免疫刺激性寡核糖核苷酸的制作方法

專利名稱：：免疫刺激性寡核糖核苷酸的制作方法免疫刺激性寡核糖核苷酸
技術領域：
一般而言，本發明涉及免疫學領域，更具體地涉及免疫刺激性分子。更特別地，本發明涉及具有免疫刺激活性的核糖核酸(RNA)分子，包括寡核糖核苷酸。
背景技術：
：Toll樣受體(TLR)是高度保守的模式識別受體(PRR)多肽家族，其識別與病原體結合的分子模式(PAMP)，在哺乳動物的先天免疫(innateimmunity)中起關鍵作用。目前已經鑒定出了至少十個家族成員，它們被命名為TLR1-TLRIO。多種TLR的胞漿結構域特征在于Toll-白介素1受體(TIR)結構域。MedzhitovRetal.(1998)Mo/Ce〃2:253-8。TLR對微生物侵入的識別引發信號級聯放大的激活，這在果蠅(/>0^/7")和哺乳動物中是保守的。已經報導含TIR結構域的適體蛋白MyD88與TLR結合，將與白介素1受體結合的激酶(IRAK)和腫瘤壞死因子(TNF)受體結合的因子6(TRAF6)募集至TLR。人們認為，MyD88-依賴性的信號轉導途徑導致NF-kB轉錄因子和c-JunNH2末端激酶(Jnk)促有絲分裂劑(mitogen)-激活的蛋白激酶(MAPK)的活化，這是免疫激活中及炎癥細胞因子產生的關鍵步驟。綜述參閱AderemAetal.(2000)A^wre406:782-87和AkiraSetal.(2004)Na/Wev/附mtmo/4:499-511。已經鑒定出了大量的特異性TLR配體。TLR2的配體包括肽聚糖和脂肽。YoshimuraAetal.(1999)//續國/163:1-5;YoshimuraAetal.(1999)/7mmw"o/163:1-5;AliprantisAOetal.(1999)5Wewce285:736-9。月旨多糖(LPS)是TLR4的配體。PoltorakAetal.(1998)5We"ce282:2085-8;HoshinoKetal.(1999)J/附mM"o/162:3749-52。細菌鞭毛蛋白是TLR5的配體。HayashiFetal.(2001)A/a似"410:1099-1103。已經報導肽聚糖不僅是TLR2的配體，而且還是TLR6的配體。OzinskyAetal.(2000)尸racV^/XcadSci'(7&497:13766-71;TakeuchiOetal.(2001)/m/mmo/13:933-40。最近報導某些低分子量合成化合物咪唑喹啉咪喹莫德(imidazoquinolinesimiquimod，R-837)和瑞喹莫德(resiquimod，R-848)是TLR7和TLR8的配體。HemmiHetal.(2002)/mww"o/3:196-200;JurkMetal.(2002)7Vi^/mmwwo/3:499。從近來發現未甲基化的細菌DNA及其合成的類似物(CpGDNA)是TLR9的配體(HemmiHetal.(2000)A^mm408:740-5;BauerSetal.(2001)iVoc7Vfl/Mcad5Wt/&498，9237-42)開始，已經有報導某些TLR的配體包括某些核酸分子。目前已經報導某些類型的RNA以序列非依賴性或序列依賴性形式是免疫刺激性的。另外，已經報導這些多種免疫刺激性RNA能刺激TLR3、TLR7或TLR8。
發明內容一般而言，本發明涉及含有某些免疫刺激性RNA基序的免疫刺激性的寡核糖核苷酸(ORN)，以及含有這類免疫刺激性ORN的相關免疫剌激性組合物，和這類免疫刺激性ORN和組合物的使用方法。本發明的免疫刺激性ORN適用于任何用于刺激或增強免疫應答的裝置(setting)或應用中。如下文所公開的，本發明的免疫刺激性ORN尤其適用于制備含有佐劑、疫苗、和其它藥劑的藥物組合物，所述藥物組合物用于治療多種病癥，包括感染、癌癥、變態反應和哮喘。因此，本發明在某些方面涉及含有本發明的免疫刺激性ORN的免疫刺激性組合物，以及它們的使用方法。如下文所公開的，本發明的免疫刺激性ORN和免疫刺激性組合物尤其適用于下述方法中，所述方法用于激活免疫細胞，疫苗接種受試者，治療患有免疫系統缺陷的受試者，治療患有感染的受試者，治療患有自身免疫疾病的受試者，治療患有癌癥的受試者，治療患有變應性病癥的受試者，治療患有哮喘、氣道重建(airwayremodeling)、促進表位擴展和抗體依賴性細胞毒性(ADCC)的受試者。如下文更詳細地公開的，本發明的免疫刺激性ORN的特征在于它們包含至少一種序列依賴性的免疫刺激性RNA基序。序列依賴性的免疫刺激性RNA基序通常是短的RNA序列，盡管在某些實施方案中該基序也可以含有修飾，例如經修飾的核苷酸間磷酸聯接、經修飾的核堿基(rmcleobase)、經修飾的糖、核苷酸類似物或其任何組合。如下文更詳細地描述的，在一個實施方案中，免疫刺激性RNA基序存在于本發明的較長免疫刺激性ORN的環境中。免疫刺激性RNA基序也可以存在于嵌合的DNA:RNA核酸分子的環境中。序列依賴性的免疫刺激性RNA基序和加入有了這些基序的免疫刺激性ORN被公開為TLR8的激動劑。更具體地，至少某些序列依賴性免疫刺激性RNA基序、免疫刺激性ORN和免疫刺激性DNA:RNA核酸分子被公開為是TLR8的激動劑而不是TLR7的激動劑。根據本發明一些方面的免疫刺激性RNA基序是N-U-RrR2。N是核糖核苷酸，并且N不包括U。在一些實施方案中，N為腺苷或胞嘧啶(C)或其衍生物。U是尿嘧啶或其衍生物。R是核糖核苷酸，其中R,和R2至少之一是腺苷(A)或胞嘧啶或其衍生物。R不是U,除非N-U-RrR2含有至少兩個A。本發明的ORN含有至少一個以及在一些實施方案中含有多于一個(即2、3或4個)免疫刺激性基序N-U-RrR2。ORN不含有TLR7/8基序。ORN優選長度為4-100，并任選地含有至少一處主鏈修飾。在一些實施方案中N-U-RpR2可含有至少3個As或至少2個Cs。任選地，N-U-RrR2含有至少一個G或C。在一些實施方案中，ORN不是ACCCAUCUAUUAUAUAACUC(SEQIDNO:89)。在其它一些實施方案中，ORN基序通過非核苷酸接頭與5'核糖核苷酸分隔。還在其它一些實施方案中，ORN基序通過非核苷酸接頭與3'核糖核苷酸分隔。任選地，ORN基序通過非核苷酸接頭與5'和3'核糖核苷酸分隔。ORN還包含可藥用的運載體，其任選地是脂質運載體如N-[l-(2,3-二油酰氧)丙基]-N，N，N三甲基銨甲基硫酸酯(DOTAP)。在其它一些實施方案中，ORN不與DOTAP復合。ORN可以是單鏈或雙鏈的。在其它一些實施方案中，ORN含有至少一個AU。還在其它一些實施方案中，ORN含有至少一個CU。在一些實施方案中，ORN為以下之一A*U*A*G*G*C*A*C(SEQIDNO:4)、G*C*C*A*C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*U*A*U*A*C*C(SEQIDNO:11)、A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U(SEQIDNO:12)、U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U(SEQIDNO:13)、A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A(SEQIDNO:16)、A*A*A*U*A*A*A*U*A*A*A*U*A*A*A*U*A*A*A*U(SEQIDNO:17)、A*A*A*A*U*A*A*A*A*U*A*A*A*A*U*A*A*A*A*U(SEQIDNO:18)、C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U(SEQIDNO:24)、U*U*A*U*U*A*U(SEQIDNO:30)、U*A*U*A*U*A*U(SEQIDNO:33)、C*C*G*A*G*C*C*G*C*A*U*U*A*C*C*C(SEQIDNO:48)、C*C*G*A*G*C*C*G*A*U*U*G*A*A*C*C(SEQIDNO:76)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*U*A*C*C*C*C(SEQIDNO:42)C*C*G*A*G*C*C*A*U*A*U*A*U*A*U*C(SEQIDNO:39)C*C*G*A*G*C*C*G*A*U*A*U*U*A*C*C卿IDNO:65)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*U*C*C*C*C*C(SEQIDNO:44)C*C*G*A*G*C*C*G*C*C*U*A*C*C*C*C(SEQIDNO:47)C*C*G*A*G*C*C*A*U*A*U*A*U*C*C*C(SEQIDNO:38)C*C*G*A*G*C*C*G*C*U*A*U*A*C*C*C(SEQIDNO:37)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*U*A*A*C*C*C(SEQIDNO:40)C*C*G*A*G*C*C*G*C*U*A*U*C*C*C*C(SEQIDNO:55)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*G*G*U*A*C*C(SEQIDNO:82)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*G*A*U*A*C*C(SEQIDNO:85)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*U*G*U*A*C*C(SEQIDNO:63)C*C*G*A*G*C*C*G*C*C*U*A*A*C*C*C(SEQIDNO:43)C*C*G*A*G*C*C*G*C*A*U*A*U*C*C*C(SEQIDNO:36)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*G*C*U*A*C*C(SEQIDNO:87)C*C*G*A*G*C*C*G*C*A*U*A*C*C*C*C(SEQIDNO:45)C*C*G*A*G*C*C*G*C*A*U*A*A*C*C*C(SEQIDNO:41)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*G*G*U*G*C*C(SEQIDNO:83)C*C*G*A*G*C*C*G*C*A*U*C*C*C*C*C(SEQIDNO:46)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*G*C*U*G*C*C(SEQIDNO:88)C*C*G*A*G*C*C*G*C*C*G*C*C*C*C*C(SEQIDNO:35)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*G*C*U*C*C*C(SEQIDNO:84)，C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*G*G*C*A*C*C(SEQIDNO:56)。ORN特別排除TLR7/8基序。TLR7/8基序可含有例如選自以下的核糖核苷酸序列①5'-C/U畫U畫G/U畫U畫3',(ii)5'-R-U隱R-G隱Y-3'，(iii)5'-G-U陽U-G-B-3',(iv)5'-G-U-G-U-G/U-3'，和(v)5'隱G/C-U誦A/C-G-G-C-A-C-3'，其中C/U為胞嘧啶(C)或尿嘧啶(U)，G/U為鳥嘌呤(G)或U，R為嘌呤，Y為嘧啶，B為U、G或C，G/C為G或C，且A/C為腺嘌呤(A)或C。在多種實施方案中，5'-C/U-U-G/U-U-3'為CUGU、CUUU、UUGU或uuuu。在多種實施方案中，5'-R-U-R-G-Y-3'為GUAGU、GUAGC、GUGGU、GUGGC、AUAGU、AUAGC、AUGGU或AUGGC。在一個實施方案中，堿基序列為GUAGUGU。在多種實施方案中，5'-G-U-U-G-B-3'為GUUGU、GUUGG或GUUGC。在多種實施方案中，5'-G-U-G-U-G/U-3'為GUGUG或GUGUU。在一個實施方案中，堿基序列為GUGUUUAC。在多種實施方案中，5'-G/C-U-A/C-G-G-C-A-C-3'為GUAGGCAC、GUCGGCAC、CUAGGCAC或CUCGGCAC。本發明的一個方面提供了包含本發明免疫刺激性ORN和佐劑的免疫刺激性組合物。在多種實施方案中，佐劑為產生儲存作用(depoteffect)的佐劑、免疫刺激性佐劑、或產生儲存作用并刺激免疫系統的佐劑。在一個實施方案中，根據本發明該方面的免疫剌激性組合物是免疫刺激性ORN和佐劑的綴合物。在根據本發明該方面的一個實施方案中，免疫刺激性ORN與佐劑共價連接。在其它一些實施方案中它們不綴合。在一個實施方案中，佐劑是TLR9的激動劑。在一個實施方案中，佐劑是免疫刺激性的CpG核酸。本發明的組合物可任選地含有抗原。因此，本發明的一個方面提供了下述疫苗，其中所述疫苗含有本發明的免疫刺激性ORN和抗原。本發明的一個方面提供了一種疫苗，所述疫苗含有本發明的免疫刺激性ORN和抗原的綴合物。在一個實施方案中，根據本發明該方面的綴合物含有與抗原共價連接的免疫刺激性ORN。在其它一些實施方案中，它們不綴合。在多個實施方案中，抗原可以是抗原本身。抗原可以是任何抗原，包括癌癥抗原、微生物抗原或變應原。本發明的一個方面提供了免疫刺激性組合物，所述組合物含有本發明的免疫刺激性ORN與親脂部分的綴合物。在一個實施方案中，免疫刺激性的ORN與親脂部分共價連接。在一個實施方案中，親脂部分選自膽固醇基、棕櫚基和脂肪酰基。在一個實施方案中，親脂部分是膽固醇的衍生物，例如膽固醇基。在一個實施方案中，免疫刺激性ORN含有至少一個脫氧核糖核苷酸。所述至少一個脫氧核糖核苷酸通常可以出現在免疫刺激性RNA基序之外的任何地方。在多個實施方案中，所述至少一個脫氧核糖核苷酸為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個連續的脫氧核糖核苷酸。本發明也考慮了包含非連續的脫氧核糖核苷酸的免疫刺激性ORN。在多個實施方案中，至少一個脫氧核糖核苷酸是免疫剌激性ORN的5'端、3'端或5'和3'兩端。所述至少一個脫氧核糖核苷酸也對應于嵌合的DNA:RNA分子的DNA部分。在一個實施方案中，嵌合的DNA:RNA分子的DNA組分包括CpG核酸，即TLR9激動劑。在一個實施方案中，嵌合的DNA:RNA分子的DNA和RNA部分通過核苷酸間磷酸鍵共價連接。在另一實施方案中，嵌合的DNA:RNA分子的DNA和RNA部分通過接頭(例如非核苷酸接頭)共價連接。本發明的一個方面提供了免疫刺激性組合物，所述組合物包含共價閉合的、部分單鏈的、椏鈴形的核酸分子，其中該分子的至少一個單鏈部分包含本發明的免疫刺激性RNA基序。本發明的一個方面提供了包含本發明前述任何方面的組合物和任選的可藥用運載體的藥物組合物，所述組合物與選自以下的遞送媒介物結合陽離子脂質、脂質體、螺旋狀的(cochleate;)、病毒顆粒、免疫刺激性復合物(ISCOM)、微粒、微球、毫微球、單層囊泡(LUV)、多層囊泡、水包油乳劑、油包水乳劑、乳體(emulsome)和聚陽離子肽。在根據本發明該方面的一個實施方案中，藥物組合物包含抗原。可以在噴霧器或吸入器中配制ORN，例如定量吸入器(metereddoseinhaler)或干粉吸入器。在一些實施方案中，ORN還包含額外的組合物，例如化學治療劑、抗病毒劑或可藥用運載體。可藥用運載體可以被配制為用于注射或粘膜施用。另外，根據本發明的這些方面和其它方面，在多種實施方案中，免疫刺激性ORN可任選包含至少一個5'-5'核苷酸間聯接、至少一個3'-3'核苷酸間聯接、至少一個包含接頭部分的5'-5'核苷酸間聯接、至少一個包含接頭部分的3'-3'核苷酸間聯接，或其任何組合。在一個實施方案中，接頭部分是非核苷酸接頭部分。另外，還根據本發明的這些方面和其它方面，在多種實施方案中，免疫刺激性ORN可任選包含至少一個2'-2'核苷酸間聯接、至少一個2'-3'核苷酸間聯接、至少2'-5'核苷酸間聯接或其任何組合。在優選的實施方案中，所述至少一個2'-2'核苷酸間聯接、至少一個2'-3'核苷酸間聯接、或至少2'-5'核苷酸間聯接存在于免疫刺激性RNA基序之外。還根據本發明的這些和其它方面，在一個實施方案中，免疫刺激性ORN包含至少一個倍增單元(multiplierunit)。因此，在某些實施方案中，本發明的免疫刺激性ORN可以具有分支結構。分支的組合物可以包含任意組合的3'-5'、5'-5'、3'-3'、2'-2'、2'-3'或2'-5'核苷酸間鍵。在一個實施方案中，免疫刺激性ORN包含至少兩個倍增單元，產生所謂的樹狀聚體(dendrimer)。另外，在某些實施方案中，本發明的免疫刺激性ORN可包含兩個或更多的免疫刺激性RNA基序，其例如在分支結構的不同臂上沿線性ORN隨機排列，或均沿線性ORN隨機排列并位于分支結構的不同臂上。分支結構(包括樹狀聚體)可任選的包含至少一個免疫剌激性的CpG核酸，例如作為分支結構的獨立臂。還根據本發明的這些和其它方面，在一個實施方案中，免疫刺激性ORN不包含CGDNA或RNA二核苷酸。本發明的一個方面提供了用于下調免疫抑制性CD4+調節(Treg)細胞的方法。根據本發明該方面的方法包括下述步驟將CD4+Treg細胞與有效量的含本發明的TLR8-特異性免疫刺激ORN的組合物接觸，以降低CD4+Treg細胞的抑制作用。在一個實施方案中，組合物包含TLR8-特異性ORN和免疫刺激性CpG核酸，其中TLR8-特異性ORN和免疫刺激性CpG核酸未連接。在一個實施方案中，組合物含有TLR8-特異性ORN和免疫刺激性CpG核酸，其中TLR8-特異性的ORN和免疫刺激性CpG核酸作為綴合物存在。本發明另一方面提供了用于調控受試者中免疫應答的方法。根據本發明該方面的方法包括對受試者施用有效量的本發明組合物的步驟。在一些實施方案中，ORN可以被遞送給受試者，以在受試者中治療自身免疫疾病或氣道重建。ORN可以單獨或與抗原一起被施用給受試者。任選地，以例如口、鼻、舌下、靜脈內、皮下、粘膜、呼吸、直接注射和經皮的途徑遞送ORN。ORN可以以有效量遞送給受試者以誘導細胞因子表達，例如TNFa、IL-IO、IL-6、IFN-7、MCP1和IL-12。本發明的一個方面提供了對受試者疫苗接種的方法。根據本發明該方面的方法包括對受試者施用抗原和本發明的免疫刺激性ORN的步驟。本發明的一個方面提供了用于治療受試者的方法，所述受試者患有傳染性疾病或具有患傳染性疾病的風險。根據本發明該方面的方法包括對受試者施用有效量的本發明組合物的步驟。在一個實施方案中，該方法包括對受試者施用有效量的本發明免疫刺激性ORN的步驟。在一個實施方案中，受試者患有病毒感染。病毒感染可以是例如乙型肝炎或丙型肝炎。也可以對受試者施用抗病毒劑。任選地，抗病毒劑與ORN連接。本發明的一個方面提供了用于治療受試者的方法，所述受試者患有癌癥或具有患癌癥的風險。根據本發明該方面的方法包括對受試者施用有效量的本發明組合物的步驟。在一個實施方案中，該方法包括對受試者施用有效量的本發明免疫刺激性ORN的步驟。在一個實施方案中，也對受試者施用化學治療或輻射。本發明的一個方面提供了用于治療受試者的方法，所述受試者患有癌癥或具有患癌癥的風險。根據本發明該方面的方法包括對受試者施用有效量的組合物的步驟，所述組合物含有本發明的TLR8-特異性免疫刺激性ORN以降低CD4+Treg細胞的抑制作用。在一個實施方案中，組合物包含TLR8-特異性ORN和免疫刺激性CpG核酸，其中TLR8-特異性ORN和免疫刺激性CpG不連接。在一個實施方案中，組合物包含TLR8-特異性ORN和免疫刺激性CpG核酸，其中TLR8-特異性ORN和免疫刺激性CpG核酸作為綴合物存在。本發明的一個方面提供了用于治療受試者的方法，所述受試者患有變應性病癥或具有患變應性病癥的風險。根據本發明該方面的方法包括對受試者施用有效量的本發明組合物的步驟。在一個實施方案中，該方法包括對受試者施用有效量的本發明免疫刺激性ORN的步驟。在一個實施方案中，受試者患有變應性鼻炎。本發明的一個方面提供了用于治療受試者的方法，所述受試者患有哮喘或具有患哮喘的風險。根據本發明該方面的方法包括對受試者施用有效量的本發明組合物的步驟。在一個實施方案中，該方法包括對受試者施用有效量的本發明免疫刺激性ORN的步驟。在一個實施方案中，哮喘是被病毒感染加重的哮喘。ORN可以單獨或與變應原一起被施用。本發明的另一方面提供了用于治療患有氣道重建的受試者的方法。根據本發明該方面的方法包括對受試者施用有效量的本發明免疫刺激性ORN的步驟。本發明的一個方面提供了用于提高抗體依賴性細胞毒性(ADCC)的方法。根據本發明該方面的方法包括下述步驟對需要增加的ADCC的受試者施用有效量的本發明的免疫刺激性ORN和抗體，以增加ADCC。在一個實施方案中，抗體是對癌癥抗原或癌細胞表達的其它抗原特異的抗體。在一個實施方案中，抗體為IgG抗體。本發明的一個方面提供了用于增強表位擴展的方法。根據本發明該方面的方法包括下述順序步驟將免疫系統的細胞與抗原接觸，隨后將該細胞與至少兩份劑量的本發明的免疫刺激性ORN接觸。在一個實施方案中，該方法體內進行。在一個實施方案中，該方法包括下述步驟以能有效誘導多重表位特異性免疫應答的量對受試者施用包含抗原和佐劑的疫苗，隨后對受試者施用至少兩份劑量的本發明的免疫刺激性ORN。該方法在一個實施方案中涉及應用治療方案，所述方案導致受試者中的免疫系統抗原暴露，然后以能有效誘導多重表位特異性免疫應答的量對受試者施用至少兩份劑量的本發明的免疫刺激性ORN。在多種實施方案中，治療方案為手術、輻射、化學治療、其它癌癥藥劑、疫苗或癌癥疫苗。在一個實施方案中，所述至少兩份劑量的免疫刺激性ORN彼此隔開至少一天到一周被施用。在一個實施方案中，所述至少兩份劑量的免疫刺激性ORN彼此隔開至少一周到一個月被施用。在一個實施方案中，所述至少兩份劑量的免疫刺激性ORN彼此隔開至少一個月到六個月被施用。一方面，本發明是通過將表達TLR8的細胞與下述用量的包含N-U-RrR2的RNA寡核糖核苷酸(ORN)接觸，其中N是核糖核苷酸且N不包括U，U是尿嘧啶或其衍生物，R是核糖核苷酸，其中R4和R2至少之一是腺苷(A)或胞嘧啶或其衍生物，其中R不是U，除非N-U-RrR2含有至少兩個A，其中所述ORN不包含TLR7/8基序，并且其中所述ORN長度為4-100，所述用量有效剌激前炎性細胞因子生產并且其中應答于ORN的IFN-ce生產相對于背景而言不被顯著誘導。在一些實施方案中，應答于ORN的IFN-o;生產少于300pg/ml。在一個實施方案中，ORN不是ACCCAUCUAUUAUAUAACUC(SEQIDNO:89)。ORN可以與N-[l-(2,3-二油酰氧)丙基]-N,N，N三甲基銨甲基硫酸酯(DOTAP)復合或不復合。在一些實施方案中，表達TLR8的細胞是單核細胞或mDC。還在其它一些實施方案中，表達TLR8的細胞是體外的或體內的。本發明的這些和其它特征將在發明詳述部分被更詳細地描述。附圖概述圖1是描述在PBMC刺激時由ORN誘導的細胞因子生產。通過測量IFN-o;和TNF-o;細胞因子生產，觀察到TLR8和TLR7/8之間的差異。在完全滴定曲線上用與DOTAP(25)ig/ml，1/3稀釋度)復合的指定ORN(2pM，1/3稀釋度)或用R-848(2pM，1/3稀釋度)刺激人PBMC。16小時后收集上清液，并通過ELISA測量IFN-o;(圖la)禾nTNF-a(圖lb)。數據顯示了至少三份獨立實驗的三個血供體的均值。DOTAP單獨不顯示作用。ORN可與DOTAP復合，R-848不復合。DOTAP單獨是對照。在圖lc中，用與DOTAP(2.2ng/ml)或與R-848(2pM)復合的0.2pM指定的ORN刺激人PBMC。16小時后收集上清液并通過ELISA測量IFN-a(左圖)和TNF-ce(右圖)。數據顯示了3個供體的均值(士SEM)。圖2是一組柱狀圖，其描述了經分離的pDC(圖2a)、單核細胞(圖2b)和mDC(圖2c)刺激時由ORN誘導的細胞因子生產。用與lO^g/mlDOTAP、0.5nMCpGODN或DOTAP復合的0.5pMORN或單獨的培養基刺激細胞，并測量IFN-a(圖2a)、TNF-of(圖2c)和IL-12p40(圖2c)。圖3是一組柱狀圖，其闡述了PBMC刺激時由ORN誘導的細胞因子生產。用與10jig/mlDOTAP復合的指定ORN(0.5pMORN)刺激人PBMC，并通過ELISA技術測量IFN-a(圖3A)和TNF-a(圖3B)和通過Luminex技術測量細胞因子生產。圖4是闡述指定ORN的(圖4a)和TNF-a(圖4b)最大活性比較的柱狀圖。用與DOTAP(從25i!g/ml開始，稀釋度1/3)復合的ORN(7種濃度，從2pg/ml開始，1/3稀釋度)刺激人PBMC，并對兩份單獨實驗中0.6pM處3-6個血供體的平均最大活性進行了測定。圖5是闡述IFN-ce最大活性(圖5a)與IFN-aEC50(圖5b)比較的柱狀圖。用于DOTAP復合的ORN刺激人PBMC并測量IFN-a。圖6是一組圖，其比較了帶有TLR8(SEQIDNO:13)或TLR7/8(SEQIDNO:21)的ORN對3個血供體的PBMC、經分離的pDC或經分離的單核細胞的滴定曲線。用與DOTAP(從25pg/ml開始，％稀釋度)復合的ORN(4種濃度，從lpg/ml開始，W稀釋度)刺激細胞。16小時后收集上清液并通過Luminex技術測量細胞因子生產。圖顯示SEQIDNO:21(0、3nM)細胞因子生產百分比。圖7-1到7-4顯示了一組柱形圖，其闡述在任何濃度的3個血供體對PMBC、經分離的單核細胞、經分離的pDC和CD14-CD123-PBMC的平均最大活性。用與DOTAP(從25嗎/ml開始，W稀釋度)復合的ORN(4種濃度，從lpg/ml開始，^稀釋度)刺激細胞。16小時后收集上清液并通過Luminex技術測量細胞因子生產。紅色正方形指示在DOTAP和培養基的背景上的陽性反應。圖8是一組柱形圖，其顯示了TLR8(SEQIDNO:13)和TLR7/8(SEQIDNO:21)ORN之間的差異。用與DOTAP(從25pg/ml開始，％稀釋度)復合的ORN(4種濃度，從l)ig/ml開始，W稀釋度)刺激細胞。16小時后收集上清液并通過Luminex技術測量細胞因子生產。圖表顯示測量的任何濃度下的平均最大細胞因子生產，其表示為TLR8ORN(SEQIDNO:13)比TLR7/8ORN(SEQIDNO:21)的百分比。針對經分離的pDC、PBMC、經分離的單核細胞和CD123-CD14-PBMC顯示。圖9是一組圖和曲線，其顯示了經穩定轉染的HEK-293細胞中通過TLR8作用的TLR8ORN(SEQIDNO:13)和TLR7/8ORN(SEQIDNO:21)的反應。用指定的ORN將HEK-293細胞刺激16小時，所述HEK-293細胞用NF/cB-螢光素酶讀出報告子和人TLR8穩定轉染。16個小時后去除上清液，將細胞裂解并測量螢光素酶活性或細胞因子水平。圖9a和9b顯示了刺激后NF/cB-螢光素酶的倍數誘導。圖9c顯示了存在抑制劑時刺激后NF/cB-螢光素酶的倍數誘導。圖9d顯示了通過螢光素酶測定測量的刺激后的IP-10刺激。圖IO是一組圖表，其顯示了用富含AU或富含GU的ORN刺激的人pDC上的表面標記物表達。用與25嗎/mlDOTAP復合的lpMORN或單獨用DOTAP(圖10a)，或指定量的與DOTAP復合的ORN或單獨用DOTAP(圖10b-10c)孵育CD123+經純化的pDC(圖10a和10b)或經分離的單核細胞(圖lOc)。16小時后收集細胞并用CD123、CDllc和HLA-DR抗體(圖10a和10b)或CD14和CD19(圖10c)染色。通過CD86(圖10a和10b)或CD80(圖10c)表達測量細胞表面標記物激活。圖10a顯示FACS分析，其證明了富含AU的ORN(SEQIDNO:13)和富含GU的ORN(SEQIDNO:21)在pDC剌激時的CD86表面標記物表達中顯示差異。圖10b是闡述人pDC刺激時的CD86表面標記物表達是劑量依賴性的。圖10c是顯示以下內容的圖富含AU的ORN(SEQIDNO:13)和富含GU的ORN(SEQIDNO:21)在人PBMC(數據未顯示)和CD14-陽性細胞刺激時在CD80表面標記物表達中顯示無差異。圖11是一組柱形圖，其顯示了TLR8ORN(SEQIDNO:13)和TLR7/8ORN(SEQIDNO:21)之間的差異。使用SEQIDNO:5ORN作為對照。將牛PBMC與10嗎/mlORN(HD)或2.5pg/mlORN(LD)孵育48小時。收集上清液并用ELISA分析。圖lla-c分別顯示了IL-12、IFN-y和TNF-a的水平。圖12是一組展示出下述內容的圖表鼠細胞體內或體外不應答于富含AU的ORNSEQIDNO:13。使用的細胞是小鼠巨噬細胞系Raw264.7細胞(圖12a)、J774細胞(圖12b)、經純化的小鼠CDllc+細胞(svl29小鼠)(圖12c-12g)和體內小鼠細胞。通過ELISA評價細胞因子濃度。圖13是展示下述內容的圖表大鼠脾細胞不應答于富含AU的ORNSEQIDNO:13。將來自3只Sprague-Dawley大鼠的脾細胞合并，并用指定濃度的SEQIDNO:21、SEQIDNO:13(均與62.5pg/mlDOTAP復合，1/5稀釋度)、R-848或DOTAP單獨(62.5嗎/ml->1/5稀釋度)刺激。20小時后收集上清液并通過ELISA測量TNF-a水平。發明詳述本發明的一部分涉及本發明的發明人對大量序列特異性的免疫刺激性RNA基序的發現。目前已經發現含有免疫刺激性RNA基序的分子(單獨或與某些其它成分組合)是重要的免疫剌激性化合物，其在用于治療患有病癥或具有患病癥風險的受試者的大量方法中有用，所述病癥中誘導、增加或更改免疫應答會是有利的。在一個實施方案中，本文所使用的本發明的免疫刺激性組合物是本發明的免疫剌激性ORN。已經發現某些序列特異性RNA基序是免疫刺激性的，其通過TLR8作用，與作用于TLR7和TLR8的其它基序(富含GU和富含CU)相反。RNA寡核苷酸(RON)(優選含有富含AU的序列)通過TLR8刺激免疫應答。己經在不同種類的ORN(例如含有含AU和含GU重復的ORN)中觀察到IFN-a、TNF-a、IFN-y和IL-12生產之間的差異。有趣的是，已經發現本發明的免疫刺激性ORN生產強的前炎性細胞因子應答，而IFN-a和IFN-a相關的分子除外。用這些新穎的ORN刺激時IFN-of生產減少或缺乏。根據本發明一些方面的免疫刺激性RNA基序為N-U-RrR2。N是核糖核苷酸，并且N不包括U。在一些實施方案中，N為腺苷或胞嘧啶(C)或其衍生物。U是尿嘧啶或其衍生物。R是核糖核苷酸，其中Rt和R2至少之一是腺苷(A)或胞嘧啶或其衍生物。R不是U，除非N-U-RrR2含有至少兩個A。本發明的ORN含有至少一個和在一些實施方案中含有多于一個(即2、3或4個)免疫刺激性基序N-U-RrR2。ORN不含有TLR7/8基序。ORN是寡核苷酸。任選地，該寡核苷酸長度為4-100。ORN長度也可以是例如8-40、15-25或20-30個核苷酸。ORN任選地含有至少一個主鏈修飾。在一些實施方案中N-U-RpR2可含有至少3個As或至少2個Cs。任選地，N-U-R「R2含有至少一個G或C。在一些實施方案中，ORN不是ACCCAUCUAUUAUAUAACUC(SEQIDNO:89)。ORN還可包含可藥用的運載體，其任選地是脂質運載體如N-[l-(2,3-二油酰氧)丙基]-N,N，N三甲基銨甲基硫酸酯(DOTAP)。在其它一些實施方案中，ORN不與DOTAP復合。在其它一些實施方案中可藥用運載體可以是肽，如聚陽離子肽。聚陽離子肽包括例如多重的多聚賴氨酸、多聚精氨酸和多聚肽(其在多于5個、特別是多于8個氨基酸殘基的范圍內含有多于50%的堿性氨基酸、特別是精氨酸或賴氨酸殘基)或其混合物，并可例如含有天然存在的昆蟲抗菌蛋白質。在其它一些實施方案中，ORN含有至少一個AU。除了是序列特異性的以外，作為單鏈RNA、部分雙鏈RNA或完全雙鏈RNA的免疫刺激性RNA基序是有效的。對本發明的ORN和具有TLR7/8基序(即含GU的重復)的ORN而言，觀察到IFN-o;和IFN-a相關分子和其它前炎性細胞因子如TNF-a、IFN-7、IL-IO、IL-6和IL-12的生產之間的清晰差異。具有N-U-R「R2基序的本發明的ORN，例如那些含有AU或AUU重復(SEQIDNO:12，SEQIDNO:13)的ORN在PBMC和pDC刺激時顯示無IFN-a細胞因子生產。相反，具有一列中三個或更多U(SEQIDNO:14，SEQIDNO:15)的ORN誘導IFN-a生產，盡管存在As。有趣的是，使用相同的、單室用A交換G的ORN組時，觀察到PBMC刺激時的強IFN-a生產。本文存在的數據強烈地提示兩個不同ORN種類的存在一種作用于表達TLR8的細胞，如單核細胞和mDC(SEQIDNO:12，SEQIDNO:13,SEQIDNO:16-SEQIDNO:18)、含本發明的N-U-RrR2基序的ORN，另一種作用于表達TLR7/8二者的細胞，例如含有CU、GU和GUU序列的單核細胞、mDC和pDC(SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:19-SEQIDNO:23)。因此，本發明的ORN具有誘導免疫應答而不誘導相對于背景的顯著量IFN-a或IFN-ce相關分子的能力。相對于背景的顯著量的IFN-a或IFN-a相關分子優選是相對于背景的IFN-o;或IFN-a相關分子水平改變少于20%。在一些實施方案中，其少于15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%。在其它一些實施方案中，被誘導的IFN-a或相關分子等于背景或少于背景水平。還在其它一些實施方案中，被本發明ORN誘導的IFN-a少于或等于被TLR7/8ORN誘導的IFN-ce的20%。被本發明的ORN誘導的IFN-a在體外測試中可任選的少于300pg/ml，或可以具有大于1.5pM的EC50。本文使用的IFN-a相關分子是與IFN-a表達相關的細胞因子或因素。這些分子包括但不限于MIPl-/3、IP-10和MIPl-a。目前報導CD4+Treg細胞表達TLR8，且這些細胞中的TLR8信號轉導降低或逆轉了它們的免疫刺激性功能。PengGetal.(2005)Science309:1380-4。在患有多種類型癌癥的患者中觀察到增加的CD4+Treg細胞種群，其中免疫抑制可有助于免疫"逃逸"和下調這些癌癥的生長。因此，預計Treg-介導的抑制的反轉在治療癌癥中是有利的。PRN特別排除TLR7/8基序。已經發現TLR7/8基序可以產生顯性結果，其屏蔽了本發明ORN的獨特的免疫刺激特性。TLR7/8基序包括例如核糖核苷酸序列，如5'-C/U-U-G/U-U-3'、5'-R-U-R-G-Y-3'、5'-G-U-U-G-B-3'、5'-G-U-G-U-G/U-3'或5'-G/C-U-A/C-G-G-C-A-C-3'。C/U是胞嘧啶(C)或尿嘧啶(U)，G/U是鳥嘌呤(G)或U，R是嘌呤，Y是嘧啶，B是U、G或C，G/C是G或C，A/C是腺嘌呤(A)或C。5'-C/U-U-G/U-U-3'可以是CUGU、CUUU、UUGU或UUUU。在多個實施方案中，5'-R-U-R-G-Y-3'是GUAGU、GUAGC、GUGGU、GUGGC、AUAGU、AUAGC、AUGGU或AUGGC。在一個實施方案中，堿基序列是GUAGUGU。在多個實施方案中，5'-G-U-U-G-B-3'是GUUGU、GUUGG或GUUGC。在多個實施方案中，5'-G-U-G-U-G/U-3'是GUGUG或GUGUU。在一個實施方案中，堿基序列是GUGUUUAC。在多個實施方案中，5'-G/C-U-A/C-G-G-C-A-C-3'是GUAGGCAC、GUCGGCAC、CUAGGCAC或CUCGGCAC。一般而言，本發明涉及免疫刺激性寡核糖核苷酸，其包含一個或多個免疫刺激性RNA基序、含有一個或多個本發明的免疫剌激性ORN的免疫刺激性組合物，和本發明的免疫刺激性ORN和免疫剌激性組合物的使用方法。本文使用的術語"RNA"和等效的"天然RNA"旨在表示通過3'-5'磷酸二酯鍵共價連接在一起的兩個或更多的核糖核苷酸(即每個分子包含與磷酸基和嘌呤或嘧啶核堿基(例如鳥嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶)連接的一個核糖)。免疫剌激性的RNA基序可以存在于免疫刺激性ORN的末端(當免疫刺激性ORN具有游離末端時)。例如，具有游離末端的免疫刺激性ORN和位于免疫刺激性ORN末端的免疫刺激性RNA基序可以作為XaM或作為MXb存在，其中M表示免疫刺激性RNA基序，Xa和Xb各自獨立地表示免疫刺激性ORN除免疫刺激性RNA基序外的一個或多個相同或不同的核苷酸。或者，免疫刺激性RNA基序可以在其兩側末端連接有免疫刺激性ORN的至少一個額外的核苷酸，無論該免疫剌激性ORN是否具有游離末端。例如，具有游離末端和免疫刺激性RNA基序側翼的核苷酸的免疫刺激性ORN可以作為XJVlXb存在，其中M表示免疫刺激性RNA基序，Xa和Xb各自獨立地表示免疫刺激性ORN除免疫刺激性RNA基序外的一個或多個相同或不同的核苷酸。在不同的實施方案中，包含免疫刺激性RNA基序的免疫刺激性ORN可含有單個基序或多于一個的免疫刺激性RNA基序。單個免疫剌激性ORN中具有兩個或更多免疫刺激性RNA基序被認為可能是有利的，例如如果基序被隔開使得免疫刺激性ORN能夠結合兩個或更多的TLR的時候。例如，免疫刺激性ORN可以結合兩個或更多的TLR8受體，從而擴增或修飾得到的免疫刺激作用。當免疫刺激性ORN包含多于一個免疫刺激性RNA基序時，在一個實施方案中免疫刺激性ORN可作為MtXM2存在，其中M!和M2各自獨立地表示免疫刺激性RNA基序，X表示免疫刺激性ORN除免疫刺激性RNA基序外的一個或多個相同或不同的核苷酸。在一個實施方案中，X包含本文所述的非核苷酸接頭。在一個實施方案中，X包含本文所述的分支單元。當免疫刺激性ORN中存在多于一個免疫刺激性RNA基序時，該基序一般可以在沿著免疫刺激性ORN的任何位置發生。例如，當存在兩個基序時，它們可各自存在于免疫刺激性ORN的末端。或者，一個基序可以存在于一個末端，一個基序可以通過免疫刺激性ORN的至少一個外的核苷酸包圍在其兩側末端。還在另一實施方案中，各基序可以通過免疫刺激性ORN的至少一個額外的核苷酸包圍在其兩側末端。免疫刺激性ORN包括但不限于以下，以從左到右讀出5'到3'顯示在一些實施方案中，ORN是下表1和表2顯示的活性ORN之一，例如以下U*U*A*G*G*C*A*C(SEQIDNO:2)、A*U*A*G*G*C*A*C(SEQIDNO:4)、G*C*C*A*C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*U*A*U*A*C*C(SEQIDNO:11)、A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U(SEQIDNO:12)、U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U(SEQIDNO:13)、A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A(SEQIDNO:16)、A*A*A*U*A*A*A*U*A*A*A*U*A*A*A*U*A*A*A*U(SEQIDNO:17)、A*A*A*A*U*A*A*A*A*U*A*A*A*A*U*A*A*A*A*U(SEQIDNO:18)、C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U(SEQIDNO:24)、U*U*A*U*U*A*U(SEQIDNO:30)、U*A*U*A*U*A*U(SEQIDNO:33)、C*C*G*A*G*C*C*G*C*A*U*U*A*C*C*C(SEQIDNO:48)、C*C*G*A*G*C*C*G*A*U*U*G*A*A*C*C(SEQIDNO:76)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*U*A*C*C*C*C(SEQIDNO:42)C*C*G*A*G*C*C*A*U*A*U*A*U*A*U*C(SEQIDNO:39)C*C*G*A*G*C*C*G*A*U*A*U*U*A*C*C(SEQIDNO:65)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*U*C*C*C*C*C(SEQIDNO:44)C*C*G*A*G*C*C*G*C*C*U*A*C*C*C*C(SEQIDNO:47)C*C*G*A*G*C*C*A*U*A*U*A*U*C*C*C(SEQIDNO:38)C*C*G*A*G*C*C*G*C*U*A*U*A*C*C*C(SEQIDNO:37)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*U*A*A*C*C*C(SEQIDNO:40)C*C*G*A*G*C*C*G*C*U*A*U*C*C*C*C(SEQIDNO:55)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*G*G*U*A*C*C(SEQIDNO:82)c*c*G*A*G*C*C*G*A*A*G*A*U*A*C*C(SEQIDNO:85)C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*U*G*U*A*C*C(SEQIDNO:63)、C*C*G*A*G*C*C*G*C*C*U*A*A*C*C*C(SEQIDNO:43)、C*C*G*A*G*C*C*G*C*A*U*A*U*C*C*C(SEQIDNO:36)、C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*G*C*U*A*C*C(SEQIDNO:87)、C*C*G*A*G*C*C*G*C*A*U*A*C*C*C*C(SEQIDNO:45)、C*C*G*A*G*C*C*G*C*A*U*A*A*C*C*C(SEQIDNO:41)、C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*G*G*U*G*C*C(SEQIDNO:83)、C*C*G*A*G*C*C*G*C*A*U*C*C*C*C*C(SEQIDNO:46)、C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*G*C*U*G*C*C(SEQIDNO:88)、C*C*G*A*G*C*C*G*C*C*G*C*C*C*C*C,IDNO:35)、c*c*G*A*G*C*C*G*A*A*G*C*U*C*C*C(SEQIDNO:84)或C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*G*G*C*A*C*C(SEQIDNO:56)。如上所述，RNA是通過3'-5'磷酸二酯鍵連接的核糖核苷酸的多聚物。在某些實施方案中，本發明的免疫刺激性ORN是RNA。然而，本發明的免疫刺激性ORN不限于RNA，如下文將描述的。在一個實施方案中，本發明的免疫刺激性ORN可以包含兩個或更多經修飾的核堿基，即A、C、G和U的衍生物。這些經修飾的核堿基的特定實施方案包括但不限于5-取代的胞嘧啶(例如5-甲基-胞嘧啶、5-氟-胞嘧啶、5-氯-胞嘧啶、5-溴-胞嘧啶、5-碘-胞嘧啶、5-羥基-胞嘧啶、5-羥甲基-胞嘧啶、5-二氟甲基-胞嘧啶，和未取代的或取代的5-炔基-胞嘧啶)、6-取代的胞嘧啶，N4-取代的胞嘧啶(例如N4-乙基-胞嘧啶)、5-氮雜-胞嘧啶、2-巰基-胞嘧啶、異胞嘧啶、假異胞嘧啶、帶有稠環系統的胞嘧啶類似物(例如N，N'-丙烯胞嘧啶或吩噁嗪)，和尿嘧啶及其衍生物(例如5-氟-尿嘧啶、5-溴-尿嘧啶、5-溴乙烯基-尿嘧啶、4-硫代-尿嘧啶、5-羥基-尿嘧啶、5-丙炔基-尿嘧啶)，胸腺嘧啶衍生物(例如2-硫代胸腺嘧啶、4-硫代胸腺嘧淀、6-取代的胸腺嘧啶)，鳥苷衍生物(7-脫氮鳥嘌呤、7-脫氮-7-取代的鳥嘌呤(例如7-脫氮-7-(C2-C6)炔基鳥嘌呤)、7-脫氮-8-取代的鳥嘌呤、次黃嘌呤、N2-取代的鳥嘌呤(例如N2-甲基-鳥嘌呤)、8-取代的鳥嘌呤(例如8-羥基鳥嘌呤和8-溴代鳥嘌呤)和6-硫代鳥嘌呤)或腺苷衍生物(5-氨基-3-甲基-3H,6H-噻唑基[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮、2,6-二氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、嘌呤、吲哚、腺嘌呤、取代的腺嘌呤(例如N6-甲基-腺嘌呤、8-氧-腺嘌呤))。堿基也可以被通用堿基(例如4-甲基』引哚、5-硝基-吲哚、3-硝基吡咯、P-堿基和K-堿基)、芳環(例如苯并咪唑或二氯-苯并咪唑、l-甲基-lH-[l,2，4]三唑-3-羧酸胺)、芳環系統(例如氟苯或二氟聯二苯)或氫原子(dSpacer)取代。優選的堿基修飾是尿嘧啶和7-脫氮-鳥嘌呤。這些經修飾的U核堿基和它們對應的核糖核酸可從商業供應商得來。經修飾的G核堿基的特定實施方案包括N、二甲基鳥嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤、7-脫氮-7-取代的鳥嘌呤、7-脫氮-7-(C2-C6)炔基鳥嘌呤、7-脫氮-8-取代的鳥嘌呤、8-羥基鳥嘌呤、6-硫代鳥嘌昤和8-氧代鳥嘌呤。在一個實施方案中，經修飾的G核堿基是8-羥基鳥嘌呤。這些經修飾的G核堿基和它們相應的核糖核苷可得自商業供應商。在某些實施方案中，至少一個3-核糖單元可以被P-D-脫氧核糖或經修飾的糖單元置換，其中經修飾的糖單元例如選自e-D-核糖、a-D-核糖、/3-L-核糖(如'Spiegelmers，中)、a-L-核糖、2'-氨基-2'-脫氧核糖、2，-氟-2，-脫氧核糖、2'-0-(Cl-C6)烷基核糖，優選2'-0-(Cl-C6)垸基核糖為2'-0-甲基核糖、2'-0-(C2-C6)鏈烯基核糖、2'-核糖、LNA和o;-LNA(NielsenPetal.(2002)Chemistry-AEuropeanJournal8:712-22)、i3-D-木-呋喃糖、a-阿拉伯呋喃糖、2，-氟代阿拉伯呋喃糖和碳環和/或開環糖類似物(描述于例如Vandendriesscheetal.(1993)Tetrahedron49:7223中)和/或雙環糖類似物(描述于例如TarkovMetal.(1993)HelvChimActa76:481中)。或者，本發明的免疫刺激性ORN的各核糖核苷酸和核糖核苷可以通過非核酸的接頭連接，尤其是脫堿基接頭(abasiclinkers(dSpacers))、三乙二醇單元或六乙烯基乙二醇(hexaethyleneglycol)單元。其它接頭為烷氨基(alkylamino)接頭，例如C3、C6和C12氨基接頭，以及垸基硫醇(alkylthiol)接頭，例如C3或C6硫醇接頭。或者，本發明的免疫刺激性ORN的個體核苷酸和核糖核苷可以通過芳香族殘基連接，所述芳香族殘基還可被烷基或取代的烷基取代。RNA是通過3'-5'磷酸二酯聯接而連起來的核糖核苷酸的多聚物。本發明的免疫刺激性ORN的核苷酸也可以通過3'-5'磷酸二酯聯接連起來。然而，本發明也包括具有異常核苷酸間聯接的ORN，特異地包含5'-5'、3'-3'、2'-2'、2'-3'和2'-5'核苷酸間鍵。在一個實施方案中，這類異常聯接被排除在免疫刺激性RNA基序外，盡管一個或多個這種聯接可存在于免疫刺激性ORN的別處。對于具有游離末端的免疫刺激性ORN而言，包含一個3'-3'核苷酸間聯接可導致免疫刺激性ORN具有兩個游離的5'端。相反，對于具有游離末端的免疫刺激性ORN而言，包含一個5'-5'核苷酸間聯接可導致免疫刺激性的ORN具有兩個游離的3'末本發明的免疫刺激性組合物可含有兩個或更多的免疫刺激性RNA基序，其可以通過分支的單元連接。核苷酸間聯接可以是3'-5'、5'-5'、3'-3'、2'-2'、2'-3'或2'-5'聯接。其中，名稱2，-5，根據核糖的碳原子選擇。異常核苷酸間聯接可以是磷酸二酯聯接，但是其也可以被修飾為硫代磷酸酯或本文所述的任何其它經修飾的聯接。下式通過核苷酸分支單元顯示本發明的分支的免疫刺激性ORN的一般結構。其中NUl、Mi2和Nii3可以通過3'-5'、5'-5'、3'-3'、2'-2'、2'-3'或2'-5'-聯接來連接。免疫刺激性ORN的分支也可以涉及非核苷酸接頭和脫堿基間隔的使用。在一個實施方案中，NUl、N化和Nu3表示相同或不同的免疫刺激性RNA基序。在另一實施方案中，NUl、Nii2和N化包含至少一個免疫刺激性RNA基序和至少一個免疫刺激性CpGDNA基序。免疫剌激性ORN可含有雙倍的或三倍的單元(GlenResearch,Sterling,VA)，尤其是具有3'-3'鍵的免疫刺激性ORN。在一個實施方案中，雙倍單元可以以1，3-雙-[5-(4，4'-二甲氧基三四丁酚醛)戊基酰胺基]丙基-2-[(2-氰乙基)-(N,N-二異丙基)]-亞磷酰胺為基礎。在一個實施方案中，三倍單元可以以丁1^-2,2，2-[3-(4，4'-二甲氧基三四丁酚醛)丙基氧甲基]乙基-[(2-氰乙基)-(N，N-二異丙基)]-亞磷酰胺的整合為基礎。多重雙倍、三倍或其它多倍單元對免疫刺激性ORN的分支導致樹狀聚體，其為本發明的另一實施方案。分支的免疫剌激性ORN可以導致免疫刺激性RNA的受體(如TLR3、TLR7和TLR8)的交聯，具有與未分枝形式的免疫刺激性ORN相比不同的免疫作用。另外，分支或其它的多體(multimeric)免疫刺激性ORN的合成可以穩定RNA不被降解，或可以使弱的或部分有效的RNA序列顯示出治療有用的免疫活性水平。免疫刺激性ORN也可以含有接頭單元，其得自肽修飾試劑或寡核苷酸修飾試劑(GlenResearch)。另外，免疫刺激性ORN可含有通過肽(酰胺)聯接與多聚物連接的一個或多個天然的或非天然的氨基酸殘基。3'-5',5'-5',3'-3'，2'-2',2'-3'和2'-5'核苷酸間聯接可以是直接的或非直接的。在該上下文中，直接聯接是指本文公開的磷酸聯接或經修飾的磷酸聯接，不含插入接頭部分。插入接頭部分是與本文公開的磷酸聯接或經修飾的磷酸聯接不同的有機部分，其可包括例如聚乙二醇、三乙二醇、六乙二醇、dSpacer(即脫堿基脫氧核苷酸)、二倍單元或三倍單元。在某些實施方案中，免疫刺激性ORN與另一實體綴合產生綴合物。本文使用的綴合物是指通過任何物理化學途徑(包括疏水相互作用和共價偶合)彼此結合的任兩個或多個實體的組合。在另一實施方案中，免疫刺激性ORN可以與被免疫刺激性受體識別的小分子量配體綴合。該受體優選是TLR家族的成員，例如TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8或TLR9。小分子量配體是針對這些受體的天然配體的擬態。例子包括但不限于刺激TLR7和TLR8二者的R-848(Resiquimod)、R-837(Imiquimod;ALDARA,3MPharmaceuticals)、7-脫氮-鳥苷、7-硫代-8-氧-鳥苷和7-烯丙基-8-氧-鳥苷(Loxoribine)。D-吡喃葡萄糖衍生物如3D-MPL(TLR4配體)也可以與免疫刺激性ORN綴合。Pam3-Cys是能夠與免疫刺激性ORN綴合的TLR2配體的一個例子。含有CpG基序的寡脫氧核苷酸是TLR9配體，這些也可以與本發明的免疫刺激性ORN綴合。在一個實施方案中，至少一個包含對剌激TLR9信號轉導有效的CpG基序的寡脫氧核苷酸與本發明的免疫剌激性ORN綴合。針對不同TLR的配體進入一個分子的綴合可導致受體的多聚化，這導致與任何單個這類配體引起的相比增強的免疫刺激或不同的免疫刺激譜。本發明一方面提供了本發明的免疫刺激性ORN和親脂部分的綴合物。在某些實施方案中，免疫刺激性ORN與親脂性部分共價連接。親脂性部分通常會存在于具有游離末端的免疫刺激性ORN的一個或多個末端上，盡管在某些實施方案中，親脂性部分可以在免疫刺激性ORN的別處存在，并從而不要求免疫刺激性ORN具有游離末端。在一個實施方案中，免疫刺激性ORN具有3'末端，親脂性部分與所述3'末端共價連接。親脂性基團一般可以是膽固醇基、經修飾的膽固醇基、膽固醇衍生物、被還原的膽固醇、被取代的膽固醇、膽甾垸、C16垸基鏈、膽汁酸、膽酸、牛磺膽酸、脫氧膽酸、油酰基石膽酸(oleyllitocholicacid)、油酰膽烯酸、糖脂、磷脂、鞘脂、類異戊二烯如類固醇、維生素如維生素E、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、脂肪酸酯如甘油三酯、芘、紫菜堿、Texaphyrine、金剛烷胺、吖啶、生物素、香豆素、熒光素、羅丹明、Texas-Red、地高辛(digoxygenin)、二對甲氧三苯甲基、t-丁基二甲基甲硅烷、t-丁基聯二苯甲硅烷、花青染料(例如Cy3或Cy5)、Hoechst33258染料、補骨脂素或布洛芬。在某些實施方案中，親脂性部分選自膽固醇基、棕櫚基和脂肪酰基。在一個實施方案中，親脂性部分為膽固醇基。認為本發明的免疫刺激性ORN中包括一個或多個這類親脂性部分又賦予它們針對核酸酶降解的額外的穩定性。當本發明的單個免疫刺激性ORN中存在兩個或多個親脂性部分時，這類親脂性部分可以彼此獨立地被選擇。在一個實施方案中，親脂性部分附著在免疫刺激性ORN的核苷酸的2'位置上。親脂性基團或者或額外地與免疫剌激性ORN的核苷酸的雜環核堿基連接。親脂性部分可以通過任何合適的直接或間接聯接與免疫刺激性ORN共價連接。在一個實施方案中，該聯接是直接的并且是酯或酰胺。在一個實施方案中，該聯接是間接的并包括間隔部分，例如一個或多個脫堿基的核苷酸殘基、寡聚乙二醇如三乙二醇(間隔9)或六乙二醇(間隔18)或鏈垸二醇如丁二醇。在一個實施方案中，本發明的免疫刺激性ORN有利地與陽離子脂質或陽離子肽組合。陽離子脂質和陽離子肽被認為幫助將免疫刺激性ORN運輸進核內體區室中，TLR8存在于其中。在一個實施方案中，陽離子脂質為DOTAP(N-[l-(2，3-二油酰氧)丙基]-N，N,N-三甲基銨甲基硫酸酯)。DOTAP被認為將RNA寡聚體轉運進入細胞并特異地運輸至核內體區室中，在那里其可以以pH依賴性的模式釋放RNA寡聚體。在核內體區室中時，RNA可以與某些細胞內TLR相互作用，引發設計免疫應答產生的TLR介導的信號轉導途徑。具有相似特性(包括運輸至核內體區室)的其它試劑可以代替DOTAP或除DOTAP外使用。其它液體配方包括例如EFFECTENE(具有特異DNA壓縮增強子的非脂質體脂質)和SUPERFECT(新穎的作用dendrimeric技術)。脂質體可商業得自GibcoBRL，例如LIPOFECTINtm和LIPOFECTACETM，它們是由陽離子脂質如N-[l-(2，3二油酰氧)-丙基]-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)和二甲基溴化二十八烷銨(DDAB)形成的。用于制造脂質體的方法是本領域已知的并描述于許多出版物中。脂質體也已由GregoriadisG(1985)TrendsBiotechnol3:235-241綜述。在一個實施方案中，本發明的免疫刺激性ORN是具有一級結構和二級結構的共價閉合的、啞鈴形分子的形式。如本文所公開的，在一個實施方案中這類環狀寡核糖核苷酸包含通過插入的雙鏈區段連接的兩個單鏈環。在一個實施方案中，至少一個單鏈環包含本發明的免疫刺激性RNA基序。本發明的其它共價閉合的、啞鈴形的分子包括嵌合的DNA:RNA分子，其中例如雙鏈區段至少部分是DNA(例如同源二聚體dsDNA或醫院二聚體DNA:RNA)且至少一個單鏈的環包含本發明的免疫刺激性RNA基序。或者，嵌合分子的雙鏈區段為RNA。在某些實施方案中，免疫刺激性的ORN是經分離的。經分離的分子是基本純凈的并且不含其它物質的分子，所述其它物質與所述分子通常一起存在于自然界中或體內系統中，存在程度達到對所述分子目的用途而言能夠實踐的并且適當的程度。免疫刺激性ORN尤其是足夠純凈和足夠不含細胞的其它生物學組分的，從而適用于例如生產藥物制劑。因為經分離的本發明的刺激性ORN可以與可藥用運載體在藥物制劑中混合，所以免疫刺激性ORN可僅包含按重量計小量百分比的制劑。但是免疫刺激性ORN是基本純凈的，因為所述ORN己經基本與生活系統中可與之結合的物質分離。為了本發明中的用途，本發明的免疫刺激性ORN可以使用或適應本領域公知的大量步驟的任何來從新合成。例如e氰乙基亞磷酰胺方法(BeaucageSLetal.(1981)TetrahedronLett22:1859);核苷H-磷酸酯方法(GareggPetal.(1986)TetrahedronLett27:4051-4;FroehlerBCetal.(1986)NuclAcidRes14:5399-407;GareggPetal.(1986)TetrahedronLett27:4055-8;GaffneyBLetal.(1988)TetrahedronLett29:2619-22)。這些化學可以通過市售的大量自動化核酸合成儀進行。根據本發明適用的其它合成方法公開于UhlmannEetal.(1990)ChemRev90:544-84禾卩GoodchildJ(1990)BioconjugateChem1:165中。對寡核糖核苷酸的合成可以在溶液中或在固相支持物上進行。在溶液中，優選阻滯偶聯反應(二聚體、三聚體、四聚體等)，而固相合成優選使用單體構件塊在分步的過程中進行。已經描述(EcksteinF(1991)OligonucleotidesandAnalogues,APracticalApproach,IRLPress,Oxford)了不同的化學，例如磷酸三酯法、H-磷酸酯方法和亞磷酰胺方法。盡管在磷酸三酯方法中，反應性的磷基團在氧化速率+V中，但是根據亞磷酰胺和H-磷酸酯途徑，偶聯反應中使用更具反應性的Phosphor+111衍生物。在后兩種途徑中，磷在偶聯步驟后被氧化產生穩定的P(V)衍生物。如果氧化劑是碘/水/堿基，則在脫保護后獲得磷酸二酯。相反，如果氧化劑是硫化劑如Beaucage，s試劑，則在脫保護后獲得硫代磷酸酯。用于寡核糖核苷酸合成的一個有效方法是使用(如MatteucciandCaruthers最初針對寡聚脫氧核苷酸所描述的)亞磷酰胺化學的固體支持合成法的組合。MatteucciMDetal.(1981)JAmChemSoc103:3185。對寡核糖核苷酸的合成與對寡脫氧核苷酸的合成是類似的，差異在于寡核糖核苷酸中存在的2'羥基必須被合適的羥基保護基團保護。單體可以例如被RNA單體構件塊中的2'-0-t-丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)基團保護。然而，使用含有2'-O-三異丙基甲硅烷基氧甲基(TOM)基團(TOM-Protecting-GroupTM)的單體合成RNA已經被報導產生更高的偶聯效力，因為TOM保護基團顯示比TBDMS基團更低的位阻。盡管使用氟化物去除TBDMS保護基團，但是使用乙醇/水中的甲胺在室溫下達成TOM基團的快速脫保護。在寡聚(核糖)核苷酸合成中，優選從3'-5'末端的鏈延伸，這通過將具有3'-磷(in)基團的核糖核苷酸單元或其被活化的衍生物與另一核苷酸單元的游離5'羥基基團偶聯達成。合成可以使用自動化DNA/RNA合成儀便利地進行。其中可使用合成儀供應商推薦的合成循環。對于核糖核苷亞磷酰胺單體而言，偶聯時間與脫氧核苷單體相比更長(例如400秒)。作為固體支持物，可以使用500到1000A的可控多孔玻璃(CPG)支持物或有機多聚體支持物，例如引物支持物PS200(Amersham)。固體支持物通常含有通過其3'-末端結合的第一個核苷，例如5'-0-二對甲氧三苯甲基-N-6-苯甲酰腺苷。用三氯乙酸切割5，-O-二對甲氧三苯甲基基團后，使用例如5，-0-二對甲氧三苯甲基-^保護的-2，-0-叔丁基二甲基甲硅垸基-核苷-3'-0-亞磷酰胺達成鏈延伸。連續的重復循環后，通過用濃氨水/乙醇(3:l，v:v)在30'C處理24小時將完成的寡核糖核苷酸從支持物上切割并脫保護。最后使用三乙胺/HF將TBDMS封閉基團切除。可以通過離子交換柱高壓液相色譜(HPLC)、離子對反相HPLC或聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)純化粗的寡核糖核苷酸并通過質譜法來分析。5'綴合物的合成后直接在固相合成中將待連接的的分子的亞磷酰胺與末端核苷酸的5'羥基偶聯。可商業獲得這類配體的多種亞磷酰胺衍生物，例如膽固醇、吖啶、生物素、普素拉倫(psoralene)、乙二醇或氨基垸基殘基。或者，可以在固相合成期間引入氨基烷基功能，其允許通過活化的綴合物分子(例如活性酯、異硫脲或碘-乙酰胺)進行合成后衍生化。3'端綴合物的合成通常通過使用相應被修飾的固體支持物完成，所述支持物例如可商業獲得的膽固醇基衍生的固體支持物。然而，綴合也可以在核苷酸間鍵、核堿基或核糖殘基(例如核糖的2，-位置)上進行。對于環狀寡核糖核苷酸而言，寡核苷酸鏈的延伸可以使用標準亞磷酰胺化學在核苷酸PS固體支持物(GlenResearch)上進行。然后使用磷酸三酯偶聯步驟(Alazzouzietal.(1997)NucleosidesNucleotides16:1513-14)在固體支持物上進行環化反應。在用氫氧化銨最終脫保護時，事實上進入溶液中的唯一產物是期望的環狀寡核苷酸。本發明的環狀寡核糖核苷酸包括閉環形式的RNA，并可包括帶有或不帶有雙鏈RNA的單鏈RNA。例如，在一個實施方案中，所述環狀寡核糖核苷酸包括雙鏈的RNA并呈現具有兩個單一標準環的啞鈴構象，所述兩個環通過插入的雙鏈區段連接。共價閉合的、椏鈴形的CpG寡脫氧核苷酸已經描述于U.S.Pat.No.6,849,725中。在另一實施方案中，環狀寡核糖核苷酸包括雙鏈的RNA并呈現下述構型，所述構型具有通過插入的雙鏈區段連接的三個或更多的單鏈環。在一個實施方案中，免疫刺激性RNA位于一個或多個單鏈區段中。本發明的免疫刺激性ORN適用于單獨或與其它試劑如佐劑組合使用。本文使用的佐劑表示除抗原以外增強應答抗原的免疫細胞活化(例如體液和/或細胞免疫應答)的物質。佐劑促進佐細胞的聚集和/或活化，以增強抗原特異的免疫應答。佐劑被用于增強疫苗的效率，所述疫苗即用于誘導針對抗原的保護性免疫的含抗原組合物。佐劑通常包括傳見儲存效應的佐劑、免疫刺激佐劑和創建儲存效應并刺激免疫系統的佐劑。本文使用的創建儲存效應的佐劑是指引起抗體在體內緩慢釋放，從而延長免疫細胞對抗原暴露的佐劑。這種佐劑包括但不限于明礬(例如氫氧化鋁、磷酸鋁)；基于乳劑的配方，包括礦物油、非礦物油、油包水或油包水包油乳劑，水包油乳劑例如Montanide佐劑的SeppicISA系列(例如MontanideISA720;AirLiquide,Paris，法國);MF畫59(用Span85和Tween80穩定的水包角鳘烯乳劑，ChironCorporation,Emeryville,Calif.);和PROVAX(含有穩定洗滌劑和成微團劑的水包油乳齊O;IDECPharmaceuticalsCorporation,SanDiego,Calif.)。免疫刺激佐劑是引起免疫系統細胞活化的佐劑。其可例如引起免疫細胞的生產和細胞因子的分泌。這類佐劑包括但不限于從Q.saponaria樹樹皮中純化的皂苷，如QS21(在HPLC級分的第21個峰中洗脫的糖脂；AquilaBiopharmaceuticals，Inc.,Worcester,Mass.);多聚[二(羧酸苯氧基(carboxylatophenoxy))磷月青](PCPP多聚物；VirusResearchInstitute,美國)；脂多糖衍生物如單磷酸類脂A(MPL;RibiImmunoChemResearch,Inc.,Hamilton,Mont.)、胞壁酰二肽(MDP;Ribi)、andthreonyl-胞壁酰二肽(t-MDP;Ribi);OM-174(與脂質A相關的葡糖胺二糖；OMPharmaSA,Meyrin,Switzerland)禾口Leishmania延伸因子(經純《七的Leishmania蛋白；CorixaCorporation,Seattle,Wash.)。該種類的佐劑也包括CpGDNA。創建儲存作用并刺激免疫系統的佐劑是具有上述兩種功能的化合物。這類佐劑包括但不限于ISCOMS(免疫刺激復合物，其含有混合的皂苷、脂質并與可保留抗原的孔形成病毒大小的顆粒；CSL,Melbourne,Australia);SB-AS2(SmithKlineBeecham佐劑系統弁2，其為含有MPL和QS21的水包油乳劑SmithKlineBeechamBiologicals[SBB],Rixensart，比利時)；SB-AS4(SmithKlineBeecham佐劑系統#4,其含有明礬和MPL;SBB，比利時)；非離子嵌段共聚物，其形成微團如CRL1005(這些含有側翼為聚氧乙烯鏈的疏水性聚氧丙烯線性鏈；Vaxcel,Inc.，Norcross,Ga.);和Syntex佐劑配方(SAF，含有Tween80的水包油乳劑和非例子的嵌段共聚物；SyntexChemicals,Inc.,Boulder,Colo.)。本發明一方面提供了自身包含本發明的免疫刺激性ORN的佐劑。在另一實施方案中，本發明提供了包含本發明的免疫刺激性ORN和至少一種其它佐劑的佐劑(組合佐劑)。所述其它佐劑可包含創建儲存作用的佐劑、免疫刺激的佐劑、創建儲存作用并刺激免疫系統的佐劑及其任何組合。在一個實施方案中，本發明的免疫刺激性ORN和至少一種其它佐劑彼此共價連接。根據本發明的組合佐劑與免疫刺激ORN單獨和至少一種其它佐劑單獨的作用之和相比，可顯示協同的免疫刺激作用。另外或或者，根據本發明的組合佐劑可顯示與免疫刺激性ORN單獨或至少一種其它佐劑單獨相比，改變的免疫刺激譜。例如，組合佐劑可以在一個實施方案中提供更分支形式的Thl/Th2免疫刺激，或其可以在另一實施方案中提供更傾斜(skewed)形式的Thl/Th2免疫刺激。本領域的這些技術人員應當明白如何選擇個體組分以促進期望類型的免疫刺激，例如關于Thl和Th2特征更加分支或更傾斜。Thl和Th2在下文中有進一步描述。還提供了一種組合物，所述組合物包含本發明的免疫刺激性ORN加上另一佐劑，其中所述其它佐劑為細胞因子。在一個實施方案中，該組合物是本發明的免疫刺激性ORN和細胞因子的綴合物。細胞因子是由許多種細胞生產的介導炎癥反應和免疫反應的可溶性蛋白質和糖蛋白。細胞因子介導免疫系統細胞之間的交流，局部和全身性地作用以募集細胞和調節它們的功能和增殖。細胞因子的范疇包含先天免疫的介質和調節器、適應性免疫的介質和調節器，以及血細胞生成的刺激器。包括在細胞因子內的是白介素(例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL畫7、IL-8、IL-9、IL畫IO、IL畫ll、IL-12、IL隱13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18和白介素19-32(IL-19-IL-32)，除了別的以外)、趨化因子(例如IP-IO、RANTES、MlP-la、MIP-l/3、MIP-3o;、MCP-1、MCP陽2、MCP畫3、MCP-4、嗜酸細胞活化趨化因子、I-TAC禾HBCA畫1，除了別的以外)以及其它細胞因子，包括1型干擾素(例如IFN-a禾口IFN-/3)、2型干擾素(例如IFN-7)、腫瘤壞死因子-a(TNF-ce)、轉化生長因子-/3(TGF-Z3)和多種集落刺激因子(CSF)，包括GM-CSF、G-CSF和M-CSF。還提供了包含本發明的免疫刺激性ORN加上免疫刺激性CpG核酸的組合物。在一個實施方案中，該組合為本發明的免疫剌激性ORN和CpG核酸的綴合物，例如RNA:DNA綴合物。在一個實施方案中，該組合物是本發明的免疫刺激性ORN與CpG核酸的混合物，即不是RNA:DNA綴合物。本文使用免疫刺激性CpG核酸是指天然或合成的DNA序列，其含有CpG基序并刺激免疫系統細胞的活化或增殖。免疫刺激性CpG核酸已經在大量出版的專利、公開的專利申請和其它出版物中描述，包括U.S.Pat.Nos.6，194，388;6，207，646;6,214,806;6,218,371;6,239,116和6,339,068。在一個實施方案中，免疫刺激性CpG核酸是6-100個核苷酸長的CpG寡脫氧核苷酸(CpGODN)。在一個實施方案中，免疫刺激性CpG核酸是8-40個核苷酸長的CpG寡脫氧核苷酸(CpGODN)。免疫刺激性CpG核酸包括不同種類的CpG核酸。一種能夠激活B細胞但是在誘導IFN-o;和NK細胞活化時相對弱；該種類已經被命名為B類。典型地，B類CpG核酸被完全穩定，其在某些優選的堿基環境中具有未甲基化的CpG二核苷酸。參閱例如U.S.Pat.Nos.6,194,388;6,207,646;6,214,806;6,218,371;6,239,116禾Q6,339,068。另一種類能夠誘導IFN-a和NK細胞活化，但是在刺激B細胞時相對弱，該種類己經被稱作A類。A類CpG核酸在5'和3'兩個末端典型地具有回文的至少6個核苷酸的含磷酸二酯CpG二核苷酸的序列和穩定的多聚G序列。參閱例如公開的國際專利申請WO01/22990。CpG核酸的再一種類激活B細胞和NK細胞并誘導IFN-a;該種類已經被稱作C類。如首先分析的，C類CpG核酸典型地被完全穩定，包括B類型序列和富含GC的回文序列或近似回文序列。該種類己經描述于公開的U.S.專利申請2003/0148976中，其全部內容通過引用并入本文。免疫刺激性CpG核酸也包括如公開的U.S.專利申請2003/0148976中所公開的所謂的軟性和半軟性CpG核酸，所述申請的全部內容通過引用并入本文。這類軟性和半軟性免疫刺激性CpG核酸整合核酸酶抗性和核酸酶敏感性核苷酸間鍵的組合，其中不同類型的鍵根據某些原則定位。還提供了包含本發明的免疫刺激性ORN系上另一佐劑的組合物，其中所述另一佐劑是脂肽如Pam3Cys、陽離子多糖如殼聚糖，或陽離子肽如魚精蛋白。在一個實施方案中，組合物為本發明的免疫刺激性ORN和另一佐劑的綴合物。本發明一方面提供了包含本發明的免疫刺激性ORN和抗原的疫苗。本文使用的"抗原"表示能夠被T細胞抗原受體或B細胞抗原受體識別的任何分子。該術語廣泛地包含被宿主免疫系統識別為外源的任何類型的分子。抗原一般包括但不限于細胞、細胞提取物、蛋白質、多肽、肽、多糖、多糖綴合物、多糖和其它分子的肽和非肽擬態、小分子、脂質、糖脂、多糖、碳水化合物、病毒和病毒提取物以及多細胞生物如寄生蟲和變應原。對于為蛋白質、多肽或肽的抗原而言，這類抗原可包括編碼這類抗原的核酸分子。抗原更特異地包括但不限于癌癥抗原，其包括癌細胞和在癌細胞中或癌細胞上表達的分子；微生物抗原，其包括微生物和在微生物中或微生物上表達的分子；和變應原。因此，本發明在某些實施方案中提供了用于癌癥、傳染原和變應原的疫苗。本發明的一個方面提供了本發明的免疫刺激性ORN用于制備藥劑的用途，所述藥劑用于疫苗接種受試者。本發明的一個方面提供了用于制備疫苗的方法。該方法包括下述步驟將本發明的免疫刺激性ORN置于與抗原和任選的可藥用運載體的直接結合中。在多種實施方案中，抗原為微生物抗原、癌癥抗原或變應原。本文使用的"微生物抗原"是指微生物的抗原，其包括但不限于病毒、細菌、寄生蟲和真菌。這類抗原包括完整的微生物及其天然的隔離群或片段或衍生物，也包括與天然微生物抗原相同或相似并誘導對該微生物特異的免疫應答的合成化合物。如果化合物誘導對天然微生物抗原的免疫應答(體液和/或細胞)，則其與天然微生物抗原類似。這類抗原是本領域常規使用的并是本領域常規技術人員公知的。病毒是小傳染原，其一般含有核酸核心和蛋白質外殼，但是不能獨立生活的生物。病毒也可以采取缺乏蛋白質的傳染性核酸的形式。不存在病毒在其中能夠復制的生活細胞時，病毒不能存在。病毒通過胞吞作用或直接注射DNA(噬菌體)進入特異的生活細胞并繁殖，引起疾病。然后繁殖的病毒可以被釋放或感染其它細胞。一些病毒是含DNA的病毒，其它是含RNA的病毒。在一些方面，本發明也旨在治療疾病，所述疾病中感染性月元蛋白質(prion)在疾病進展中被復制，所述疾病例如牛海綿狀腦病(即瘋牛病，BSE)或動物中的綿羊瘙癢病感染，或人中的Creutzfeldt-Jakob疾病。病毒包括但不限于腸道病毒(包括但不限于/^com"WnW^科，例如脊髓灰質炎病毒、柯薩奇病毒(coxsackievirus)、艾柯病毒(echovirus))、輪狀病毒、腺病毒、肝炎病毒。已經在人中發現的病毒的特異例子包括但不限于7"rav/nV/ae(例如人免疫缺陷病毒如HIV-1(也稱作HTLV-III、LAV或HTLV-III/LAV或HIV-III;和其它隔離群，例如HIV-LP));乃'cwmmW^e(例如脊髓灰質炎病毒、甲型肝炎病毒；腸道病毒、人柯薩奇病毒、鼻病毒、艾柯病毒)；O^^W^e(例如引起胃腸炎的菌株)；7bgaWnV/ae(例如馬腦炎病毒、風疹病毒)；F/aWvzWdae(例如登革熱病毒、腦炎病毒、黃熱病病毒)；Gra"avzW^e(例如冠形病毒)；A/wMovz'nV/ae(例如皰疹性口炎病毒、狂犬病病毒)；Fz7ov/nWae(例如埃博拉病毒)；(例如副流感病毒、流行性腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒)；(9r/Aom;;xoWn'fi^e(例如流感病毒)；_8t/"_yavzWfifae(例如漢坦病毒(Hantaanviruses)、bunya病毒、靜脈病毒(phleboviruses)禾口Nairo病毒)；Jre"謂'nV/ae(出血熱病毒)；/e<rw>^/ae(例如呼月3病毒、orbiviurses禾口輪狀病毒)；說r"aWnV/ae;//e/a^"crw'nV/ae(乙型肝炎病毒)；尸arvovzVWae(細小病毒組)；尸apovavzWdae(乳頭瘤病毒屬、多瘤病毒)；A;fe"ovzWfi^e(大部分月泉病毒)；//e/77asW^/ae(單純皰疹病毒(HSV)1和2、水痘一帶狀皰疹病毒、巨細胞病毒(CMV));尸oxv/r油e(類天花病毒、痘苗病毒、痘病毒)；7nW頻W(iae(例如非洲豬瘟病毒)；和未分類的病毒(例如海綿狀腦病的病原(etiologicalagent),丁型病毒性肝炎的病原(被認為是乙型肝炎病毒的有缺陷的隨體)，非甲型、非乙型肝炎的病原(種類1=內部傳輸；種類2=腸胃外傳輸)(即丙型肝炎)；Norwalk及相關病毒和星狀病毒)。細菌是通過二元裂變無性繁殖的單細胞生物。根據其形態學、染色反應、營養和代謝需要、抗原結構、化學組成和遺傳同源性對它們進行分類和命名。細菌根據其形態學形式可以被分為三類球形(球菌)、直棒狀(桿菌)和彎曲或螺旋棒狀(弧菌、彎曲桿菌、螺菌和螺旋體)。細菌也更通常根據它們的染色反應被分為兩類生物，革蘭氏陽性和革蘭氏陰性。革蘭氏是指在微生物學實驗室中通常進行的染色方法。革蘭氏陽性生物在染色步驟后保持染色并顯示深紫色。革蘭氏陰性生物不保持染色但是吸收復染，并從而顯示粉色。傳染性的細菌包括但不限于革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細菌。革蘭氏陽性細菌包括但不限于PaWew"http://"的種、5"to//^/ococcz'的種和5V印tococa^的種。革蘭氏陰性細菌包括但不限于_Esc/^hc/'aco/z'、尸w^/owo"^的種和5Wmo"e〃a的種。傳染性細菌的特異例子包括但不限于//e/z.coZacter/j/o/7S、5o/re/z'a6t/廠gc/o/^n'、丄egz'owe〃a/wewmo//7z'a、Afyco^cte".as戸(例女口M.勵ercw/c^、Mav/wm、M./w加ce/Zw/are、M.7Ve/^m'a艦m'wg"W5、Z^e"'amowoc_ytogeway、5^"，ococct^/_yogew&y(A組5Wptococctw)、5Yr一ococcMSagfl/aWae(B組》SV，tococc—、5Vre;tococct^(厭氧禾中)、5^印tococcus/wet/mom'fle、戶aAogew/cCam/3^o6acter平、五wteracoccws5p.、//ae附o//n7wsz'w^Zwewzae、SacZ〃iw7Vej90打ema/a〃iWwm、7>e/owemapeWewwe、Z/e/>to5pz>"、J^'c&e"w'a禾口寄生蟲是依賴于其它生物而存活的生物，因此其必須進入或感染其它生物以持續它們的生命周期。被感染的生物(即宿主)對寄生蟲提供營養和生境。盡管該術語寄生蟲以其最廣泛的含義可以包括所有的傳染原(即細菌、病毒、真菌、原生動物和蠕蟲)，但是一般而言，該術語用于單獨表示原生動物、蠕蟲和外寄生節肢動物(例如蜱、螨等)。原生動物是單細胞的生物，其可細胞內或細胞外復制，尤其是在血、腸道或組織的細胞外基質中。蠕蟲是幾乎總是在細胞外的多細胞生物(除7WC/n>ze//aspp.外)。蠕蟲通常需要從初級宿主中退出并轉移進入次級宿主中，從而復制。與這些上述的種類相反，外寄生節肢動物形成與宿主身體外表面的寄生關系。寄生蟲包括細胞內寄生蟲和專性的細胞內寄生蟲。寄生蟲的例子包括fS不限于尸/osmod/i/m聲/c^an/zw、尸/asmo&wmova/e、/Vosmo^w/w附a/fln'ae、尸/asm^/otZ/MWv/vflx、^/as^wotZ/w/wAwc>v/asz'、Sa^e^am/crod、Mocfesi'ewse禾口Sc/n'stosomama朋om'。真菌是真核生物，只有一部分在脊椎動物哺乳動物中引起感染。因為真菌是真核生物，所以它們與原核的細菌在尺寸、結構組建、生命周期和繁殖機制上顯著不同。真菌通常以其形態學特征、生殖模式和培養特征被分類。盡管真菌可在受試者中引起不同類型的疾病，例如吸入真菌抗原后的呼吸變態反應、由于攝取毒性物質(例如由毒蘑菇生產的Jm"m'to毒素和毒蕈肽和由曲霉的種生產的黃曲霉毒素)引起的真菌中毒，但是不是所有的真菌引起傳染病。傳染性真菌可以引起全身性的或淺表性的感染。初級全身性感染可以在正常的健康受試者中發生，機會性感染最經常存在于免疫妥協的受試者中。引起初級全身性感染的最常見真菌物質包括別mtom;;c"、Cocc^o^es和//^to;/aww。在免疫妥協的或免疫抑制的受試者中引起機會性感染的常見真菌包括但不限于OwA^a/Z^c"似、Co^tococc^weo/oma似和多種A^w^7/m的種。全身性真菌感染是內部器官的侵入性感染。生物通常經過肺、胃腸道或靜脈內導管進入身體。這些類型的感染可以由初級病原真菌或機會性真菌引起。淺表性的真菌感染涉及真菌在外部表面的生長而不侵入內部組織。典型的淺表性真菌感染包括涉及皮膚、毛發或指甲的表皮真菌感染。與真菌感染相關的疾病包括曲霉病，芽生菌病，念珠菌病，著色芽生菌病，球孢子菌病，隱球菌病，真菌眼感染，真菌毛發、指甲和皮膚感染，組織胞漿菌病，瘢痕疙瘩性芽生菌病，足菌腫，耳真菌病，副球孢子菌病，散布的尸em'd〃/"mwame^e"暗色絲孢霉病，鼻孢子菌病，孢子絲菌病和接合菌病。其它醫學相關的微生物己經在文獻中廣泛描述，例如參閱C.G.AThomas,MedicalMicrobiology,BailliereTindall,GreatBritain1983，其整體內容通過引用并入本文。前述列表的每一內容都是闡述性的而非旨在限制。本文使用的術語"癌癥抗原"和"腫瘤抗原"可交換地使用來表示化合物，如肽、蛋白質或糖蛋白，其與腫瘤或癌細胞相關，并且在主要組織相容性復合物(MHC)分子環境中的抗原呈遞細胞表面上表達時能夠激發免疫應答。由癌細胞差異表達的癌癥抗原能夠被利用以耙向癌細胞。癌癥抗原是可能明顯地刺激腫瘤特異免疫應答的抗原。這些抗原中的一些由正常細胞編碼，盡管不必須由正常細胞表達。這些抗原可以被表征為在正常細胞中通常沉默(即不表達)的、僅在分化的某些階段表達的，和短暫表達的抗原(例如胚胎抗原和胎兒抗原)。其它癌癥抗原由突變的細胞基因編碼，例如癌基因(例如激活的ms癌基因)、抑制基因(例如突變的p53)、得自內部缺失或染色體易位的融合蛋白。還有其它癌癥抗原可以由病毒基因編碼，例如RNA和DNA腫瘤病毒上載有的病毒基因。癌癥抗原可以通過制備癌細胞粗提物(例如CohenPAetal.(1994)CancerRes54:1055-8中所述)、通過部分純化抗原、通過重組激素或通過己知抗原的從新合成從癌細胞中制備。癌癥抗原包括但不限于被重組表達的抗原、其免疫原性部分或其完整的腫瘤或癌癥或細胞。這類抗原可以被重組地或通過本領域己知的任何其它手段分離或制備。腫瘤抗原的例子包括MAGE、MART-1/Melan-A、gp100、二肽基肽酶IV(DPPIV)、腺苷脫氨酶結合蛋白(ADAbp)、親環蛋白b、結腸直腸相關抗原(CRC)--C017-1A/GA733、癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-1和CAP-2、etv6、amll、前列腺特異抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-l、PSA-2禾HPSA畫3、前列腺特異膜抗原(PSMA)、T-細胞受體/CD3;鏈、MAGE-家族的腫瘤抗原(例如MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE隱A4、MAGE畫A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-AIO、MAGE-All、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE畫B3)、MAGE畫Xp4(MAGE-B4)、MAGE-C1、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)、GAGE-家族的腫瘤抗原(例如GAGE-1、GAGE畫2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE隱7、GAGE扁8、GAGE畫9)、BAGE、RAGE、LAGE-1、NAG、GnT隱V、MUM-1、CDK4、酪氨酸酶、p53、MUC家族、HER2/neu、p21ras、RCAS1、Qf-肽蛋白、E-鈣粘蛋白、ce-連環蛋白、/3-連環蛋白和7連環蛋白、pl20ctn、gpl00Pmelll7、PRAME、NY-ESO-l、cdc27、腺瘤性結腸息肉病蛋白(APC)、胞影蛋白、連接蛋白37、Ig-獨特型、p15、gp75、GM2和GD2神經節苷酯、病毒產物如人乳頭狀瘤病毒蛋白、Smad家族的腫瘤抗原、lmp-l、P1A、EBV-編碼的核抗原(EBNA)-1、腦糖原磷酸化酶、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX隱1、SSX-4、SSX-5、SCP隱1和CT-7，以及c-erbB-2。該列表不表示限制。本文使用的"變應原"是能夠激發免疫應答的分子，所述免疫應答特征在于生產IgE。變應原也是能夠在易感的受試者中誘導變應性應答或哮喘應答的物質。因此，在本發明的上下文中，術語變應原表示特異類型的抗原，其引發由IgE抗體介導的變應性應答。變應原的列表是龐大的并可包括花粉、昆蟲毒液、動物皮屑粉塵、真菌孢子和藥物(例如青霉素)。天然的動物和植物變應原的例子包括對以下屬特異的蛋白質Canis(C朋z、々mz7zYm'力；Dermatophagoides(例如Z)e/7wa/opAagc^fifesy^tn.wae);Felis(Fe/z'sdom&y"cws》Ambrosia(^mZros7.aaWem^/^/b/Zfl);Lolium(例如Zo//wm/e;-e朋e禾口丄o/z.wmmw/^/7oram);Cryptomeria(O^/^owen'ay.opom'ca);Alternaria(yl/te/7zan.afl/ferwato);Aider;Alnus(yl/ww51gw/riwosa);Betula(5e似/avem/cos");Quercus(2w"ctwa腸)；Olea(6/eaewraj:a);Artemisia(v^te/m'w'avw/gan力；Plantago(例如尸/朋tago/awceo/ata);Parietaria(例如尸an'etan'aq^c/wafo禾口/wdaz'ca);Blattella(例如5/a"e〃agermaw'ca);Apis(例如J/^wwtoy7on/m);Cupressus(例如Cw/7ray5m"/w/erv7'rera、Q/pms;ywj禾口Cw/mwtwwacracarpa);Juniperus(例如Jwm)emssaZH'"o/cfes1、c/wm)en^Wr^"Zawa、/wm》en^cowmwm^禾口/wm》en^;Thuya(例如77w少a;Chamaecyparis(例如CAawaecj^"n'51oZ)A"fl);Periplaneta(例如尸en》/"/2etofl/we"'c"wa);Agropyron(例如v4gra/_>ro"repe/iy);Secale(例如Seca/ecerea/e);Triticum(例如7h'ric簡aeWv腿);Dactylis(例如Z)ac(ytog7omerata);Festuca(例如FeWwcae/a"or);Poa(例如尸oapratewsz、禾口尸oflcompreMa);Avena(例如Xvewasa&va);Holcus(例如i/o/ci^/awa^y);Anthoxanthum(例如JwAoxaw/Aw/Mocfora,wm);Arrhenatherum(例如J/rAewaAen/Ane/ari"s);Agrostis(例如jgrostoa/6a);Phleum(例如尸^/ewm/rate似e);Phalaris(例如尸Aa/an、anw&"acea);Paspalum(例如尸as/a/ww);Sorghum(例如5brgAwmAa/e/ew57^)禾口Bromus(例如5ramtw/weA7m、)。本發明一方面提供了本發明的免疫刺激性ORN和抗原的綴合物。在一個實施方案中，本發明的免疫刺激性ORN與抗原共價連接。免疫刺激性ORN和抗原之間的共價聯接可以是任何合適種類的共價聯接，只要免疫刺激性ORN和抗原如此結合時保留各自組建的可測量的功能活性即可。在一個實施方案中，共價聯接是直接的。在另一實施方案中，共價聯接是間接的，例如通過接頭部分。共價連接的免疫刺激性ORN和抗原可以在細胞內被加工以彼此釋放。以此種方式，任一組分遞送至細胞與作為獨立制劑或獨立組分施用時其遞送相比可被增強。在一個實施方案中，抗原是抗原本身，即其為預先形成的抗原。本發明的一個方面提供了一種藥物組合物，其包含與遞送媒介結合的本發明的組合物。在多種實施方案中，遞送媒介可選自陽離子脂質、脂質體、螺旋體、病毒顆粒、免疫刺激復合物(ISCOM)、微粒、微球、毫微球、單層囊泡(LUV)、多層囊泡、水包油乳劑、油包水乳劑、乳體和聚陽離子肽，和任選的可藥用的運載體。可藥用的運載體在下文討論。本發明的藥物組合物任選地可以進一步包含抗原。本發明的組合物與存在的抗原一起，使用合適的方法被送入與遞送媒介的物理結合中。免疫刺激性組合物可以包含在遞送媒介中，或其可以存在于遞送媒介的溶劑暴露的表面上或與之結合。在一個實施方案中，免疫刺激性ORN存在于遞送媒介的溶劑暴露的表面上或與之結合，且如果存在抗原的話，其包含在遞送媒介中。在另一實施方案中，免疫刺激性ORN和抗原二者均存在于遞送媒介的溶劑暴露表面上或與之結合。還在另一實施方案中，抗原存在于遞送媒介的溶劑暴露表面上或與之結合，免疫刺激性ORN包含在遞送媒介中。還在另一實施方案中，免疫刺激性ORN和抗原二者(如果包含抗原的話)均包含在遞送媒介中。本發明還提供了本發明的免疫刺激性組合物的使用方法。本發明一方面提供了激活免疫細胞的方法。根據本發明該方面的方法包括下述步驟將免疫細胞與有效量的本發明組合物體外或體內接觸，以激活免疫細胞。本發明的組合物可任選地含有抗原。本文使用的"免疫細胞"是指任何骨髓衍生的細胞，其參與先天的或適應的免疫應答。免疫系統的細胞包括，但不限于樹狀突細胞(DC)、天然殺傷(NK)細胞、單核細胞、巨噬細胞、粒細胞、B淋巴細胞、漿細胞、T淋巴細胞及其前體細胞。本文使用的術語"有效量"是指導致期望的生物效應的必要或充分的物質量。有效量能夠但是不必須受限于單次施用中施用的量。本文使用的術語"激活免疫細胞"是指誘導免疫細胞進入與免疫應答相關的活化狀態。術語"激活免疫細胞"是指誘導和增加免疫應答二者。本文使用術語"免疫應答"是指先天的或適應的免疫應答的任何方面，所述免疫應答反映了免疫細胞增殖、進行效應器免疫功能或生產涉及免疫應答的基因產物的活化。涉及免疫應答的基因產物可包括分泌的產物(例如抗體、細胞因子和趨化因子)以及免疫功能的特征性的細胞內和細胞表面分子(例如某些分化抗原簇(CD)、轉錄因子和基因轉錄物)。術語"免疫應答"可以應用于單個細胞或細胞種群。可以通過本領域公知的若干方法中的任何方法來評估細胞因子的生產，所述方法包括生物反應測定、酶聯免疫吸附測定(ELISA)、細胞內熒光激活細胞分選術(FACS)分析和反轉錄酶/聚合酶鏈式反應(RT-PCR)。在一個實施方案中，免疫應答涉及前炎性細胞因子免疫應答的產生。前炎性細胞因子免疫應答可包括某些細胞因子和趨化因子中任何的表達，包括IFN-7、TNF-a、IL-12、IL-IO、IL-6及其任何組合。其特異地就本發明的目的排除IFN-o;。在一個實施方案中，免疫應答涉及免疫細胞激活的細胞表面標記的上調，例如CD25、CD80、CD86和CD154。用于測量這類標記的細胞表面表達的方法是本領域公知的并包括FACS分析。為了測量細胞或細胞種群中的免疫應答，在一個實施方案中，細胞或細胞種群表達TLR8。細胞可以天然地表達TLR，或可以通過向細胞中引入TLR的合適表達載體將其操作為表達TLR。在一個實施方案中，獲得的細胞或細胞種群為外周血單核細胞(PBMC)。在一個實施方案中，獲得的細胞或細胞種群為表達TLR的細胞系。在一個實施方案中，獲得的細胞或細胞種群為表達TLR的瞬時轉染體。在一個實施方案中，獲得的細胞或細胞種群是表達TLR的穩定轉染體。還為了用于測量細胞或細胞種群中的免疫應答，向細胞或細胞種群中引入報告子構建體可以是便利的，所述構建體應答于TLR引起的細胞內信號轉導。在一個實施方案中，這里報告子是位于NF-zcB啟動子調控下的基因。在一個實施方案中，位于所述啟動子調控下的基因是螢光素酶。在合適的激活條件下，螢光素酶報告子構建體被表達并發出可檢測的光信號，所述信號可以使用發光計定量地測量。這類報告子構建體和其它合適的報告子構建體是可商業獲得的。本發明還考慮了監測TLR激活的無細胞方法的用途。本發明在某些方面涉及用于治療用途的組合物和方法。本發明的免疫刺激性組合物可以單獨使用或與其它治療劑組合使用。免疫剌激性組合物和其它治療劑可以同時或連續施用。當本發明的免疫刺激性組合物和其它治療劑同時施用時，它們可以在相同或獨立的配方中施用，但是同時施用。另外，當本發明的免疫刺激性組合物和其它治療劑同時施用時，它們可以通過相同或獨立的施用途徑被施用，但是同時施用。當本發明的免疫刺激性組合物的施用暫時與另一治療劑的施用分離時，本發明的免疫刺激性組合物和另一治療劑被連續施用。這些化合物施用之間時間上的分離可以是大約數分鐘或可以更久。在一個實施方案中，本發明的免疫刺激性組合物在施用另一治療劑之前被施用。在一個實施方案中，本發明的免疫刺激性組合物在施用另一治療劑之后被施用。另外，當本發明的免疫刺激性組合物和另一治療劑被連續施用時，它們可以通過相同或獨立的施用途徑被施用。其它治療劑包括但不限于適用于治療感染、癌癥、變態反應和哮喘的佐劑、抗原、疫苗和藥物。本發明的一方面提供了對受試者疫苗接種的方法。根據本發明該方面的方法包括對受試者施用抗原和本發明組合物的步驟。在一個實施方案中，施用抗原包括施用編碼抗原的核酸。本文使用的"受試者"是指脊椎動物。在多個實施方案中，受試者是人、非人靈長類、或其它哺乳動物。在某些實施方案中，受試者是小鼠、大鼠、荷蘭豬、兔、貓、犬、豬、綿羊、山羊、牛或馬。為了在疫苗接種受試者的方法中使用，本發明的組合物在一個實施方案中包含抗原。抗原可以從本發明的ORN中分離或與之共價連接。在一個實施方案中，本發明的組合物自身不包含抗原。在該實施方案中，該抗原可以與本發明的組合物分離地或與本發明的組合物一起被施用給受試者。獨立的施用包括時間的獨立、位點或施用途徑的獨立，或時間和位點或施用途徑均獨立。當本發明的組合物和抗原在時間上被獨立施用時，抗原可以在本發明的組合物之前或之后被施用。在一個實施方案中，抗原在本發明的組合物施用之后48小時到4周被施用。該方法還考慮了在最初施用抗原和組合物之后，一個或多個加強免疫劑量的抗原單獨施用、組合物單獨施用、或抗原和組合物的施用。本發明還包括可以通過對受試者施用本發明的組合物來制備將來遭遇未知抗原的受試者，其中所述組合物不含有抗原。根據該實施方案，受試者的免疫系統被制備為具有對受試者稍后遭遇的抗原更有力的應答，所述遭遇例如通過環境或職業暴露。這類方法可用于例如可能暴露于微生物物質的旅行者、醫療工作者和戰士。本發明的一方面提供了治療患有免疫系統缺陷的受試者的方法。根據本發明該方面的方法包括對受試者施用有效量的本發明的組合物以治療受試者的步驟。本文使用的"免疫系統缺陷"是指被異常阻抑的免疫系統針對抗原發生免疫應答的能力。在一個實施方案中，免疫系統缺陷是一種疾病或病癥，其中受試者的免疫系統不以正常的能力作用，或其中加強受試者的免疫應答會適用于例如消除受試者中的腫瘤或癌癥或感染。本文使用的"患有免疫缺陷的受試者"是指下述受試者，其中受試者的免疫系統針對抗原發生免疫應答的能力被阻抑。患有免疫缺陷的受試者包括具有獲得性免疫缺陷的受試者以及具有先天性免疫系統缺陷的受試者。患有獲得性免疫缺陷的受試者包括但不限于患有慢性炎性病癥的受試者、患有慢性腎功能不全或腎功能衰竭的受試者、患有感染的受試者、患有癌癥的受試者、接受免疫抑制藥的受試者、接受其它免疫抑制治療的受試者和患有營養不良的受試者。在一個實施方案中，受試者具有被抑制的CD4+T細胞種群。在一個實施方案中，受試者感染了人免疫缺陷病毒(HIV)或患有獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)。根據本發明該方面的方法從而提供了用于在需要更有力的免疫應答的受試者中加強免疫應答或加強發生免疫應答的能力的方法。本發明的組合物和方法可以單獨使用或與適用于治療感染的其它試劑和方法結合使用。本發明一方面提供了治療患有感染的受試者的方法。根據本發明該方面的方法包括向患有感染的受試者施用有效量的本發明組合物以治療受試者的步驟。本發明的一方面提供了治療患有感染的受試者的方法。根據本發明該方面的方法包括向患有感染的受試者施用有效量的本發明組合物和感染藥物以治療受試者的步驟。本發明的一方面提供了本發明的免疫刺激性ORN用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療受試者中的感染。本發明的一方面提供了適用于治療感染的組合物。根據該方面的組合物包含本發明的免疫刺激性ORN和感染藥物。本文關于患有疾病或病癥的受試者的方面使用的術語"治療"應當表示在受試者中預防、改善或消除疾病或病癥的至少一個征兆或癥狀。"患有感染的受試者"是下述受試者，所述受試者患有由傳染性微生物對受試者淺表的、局部的或全身性的入侵引起的病癥。傳染性微生物可以是如上所述的病毒、細菌、真菌或寄生蟲。感染藥物包括但不限于抗菌劑、抗病毒劑、抗真菌劑和抗寄生蟲劑。例如"抗感染劑"、"抗生素"、"抗菌劑"、"抗病毒劑"、"抗真菌劑"、"抗寄生蟲劑"、"殺寄生蟲劑"對本領域常規技術人員而言具有確定的含義并在標準的醫學文章中定義。簡言之，抗菌劑殺死或抑制細菌，并包括抗生素以及其它具有類似功能的合成或天然的化合物。抗病毒劑可以從天然來源中分離或合成，并適用于殺死或抑制病毒。抗真菌劑被用于治療淺表的真菌感染以及機會性的和初級全身性真菌感染。抗寄生蟲劑殺死或抑制寄生蟲。很多抗生素是低分子量分子，其作為細胞如微生物的刺激代謝產物被生產。抗生素一般感染微生物特異的、不存在于宿主細胞中的一種或多種功能或結構。抗感染療法的問題之一是用抗感染劑治療時宿主中發生的副作用。例如，許多抗感染劑可殺死或抑制廣譜的微生物，而不對具體類型的物種特異。用這些類型的抗感染劑治療導致殺死宿主中生活的正常菌群以及感染性微生物。所述菌群的喪失可導致疾病并發癥并使宿主易于被其它病原體感染，因為所述菌群與傳染性病原體競爭并起到對傳染性病原體的屏障的作用。其它副作用可以由這些化學實體對宿主的非微生物細胞細胞或組織的特異性或非特異性作用引起。廣泛使用抗感染劑的另一問題在于抗生素抗性的微生物菌株的發展。已經發展了萬古霉素抗性的ewteracoc"'、青霉素抗性的戶"ewmococ"'、多重抗性的5".aM"t^和多重抗性的似&rcw/a^菌株，并且成為主要的臨床問題。抗感染劑的廣泛使用可能會產生許多抗生素抗性的細菌菌株。因此，需要新的抗感染策略來抗擊這些微生物。能有效殺死或抑制大范圍細菌的抗菌抗生素是指廣譜抗生素。其它類型的抗菌抗生素主要對革蘭氏陽性或革蘭氏陰性種類的細菌有效。這些類型的抗生素被稱作窄譜抗生素。對單個生物或疾病有效而不針對其它類型的細菌的其它抗生素被稱作限譜抗生素(limited-spectrumantibiotics)。抗菌劑有時根據它們的主要作用模式被分類。抗菌劑一般是細胞壁合成抑制劑、細胞膜抑制劑、蛋白質合成抑制劑、核酸合成或功能抑制劑和競爭性抑制劑。細胞壁合成抑制劑抑制細胞壁合成過程中的一個步驟，通常在細菌肽聚糖的合成中。細胞壁合成抑制劑包括^-內酰胺抗生素、天然青霉素、半合成青霉素、氨芐西林、克拉維酸、頭孢菌素類和桿菌肽。/3-內酰胺是含有四元/3-內酰胺環的抗生素，其抑制肽聚糖合成的最后一步。i3-內酰胺抗生素可以是合成的或天然的。由；^m'a7/^m生產的/3-內酰胺抗生素是天然的青霉素，例如青霉素G或青霉素V。這些通過尸em'c/〃^mcAo^oge肌m的發酵產生。天然青霉素具有窄譜的活性，并通常針對》eptococcws、Gowococcws禾口5Vap/i_v/ccoccws有效。X寸革蘭氏陽性細菌也有效的其它類型的天然青霉素包括青霉素F、X、K和O。半合成的青霉素通常是由霉菌生產的6-氨基青霉烷酸分子的修飾。6-氨基青霉垸酸可以通過添加側鏈被修飾，這產生了與天然青霉素相比具有更廣譜的活性或多種其它有利特征的青霉素。一些類型的半合成青霉素具有針對革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌的廣譜，但是被青霉素酶滅活。這些半合成的青霉素包括氨芐西林、羧芐西林、苯唑西林、阿洛西林、美洛西林和哌拉西林。其它類型的半合成青霉素具有針對革蘭氏陽性細菌的較窄的活性，但是具有發達的特性從而不被青霉素酶滅活。這些包括例如甲氧西林、雙氯西林和萘夫西林。一些廣譜半合成青霉素可以與/-內酰胺酶抑制劑例如克拉維酸和舒巴坦(sulbactam)組合使用。^內酰胺酶抑制劑不具有抗菌作用，但是它們作用于抑制青霉素酶，從而保護半合成的青霉素不被降解。另一種類型的/3-內酰胺抗生素是頭孢菌素類。它們對細菌^-內酰胺酶的降解敏感，并從而通常不單獨有效。然而，頭孢菌素類是青霉素酶抗性的。它們對多種革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌是有效的。頭孢菌素類包括，但不限于頭孢噻吩、頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢孟多、頭孢克洛、頭孢唑林、頭孢呋辛、頭孢西丁、頭孢噻肟、頭孢磺啶、頭孢他美、頭孢克肟、頭孢曲松、頭孢哌酮、頭孢他啶和拉氧頭孢。桿菌肽是另一種類的抗生素，其通過抑制胞壁肽亞單元或肽聚糖從下述分子的釋放來抑制細胞壁合成，所述分子將亞基遞送至膜的外側。盡管桿菌肽對革蘭氏陽性細菌是有效的，但是因為它的高毒性，其用途通常被限制在局部施用中。碳青霉烯類是另一種廣譜/3-內酰胺抗生素，其能夠抑制細胞壁合成。碳青霉烯的例子包括，但不限于亞胺培南(imipenem)。單環/5-內酰胺也是廣譜/3-內酰胺抗生素，其包括優特納(euztreonam)。由生產的一種抗生素萬古霉素，也是通過抑制細胞膜合成對革蘭氏陽性菌有效的。另一類抗菌劑是屬于細胞膜抑制劑的抗菌劑。這些化合物破壞細菌膜的結構或抑制其功能。屬于細胞膜抑制劑的抗菌劑的一個問題是因為細菌和真核生物膜中磷脂的類似性，它們可以在真核細胞中以及細菌中產生作用。因此，這些化合物很少足夠特異以允許這些化合物被全身性地使用，并預防高劑量的局部施用。一種臨床有用的細胞膜抑制劑為多粘菌素(Polymyxin)。多粘菌素通過與膜磷脂結合干涉膜功能。多粘菌素主要針對革蘭氏陰性細菌有效，并通常被用于對較小毒性抗生素有抗性的嚴重的尸^^/omo"^感染或Aei^omo"^感染中。與全身性施用該化合物相關的嚴重副作用包括對腎和其它器官的損傷。其它細胞膜抑制劑包括兩性霉素B(AmphotericinB)和制霉菌素(Nystatin),其為主要用于治療全身性真菌感染和Om^'c/a酵母感染中的抗真菌劑。咪唑是屬于細胞膜抑制劑的另一類抗生素。咪唑被用作抗菌劑以及抗真菌劑，例如用于治療酵母感染、皮膚寄生蟲感染和全身性真菌感染。咪唑包括但不限于克霉唑(clotrimazole)、咪康唑(miconazole)、酮康唑(ketoconazole)、伊曲康唑(itraconazole)和氟康唑(fluconazole)。許多抗菌劑是蛋白質合成抑制劑。這些化合物阻止細菌合成結構蛋白質和酶，從而引起細菌細胞生長或功能的抑制或細胞死亡。通常，這些化合物干擾轉錄或翻譯的過程。妨礙轉錄的抗菌劑包括但不限于利福平(Rifampins)和乙胺丁醇(Ethambutol)。抑制RNA聚合酶的利福平具有廣譜活性，并對革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌以及A^coZwcte〃'wm/w&rc"/a;y有效。乙胺丁醇對Afyco6acten'應^^eraz/os^有效。封閉轉錄的抗菌劑千擾細菌核糖體，以阻止mRNA被翻譯為蛋白質。通常，該種類的化合物包括但不限于四環素類、氯霉素、大環內酯類(例如紅霉素)和氨基糖苷類(例如鏈霉素)。氨基糖苷類是由細菌^reptom少c^生產的一種抗生素，例如鏈霉素、卡那霉素、妥布霉素、阿米卡星(amikacin)和慶大霉素。氨基糖苷類已經用于針對由革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌引起的多種細菌感染。鏈霉素已經被廣泛地用作治療結核病(似6ww/o^)的主要藥物。慶大霉素被用于(特別是與妥布霉素組合)針對多種革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌包括尸wt^omo"^的感染。卡那霉素被用于針對許多革蘭氏陽性細菌，包括青霉素抗性的Stoj^;;fococa'。限制氨基糖苷類臨床用途的一個副作用是在功效必需的劑量下，長期使用顯示損傷腎功能并引起導致耳聾的聽神經損傷。另一種類型的翻譯抑制劑抗菌劑是四環素類。四環素類是一種抗生素，其為廣譜的并針對多種革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌有效。四環素類的例子包括四環素、米諾環素、多西環素和金霉素。它們對于治療許多類型的細菌是重要的，但是在萊姆病(Lymedisease)的治療中尤其重要。因為它們的低毒性和最小的直接副作用，四環素類已經被醫學界超量使用和濫用，弓l起多個問題。例如，它們的超量使用已經引起抗性的廣泛產生。抗菌劑如大環內酯類與50S核糖體亞基可逆結合，并通過肽基轉移酶抑制蛋白質的延伸或阻止不帶電的tRNA從細菌核糖體上釋放，或二者兼有。這些化合物包括紅霉素、羅紅霉素、克拉霉素、竹桃霉素和阿奇霉素。紅霉素對多數革蘭氏陽性細菌、A^^en'a、丄eg/o"e〃a禾卩ifoewo;/n7i^是活性的，但是對五w/eraZ^cten'aceae不是活性的。封閉蛋白質合成期間肽鍵形成的林可霉素和克林霉素用于針對革蘭氏陽性細菌。另一種類型的翻譯抑制劑是氯霉素。氯霉素結合70S核糖體，抑制細菌酶肽基轉移酶，從而阻止蛋白質合成期間肽鏈的生長。與氯霉素相關的一個嚴重的副作用是再生障礙性貧血。在小部分(l/50,000)患者中，再生障礙性貧血在有效治療細菌的氯霉素劑量下發生。由于貧血導致的死亡，曾經被大量開處方的抗生素氯霉素現在很少使用。其因為有效性而仍然用于危及生命的狀況(例如傷寒病)。一些抗菌劑破壞核酸合成或功能，例如與DNA或RNA結合從而它們的信號不能被閱讀它們包括但不限于喹諾酮類和復方新諾明(COtrimoxazole)(二者均為合成的化學品)和利福霉素(天然或半合成的化學品)。喹諾酮通過抑制DNA旋轉酶(gyrase)封閉細菌的DNA復制，細菌需要所述旋轉酶來生產它們的環狀DNA。它們是廣譜的，例子包括諾氟沙星、環丙沙星、依諾沙星、萘啶酸和替馬沙星。萘啶酸是結合DNA旋轉酶(拓撲異構酶)的殺菌劑，其對于DNA的復制是關鍵的，并允許超螺旋被釋放和再形成，抑制DNA旋轉酶活性。萘啶酸的主要用途是治療下泌尿道感染(UTI)，因為其對UTI的常見原因——若干種革蘭氏陰性菌如co/z'、5Vz/era6acferaeragewa5、AT./wewwom'ae禾口尸ra&tw的禾中是有效的。復方新諾明是磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole)和甲氧芐啶(trimeth叩rim)的組合，其封閉制造DNA核苷酸所需的葉酸的細菌合成。利福平是對革蘭氏陽'性細菌(包括Afyco6(3cten'wm^/6ercw/a^5禾口由7Ve/Men'fl引起的腦膜炎)和一些革蘭氏陰性細菌有活性的利福霉素的衍生物。利福平與聚合酶的/3亞基結合并封閉第一個核苷酸(其是激活聚合酶所必需的)的添加，從而封閉mRNA合成。另一類抗菌劑是起到細菌酶的競爭性抑制劑作用的化合物。競爭性抑制劑幾乎全部與細菌生長因子結構類似并競爭結合，但是在細胞中不進行代謝功能。這些化合物包括磺胺類和化學修飾形式的磺胺，其具有更高或更廣泛的抗菌活性。磺胺類(例如磺胺異噁唑和甲胺芐啶)適用于治療^r印tococct^j9wewwow'ae、/3-溶血性鏈球菌和co//，并已經用于治療由五.引起的不復雜的UTI和用于腦膜炎球菌性腦膜炎的治療中。抗病毒劑是防止細胞被病毒感染或防止細胞中病毒復制的化合物。存在比抗菌藥更少的抗病毒藥，因為病毒復制的過程與宿主細胞中的DNA復制密切相關，使得非特異性的抗病毒劑通常對宿主細胞有毒。在病毒感染的過程中存在若干階段，其可以被抗病毒劑封閉或抑制。這些階段包括病毒與宿主細胞結合(免疫球蛋白或結合肽)、病毒脫殼(例如金剛烷胺)、病毒mRNA的合成或翻譯(例如干擾素)、病毒RNA或DNA的復制(例如核苷類似物)、新的病毒蛋白質的成熟(例如蛋白酶抑制劑)和病毒的出芽和釋放。抗病毒劑的另一范疇是核苷類似物。核苷類似物是與核苷類似的合成的化合物，但是具有不完全的或異常的脫氧核糖或核糖基團。核苷類似物一旦處于細胞中就被磷酸化，產生三磷酸鹽形式，其與正常的核苷酸競爭整合進病毒DNA或RNA中。一旦核苷類似物的三磷酸鹽形式被整合進生長的核酸鏈中，其引起與病毒聚合酶的不可逆的結合和由此導致的鏈終止。核苷類似物包括，但不限于阿昔洛韋(用于治療單純皰疹病毒和水痘一帶狀皰疹病毒)、更昔洛韋(gancyclovir)(用于治療巨細胞病毒)、碘苷、利巴韋林(用于治療呼吸道合胞病毒(respiratorysyncitialvirus))、雙脫氧肌苷、扎西他濱和齊多夫定(疊氮胸苷)。另一類抗病毒劑包括細胞因子，例如干擾素。干擾素是由病毒感染的細胞以及免疫細胞分泌的細胞因子。干擾素如下作用與被感染細胞鄰近細胞上的特異受體結合，引起細胞中的改變，所述改變保護細胞免受病毒感染。a和/3干擾素也誘導被感染的細胞表面上I類和II類MHC分子的表達，導致增加的抗原出現用于宿主免疫細胞識別。a和/3干擾素可作為重組體形式獲得，并已經被用于治療慢性乙型肝炎和丙型肝炎感染。在對抗病毒治療有效的劑量下，干擾素具有嚴重的副作用例如發燒、不適和體重減輕。免疫球蛋白療法被用于預防病毒感染。用于病毒感染的免疫球蛋白療法與用于細菌感染的不同，因為免疫球蛋白療法通過結合細胞外病毒體并阻止它們攻擊和進入對病毒感染易感的細胞，而不是抗原特異的。該療法適用于在抗體存在于宿主中的一段時期內預防病毒感染。通常有兩種類型的免疫球蛋白療法，正常的免疫球蛋白療法和超免疫球蛋白療法。正常的免疫球蛋白療法利用一種抗體產物，所述抗體產物從正常血供體的血清中制備并合并。該合并的產物具有對大范圍的人病毒的低抗體效價，所述病毒例如甲型肝炎、細小病毒、腸道病毒(特別是在新生兒中)。超免疫球蛋白療法利用從下述個體的血清中制備的抗體，所述個體具有對具體病毒的高抗體效價。然后使用這些抗體針對特異的病毒。超免疫球蛋白的例子包括帶狀皰疹免疫球蛋白(適用于在免疫妥協的兒童和新生兒中預防水痘)、人狂犬病免疫球蛋白(適用于被患狂犬病的動物咬傷的受試者的暴露后預防中)、乙型肝炎免疫球蛋白(適用于預防乙型肝炎病毒，特別是在暴露于該病毒的受試者中)和RSV免疫球蛋白(適用于治療呼吸道合胞病毒感染)。抗真菌劑適用于治療和預防感染性真菌。抗真菌劑有時通過它們的作用機制被分類。一些抗真菌劑通過抑制葡萄糖合酶作為細胞壁抑制劑作用。這些包括但不限于bashmgin/ECB。其它抗真菌劑通過使膜完整性失穩定而作用。這些包括，但不限于咪唑，例如克霉唑、sertaconzole、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、咪康唑和伏立康唑，以及FK463、兩性霉素B、BAY38-9502/MK991、普拉米星、UK292、布替萘芬和特比萘芬。其它抗真菌劑通過降解殼多糖(例如殼多糖酶)或免疫抑制(501乳霜)作用。殺寄生蟲劑是直接殺死寄生蟲物質。這類化合物是本領域已知的并通常可商業獲得。適用于人施用的殺寄生蟲劑的例子包括但不限于阿苯達唑、兩性霉素B、芐硝唑、硫氯酚、氯喹HC1、磷酸氯喹、克林霉素、去氫依米丁、乙胺嗪、二氯尼特(diloxanidefiiroate)、依氟鳥氨酸、呋喃唑酮、糖皮質激素、氯氟菲醇(halofantrine)、雙碘喹啉(iodoquinol)、伊維菌素(ivermectin)、甲苯達唑(mebendazole)、甲氟喹(mefloquine)、葡甲胺銻酸鹽(meglumineantimoniate)、美拉月申醇(melarsoprol)、美曲憐酉旨(metrifonate)、甲硝唑(metronidazole)、氯硝柳胺(niclosamide)、硝呋替莫(nifbrtimox)、奧沙、尼喹(oxamniquine)、巴龍霉素(paromomycin)、l圣乙石黃酸戊氧苯脒(pentamidineisethionate)、哌嗪(piperazine)、卩比喹酮(praziquantel)、伯氨喹(primaquinephosphate)、氯胍(proguanil)、噻嘧啶(pyrantelpamoate)、乙月安嘧徒匿石黃胺類(pyrimethanmine-sulfonamides)、乙月安嘧啶-磺胺多辛(pyrimethanmine-sulfadoxine)、鹽酸喹納克林(quinacrineHC1)、硫酸奎寧、奎尼丁葡萄糖酸鹽(quinidinegluconate)、螺旋霉素、葡萄糖酸銻鈉(葡萄糖酸銻鈉sodiumantimonygluconate)、蘇拉明、四環素、多西環素、噻苯達唑、替硝唑、trimethroprim-sulfamethoxazole和錐蟲胂胺。ORN也適用于治療和預防自身免疫疾病。自身免疫疾病是一類疾病，其中受試者自身的抗體與宿主組織反應，或其中免疫效應T細胞與內源的自身肽自動反應并引起組織破壞。因此，引發了針對受試者自身的抗原(稱作自體抗原)的免疫應答。自身免疫疾病包括但不限于類風濕性關節炎、Crohn's病、多發性硬化、系統性紅斑狼瘡(SLE)、自身免疫腦脊髓炎、重癥肌無力(MG)、Hashimoto's甲狀腺炎、Goodpasture's綜合征、天皰瘡(例如尋常天皰瘡)、Grave's病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性血小板減少性紫癜、帶有抗膠原抗體的硬皮病、混合性結締組織病、多肌炎、惡性貧血、原發性Addison's病、自身免疫相關性不育、腎小球腎炎(例如新月體腎小球腎炎、增生性腎小球腎炎)、大皰性類天皰瘡、Sj6gren's綜合征、胰島素抵抗和自身免疫糖尿病。本文使用"自體抗原"是指正常宿主組織的抗原。正常的宿主組織不包括癌細胞。因此，在自身免疫病的上下文中，針對自體抗原引發的免疫應答是不期望的免疫應答，并有助于破壞和損傷正常組織，而針對癌癥抗原引發的免疫應答是期望的免疫應答，并有助于腫瘤或癌癥的破壞。因此，在本發明針對治療自身免疫病癥的一些方面，不推薦將ORN與自體抗原一起施用，尤其是屬于自身免疫病癥的靶標的那些自體抗原。在其它情況下，ORN可以與低劑量的自體抗原一起被遞送。大量動物研究已經證明低劑量抗原的粘膜施用可以導致免疫低反應性或"耐受"的狀態。有效機制顯示是細胞因子介導的免疫偏差，所述偏差是從Thl到主要為Th2和Th3(即TGF-b支配的)的應答偏差。低劑量抗原遞送的有效抑制也可以抑制不相關的免疫應答(旁觀者抑制)，其在自身免疫疾病(例如類風濕性關節炎和SLE)治療中受到重要關注。旁觀者抑制涉及Thl-反-調節的、抑制劑細胞因子在局部環境中的分泌，所述局部環境中促炎癥的細胞因子和Thl細胞因子以抗原特異的或抗原非特異的方式被釋放。本文使用"耐受"是指該現象。事實上，口服耐受在動物中大量自身免疫病的治療中己經是有效的，所述疾病包括實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)、實驗性自身免疫重癥肌無力、膠原誘導的關節炎(CIA)和胰島素依賴性糖尿病。在這些模型中，自身免疫疾病的預防和抑制與抗原特異的體液和細胞應答從Thl到Th2/Th3應答的遷移相關。本發明的組合物和方法可以單獨使用或與適用于治療癌癥的其它試劑和方法結合使用。本發明一方面提供了治療患有癌癥的受試者的方法。根據本發明該方面的方法包括對患有癌癥的受試者施用有效量的本發明組合物以治療受試者的步驟。本發明的一個方面提供了治療患有癌癥的受試者的方法。根據本發明該方面的方法包括對患有癌癥的受試者施用有效量的本發明的組合物和抗癌療法以治療受試者的步驟。本發明的一個方面提供了本發明的免疫刺激性ORN用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療受試者中的癌癥。本發明的一個方面提供了適用于治療癌癥的組合物。根據該方面的組合物包括本發明的免疫刺激性ORN和癌癥藥物。患有癌癥的受試者是具有可檢測到的癌細胞的受試者。癌癥可以是惡性或非惡性的癌癥。本文使用"癌癥"是指不受控制的細胞生長，其干擾身體器官和系統的正常功能。從它們最初位置遷移并進入重要器官的癌癥可通過受影響的器官的功能衰退最終導致受試者死亡。造血癌癥例如白血病能夠在受試者中戰勝正常的造血區室，從而導致造血失敗(以貧血、血小板減少和中性粒細胞減少的形式)，最終引起死亡。轉移灶是一個區域的癌細胞，其與原發性腫瘤的位置不同，得自癌細胞從最初的腫瘤散布至身體的其它部分。診斷原發性腫瘤塊時，可以監測受試者的轉移灶的存在。除監測特異的癥狀外，轉移灶通常通過單獨或組合使用磁共振成像(MRI)掃描、計算機斷層攝影(CT)掃描、血和血小板計數、肝功能研究、胸X射線檢查和骨掃描來探測。癌癥包括但不限于基底細胞癌、膽管癌；膀胱癌；骨癌；腦和中樞神經系統(CNS)癌；乳腺癌；子宮頸癌；絨毛膜癌；結腸和直腸癌；結締組織癌；消化系統癌；子宮內膜癌；食管癌；眼癌；頭與頸癌；上皮內新生物；腎癌；喉癌；白血病；肝癌；肺癌(例如小細胞和非小細胞肺癌)；淋巴瘤，包括Hodgkin，s禾卩Non-Hodgkin，s淋巴瘤；黑素瘤；骨髓瘤；神經母細胞瘤；口腔癌(例如唇、舌、嘴和咽癌)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；視網膜母細胞瘤；橫紋肌肉瘤；直腸癌；呼吸系統癌癥；肉瘤；皮膚癌；胃癌；睪丸癌；甲狀腺癌；子宮癌；泌尿系統癌癥以及其它癌(carcinomas)、腺癌禾口肉瘤(sarcomas)。本發明的免疫刺激性組合物還可以與抗癌療法一起被施用。抗癌療法包括癌癥藥劑、輻射和手術操作。本文使用的"癌癥藥劑"是指被使用給受試者、目的在于治療癌癥的試劑。本文使用的"治療癌癥"包括預防癌癥的發生、減少癌癥的癥狀，和/或抑制確定的癌癥的生長。在其它方面，癌癥藥劑被施用給處于發生癌癥風險下的受試者，目的在于降低發生癌癥的風險。本文公開了用于治療癌癥的多種類型的藥劑。就該說明書的目的而言，癌癥藥劑被分類為化學治療劑、免疫治療劑、癌癥疫苗、激素治療和生物學反應修飾劑。化學治療劑可選自甲氨喋呤、長春新堿、阿霉素、順鉑、不含糖的氯乙基亞硝基脲類、5-氟尿嘧啶、絲裂霉素C、博來霉素、多柔比星、達卡巴嗪、泰素、fragyline、MeglamineGLA、戊柔比星、卡莫司汀和poliferposan、MMI270、BAY12-9566、RAS法尼基轉移酶抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑、MMP、MTA/LY231514、LY264618/Lometexo1、Glamolec、CI-994、TNP-470、和美新/托泊替康(Hycamtin/Topotecan)、PKC412、伐司樸達(Valspodar)/PSC833、諾安托(Novantrone)/Mitroxantrone、Metaret/蘇拉明(Suramin)、巴馬司他(Batimastat)、E7070、BCH-4556、CS-682、9陽AC、AG3340、AG3433、Incel/VX-710、VX-853、ZD0101、ISI641、ODN698、TA2516/Marmistat、BB2516/Marmistat、CDP845、D2163、PD183805、DX8951f、LemonalDP2202、FK317、溶鏈菌(Picibanil)/OK-432、AD32/戊柔比星(Valrubicin)、氯化鍶(Metastron)/鍶衍生物、Temodal/替莫唑胺(Temozolomide)、阿霉素脂質體(Evacet)/多柔比星脂質體、Yewtaxan/紫杉醇(Paclitaxel)、泰素(Taxol)/紫杉醇(Paclitaxel)、西羅達(Xeload)/卡培他濱(Capecitabine)、氟鐵龍(Furtulon)/去氧氟尿苷(Doxifluridine)、Cyclopax/口服紫杉醇、口服紫杉烷、SPU-077/順鉬、HMR1275/Flavopirido1、CP-358(774)/EGFR、CP-609(754)/RAS癌基因抑制劑、BMS-182751/口服鉑、UFT(替加氟/尿嘧啶)、Ergamisol/左旋咪唑(Levamisole)、恩尿嘧啶(Eniluracil)/776C85/5FU增強子、Campto/左旋咪唑(Levamisole)、Camptosar/伊立替康(Irinotecan)、Tumodex/Ralitrexed、Leustatin/克拉屈、)賓(Cladribine)、Paxex/紫杉醇、Doxil/多柔比星脂質體、Caelyx/多柔比星脂質體、福達華(Fludara)/氟達拉濱(Fludarabine)、Pharmarubicin/表柔比星(Epirubicin)、DepoCyt、ZD1839、LU79553/Bis-Naphtalimide、LU103793/多拉司他汀(Dolastain)、Caetyx/多柔比星脂質體、健擇(Gemzar)/吉西他濱(Gemcitabine)、ZD0473/Anormed、YM116、碘粒子(Iodineseeds)、CDK4和CDK2抑制劑、PARP抑制劑、D4809/Dexifosamide、Ifes/Mesnex/異環磷酰胺(Ifosamide)、威猛(Vumon)/替尼泊苷(Teniposide)、伯爾定(Paraplatin)/卡鉑(Carboplatin)、順鉑(Plantinol)/順鉑、足葉乙苷(Vepeside)/依托泊苷(Etoposide)、ZD9331、泰索帝(Taxotere)/多西紫杉醇(Docetaxel)、鳥嘌呤阿糖胞苷的前藥、紫杉烷類似物、亞硝基脲、烷化劑如melphelan和環磷酰胺、氨魯米特(Aminoglutethimide)、天冬酰胺酶、白消安(Busulfan)、卡鉑、苯丁酸氮芥(Chlorombucil)、鹽酸阿糖胞苷(CytarabineHC1)、更生霉素(Dactinomycin)、鹽酸柔紅霉素(DaunorubicinHC1)、雌莫司汀磷酸鈉(Estramustinephosphatesodium)、依托泊苷(VP16-213)、氟尿嘧啶脫氧核苷(Floxuridine)、氟尿嘧啶(5-FU)、氟他胺、羥基脲(羥基尿素)、異磷酰胺(Ifosfamide)、干擾素a-2a、a-2b、醋酸亮丙瑞林(Leuprolideacetate)(LHRH-釋放因子類似物)、洛莫司汀(Lomustine)(CCNU)、鹽酸雙氯乙基甲胺(MechlorethamineHC1)(氮芥)、巰嘌呤(Mercaptopurine)、美司鈉(Mesna)、米托坦(Mitotane)(o.p'-DDD)、鹽酸米托蒽酉昆(MitoxantroneHC1)、奧曲肽(Octreotide)、普卡霉素(Plicamycin)、鹽酸丙卡巴阱(ProcarbazineHC1)、鏈佐星(Streptozocin)、枸櫞酸他莫昔芬(Tamoxifencitrate)、硫代鳥嘌呤、塞替派(Thiotepa)、長春堿(Vinblastinesulfate)、安吖啶(Amsacrine)(m-AMSA)、阿扎胞苷(Azacitidine)、Erthropoietin、六甲蜜胺(Hexamethylmelamine)(HMM)、白細胞介素(Interleukin)2、米托胍腙(Mitoguazone)(甲基-GAG;甲基丙酮醛二-丙咪腙；MGBG)、噴司他丁(Pentostatin)(2'脫氧柯福霉素)、司莫司汀(Semustine)(甲基-CCNU)、替尼泊苷(Teniposide)(VM-26)和硫酸長春地辛，但不僅限于此。免疫治療劑可選自3622W94、4B5、ANAAb、抗-FLK-2、抗-VEGF、ATRAGEN,AVASTIN(貝伐單抗(bevacizumab);Genentech)、BABS、BEC2、BEXXAR(托西莫單抗(tositumomab);GlaxoSmithKline)、C225、CAMPATH(阿侖單抗(alemtuzumab);GenzymeCorp.)、CEACIDE、CMA676、EMD-72000、ERBITUX(西妥昔單抗(cetuximab);ImCloneSystems,Inc.)、Gliomab-H、GNI-250、HERCEPTIN(曲妥單抗(trastuzumab);Genentech)、IDEC畫Y2B8、ImmuRAIT-CEA、iorc5、ioregf.r3、iort6、LDP-03、LymphoCide、MDX-ll、MDX畫22、MDX-210、MDX-220、MDX-260、MDX-447、MELIMMUNE-1、MELIMMUNE-2、Monopharm-C、NovoMAb-G2、Oncolym、OV103、Ovarex、Panorex、Pretarget、Quadramet、Ributaxin、RITUXAN(美羅華(rituximab);Genentech)、SMARTID10Ab、SMARTABL364Ab、、SMARTMl95、TNT禾卩ZENAPAX(daclizumab;Roche)，但不僅限于此。癌癥疫苗可選自EGF、抗個體基因型的癌癥疫苗、Gp75抗原、GMK黑瘤疫苗、MGV神經節苷脂綴合物疫苗、HeR2/neu、Ovarex、M-Vax、O-Vax、L-Vax、STn-KHLtheratope、BLP25(MUC-1)、脂質體個體基因型疫苗、黑素瘤疫苗(Meladne)、肽抗原疫苗、毒素/抗原疫苗、基于MVA的疫苗、PACIS、BCGvacine、TA-HPV、TA隱CIN、DISC-virusandImmuCyst/TheraCys，但不僅限于此。本發明的組合物和方法可以單獨使用，或與適用于治療變態反應的其它試劑和方法組合使用。本發明一方面提供了治療患有變應性病癥的受試者的方法。根據本發明該方面的方法包括對患有變應性病癥的受試者施用有效量的本發明的組合物以治療受試者。本發明的一個方面提供了治療患有變應性病癥的受試者的方法。根據本發明該方面的方法包括對患有變應性病癥的受試者施用有效量的本發明的組合物和抗變態反應療法以治療受試者。本發明的一個方面提供了本發明的免疫刺激性ORN用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療受試者中的變應性病癥。本發明一方面提供了適用于治療變應性病癥的組合物。根據該方面的組合物包含本發明的免疫刺激性ORN和變態反應藥劑。"患有變應性病癥的受試者"表示目前正在經歷或先前曾經經歷過應答于變應原的變應性反應的受試者。"變應性病癥"或"變態反應"是指對物質(變應原)的獲得性超敏感性。變應性病癥包括但不限于濕疹、變應性鼻炎或鼻炎(coryza)、枯草熱(hayfever)、變應性結膜炎、支氣管哮喘、蕁麻疹(hives)和食物變態反應，其它的特異反應性病癥，包括特異性皮炎；過敏癥(anaphylaxis);藥物變態反應和血管性水腫。典型地，變態反應是與針對變應原的抗體生產相關的短暫病癥，所述抗體來自具體的免疫球蛋白種類IgE。由IgE介導的對一般氣源性過敏源應答的發生也是指示趨向于發生哮喘的誘因的一個因素。如果變應原遭遇嗜堿白細胞(在血中循環)或肥大細胞(分散于固體組織各處)表面上與IgEFc受體(FceR)結合的特異IgE，則細胞被激活，導致介質的生產和釋放，所述介質例如組胺、5-羥色胺和脂質介質。當IgE型的組織敏感免疫球蛋白與外源變應原反應時，發生變應性反應。IgE抗體與肥大細胞和/或嗜堿白細胞結合，然后在受到與抗體分子末端橋接的變應原刺激時，這些專門化的細胞釋放變應性反應的化學介質(血管活性胺)。組胺、血小板活化因子、花生四烯酸代謝產物和5-羥色胺是人中變應性反應的己知的最好介質。組胺和其它血管活性胺通常儲存于肥大細胞和嗜堿性白細胞中。肥大細胞分散在動物組織各處，嗜堿白細胞在維管系統中循環。這些細胞制造組胺并將其儲存在細胞中，除非涉及IgE結合的專門化序列的事件發生，引發其釋放。變應性反應的癥狀根據身體中的位置而不同，所述位置是IgE與抗原反應的位置。如果反應在呼吸上皮上發生，則癥狀通常是打噴嚏、咳嗽和哮喘反應。如果相互作用發生在消化道中(例如在食物變態反應的情況下)，則常見腹痛和腹瀉。全身性的變應性反應(例如在蜜蜂叮咬后或對受試者施用青霉素后)可以是嚴重的，并常常是危及生命的。變態反應與Th2型免疫應答相關，其至少部分由Th2細胞因子IL-4和IL-5以及抗體同種型轉換為IgE表征。Thl和Th2免疫應答是互相反調節的，從而免疫應答朝向Thl型免疫應答的偏移可以預防或改善Th2型的免疫應答，包括變態反應。因此，本發明的免疫剌激性ORN自身適用于治療患有變應性病癥的受試者，因為免疫刺激性ORN可以使免疫應答偏向Thl型的免疫應答。或者或另外，本發明的免疫剌激性ORN可以與變應原組合使用以治療患有變應性病癥的受試者。本發明的免疫刺激性組合物也可以與抗變態反應療法組合施用。用于治療或預防變態反應的常規方法涉及變態反應藥劑或脫敏療法的使用。用于治療或預防變態反應的一些發展中療法包括中和抗IgE抗體的使用。封閉變應性反應的化學介質的抗組胺和其它藥物幫助調節變應性癥狀的嚴重性，但是不能預防變應性反應，并且對隨后的變應性應答沒有作用。優選脫敏療法，所述脫敏療法通過給予(通常通過皮下注射)小劑量變應原來誘導針對變應原的IgG型應答。認為IgG的存在幫助中和介質的生產，所述介質的生產得自IgE抗體的誘導。最初用非常低劑量的變應原治療受試者以避免誘導嚴重的反應，將劑量緩慢增加。該類型的療法是危險的，因為受試者實際上被施用了引起變應性應答的化合物并能夠導致嚴重的變應性反應。變態反應藥劑包括但不限于，抗組胺、皮質激素和前列腺素誘導物。抗組胺是抵消肥大細胞或嗜堿粒細胞釋放的組胺的化合物。這些化合物是本領域公知的，并通常用于治療變態反應。抗組胺包括，但不限于阿伐斯汀(acrivastine)、阿司咪唑(astemizole)、阿扎他定(azatadine)、氮卓斯汀(azelastine)、betatastine、溴苯夷卩敏(brompheniramine)、布克力嗪(buclizine)、西替利嗪(cetirizine)、西替利嗪類似物、氯苯那敏(chlorpheniramine)、氯馬斯汀(clemastine)、CS560、賽庚啶(cyproheptadine)、地氯雷他定(desloratadine)、右氯苯那敏(dexchlorpheniramine)、4衣巴其jfT(ebastine)、亍衣匹其/fff(epinastine)、一一索3^那定(fexofenadine)、HSR609、羥嗪(hydroxyzine)、左卡巴斯汀(levocabastine)、loratidine、甲基東莨菪石咸(methscopolamine)、咪唑其jf汀(mizolastine)、諾阿其j咪唑(norastemizole)、苯茚胺(phenindamine)、異丙嗪(promethazine)、甲氧苯二胺(pyrilamine)、特非那定(terfenadine)禾卩曲尼司特(tranilast)。虔質、激表^fel:t壬/AX阻不.田、準f3"B^mPth、,1nrpdn;c^1nnP、、、滯尼朽、龍(prednisolone)、^發尼豐公(prednisone)、^f咅氯米松(beclomethasone)、布土也奈《惠(budesonide)、地塞米松(dexamethasone)、氟尼縮松(flunisolide)、氟替卡松丙酸鹽(fluticasonepropionate)和曲安西龍(triamcinolone)。盡管地塞米松是具有抗炎作用的皮質類固醇，但是它通常不以吸入的形式用于治療變態反應或哮喘，因為它被高度吸收并且在有效劑量下有長期的抑制性副作用。然而，地塞米松可以根據本發明被用于治療變態反應或哮喘，因為與本發明的組合物組合施用時，其能夠以低劑量使用從而減少副作用。與皮質類固醇使用相關的一些副作用包括咳嗽、發聲困難、鵝口瘡(念珠菌病)和在更高劑量時的全身效應，例如腎上腺抑制、葡萄糖耐受不良、骨質疏松癥、骨無菌性壞死、白內障生成、生長抑制、高血壓、肌無力、皮膚變薄(skinthinning)禾口容易擦傷。Barnes&Peterson(1993)AmRevRespirDis148:S1-S26和KamadaAKetal.(1996)AmJRespirCritCareMed153:1739-48。本發明的組合物和方法可以單獨使用或與適用于治療哮喘的其它試劑和方法結合使用。本發明一方面提供了治療患有哮喘的受試者的方法。根據本發明該方面的方法包括對患有哮喘的受試者施用有效量的本發明組合物以治療受試者的步驟。本發明的一個方面提供了治療患有哮喘的受試者的方法。根據本發明該方面的方法包括對患有哮喘的受試者施用有效量的本發明的組合物和抗哮喘療法以治療受試者的步驟。本發明的一個方面提供了本發明的免疫刺激性ORN用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療受試者中的哮喘。本發明的一個方面提供了適用于治療哮喘的組合物。根據該方面的組合物包括本發明的免疫刺激性ORN和哮喘藥劑。本文使用的"哮喘"是指呼吸系統的病癥，其特征在于氣道的炎癥和狹窄，以及氣道對吸入劑的提高的反應性。哮喘通常(但不專有地)與特異反應性或變應性病癥結合。哮喘的癥狀包括由氣流阻礙引起的喘鳴、氣喘、胸部緊迫和咳嗽的周期性發作。與哮喘相關的氣道炎癥可以通過觀察大量生理學改變被監測，例如氣道上皮的剝蝕、基底膜下的膠原沉著、水腫、肥大細胞活化、炎性細胞(包括中性粒細胞、嗜酸粒細胞和淋巴細胞)浸潤。作為氣道炎癥的結果，哮喘患者常經歷氣道高反應性、氣道限制、呼吸癥狀和疾病慢性。氣道限制包括極性支氣管收縮、氣道水腫、宮頸粘液塞形成和氣道重建，這些特征常導致支氣管梗阻。在哮喘的一些情況下可發生半基底膜纖維化(sub-basementmembranefibrosis),導致肺功能永久性異常。過去幾年間的研究顯示哮喘可能是由炎癥細胞、介質和氣道中固有的其它細胞和組織間的復雜相互作用引起的。肥大細胞、嗜酸粒細胞、上皮細胞、巨噬細胞和激活的T細胞均在與哮喘相關的炎癥過程中起到重要的作用。DjukanovicRetal.(1990)AmRevRespirDis142:434-457。認為這些細胞可以通過分泌預先形成的和新近合成的介質影響氣道功能，所述介質可以直接或間接地作用于局部組織。已經認為T淋巴細胞(Th2)亞群通過釋放選擇性的細胞因子和建立疾病慢性在調節氣道的變應性炎癥中起重要作用。RobinsonDSetal.(1992)NEnglJMed326:298-304。哮喘是一種復雜的病癥，其在發育的不同階段發生，并可以根據癥狀的程度被分類為急性、亞急性或慢性。急性的炎癥應答與細胞進入氣道的早期募集相關。亞急性炎癥應答涉及細胞的募集以及固有細胞的激活，這引起更持久的炎癥模式。慢性炎癥應答特征在于持久水平的細胞損傷和進行中的修復過程，其可導致氣道中的永久性異常。"患有哮喘的受試者"是指患有呼吸系統病癥的受試者，所述病癥的特征在于氣道的炎癥和狹窄，以及氣道對吸入劑的提高的反應性。與哮喘發作相關的因素包括，但不限于變應原、冷的溫度、運動、病毒感染和so2。如上所述，哮喘可能與Th2型免疫應答相關，其至少部分由Th2細胞因子IL-4和IL-5以及抗體同種型轉換為IgE表征。Thl和Th2免疫應答是互相反調節的，從而免疫應答朝向Thl型免疫應答的偏移可以預防或改善Th2型的免疫應答，包括變態反應。因此，本發明的經修飾的寡核糖核苷酸類似物自身適用于治療患有哮喘的受試者，因為所述類似物能夠使免疫應答偏向Thl型的免疫應答。或者或另外，本發明的經修飾的寡核糖核苷酸類似物可以與變應原組合使用以治療患有哮喘的受試者。本發明的免疫刺激性組合物也可以與哮喘療法組合施用。用于治療或預防哮喘的常規方法涉及抗變態反應療法(如上所述)和大量其它試劑(包括吸入劑)的使用。用于治療哮喘的藥物通常被分為兩類，快速釋放藥物和長期控制藥物。哮喘患者在每日的基礎上采用長期控制藥物以達到和維持長期哮喘的控制。長期控制藥物包括抗炎劑，例如皮質激素、克羅默(chromolyn)鈉和奈多羅米(nedocromil);長效支氣管擴張劑，例如長效&-激動劑和甲基黃嘌呤；和白細胞三烯修飾劑。快速釋放藥物包括短效/52-激動劑、抗膽堿能藥物和全身性皮質激素。存在與這些藥物中每種相關的許多副作用，沒有一種藥物或其組合能夠預防或完全治療哮喘。哮喘藥物包括，但不限于PDE-4抑制劑、支氣管擴張劑//3-2激動劑、K+通道開放劑、VLA-4拮抗劑、神經激肽(neurokin)拮抗劑、血栓素(thromboxane)A2(TXA2)合成抑制劑、黃嘌呤、花生四烯酸拮抗劑、5脂肪氧化酶抑制劑、TXA2受體拮抗劑、TXA2拮抗劑、5-lipox活化蛋白質的抑制劑和蛋白酶抑制劑。支氣管擴張劑//32-激動劑是引起支氣管擴張或平滑肌松弛的一類化合物。支氣管擴張劑/&-激動劑包括，但不限于沙美特羅(salmeterol)、沙丁胺醇(salbutamol)、沙丁胺醇(albuterol)、特布他林(terbutaline)、D2522/福莫特羅(formoterol)、非諾特羅(fenoterol)、比托特羅(bitolterol)、吡布特羅甲基黃嘌呤(pirbuerolmethylxanthines)和奧西那林(orciprenaline)。長效/32激動劑和支氣管擴張劑是除抗炎療法外用于長期預防癥狀的化合物。長效&激動劑包括，但不限于沙美特羅和沙丁胺醇。這些化合物通常與皮質激素組合使用，并且不在沒有任何炎癥療法時使用。它們已經與超劑量中例如心動過速、骨骼肌震顫、低鉀血和QTc間隔延長的副作用相關。甲基黃嘌呤(包括例如茶堿)已經被用于長期控制和預防癥狀。這些化合物引起由磷酸二酯酶抑制和可能的腺苷拮抗導致的支氣管擴張。劑量相關的急性毒性是這些類型化合物的具體問題。因此，必需監測常規血清濃度從而計算毒性并限制代謝清除率個體差異引起的治療性范圍(therapeuticrange)。副作用包括心動過速、過速心律市場、惡心和嘔吐、中樞神經系統興奮、頭痛、癲癇發作、嘔血、高血糖癥和低鉀血。短效/32激動劑包括，但不限于沙丁胺醇(albuterol)、比托特羅(bitolterol)、吡布特羅(pirbuterol)和特布他林(terbutaline)。與短效/32激動劑施用相關的一些不良作用包括心動過速、骨骼肌震顫、低鉀血、乳酸增加、頭痛和高血糖。克羅默(chromolyn)鈉和奈多羅米被用作長期控制藥物，所述藥物用于預防由運動引起的原發性哮喘癥狀或由變應原引起的變應性癥狀。這些化合物被認為通過干擾氯化物途徑功能來封閉對變應原的早期和晚期反應。它們也穩定肥大細胞膜并抑制介質的活化及其從inosineophils和上皮細胞中的釋放。通常需要四到六周的施用以達到最大的益處。抗膽堿能類通常被用于緩解急性支氣管痙攣。這些化合物被認為通過競爭性抑制毒蕈堿膽堿能受體來發揮作用。抗膽堿能類包括，但不限于異丙托溴銨。這些化合物僅能逆轉類膽堿方式(cholinerigically)介導的支氣管痙攣，并不改變對抗原的任何反應。副作用包括口干和呼吸分泌(respiratorysecretions)、在一些個體中增加的喘鳴和如果噴入眼睛時的視野模糊。本發明的免疫刺激性ORN也可適用于治療氣道重建。氣道重建由氣道中平滑肌細胞增殖和/或粘膜下層增厚導致，并最終引起氣道狹窄，導致氣流受限。本發明的免疫刺激性ORN可預防進一步重建，并且甚至可能減少重建過程導致的組織構建。本發明的免疫刺激性ORN也適用于促進樹狀突細胞的存活、分化、活化和成熟。免疫刺激性的寡核糖核苷酸具有促進樹狀突細胞的細胞存活、分化、活化和成熟的獨特能力。本發明的免疫刺激性ORN也提高天然殺傷細胞溶解活性和抗體依賴性的細胞毒性(ADCC)。ADCC可以通過與抗體組合使用免疫刺激性ORN進行，所述抗體對細胞靶標如癌細胞特異。當免疫刺激性ORN與抗體組合施用給受試者時，受試者的免疫系統被誘導殺死腫瘤細胞。適用于ADCC過程中的抗體包括與細胞在體內相互作用的抗體。對細胞靶標特異的許多這類抗體已經在本領域被描述，并且許多可以商業獲得。在一個實施方案中，所述抗體為IgG抗體。在某些方面，本發明提供了用于增強表位擴展的方法。本文使用"表位擴展"是指表位特異性從最初集中的、主要的表位特異性免疫應答(指向自身或外源蛋白質)多樣化為所述蛋白質(分子內擴展)或其它蛋白質(分子間擴展)上的次要的和/或隱藏的表位。表位擴展引起多表位特異的免疫應答。免疫應答由初始的放大期(magnificationphase)和后來的下調期組成，所述放大期可以是有害的(如在自身免疫疾病中)或有益的(如在疫苗接種中)，所述下調期將免疫系統恢復為穩態并產生記憶。表位擴展可以是這兩個階段的重要部分。在腫瘤發生中表位擴展的增強允許受試者的免疫系統確定額外的靶表位(其最初不被應答于原始治療方案的免疫體系識別)，同時減少腫瘤種群中逃逸變體的可能性，從而影響疾病的發展。本發明的寡核糖核苷酸可適用于促進治療上有益的適應癥(例如癌癥、病毒和細菌感染，以及變態反應)中的表位擴展。所述方法在一個實施方案中包括下述步驟對受試者施用包含抗原和佐劑的疫苗，隨后對受試者施用一定用量的至少兩份劑量的本發明的免疫刺激性ORN，所述用量有效誘導多表位特異的免疫應答。該方法在一個實施方案中包括下述步驟對受試者施用包含腫瘤抗原和佐劑的疫苗，隨后對受試者施用一定用量的至少兩份劑量的本發明的免疫刺激性ORN，所述用量有效誘導多表位特異的免疫應答。該方法在一個實施方案中涉及應用一種治療方案，所述治療方案導致受試者中的免疫系統抗原暴露，隨后施用至少兩次本發明的免疫刺激性寡核糖核苷酸，以誘導多表位特異的免疫應答，即促進表位擴展。在多個實施方案中，該治療方案是外科手術、輻射、化學療法、其它癌癥藥物、疫苗或癌癥疫苗。除了隨后的免疫刺激療法外，治療方案可以與免疫促進劑組合進行。例如，當治療方案是疫苗時，其可以與佐劑結合施用。疫苗和佐劑的組合可以是混合物或獨立的施用，即注射(即相同的引流區(drainagefield))。施用不必須是同時的。如果使用非同時的注射，則時間安排可包括先注射佐劑，然后是疫苗配方。完成治療方案后，開始免疫刺激單一療法。最佳的施用頻率、持續時間和位點應取決于耙標和其它因素，但是可例如是在六個月到兩年的時間段內每月或每兩月的施用。或者，施用可以基于每日、每周或每兩周進行，或施用可以是一天、一周或一月內多次。在一些情況下，施用的持續時間可取決于療法的長度，例如其可以在一周后、一個月后、一年后或數年后停止。在其它情況下，單一療法可以是連續的，如使用靜脈滴注。免疫刺激劑可以被施用給靶標常見的引流區。就療法中的用途而言，不同的劑量對于治療受試者可能是必需的，這取決于化合物的活性、施用途徑、免疫的目的(即預防性或治療性)、病癥的性質和嚴重性受試者的年齡和體重。給定劑量的施用可以以個體劑量單位的形式或若干個小劑量單位的形式通過單一施用完成。以分開數周或數月的特異間隔多次施用劑量適用于加強抗原特異性的免疫應答。結合本文提供的教導，通過在多種活性化合物和稱量因子(例如潛能、相對的生物可利用率、患者體重、不良副作用的嚴重性和施用的優選模式)中選擇，可以計劃有效的預防性或治療性治療制度，所述治療制度不引起顯著毒性并對于治療具體受試者而言是完全有效的。用于任何具體應用的有效量可根據下述因素而不同，所述因素如治療的疾病或病癥、施用的具體治療劑、受試者的塊頭，或疾病或病癥的嚴重性。本領域常規技術人員之一可根據經驗確定具體核酸和/或其它治療劑的有效量而不必需進行不適當的實驗。本文所述的化合物的受試者劑量典型地在從約0.1mg到10,000mg、更典型地從約1mg/到8000mg、最典型地從約10mg至lj100mg的范圍內。以受試者體重而言，典型的劑量在從約0.1mg到20mg/kg/天、更典型地從約1到10mg/kg/天、最典型地從約1到5mg/kg/天的范圍內。含有核酸和/或其它化合物的藥物組合物可以通過用于施用藥物的任何合適途徑被施用。可以獲得多種施用途徑。當然，選擇的具體模式將取決于選擇的一種或多種具體試劑、治療的具體病癥和治療效果所需的劑量。一般而言，本發明的方法可以施用醫學可接受的任何施用模式進行，即產生有效的免疫應答水平而不引起臨床上不可接受的不良作用的任何模式。優選的施用模式在本文討論。對治療中的用途而言，有效量的核酸和/或其它治療劑可以通過任何模式被施用給受試者，所述模式將所述試劑遞送至期望的表面，例如粘膜的、全身性的。施用本發明的藥物組合物可以通過技術人員己知的任何途徑完成。施用的途徑包括但不限于口、腸胃外、靜脈內、肌內、腹膜內、鼻內、舌下、氣管內、吸入、皮下、眼、陰道和直腸。就哮喘或變態反應的治療或預防而言，這類化合物優選地被吸入、攝入或通過全身性途徑被施用。全身性途徑包括口服和腸胃外。在一些實施方案中優選吸入的藥物，因為直接遞送至肺，哮喘患者中原發的炎癥位點。通常使用若干類型的設備用于通過吸入施用。這些類型的設備包括計量吸入器(MDI)、呼吸開動的MDI、干粉吸入器(DPI)、與MDI組合的間隔/儲藏倉和噴霧器。本發明的治療劑可以借助于載體被遞送至具體的組織、細胞類型，或遞送至免疫系統，或二者兼有。"載體"在其最廣泛的含義中是指能夠便于將組合物轉移至耙細胞的任何媒介。載體通常將免疫刺激性核酸、抗體、抗原和/或疾病特異性藥物轉運至靶細胞，具有相對于不存在載體時得到的降解范圍而言減少的降解。通常，適用于本發明的載體被分為兩類生物學載體和化學/物理載體。生物學載體和化學/物理載體適用于本發明的治療劑的遞送和/或攝入。多種生物學載體被用于遞送核酸，這在屬于免疫剌激性核酸或包含免疫刺激性核酸的治療劑遞送中最為合適。除了本文討論的生物學載體外，化學/物理載體可被用于遞送包含免疫刺激性核酸、抗體、抗原和病癥特異性藥劑的治療劑。本文使用"化學/物理載體"是指除了來自細菌或病毒來源之外的天然或合成分子，其能夠遞送核酸和/或其它藥物。本發明優選的化學/物理載體是膠體分散體系。膠體分散體系包括以脂質為基礎的體系，包括水包油乳劑、微團、混合的微團和脂質體。本發明優選的膠體系統是脂質體。脂質體是適用于體內或體外遞送載體的人工膜脈管(vessd)。已經顯示尺寸范圍從0.2-4,0mm的大單層囊泡(LUV)可以將大的大分子包膠。RNA、DNA和完整的病毒粒可以被包膠在水性內部中并以生物活性形式被遞送至細胞。Fraleyetal.(1981)TrendsBiochemSci6:77。可以通過將脂質體與特異的配體(例如單克隆抗體、糖、糖脂或蛋白質)偶聯將脂質體靶向具體的組織。可用于將脂質體靶向免疫細胞的配體包括但不限于與免疫細胞特異受體和分子(如抗體)相互作用的完整分子或片段，所述受體和分子與免疫細胞的細胞表面標記物相互作用。這類配體可容易地通過本領域技術人員公知的結合測定鑒定。還在其它一些實施方案中，可以通過將脂質體與前文討論的免疫治療性抗體之一偶聯使脂質體被靶向癌癥。另外，載體可以與核靶向肽偶聯，所述核靶向肽會將載體指向宿主細胞核。用于轉染的脂質配方可從QIAGEN以商業途徑獲得，例如EFFECTENEtm(具有特異的DNA壓縮增強子的非脂質體脂質)和SUPERFECTtm(新穎的作用樹狀聚體技術)。脂質體可從GibcoBRL以商業途徑獲得，例如LIPOFECTINtm和LIPOFECTACE,其由陽離子脂質如N-[l-(2,3dioleyloxy)-丙基]-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)和二甲基二十八烷基溴化鉸(DDAB)形成。用于制造脂質體的方法是本領域公知的，并在許多出版物中被描述過。脂質體也已經由GregoriadisG(1985)TrendsBiotechnol3:235-241綜述。某些陽離子脂質(尤其包括N-[l-(2,3二油酰氧)-丙基]-N,N,N-三甲基銨甲基硫酸酯(DOTAP))顯示與本發明的經修飾的寡核糖核苷酸類似物組合時特別有利。在一個實施方案中，媒介是適用于植入或施用至哺乳動物受體的生物相容的微粒或植入物。適用于該方法的示范性生物蝕解植入物描述于PCT國際申請no,PCT/US/03307(公開No.W095/24929,題為"PolymericGeneDeliverySystem")。PCT/US/0307描述了生物相容的、優選生物可降解的多聚體基質，所述基質用于包含處于適當啟動子調控下的外源基因。多聚體基質可被用于達成治療劑在受試者中的持續釋放。多聚體基質優選是微粒的形式，例如微球(其中核酸和/或其它治療劑被分散于固體多聚體基質各處)或微膠囊(其中核酸和/或其它治療劑被儲存于多聚體殼的核心中)。用于包含治療劑的其它形式的多聚體基質包括薄膜、包衣、凝膠、埋植劑和支架。選擇多聚體基質設備的尺寸和組成，使得在所述基質被引入的組織中產生良好的釋放動力學。該根據待使用的遞送方法選擇多聚體基質的尺寸，所述遞送方法典型地是注射進組織或通過氣霧劑將懸浮液施用進鼻和/或肺區域。優選地，當使用氣霧劑途徑時，多聚體基質和核酸和/或其它治療劑包括在表面活性劑媒介中。可以選擇多聚體基質組合物，使其既具有良好的降解率，又由生物粘附的材料形成，從而當基質被施用給持續損傷的鼻和/或肺表面時進一步提高轉移的有效性。也可以選擇不降解但是通過擴散在延長的時間段中釋放的基質組合物。在一些優選的實施方案中，當其它治療劑被急性施用時通過植入物將核酸施用給受試者。適用于遞送(例如口或粘膜遞送)的生物相容的微球公開于Chickeringetal.(1996)BiotechBioeng52:96-101和MathiowitzEetal.(1997)Nature386:410-414和PCT專利申請WO97/03702中。非生物可降解的和生物可降解的多聚體基質均可以用于將核酸和/或其它治療劑遞送給受試者。優選生物可降解的基質。這類多聚體可以是天然的或合成的多聚體。多聚體根據所期望的釋放時間段選擇，通常按數小時到一年或更久的順序。典型地，范圍在數小時和三到十二個月之間的時間段上的釋放是最期望的，尤其是對于核酸試劑而言。多聚體任選地是水凝膠(其在水中能夠吸附至多約其重量的99%)的形式，或者任選地與多價離子或其它多聚體交聯。人們特別感興趣的生物粘附多聚體包括H.S.Sawhney,C.P.PathakandJ.A,HubellinMacromolecules，(1993)26:581-587描述的生物蝕解水凝膠，該參考文獻的教導并入本文。這些包括多聚透明質酸、酪蛋白、明膠、明膠蛋白、聚酐、聚丙烯酸、藻酸鹽、殼聚糖、多聚(甲基丙烯酸酸甲酯)、多聚(甲基丙烯酸乙酯)、多聚(甲基丙烯酸丁酯)、多聚(甲基丙烯酸異丁酯)、多聚(甲基丙烯酸己酯)、多聚(甲基丙烯酸異癸酯)、多聚(甲基丙烯酸十二垸基酯)、多聚(甲基丙烯酸苯酯)、多聚(丙烯酸甲酯)、多聚(丙烯酸異丙酯)、多聚(丙烯酸異丁酯)和多聚(丙烯酸十八烷基酯)。如果治療劑是核酸，則也期望使用壓縮劑(compactionagent)。壓縮劑也可以單獨使用或與生物載體或化學/物理載體組合使用。本文使用"壓縮劑"是指中和核酸上的負電荷從而允許核酸壓縮為精細顆粒的一種試劑，例如組蛋白。核酸的壓縮便于核酸被靶細胞攝入。壓縮劑可以單獨使用，即以被細胞更有效吸收的形式遞送核酸，或更優選其與一種或多種上述載體組合使用。可用于促進核酸吸收的其它示范性組合物包括磷酸鈣和胞內運輸的其它化學媒介、微注射組合物、電穿孔和同源重組組合物(例如用于將核酸整合進靶細胞基因組中預先選定的位點中)。化合物可以單獨施用(例如在鹽水或緩沖液中)或使用本領域已知的任何遞送媒介施用。例如以下的遞送媒介己經被描述螺旋體(Gould-Fogeriteetal.,1994,1996);Emulsomes(Vancottetal.,1998,Lowelletal.，1997);ISCOMs(Mowatetal"1993，Carlssonetal.，1991,Huet.,1998,Moreinetal.，1999);脂質體(Childersetal.,1999，Michaleketal.,1989，1992,deHaan1995a,1995b);活細菌載體(例如Sa/mo"e〃a、」&c/ien'c/'acoZi'、5acZ〃wsCa/附"te-GWn'w、57n'ge〃a、丄acto6a"'〃M51)(Honeetal"1996，Pouwelsetal.,1998，Chatfieldetal.,1993,Stoveretal.，1991,Nugentetal.,1998);活病毒載體(例如牛痘、腺病毒、單純皰疹)(Gallichanetal.,1993,1995，Mossetal.，1996，Nugentetal"1998，Flexneretal.,1988,Morrowetal.，1999);微球(Guptaetal"1998,Jonesetal"1996,Maloyetal"1994,Mooreetal.，1995，O，Haganetal.,1994,Eldridgeetal.,1989);核酸疫苗(Fynanetal.，1993,Kuklinetal.，1997，Sasakietal.，1998，Okadaetal.,1997，Ishiietal"1997);多聚體(例如羧甲基纖維素、殼聚糖)(Hamajimaetal.，1998，Jabbal-Gilletal.，1998);多聚體環(Wyattetal.,1998);蛋白體(Vancottetal.,1998,Lowelletal.，1988,1996,1997);氟化鈉(Hashietal.,1998);轉基因植物(Tacketetal.,1998,Masonetal.,1998,Haqetal.,1995);病毒小體(Glucketal.,1992，Mengiardietal.，1995,Cryzetal.,1998)和病毒樣顆粒(Jiangetal.,1999,Leibletal.,1998)。本發明的配方在可藥用的溶液中被施用，所述溶液常規地含有可藥用濃度的鹽、緩沖劑、防腐劑、適合的運載體、佐劑和任選的其它治療成分。術語可藥用運載體表示適用于施用給人或其它脊椎動物的一種或多種適合的固體或液體填充劑、稀釋劑或包膠物質。術語運載體表示天然或合成的有機或無機成分，活性成分與之組合以便于應用。藥物組合物的成分也能夠以下述方式與本發明的化合物彼此混合不存在會顯著損傷期望的藥物有效性的相互作用。對于口服施用而言，可以通過將活性化合物與本領域公知的可藥用運載體混合來容易地對化合物(即核酸、抗原、抗體和其它治療劑)加以配制。這類運載體使得本發明的化合物能夠被配制為片劑、垸基、錠劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿、膏劑、懸浮液等，用于被待治療的受試者口服攝取。用于口服用途的藥物制劑可以作為固體賦形劑獲得，如果期望的話在添加合適的輔料后任選地研磨得到的混合物并加工混合物顆粒，獲得片劑或錠劑核。合適的賦形劑尤其是填充劑如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制劑如玉米淀粉、小麥淀粉、水稻淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、西黃芪樹膠(gumtragacanth)、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯酮(PVP)。如果期望的話，可以添加崩解劑例如交聯的聚乙烯吡咯酮、瓊脂或海藻酸或其鹽例如海藻酸鈉。任選地，口服制劑也可以被配制在鹽水或緩沖液中用于中和內部酸條件，或可以不與任何運載體一起被施用。錠劑核與合適的包衣一起提供。為了該目的可以使用濃縮的糖溶液，其可任選的含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯凝膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液(lacquersolution)和合適的有機溶劑或溶劑混合物。染料或色素可以被添加至片劑或錠劑包衣中用于鑒定或表征活性化合物劑量的不同組合。可口服使用的藥物制劑包括由明膠制成的push-fit膠囊，以及由明膠和增塑劑(例如甘油或山梨醇)制成的軟密封膠囊。push-fit膠囊可以含有與填充劑如乳糖、粘合劑如淀粉和/或潤滑劑如滑石或硬脂酸鎂和任選的穩定劑混合的活性成分。在軟膠囊中，活性化合物可溶于或懸浮于合適的液體中，例如脂肪油、液體石蠟，或液體聚乙二醇中。另外，可以添加穩定劑。也可以使用配制用于口施用的微球。這類微球已經是本領域確定的。用于口施用的所有配方應當是適用于這類施用的劑量。對于含服施用而言，組合物可以采取以常規方式配制的片劑或錠劑的形式。對于通過吸入施用而言，用于本發明用途的化合物可以以來自增壓包裝或噴霧器的噴霧劑的形式用合適的推進劑(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲垸、二氯四氟乙垸、二氧化碳或其它合適的氣體)便利地被遞送。在加壓氣霧劑的情況下，單位劑量可以通過提供用于遞送測定量的值來確定。用于吸入器或吹入器的膠囊和藥筒(例如明膠)可以被配制為含有化合物和合適粉末基礎(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。當期望全身性遞送化合物時，其可以被配制為用于通過注射腸胃外施用，例如通過推注(bolusinjection)或連續輸注。用于注射的配方可以以單位劑型存在，例如安瓿或帶有添加的防腐劑的多劑量容器中。組合物可以采用例如油性或水性媒介中的懸浮液、溶液或乳劑的形式，并可以含有配制劑如懸浮劑、穩定劑和/或分散劑。用于腸胃外施用的藥物配方包括水溶性形式的活性化合物的水性溶液。另外，活性化合物的懸浮液可以被制備為合適的油性注射懸浮液。合適的親脂溶劑或媒介包括脂肪油(如芝麻油)或合成的脂肪酸酯(如油酸乙酯)或甘油三酯，或脂質體。水性注射懸浮液可含有提高懸浮液粘度的物質，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖。任選的，懸浮液也可以含有合適的穩定劑或提高化合物溶解度的試劑，以允許制備高濃度溶液。或者，活性化合物可以是用于在使用前與合適媒介(例如滅菌無熱原水)組合的粉末形式。組合物也可以被配制在直腸或陰道組合物例如栓劑或灌腸劑中，其例如含有常規的栓劑基質，如可可脂或其它甘油酯。除了前述配方外，化合物也可以被配制為儲存制劑。這類長效配方可以用合適的多聚體或疏水材料(例如可接受的油中的乳劑)或離子交換樹脂配制，或被配制為微溶衍生物(例如微溶鹽)。藥物組合物也可包含合適的固體或凝膠相運載體或賦形劑。這類運載體或賦形劑的例子包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、多種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠和多聚體如聚乙二醇。合適的液體或固體藥物制劑形式為例如用于吸入的水性或鹽水溶液、被微囊包埋、螺旋包埋(encochleated)、包衣在微金顆粒上、包含在脂質體中、被噴灑、氣溶膠、用于植入皮膚的小團、或干燥在要擦入皮膚中的尖銳物品上。藥物組合物也包括顆粒、粉末、片劑、包衣的片劑、(微)膠囊、栓劑、糖漿、乳劑、懸浮液、霜、滴劑或延長活性化合物釋放的制劑，所述制劑中如上所述常規地使用賦形劑和添加劑和/或輔料，例如崩解劑、粘合劑、包衣劑、溶脹劑、潤滑劑、調味劑、甜味劑或增溶劑。藥物組合物適用于多種藥物遞送體系。用于藥物遞送的方法的概括綜述參見LangerR(1990)Science249:1527-1533，其通過參考并入本文。核酸和任選的其它治療劑和/或抗原可以自身(純的)被施用或者以可藥用鹽的形式被施用。當用于藥物中時，鹽應當是可藥用的，但是可以便利地使用非可藥用鹽以制備其可藥用鹽。這些鹽包括，但不限于從以下酸制備的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、馬來酸、乙酸、水楊酸、p-甲苯磺酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。這類鹽也可以被制備為堿金屬或堿土金屬鹽，例如羧酸基團的鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。合適的緩沖劑包括乙酸和鹽(1-2%W/V);檸檬酸和鹽(1-3%W/V);硼酸和鹽(0.5-2.5%w/v);和磷酸和鹽(0.8-2%w/v)。合適的防腐劑包括苯扎氯胺(0.003-0.03%w/v);三氯叔丁醇(0.3-0.9%w/v);對羥基苯甲酸酯(O.Ol-0.25%w/v)和柳硫汞(0.004-0.020/。w/v)。組合物可以以單位劑量形式便利地存在，并可通過制藥領域公知的任何方法制備。所有方法都包括使化合物與運載體組合的步驟，所述運載體組成一種或多種助劑(accessoryingredients)。通暢，通過將化合物均一地和直接地與液體運載體、精細分散的固體運載體或這二者組合，如果需要的話隨后使產物成形來制備組合物。液體劑量單位是管或安瓿。固體劑量單位是片劑、膠囊和栓劑。其它遞送系統可包括即時釋放(time-release)、延遲釋放或延長釋放遞送體系。這類體系可以避免化合物的重復施用，增進對受試者和醫師的便利。許多類型的遞送體系是可獲得的，并且是本領域常規技術人員已知的。它們包括多聚物基礎系統如多聚(丙交酯-乙交酯)、共聚草酸酯、聚己酸內酯、聚酯酰胺、多聚正酯、多聚羥基丁酸和多聚酸酐。含有前述多聚體微膠囊的藥物公開于例如U.S.Pat.No.5，075，109中。遞送體系也包括下述非多聚體體系脂質，包括甾醇如膽固醇、膽固醇酯和脂肪酸或中性脂肪如甘油單、二和三酯；水凝膠釋放體系；硅膠體系；基于肽的體系；蠟包衣；使用常規粘合劑和賦形劑的壓縮片劑；部分融合的埋植劑等。特異的例子包括，但不限于(a)侵蝕體系(erosionalsystem),其中本發明的試劑以基質中的形式被包含，例如U.S.Pat.Nos.4，452,775、4,675,189和5,736,152中所公開的那些，和(b)不擴散體系(diffusionalsystem),其中活性成分以受控的速率從例如U.S.Pat.Nos.3,854,480、5,133,974和5,407,686中所述的多聚體滲透。另外，可以使用基于泵的硬件遞送體系，其中一些適用于植入。以下的實施例將進一步闡述本發明，所述實施例不應以任何方式被認為用于進一步限制。實施例實施例1人PMBC對含N-U-R，-R，的寡核糖核苷酸的應答性方法Luminex技術稱作微球的Luminex色彩代碼小珠分為IOO個不同的組。每個小珠組可以用對具體生物測定特異的實際包被，允許從樣品中捕獲并檢測特異的分析物。在Luminex簡便分析儀中，激光激發鑒定每個微球顆粒的內部染料，并且任何報告子染料也在該測定期間被捕獲。對每個小珠組進修許多讀數，進一步確認結果。以此種方式，Luminex技術允許在單個樣品中快速并精確地復合多至ioo個獨特的測定。從健康的供體中分離人外周血單核細胞(PBMC)，對其進行涂布并用多種測試和對照免疫刺激劑刺激16個小時。16小時后收集上清液，然后通過ELISA測定分析。在與DOTAP復合和完全滴定曲線(7個濃度)的條件下測試含N-U-RrR2的寡核糖核苷酸，所述曲線從與25嗎/mlDOTAP復合的2pMORN開始并具有1/3的稀釋度步驟。還包括某些陰性對照，包括單獨用培養基和單獨用DOTAP(25mg/ml培養基孔；"脂質體")。對照免疫刺激劑包括咪唑喹啉R-848(2pM，1/3稀釋度步驟和7個濃度)、報導的TLR7的配體、具有TLR7基序如AU和AUU序列(SEQIDNO:13-SEQIDNO:15)的ORN、具有TLR8基序如CU、GU和GUU序列(SEQIDNO:19-SEQIDNO:23)的ORN。結果顯示在圖1和3中。使用經分離的pDC、單核細胞和mDC刺激進行用于測試不同ORN序列的類似測定。用與10|ug/mlDOTAP、0.5pMCpGODN復合的0.5jiMORN，或單獨用DOTAP或培養基刺激細胞。16小時后收集上清液并通過ELISA測量IFN-a、TNF-a和IL-12p40。結果顯示在圖2中。圖1顯示了用含AU序列的SEQIDNO:12和含GU序列的SEQIDNO:21對PBMC刺激時TNF-a和IFN-a生產之間的清晰差異。其它的序列分析顯示CUA重復(SEQIDNO:24)是另一誘導TNF-a而不產生IFN-a的ORN。含有AU和GU重復(SEQIDNO:29-SEQIDNO:34)的較短ORN顯示與較長ORN(SEQIDNO:12-SEQIDNO:23)相比相似的結果，但是效率和能力降低。圖2和6顯示了在經分離的單核細胞、pDC和mDC上對AU-ORN(SEQIDNO:13)和GU-ORN(SEQIDNO:21)的分析，反映了對AU-ORN(SEQIDNO:13)而言強烈降低的IFN-a生產，和對兩種ORN而言清晰的TNF-a和IL-12p40生產。來自pDC的ORN刺激時的IFN-a生產似乎是TLR7介導的，而來自經分離的單核細胞和mDC的TNF-a和IL-12p40生產似乎是TLR8介導的。Luminex結果反映了與ELISA數據相當的結果，并證明了GU-ORN和AU-ORN之間主要的區別歸因于IFN-a生產和IFN-a相關的基因/細胞因子(圖3和8a)。另外，其它Luminex數據顯示與IFN-a和IFN-a相關的基因/細胞因子相反，其它細胞因子/趨化因子不受來自CD123-CD14-細胞的一個異常值的影響(圖7和8a-d)。該IL-6生產可能歸因于TLR7介導的B細胞激活。實施例2對寡核糖核苷酸的IFN-ce和TNF-a最大活性的比較用與DOATP復合的ORN來刺激人PBMC。16個小時后收集上清液并測量TNF-a和IFN-a水平。測定了3-6個血供體和兩個獨立實驗在0.6pM處的平均/最大活性。結果顯示在圖4中。這些數據在TLR8和TLR7/8基序間清晰地不同具有基序N-U-R廣R2的ORN顯示在300pg/ml下的IFN-a生產，而TLR7/8ORN顯示在PBMC刺激時更高的IFN-a生產(圖4a)。TLR8和TLR7/8用紅線分開。相反，TNF-Of水平測量指出具有TLR8的ORN和具有TLR7/8基序的ORN二者均刺激TNF-ce生產。實施例3對寡核糖核苷酸的IFN-a最大活性與IFN-o;EC50的比較用與DOATP復合的ORN刺激人PBMC。16個小時后收集上清液并測量INF-a水平。測定了3-6個血供體和兩個獨立實驗在0.6pM處和在完全滴定曲線(范圍2)LiM到0.9nM)的EC50處的平均/最大活性。結果顯示在圖5中。EC50和最大活性顯示涉及TLR8和TLR7/8基序的可比較的結果。低EC50/高最大活性表示TLR7/8ORN(圖5a)而高EC50和低最大活性表示TLR80RN(圖5b)。在人PBMC剌激時對表1所列的ORN序列進行IFN-a和TNF-a生產測試。用指定的ORN刺激人PBMC16小時，收集上清液并通過ELISA測量細胞因子生產。表2概括了ORN針對IFN-Q!和TNF-a生產的最小/最大活性和EC50。表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage81</column></row><table>+:細胞因子生產-:無細胞因子生產。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage83</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage84</column></row><table>實施例4在人PMBC刺激時，合成的ORN在IFN-a和TNF-o;釋放之間不同用與25嗎/mlDOTAP復合的lpMORN或單獨用DOTAP(圖10a)，或指定量的與DOTAP復合的ORN或單獨用DOTAP(圖10b-10c)孵育CD123+經純化的pDC(圖10a和10b)或經分離的單核細胞(圖10c)。16小時后收集細胞并用CD123、CDllc和HLA-DR抗體(圖10a和10b)或CD14和CD19(圖10c)染色。對CD86的FACS分析顯示，富含AU的ORN(SEQIDNO:13)和富含GU的ORN(SEQIDNO:21)在pDC刺激時在CD86表面標記物表達中顯示差異。用富含AU的ORN(SEQIDNO:13)刺激導致非常少的CD86激活，而用富含GU的ORN(SEQIDNO:21)刺激導致顯著的CD86激活。該激活被確定為是級聯依賴性的(圖10b)。富含AU的ORN(SEQIDNO:13)和富含GU的ORN(SEQIDNO:21)在人PBMC(數據未顯示)禾HCD14-陽性細胞刺激時在CD80表面標記物表達中顯示無差異(圖10c)。富含AU的ORN(SEOIDNO:13)和富含GU的ORN(SEOIDNO:21)以齊lJ量依賴的方式刺激特異的人TLR8信號轉導用人TLR3或TLR8表達質粒和NF/cB-螢光素酶報告基因構建體穩定轉染不應答的HEK-293細胞。用指定的ORN序列(lOpM，與50|LiM/mlDOATP復合)或對照刺激(lO)iMR-848、50pg/mlpolyIC、3,3|iMODN10103或50pg/mlDOTAP)將細胞孵育16小時。通過測定螢光素酶活性測量NF/cB-激活。結果作為高于背景(培養基)的倍數誘導給出。顯示了6個獨立重復的一個代表性實驗(圖9a)。用與DOTAP(50嗎/ml-〉1/3稀釋度)復合的指定濃度的ORN或單獨用DOTAP(5(^g/ml->1/3稀釋度)將表達人TLR8的穩定轉染的HEK-293細胞刺激16小時。通過測定螢光素酶活性測量NF/cB-激活。結果作為高于背景(培養基)的倍數誘導給出。顯示了3個獨立重復的一個代表性實驗(圖9b)。用人TLR8表達質粒和NF/cB-螢光素酶報告基因構建體穩定轉染不應答的HEK-293細胞。用指定的ORN序列(15|uM，與75juM/mlDOATP復合)或對照刺激(15|iMR-848或75|ug/mlDOTAP)和用培養基(左)、200nMBafilomycin(Baf.,中)或lmM氯喹(CQ，右)將細胞孵育16小時。通過測定螢光素酶活性測量NFkB-激活。結果作為高于背景(培養基)的倍數誘導給出。顯示了4個獨立重復的一個代表性實驗(圖9c)。將RPMI8226細胞與1000U/mlIntronA孵育3小時，用培養基洗滌兩次，然后用指定濃度的與DOTAP(50嗎/ml->1/3稀釋度)復合的ORN刺激。通過ELISA測量IP-10的細胞因子釋放。結果以pg/ml給出。顯示了3個獨立重復的一個代表性實驗(圖9d)。這些數據證明SEQIDN0:13和SEQIDN0:21對TLR8的特異性。用高劑量(H.D.，10Atg/ml)和低劑量(L.D.,2.5/^g/ml)的TLR8ORN(SEQIDNO:13)、TLR7/8ORN(SEQIDNO:21)和對照ORN(SEQIDNO:5)(表3)重復該測定。僅SEQIDNO:21處理導致了顯著的IL-12和TNF-a生產(分別為圖lla和lib)。所有的ORN刺激IFN-7的生產(圖llc)。SEQIDNOORNSEQIDNO:5C*C*G*U*C*U*G*U*U*G*U*G*U*G*A*C*U*CSEQ工DNO:13U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*USEQIDNO:21U*U*G*U*U*G*U*U*G*U*U*G*U*U*G*U*U*G*U*U實施例6小鼠巨噬細胞體內或體外不對富含AU的ORN(SEOIDNO:13)應答Raw264.7細胞(圖12a)、J774細胞(圖12b)和經純化的CDllc+細胞(Milteny，磁性小珠標記)分離自svl29小鼠脾細胞(圖12c-12e)并用與DOTAP(50pg/ml并用ORN稀釋)復合的指定濃度的ORN、單獨的R-848或DOTAP(50|ig/ml)刺激。16個小時(圖12a和12b)或20個小時(圖12c-12e)后收集上清液并用于TNF-a(圖12a和12b)、IL-12p40(圖12c)、IFN隱a(圖12d)和IP-10(圖12e)的ELISA。數據表示了來自至少三個實驗的一個個體(圖12a和12b)和3只小鼠的均值(圖12c-12e)。為了測量富含AU的ORN體內刺激小鼠細胞的能力，用與DOTAP(60、20或6pg/ml)配制的指定量的ORN注射sv129小鼠(『5/組)并在3小時后采血。用ELISA在全血中測量IL-12p40(圖12f)、IFN-Q!(圖12g)和IP-10(圖12h)生產。實施例7經純化的大鼠脾細胞不對富含AU的ORNSEOIDNO:13應答將來自3只Sprague-Dawley大鼠的脾細胞合并并用指定濃度的SEQIDNO:21、SEQIDNO:13(均與62.5嗎/mlDOTAP復合，1/5稀釋度)、R-848或DOTAP單獨(62.5嗎/ml->1/5稀釋度)刺激。20小時后收集上清液并通過ELISA測量TNF-a水平。如圖13中所示，用富含GU的ORNSEQIDNO:21刺激導致TNF-a生產，而用富含AU的ORNSEQIDNO:13生產導致不生產TNF-a。實施例8嚙齒動物細胞對富含AU的ORNSEOIDNO:13的失敗應答可由物種間的TLR8多態性導致用富含AU的ORN刺激人和牛細胞導致細胞因子生產，而刺激小鼠和大鼠細胞則不導致。進行TLR8序列比對和分析。不同脊椎動物(人、猴子、猩猩、犬、牛、豬、小鼠和大鼠)間TLR8的蛋白質序列比對顯示結構域1的富含亮氨酸重復(LRR)3中強烈的差異。盡管人、猩猩和猴子是高度保守的，但是與人相比，大鼠、小鼠和豬被證明在位置106(小鼠)、103(大鼠)或102(豬)刪除4AA，牛被證明具有2AA(105-106)的插入。有趣的是，豬和牛顯示出在相同區域(位置97)中的另一個2AA刪除。可能結構域1的富含亮氨酸重復區域中的刪除可干擾富含AU的ORN結合。等同物前述書面說明書被認為足夠使本領域技術人員實現本發明。本發明的范圍不受提供的實施例限制，因為實施例僅旨在單獨闡述本發明的一個方面，其它功能等同的實施方案都在本發明的范圍之內。除了本文所示和所述的之外，本領域的技術人員根據前文描述將顯而易見本發明的多種修飾，這些都在附加的權利要求的范圍之內。本發明的優點不一定被本發明的每個實施方案包含。本申請中引用的所有參考文獻、專利和專利出版物都一起整體通過引用并入本文。權利要求1.一種用于刺激前炎性細胞因子生產的方法，所述方法包括將表達TLR8的細胞與下述用量的包含N-U-R1-R2的RNA寡核糖核苷酸(ORN)體外接觸，其中N是核糖核苷酸且N不包括U，U是尿嘧啶或其衍生物，R是核糖核苷酸，其中R1和R2至少之一是腺苷(A)或胞嘧啶或其衍生物，并且其中R不是U，除非N-U-R1-R2含有至少兩個A，其中所述ORN不是ACCCAUCUAUUAUAUAACUC(SEQIDNO89)并且不包含TLR7/8基序，并且其中所述ORN長度為4-100，所述用量能有效刺激前炎性細胞因子產生，并且使得其中應答于ORN的IFN-α生產相對于背景而言不被顯著誘導。2.—種用于刺激前炎性細胞因子的方法，包括將表達TLR8的細胞與下述用量的包含N-U-RpR2的RNA寡核糖核苷酸(ORN)體外接觸，其中N是核糖核苷酸且N不包括U，U是尿嘧啶或其衍生物，R是核糖核苷酸，其中Rt和R2至少之一是腺苷(A)或胞嘧啶或其衍生物，其中R不是U，除非N-U-RrR2含有至少兩個A，其中所述ORN不包含TLR7/8基序并且不與N-[l-(2,3-二油酰氧)丙基]-N,N,N三甲基銨甲基硫酸酯(DOTAP)復合，并且其中所述ORN長度為4-100，所述用量能有效刺激前炎性細胞因子生產并且其中應答于ORN的IFN-ce生產相對于背景而言不被顯著誘導。3.權利要求1或2的方法，其中應答于所述ORN的IFN-o;生產少于300pg/ml。4.權利要求1所述的方法，其中所述ORN與N-[l-(2,3-二油酰氧)丙基]-N,N，N三甲基銨甲基硫酸酯(DOTAP)或聚陽離子肽復合。5.權利要求1或2所述的方法，其中N為腺苷或胞嘧啶(C)或其衍生物。6.權利要求1或2所述的方法，其中N為腺苷或胞嘧啶。7.權利要求1或2所述的方法，其中U為尿嘧啶。8.權利要求l或2所述的方法，其中所述ORN包含至少一個AU。9.權利要求1或2所述的方法，其中所述ORN包含至少一個CU。10.權利要求1或2所述的方法，其中表達TLR8的細胞是單核細胞或單核細胞衍生的樹突細胞。11.權利要求l或2所述的方法，其中表達TLR8的細胞是mDC。12.權利要求l或2所述的方法，其中所述ORN含有至少兩個AU。13.權利要求l或2所述的方法，其中所述ORN含有至少三個AU。14.權利要求1或2所述的方法，其中N-U-R!-R2含有至少3個As。15.權利要求l或2所述的方法，其中N-U-RrR2含有至少2個Cs。16.權利要求1或2所述的方法，其中N-U-R廣R2含有至少一個G或C。17.權利要求1或2所述的方法，其中所述ORN含有至少一處主鏈修飾。18.權利要求1或2所述的方法，其中所述ORN是單鏈的。19.包含N-U-R,-R2的RNA寡核苷酸(ORN)，其中N是核糖核苷酸且N不包括U，U是尿嘧啶或其衍生物，R是核糖核苷酸，其中R,和R2至少之一是腺苷(A)或胞嘧啶或其衍生物，其中R不是U，除非N-U-RrR2含有至少兩個A，并且其中所述ORN不是ACCCAUCUAUUAUAUAACUC(SEQIDNO:89)并且不包含TLR7/8基序，并且其中所述ORN長度為4-100并包含至少一處主鏈修飾。20.權利要求19所述的ORN，其還包含可藥用的運載體。21.權利要求19所述的ORN，其中所述ORN與N-[l-(2，3-二油酰氧)丙基]-N，N，N三甲基銨甲基硫酸酯(DOTAP)復合。22.權利要求19所述的ORN，其中所述ORN是單鏈的。23.包含N-U-RrR2的RNA寡核苷酸(ORN)，其中N是核糖核苷酸且N不包括U，U是尿嘧啶或其衍生物，R是核糖核苷酸，其中Ri和R2至少之一是腺苷(A)或胞嘧啶或其衍生物，其中R不是U，除非N-U-RrR2含有至少兩個A，其中所述ORN不包含TLR7/8基序并且不與N-[l-(2,3-二油酰氧)丙基]-N,N,N三甲基銨甲基硫酸酯(DOTAP)復合，并且，其中所述ORN長度為4-100，并包含至少一處主鏈修飾，并被配制在可藥用的運載體中。24.權利要求19或23所述的ORN，其中N為腺苷或胞嘧啶(C)或其衍生物。25.權利要求19或23所述的ORN，其中N為腺苷或胞嘧啶。26.權利要求19或23所述的ORN，其中U為尿嘧啶。27.權利要求19或23所述的ORN，其中ORN包含至少兩個AU。28.權利要求19或23所述的ORN，其中ORN包含至少兩個CU。29.權利要求19或23所述的ORN，其中N-U-RrR2包含至少3個Aso30.權利要求19或23所述的ORN，其中N-U-RrR2包含至少2個Cs。31.權利要求19或23所述的ORN，其中N-U-RrR2包含至少一個G或C。32.權利要求19或23所述的ORN，其中所述ORN是單鏈的。33.權利要求19或23所述的ORN，其中所述ORN是以下之一U*U*A*G*G*C*A*C(SEQIDNO:2)、A*U*A*G*G*C*A*C(SEQIDNO:4)、G*C*C*A*C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*U*A*U*A*C*C(SEQIDNO:11)、A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U(SEQIDNO:12)、U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U(SEQIDNO:13)、A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A(SEQIDNO:16)、A*A*A*U*A*A*A*U*A*A*A*U*A*A*A*U*A*A*A*U(SEQIDNO:17)、A*A*A*A*U*A*A*A*A*U*A*A*A*A*U*A*A*A*A*U(SEQIDNO:18)、C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U(SEQIDNO:24)、U*U*A*U*U*A*U(SEQIDNO:30)或U*A*U*A*U*A*U(SEQIDNO:33)。34.權利要求19或23所述的ORN，其還包含噴霧器。35.權利要求19或23所述的ORN，其還包含吸入器。36.權利要求35所述的ORN，其中所述吸入器是計量吸入器。37.權利要求35所述的ORN，其中所述吸入器是粉末吸入器。38.權利要求19或23所述的ORN，其還包含化學治療劑。39.權利要求19或23所述的ORN，其還包含抗病毒劑。40.權利要求19或23所述的ORN，其還包含抗原。41.權利要求20或23所述的ORN，其中可藥用的運載體被配制用于注射。42.權利要求20或23所述的ORN，其中可藥用的運載體被配制用于粘膜施用。43.—種用于治療癌癥的方法，其包括對需要的受試者以有效治療癌癥的量施用權利要求19-23中任一項的ORN。44.權利要求43所述的方法，其還包括對受試者施用化療。45.權利要求43所述的方法，其還包括對受試者施用輻射。46.—種用于治療哮喘的方法，其包括對需要的受試者以有效治療哮喘的量施用權利要求19-23中任一項的ORN。47.—種用于治療變態反應的方法，其包括對需要的受試者以有效治療哮喘的量施用權利要求19-23中任一項的ORN。48.權利要求47所述的方法，其中所述受試者患有變應性鼻炎。49.一種用于在受試者中調控免疫應答的方法，其包括對需要的受試者以有效調控免疫應答的量施用權利要求19-23中任一項的ORN。50.權利要求49所述的方法，其中所述ORN被遞送給所述受試者以在受試者中治療自身免疫疾病。51.權利要求49所述的方法，其中所述ORN被遞送給所述受試者以在受試者中治療氣道重建。52.權利要求49所述的方法，其中所述ORN被遞送給所述受試者而不遞送抗原。53.權利要求49所述的方法，其中所述ORN以選自以下的途徑被遞送給所述受試者口、鼻、舌下、靜脈內、皮下、粘膜、呼吸、直接注射和經皮。54.權利要求49所述的方法，其中所述ORN以有效誘導細胞因子表達的量被遞送給所述受試者。55.權利要求53所述的方法，其中所述細胞因子選自TNFa、IL-IO、IL-6、IFN-7、MCP1和IL-12構成的組。56.—種用于治療被病毒感染加重的哮喘的方法，包括對需要的受試者以下述用量施用權利要求19-23中任一項的ORN，所述用量有效治療被病毒感染加重的哮喘。57.—種用于傳染病的方法，其包括對需要的受試者以有效治療所述傳染病的量施用權利要求19-23中任一項的ORN。58.權利要求57所述的方法，其中所述受試者患有病毒感染。59.權利要求58所述的方法，其中所述病毒感染為乙型肝炎。60.權利要求58所述的方法，其中所述病毒感染為丙型肝炎。61.權利要求58所述的方法，其還包括對受試者施用抗病毒劑。62.權利要求61所述的方法，其中所述抗病毒劑與ORN連接。63.權利要求57所述的方法，其中所述ORN通過選自以下的途徑被遞送口、鼻、舌下、靜脈內、皮下、粘膜、呼吸、直接注射和經皮。64.權利要求19或23所述的ORN，其中所述ORN基序被非核苷酸接頭與5'核糖核苷酸分隔。65.權利要求19或23所述的ORN，其中所述ORN基序被非核苷酸接頭與3'核糖核苷酸分隔。66.權利要求19或23所述的ORN，其中所述ORN基序被非核苷酸接頭與5'和3'核糖核苷酸分隔。67.權利要求19或23所述的ORN，其中所述ORN被配制在多聚陽離子運載體中。68.權利要求43所述的方法，其還包括對受試者施用免疫刺激性的CpG核酸。69.權利要求68所述的方法，其中所述ORN和所述免疫刺激性CpG核酸被獨立地施用。70.權利要求68所述的方法，其中所述ORN和所述免疫刺激性CpG核酸被配制為綴合物。71.權利要求68所述的方法，其中所述ORN和所述免疫刺激性CpG核酸被配制為混合物。72.—種用于下調免疫抑制性CD4+調節(Treg)細胞的方法，所述方法包括將CD4+Treg細胞與下述用量的下述組合物接觸，所述用量有效降低CD4+Treg細胞的抑制作用，所述組合物包含權利要求19-23中任一項所述的ORN。73.權利要求72所述的方法，其中所述組合物還含有免疫刺激性CpG核酸。74.權利要求73所述的方法，其中所述ORN和所述免疫刺激性CpG核酸是連接的。75.權利要求73所述的方法，其中所述ORN和所述免疫刺激性CpG核酸作為綴合物存在。76.權利要求19-42中任一項的ORN組合物在用于治療癌癥的藥劑制造中的用途。77.權利要求76所述的用途，其中所述藥劑與化學療法一起使用。78.權利要求76所述的用途，其中所述藥劑與輻射一起使用。79.權利要求19-42中任一項的ORN組合物在用于制造治療哮喘的藥劑中的用途。80.權利要求19-42中任一項的ORN組合物在用于制造治療變態反應的藥劑中的用途。81.權利要求80所述的用途，其中所述變態反應是變應性鼻炎。82.權利要求19-42中任一項的ORN組合物在用于制造調控免疫應答的藥劑中的用途。83.權利要求82所述的用途，其中所述藥劑用于治療自身免疫疾病。84.權利要求82所述的用途，其中所述藥劑用于治療氣道重建。85.權利要求82所述的用途，其中所述藥劑用于與抗原一起使用。86.權利要求82所述的用途，其中所述藥劑用于通過選自以下的途徑使用口、鼻、舌下、靜脈內、皮下、粘膜、呼吸、直接注射和經皮。87.權利要求82所述的用途，其中所述免疫應答包含細胞因子誘導。88.權利要求87所述的用途，其中所述細胞因子選自TNFce、IL-IO、IL隱6、IFN-7、MCP1和IL-12。89.權利要求19-42中任一項的ORN組合物在用于治療被病毒感染加重的哮喘的藥劑制造中的用途。90.權利要求19-42中任一項的ORN組合物在用于治療傳染病的藥劑制造中的用途。91.權利要求90所述的用途，其中所述藥劑用于治療病毒感染。92.權利要求91所述的用途，其中所述病毒感染為乙型肝炎。93.權利要求91所述的用途，其中所述病毒感染為丙型肝炎。94.權利要求91所述的用途，其中所述藥劑用于與抗病毒劑一起使用。95.權利要求94所述的用途，其中所述抗病毒劑與所述ORN連接。96.權利要求90所述的用途，其中所述藥劑用于通過選自以下的途徑遞送口、鼻、舌下、靜脈內、皮下、粘膜、呼吸、直接注射和經皮。97.權利要求19或23所述的ORN，其中所述ORN基序被非核苷酸接頭與5'核糖核苷酸分隔。98.權利要求19或23所述的ORN，其中所述ORN基序被非核苷酸接頭與3'核糖核苷酸分隔。99.權利要求19或23所述的ORN，其中所述ORN基序被非核苷酸接頭與5'和3'核糖核苷酸分隔。100.權利要求76所述的用途，其中所述藥劑用于和免疫刺激性CpG核酸一起使用。101.權利要求100所述的用途，其中所述ORN和所述免疫刺激性CpG核酸用于獨立施用。102.權利要求100所述的用途，其中所述ORN和所述免疫刺激性CpG核酸被配制為綴合物。103.權利要求100所述的用途，其中所述ORN和所述免疫刺激性CpG核酸被配制為混合物。104.—種用于下調免疫抑制性CD4+調節(Treg)細胞的方法，所述方法包括將CD4+Treg細胞與下述用量的下述組合物接觸，所述用量有效降低CD4+Treg細胞的抑制作用，所述組合物包含權利要求19-23中任一項所述的ORN。105.權利要求104所述的方法，其中所述組合物還含有免疫刺激性CpG核酸。106.權利要求105所述的方法，其中所述ORN和所述免疫刺激性CpG核酸是連接的。107.權利要求105所述的方法，其中所述ORN和所述免疫剌激性CpG核酸作為綴合物存在。全文摘要本發明提供了免疫刺激性組合物以及這些化合物在藥物制備以及體外用途中的用途，所述藥物用于治療疾病。本發明的組合物尤其包括加入了序列依賴性免疫刺激性序列基序的免疫刺激性寡核糖核苷酸。本發明提供了涉及磷酸聯接、核苷酸類似物、加合物及其組合的特定修飾。可以任選地含有抗原的本發明組合物能夠單獨使用，或與其它治療一起用于刺激或增強免疫應答。本發明還提供了適用于治療下述受試者的方法，所述受試者患有感染、癌癥、變應性病癥、哮喘、氣道再造或免疫缺陷。本發明的免疫刺激性寡核糖核苷酸被認為能刺激Toll樣受體8(TLR8)。文檔編號A61P31/00GK101331229SQ200680044030公開日2008年12月24日申請日期2006年11月22日優先權日2005年11月25日發明者亞歷山大·福斯巴赫,格雷森·B·利浦福德,約爾格·沃爾梅爾申請人:科勒制藥股份公司;科勒制藥集團公司