送給所述受試者以誘導IFNa表達。75.—種治療因病毒感染而加劇的嗜喘的方法，所述方法包括對需要治療的受試者施用有效治療所述因病毒感染而加劇的哮喘的量的權利要求1-54中任一項所述的RNA寡核苷酸。76.如權利要求75所述的方法，其中所述病毒感染是RSV。77.—種治療傳染病的方法，所述方法包括對需要治療的受試者施用有效治療所述傳染病的量的權利要求1-54中任一項所述的RNA寡核普酸。78.如權利要求77所述的方法，其中所述受試者患有病毒感染。79.如權利要求78所述的方法，其中所述病毒感染是乙型肝炎。80.如權利要求78所述的方法，其中所述病毒感染是丙型肝炎。81.如權利要求78所述的方法，其還包括對所述受試者施用抗病毒劑。82.如權利要求68所述的方法，其中所述抗病毒劑與所述RNA寡核普酸相連。83.如權利要求77所述的方法，其中所述RNA寡核苷酸通過選自口服、經鼻、舌下、靜脈內、皮下、經粘膜、經呼吸道、直接注射和經真皮的途徑來輸送。全文摘要本發明涉及免疫刺激性RNA寡核苷酸(ORN)。具體而言，所述ORN具有直接或間接地與3′多-G模體和任選的5′多-G模體側面相接的免疫刺激性ORN模體。本發明還涉及使用所述ORN的方法(包括治療方法和篩選方法)及相關的試劑盒。文檔編號A61K31/7088GK101558157SQ200780039974公開日2009年10月14日申請日期2007年10月26日優先權日2006年10月26日發明者喬爾格·沃爾默,尤金·烏爾曼,瑪麗昂·朱爾克申請人:科勒制藥有限責任公司