用于治療癌癥的免疫脂質體的制作方法

專利名稱：用于治療癌癥的免疫脂質體的制作方法
用于治療癌癥的免疫脂質體本發明屬于癌癥治療領域。特別地，本發明涉及用于一線和更高線治療罹患癌癥、 特別地由局部推進的或轉移性腫瘤所代表的癌癥的人患者并涉及在所述方法中使用的組 合物。表皮生長因子受體(EGFR)是ErbB家族的酪氨酸激酶受體，所述酪氨酸激酶受體 在許多上皮腫瘤中被異常激活。受體激活導致幾種下游胞內底物的召集和磷酸化，這導致 促有絲分裂信號傳導和其他促進腫瘤的細胞活性。在人腫瘤中，受體過量表達與更侵入性 的臨床過程相關(1，2)。針對結合配體的胞外結構域的單克隆抗體和受體酪氨酸激酶的低 分子量抑制劑目前處于臨床開發的高級階段。在可獲得的抗EGFR單抗當中，最充分表征的一種單抗是嵌合的人小鼠MAb西妥 昔單抗。西妥昔單抗是具有活躍的自分泌EGFR回路的培養癌細胞的生長的強力抑制劑。 現在已經完成單獨或者與化學療法或放射療法聯合給予的一系列西妥昔單抗I期、II期和 III期研究。發現西妥昔單抗是安全的，但是它顯示一些副作用，包括在多達40-70%全部 治療患者中的痤瘡樣皮膚疹和2%患者中發生的過敏樣或過敏反應。在4%患者中檢測到 針對嵌合抗體的非中和性人抗體。發現如通過抗體清除率的飽和作用所確定的最佳生物學 劑量是在每周200至400mg/m2的范圍內(3)。西妥昔單抗目前在許多國家被視為患有結腸 直腸癌的患者和頭頸腫瘤中的標準療法的部分。多柔比星是最廣泛使用的用于治療實體瘤和血液惡性病的抗癌藥之一。它有效 對抗多種癌癥類型，并廣泛用作單一藥物或用于聯合化療方案中。除在治療乳腺癌中的重 要地位之外，多柔比星還在卵巢癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、胃癌、膀胱癌和小細胞肺癌、子 宮肉瘤、急性成淋巴細胞白血病、霍奇金和非霍奇金淋巴瘤、多發性骨髓瘤和軟組織及骨肉 瘤中顯示抗腫瘤活性。盡管多柔比星展示了優異的抗腫瘤活性譜，然而它在臨床實踐中 的使用受到藥物相關毒性、特別地骨髓抑制和心臟毒性限制(援引“Principals and Practice of Oncology，DeVita，第 6 片反〃)。利用多柔比星的脂質體封裝來改變該藥物的組織分布和藥物代謝動力學并提 高其治療指數。聚乙二醇化的脂質體多柔比星(DOXYL，OrthoBiotech Products LP, Bridgewater, NJ ；CAELYX, Schering Plough, Kenilworth, NJ)是多柔比星的一種新制劑。 聚乙二醇化保護脂質體免遭單核吞噬細胞系統探測并增加循環時間，從而允許更多地定向 遞送多柔比星至腫瘤細胞。聚乙二醇化的脂質體多柔比星已經作為單一藥物在患有轉移性或復發性乳腺癌 的患者中顯示效力，客觀應答率范圍是9%至33% (4，5)。與常規多柔比星相比，聚乙二醇 化的脂質體多柔比星具有相似的效力譜和改善的安全性譜，伴以明顯降低的心臟毒性發生 率和明顯更少的心臟事件，以及降低的骨髓抑制、粘膜炎、惡心、嘔吐和脫發的發生率。另一方面，聚乙二醇化的脂質體多柔比星與掌跖紅斑(PPE =手足綜合征)相關， 其中所述掌跖紅斑是用游離多柔比星時很少或從未見到的一種毒性。除在乳腺癌中使用外，脂質體多柔比星在治療卡波奇氏肉瘤(6，7)和復發性卵巢 癌(8)中發揮充分確立的作用，并且還成功地用于患有不同類型的淋巴瘤、多發性骨髓瘤、
6軟組織肉瘤、神經膠質瘤、黑素瘤、間皮瘤、泌尿道移行細胞癌和用在子宮內膜癌、胰腺癌、 胃癌、小細胞及非小細胞肺癌、肝細胞癌、子宮內膜癌、腎細胞癌、頭頸癌和膽管癌的患者中 (在(9)中綜述)。對于臨床前研究，通過使用與脂質體膜共價綴合的嵌合MAb西妥昔單抗(C225， 西妥昔單抗，愛必妥，ImClone Systems公司，紐約，美國；Merck KGaA，達姆施塔特，德國) Fab’片段構建了抗EGFR免疫脂質體。設計該方法旨在通過導向受體和內化性藥物載體提 供最大藥物遞送至癌細胞，其中所述的導向受體和內化性藥物載體穩定、無免疫原性、長壽 命、具有延長的血液及組織駐留時間并且能夠遞送大的有效荷載的多樣類型藥物。在優化 MAb片段的同時，也優化了綴合方法學。開發了一種新的膠束摻入方法，包括2步驟綴合MAb 片段至預制的載藥脂質體(10)。首先，將MAb片段(Fab’ )共價地綴合至溶液中的衍生化 PEG-磷脂酰乙醇胺(MAL-PEG-DSPE)接頭，產生易于自發形成膠束的免疫綴合物。接下來， 所述綴合物通過受控加熱法摻入預載藥物的脂質體，從而產生與PEG鏈的末端共價綴合并 與脂質體錨接的MAb片段。當C225的Fab，僅以中等密度(每個脂質體30個Fab，)在免疫脂質體上存在時， 這些免疫脂質體在一系列過量表達EGFR或EGFRvIII的癌細胞系中顯示極有效的結合和內 化，如熒光顯微鏡法和FACS所示(11)。這些癌細胞系包括表皮樣癌細胞(A431)、乳腺癌細 胞(MDA-MB-468)、惡性神經膠質瘤細胞(U87)和EGFRvIII穩定轉化體NR6-M細胞。相反， 無關的免疫脂質體(抗-HER2)和對照脂質體(無MAb)不結合或聚積于A431、MDA-MB468、 U87或NR6-M細胞中。另外，抗EGFR免疫脂質體不可檢測地結合至非過量表達EGFR的細胞 (乳腺癌細胞系SKBR-3或MCF-7)或聚積于其中。在體外條件下，使用載有pH敏感探針(HPTS)的抗EGFR免疫脂質體進行免疫脂質 體攝取、內化和胞內藥物遞送的定量研究。這種方法允許定量分析在中性PH(表面結合)與 酸性pH(內吞相關)下的免疫脂質體攝取的動力學(12)。在MDA-MB-468細胞中，抗EGFR 免疫脂質體在5分鐘內結合，隨后在15分鐘處開始胞內聚積并升高直至240分鐘。以飽和 濃度存在時，靶向EGFR的免疫脂質體在MDA-MB-468細胞中的總攝取量是1. 70fmol磷脂/ 細胞，這對應于13，000個脂質體/細胞的攝取量。非靶向的脂質體在MDA-MB-468細胞中 的攝取量是小于300個脂質體/細胞，顯示因定向遞迭所致的大于43倍增加。抗EGFR免 疫脂質體在非過量表達EGFR的MCF-7細胞中的攝取量是450個ILs/細胞，顯示過量表達 EGFR的MDA-MB468細胞中28倍更多的積累。在體內，抗EGFR免疫脂質體(ILs)在單次靜脈內給藥后顯示作為穩定構建體在 正常成年大鼠中的極長循環，同時具有與那些立體穩定的(“隱形(stealth)”)的脂質 體不可區分的藥物代謝動力學(13)。另外，重復施用顯示清除率不升高，這進一步證實免 疫脂質體保留作為隱形脂質體特征的長循環作用和非免疫原性。在一系列腫瘤異種移植 物模型(MDA-MB-468、U-87和U-87vIII)中評價了載有多種抗癌藥的抗EGFR免疫脂質體 (C225-ILs-dox)的潛在治療效力(13)。仍未顯示抗EGFR免疫脂質體系統(ILs)用于臨床環境中治療人的可行性。在這 方面的一個主要顧慮涉及抗EGFR免疫脂質體(例如以脂質體方式封裝的多柔比星(Doxil， Caelyx))的已知毒性。這里，最明顯的毒性副作用是掌跖紅斑(PPE =手足綜合征)，其中 可以在作為例行腫瘤學實踐中標準的每隔4周短時輸注形式的40-50mg/m2劑量觀察到所述的掌跖紅斑。類似地，抗EGFR抗體如西妥昔單抗的重大副作用是皮膚毒性，通常表現為 面部和軀干的痤瘡樣疹。此種副作用可能是表皮以相對高的水平表達EGFR這一事實的后 果。因而，臨床環境中使用抗EGFR免疫脂質體的一個主要安全顧慮是借助抗EGFR抗體例 如西妥昔單抗引導所述脂質體至過量表達EGFR的細胞也可能增加該藥物的皮膚毒性。另外，仍然未顯示并且極其不可預測的是封裝化療藥物例如多柔比星、長春瑞濱 (vinorelbine)或氨甲蝶呤(methotrexate)的抗EGFR免疫脂質體(ILS)是否可以治療性 地用于已經接受、但不應答一種或多種標準療法(一線、二線、三線等)患者群體即非應答 者群體中。多線治療中所觀察到應答缺乏的可能原因之一是癌細胞多藥抗性的發展。抗藥性仍然是癌癥治療中的主要挑戰。內因性或獲得性抗藥性在大部分癌癥中頻 繁出現并且經常同時涉及對多種藥物抵抗(多藥抗性，MDR)。已經對抗藥性描述了許多機 制。這些機制包括藥物輸出泵(如P-糖蛋白(PGP)和多藥抗性蛋白(MRP))過量表達; 藥物攝取減少，如葉酸載體改變；藥物失活，如借助谷胱甘肽介導的還原作用；靶酶過量表 達，如胸苷酸合酶上調；藥物靶(如拓撲異構酶II)的改變；DNA修復能力提高；發生凋亡的 能力降低和其他機制(在(30)和(31)中綜述)。在這些機制當中，PGP在多藥抗性中的作 用已經成為最深入研究的對象之一。由MDR1基因編碼的PGP是ABC(ATP結合盒)轉運蛋 白家族的成員并且頻繁地在MDR表型中過量表達。能夠介導藥物排出的其他膜結合型轉運 蛋白包括多藥抗性蛋白MRP和其他相關蛋白((32)、(33)和(34))。這些蛋白質主動地轉運 多種雜環底物(包括細胞毒藥物如蒽環類藥、長春堿類、米托蒽醌、紫杉醇和其他藥物)離 開細胞或進入其他細胞區室((32)、(33)和(34))。這些抗藥性機制的特異性抑制劑已經廣泛地用作恢復藥物敏感性的手段(綜述， 見(35))。盡管仍在積極研究中，但抗藥性特異抑制劑仍沒有獲得臨床用途的注冊。治療成 功的進展受阻于此類事項，如特異性不充分、可預測的和不可預見的毒性、不確定已知抗藥 性機制的真實普遍性和貢獻、缺乏鑒定依賴特定機制的腫瘤的預測性測定法和抗藥性機制 的多樣性和冗余性((35))。因而需要提供備選策略以安全地治療性治療已經顯現癌癥的患者、特別地屬于非 應答者群體的患者，即不應答或不再應答常規癌癥化學療法的患者。特別地，需要提供備選 策略以克服癌療法中的內在性或獲得性抗藥性。能夠在本發明的范圍內通過提供基于藥物遞送系統的治療方法滿足這種提供備 選策略的需要，其中所述的藥物遞送系統包含靶向EGFR的免疫脂質體，所述免疫脂質體在 過量表達EGFR的細胞的細胞漿中顯示廣泛內化(多達30，000個ILs/細胞)，但在非過量 表達的細胞中不顯示內化，并且當封裝幾種化療藥物(多柔比星、長春瑞濱和氨甲蝶呤)之 任一種藥物時還顯示突出的細胞毒性。現在已經在本發明的范圍內驚訝地發現在臨床設立的施用抗EGFR免疫脂質體、 特別地包含幾種化療藥物例如多柔比星、長春瑞濱或氨甲蝶呤之任一種藥物的免疫脂質體 至罹患癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表的癌癥并且 未經歷過化學療法的人患者，并且特別地施用至已經接受過，但不應答或停止應答至少一 種標準療法(一線)、特別地至少二種標準療法(二線)、特別地至少三種標準療法(三線)， 不過尤其地不應答或停止應答全部可用的標準療法(多線)的患者，不僅引起該疾病穩定化、特別地引起部分應答、但是尤其地引起完全應答，而且顯示沒有或基本上沒有副作用、 特別地顯示沒有或基本上沒有掌跖紅斑(PPE =手足綜合征)和/或皮膚毒性。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的包含識別并與實體 瘤表面上的EGF受體抗原結合的抗體或抗體片段的免疫脂質體，用于一線至多線治療臨床 設立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表 的癌癥。在一個實施方案中，本發明涉及根據本發明和如本文中先前所述的包含識別并與 實體瘤表面上的EGF受體抗原結合的抗體或抗體片段的免疫脂質體，其用于二線治療臨床 設立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表
的癌癥。在一個實施方案中，本發明涉及根據本發明和如本文中先前所述的包含識別并與 實體瘤表面上的EGF受體抗原結合的抗體或抗體片段的免疫脂質體，其用于三線治療臨床 設立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表
的癌癥。在一個實施方案中，本發明涉及根據本發明和如本文中先前所述的包含識別并與 實體瘤表面上的EGF受體抗原結合的抗體或抗體片段的免疫脂質體，其用于四線治療臨床 設立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表
的癌癥。在一個實施方案中，本發明涉及根據本發明和如本文中先前所述的包含識別并與 實體瘤表面上的EGF受體抗原結合的抗體或抗體片段的免疫脂質體，其用于五線治療臨床 設立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表
的癌癥。在一個實施方案中，本發明涉及根據本發明和如本文中先前所述的包含識別并與 實體瘤表面上的EGF受體抗原結合的抗體或抗體片段的免疫脂質體，其用于六線治療臨床 設立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表
的癌癥。在一個實施方案中，本發明涉及根據本發明和如本文中先前所述的包含識別并與 實體瘤表面上的EGF受體抗原結合的抗體或抗體片段的免疫脂質體，其用于七線和更高線 治療臨床設立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫 瘤所代表的癌癥。在一個實施方案中，本發明涉及根據本發明和如本文中先前所述的包含識別并與 實體瘤表面上的EGF受體抗原結合的抗體或抗體片段的免疫脂質體，其用于治療、特別地 用于多線治療罹患癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表 的癌癥并且未經歷過化學療法的人患者、特別地是已經接受過、但不應答至少一種標準療 法、特別地至少二種標準療法、特別地至少三種標準療法，但是尤其地不應答所有可使用的 標準療法的患者。在一個實施方案中，本發明涉及根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體， 其用于治療、特別地用于多線治療具有如本文中先前所述的局部推進的或轉移性腫瘤的人 患者，其中所述的腫瘤仍然正在進展。
在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體用于治 療、特別地用于多線治療患有癌癥、特別地由如本文中先前所述的局部推進的或轉移性腫 瘤所代表癌癥的人患者，其中脂質體封裝了抗癌化合物，特別地抑制細胞性化合物，特別地 封裝選自以下的化合物道諾霉素、伊達比星、米托蒽醌、絲裂霉素、順鉬和其他鉬類似物、 長春新堿、表柔比星、阿克拉霉素、氨甲蝶呤、依托泊苷、多柔比星、表柔比星、長春瑞濱、阿 糖胞苷、氟尿嘧啶和其他氟化嘧啶、嘌呤或核苷、尤其地吉西他濱、博來霉素、絲裂霉素、普 卡霉素、放線菌素D、環磷酰胺和其衍生物、噻替派、卡芥氮、紫杉醇、多西他賽和其他紫杉烷 衍生物和分離物、喜樹堿、多肽、核酸、具有硫代磷酸酯核苷酸間鍵的核酸和具有聚酰胺核 苷酸間鍵的核酸，但是尤其地封裝選自多柔比星、表柔比星和長春瑞濱的化合物，特別地封 裝多柔比星。在一個實施方案中，本發明涉及根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體， 其用于治療、特別地用于多線治療患有癌癥、特別地由如本文中先前所述的局部推進的或 轉移性腫瘤所代表癌癥的人患者，其中該患者的非應答性由多藥抗性機制引起。在一個實施方案中，本發明涉及根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體， 其用于治療、特別地用于多線治療人患者，所述的人患者患有癌癥、特別地由如本文中先前 所述的局部推進的或轉移性腫瘤所代表的癌癥并且已經顯現多藥抗性。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的用于治療、特別地 用于多線治療人患者的免疫脂質體，所述人患者屬于患有癌癥、特別地由如本文中先前所 述的局部推進的或轉移性腫瘤所代表癌癥的非應答者群體，特別地屬于已經顯現多藥抗性 的患者，其中所述免疫脂質體具有標準MTT測定法中所確定的在1. Oy g/ml與5. Oy g/ml 之間、特別地0. 8u g/ml與3. 5 ii g/ml之間、特別地0. 7 u g/ml與2. 5 y g/ml之間、特別地
0.6u g/ml 與 2. 0 ii g/ml 之間、特別地 0. 5 u g/ml 與 1. 5 y g/ml 之間、特別地 0. 4 u g/ml 與
1.Ou g/ml 之間、特別地 0. 3 ii g/ml 與 0. 5 y g/ml 之間、特別地 0. 2 y g/ml 與 0. 4 y g/ml 之 間的IC5(I。該免疫脂質體特別地是包含多柔比星的免疫脂質體。在本發明的一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的用于治 療、特別地用于多線治療人患者的免疫脂質體，所述人患者屬于患有癌癥、特別地由如本文 中先前所述的局部推進的或轉移性腫瘤所代表癌癥的非應答者群體，特別地屬于已經顯現 多藥抗性的患者，其中所述免疫脂質體具有比游離抗癌藥的細胞毒性在3倍至5倍之間、在 5倍至20倍之間、在10倍至30倍之間、在15倍至40倍之間、在20倍至50倍之間、在25 倍至60倍之間、在30倍至70倍之間、在35倍至80倍之間、在40倍至90倍之間、在50倍 至100倍之間更高、在80倍至150倍之間、在120倍至250倍之間更高的細胞毒性。在本發明的一個實施方案中，提供了用于治療、特別地用于多線治療人患者的免 疫脂質體，所述人患者患有癌癥、特別地由如本文中先前所述的局部推進的或轉移性腫瘤、 特別地EGFR陽性腫瘤所代表的癌癥，其中所述的治療引起疾病穩定化，特別地引起部分應 答，但是尤其地特別引起完全應答。在本發明的一個實施方案中，抗EGFR免疫脂質體以10mg/m2和40mg/m2身體表面、 特別地30mg/m2與50mg/m2之間、特別地40mg/m2與60mg/m2之間、特別地50mg/m2與70mg/ m2之間、特別地60mg/m2與80mg/m2之間、特別地70mg/m2與90mg/m2之間、特別地75mg/m2 與100mg/m2的劑量水平給予，作為短時輸注每隔2至6周，特別地每隔3至5周，但是特別
10地每隔4周給予。短時輸注意為至少10分鐘、特別地至少20分鐘、特別地至少30分鐘、特 別地至少40分鐘、特別地至少60分鐘、特別地至少90分鐘、特別地至少120分鐘、特別地 至少240分鐘的輸注時間。在一個實施方案中，本發明涉及如本文中先前所述的用于治療、特別地用于多線 治療人患者的免疫脂質體，所述人患者罹患癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別 地EGFR陽性腫瘤所代表的癌癥，其中所述的治療顯示沒有或基本上沒有毒性副作用，特別 地顯示沒有或基本上沒有掌跖紅斑(PPE =手足綜合征)和/或皮膚毒性。在一個實施方案中，本發明涉及如本文中先前所述的用于治療、特別地用于多線 治療人患者的免疫脂質體，特別地包含多柔比星化合物的免疫脂質體，所述人患者罹患癌 癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表的癌癥，其中所述的 治療在5mg/m2與20mg/m2身體表面之間、特別地10mg/m2與40mg/m2之間、特別地30mg/m2 與50mg/m2之間、特別地40mg/m2與60mg/m2之間、特別地50mg/m2與70mg/m2之間、特別地 60mg/m2與80mg/m2之間、特別地70mg/m2與90mg/m2之間、特別地75mg/m2與100mg/m2之間 的免疫脂質體濃度上顯示沒有或基本上沒有毒性副作用，特別地顯示沒有或基本上沒有掌 跖紅斑(PPE =手足綜合征)和/或皮膚毒性。在本發明的一個實施方案中，提供了用于治療、特別地用于多線治療人患者的免 疫脂質體，所述人患者患有癌癥、特別地由如本文中先前所述的局部推進的或轉移性腫瘤 所代表的癌癥，其中抗體或抗體片段共價地結合至脂質體膜，特別地共價地綴合至與脂質 體錨接的接頭分子的末端。接頭分子特別地是親水聚合物，但尤其地是聚乙二醇。在本發明的一個實施方案中，根據本發明和如本文中所述的免疫脂質體包含針對 EGF受體的結合配體的胞外結構域的單克隆抗體、特別地嵌合抗體例如嵌合Mb C225或人 源化抗體例如人源化MAb EMD72000，其中提供所述的免疫脂質體用于治療、特別地用于多 線治療患有癌癥、特別地由如本文中先前所述的局部推進的或轉移性腫瘤所代表癌癥的人隱患o在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合物，其中待治療的癌癥是乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮內膜癌、 胃癌、膀胱癌、子宮肉瘤、多發性骨髓瘤和軟組織及骨肉瘤。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的用于治療，特別地 用于多線治療臨床設立的人患者的免疫脂質體，其中所述患者罹患選自卡波奇氏肉瘤、復 發性卵巢癌、軟組織肉瘤、神經膠質瘤、黑素瘤、間皮瘤、泌尿道移行細胞癌、子宮內膜癌、胰 腺癌、小細胞及非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、食管癌、結腸直腸癌、肛門癌、陰道癌、 外陰癌、前列腺癌、皮膚的基底細胞癌、頭頸癌和膽管癌的癌癥，所述癌癥特別地由局部推 進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤代表。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合物用于治療，特別地用于多線治療臨床設立的的人患者，其中 所述的患者罹患選自前列腺癌、胰腺癌、腎癌、食管癌、結腸癌和直腸癌的癌癥，所述癌癥特 別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤代表。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合用于多線治療、特別地二線、特別地三線、特別地四線治療臨床設立的的人患者，其中所述的患者罹患前列腺癌，具有在激素和/或多西他賽和/或米托蒽 醌治療下已經進展的腫瘤。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線治 療臨床設立的的人患者，其中所述的患者罹患胰腺癌或膽囊癌，具有在吉西他濱和/或卡 培他濱和/或奧沙利鉬治療下已經進展的腫瘤。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設立的的人患者，其中所述的患者罹患腎癌，具有在干擾素和/或卡 培他濱和/或舒尼替尼和/或索拉菲尼治療下已經進展的腫瘤。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設立的的人患者，其中所述的患者罹患膀胱上皮癌，具有在順鉬或卡 鉬和/或吉西他濱和/或多柔比星和/或氨甲蝶呤和/或長春新堿治療下已經進展的腫瘤。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設立的的人患者，其中所述的患者罹患非小細胞肺癌，具有在順鉬或 卡鉬和/或吉西他濱和/或長春瑞濱和/或培美曲塞和/或多西他賽和/或吉非替尼治療 下已經進展的腫瘤。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設立的的人患者，其中所述的患者罹患小細胞肺癌，具有在順鉬或卡 鉬和/或依托泊苷和/或伊立替康和/或多柔比星和/或長春新堿和/或環磷酰胺和/或 托泊替康治療下已經進展的腫瘤。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設立的的人患者，其中所述的患者罹患間皮瘤，具有在順鉬或卡鉬和/ 或吉西他濱和/或培美曲塞治療下已經進展的腫瘤。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設立的的人患者，其中所述的患者罹患乳腺癌，具有在順鉬或卡鉬和/ 或多柔比星和/或長春新堿和/或環磷酰胺和/或紫杉醇和/或多西他賽和/或吉西他濱 和/或長春瑞濱和/或卡培他濱和/或絲裂霉素和/或氨甲蝶呤和/或米托蒽醌和/或貝 伐單抗和/或曲妥珠單抗下已經進展的腫瘤。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線治 療臨床設立的的人患者，其中所述的患者罹患食管癌，具有在順鉬和/或5-FU和/或多西 他賽和/或西妥昔單抗治療下已經進展的腫瘤。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含所述免疫脂質體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設立的的人患者，其中所述的患者罹患在替莫唑銨和/或貝伐單抗和 /或伊立替康和/或長春新堿和/或丙卡巴胼和/或CCNU和/或BCNU治療下已經進展的 腦腫瘤。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線治療臨床設立 的的人患者，其中所述的患者罹患肝細胞癌，具有在舒尼替尼和/或索拉非尼治療下已經 進展的腫瘤。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中先前所述的免疫脂質體或包含 所述免疫脂質體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線、特別地六線、特別地七線治療臨床設立的的人患者，其中所述的患者罹患結腸 癌和/或直腸癌，具有在西妥昔單抗和/或貝伐單抗和/或奧沙利鉬和/或伊立替康和/ 或卡培他濱和/或5-FU治療下已經進展的腫瘤。在本發明的一個實施方案中，提供了用于治療、特別地用于多線治療患有癌癥、特 別地由如本文中先前所述的局部推進的或轉移性腫瘤所代表癌癥的人患者的免疫脂質體， 其中實現在5%與10%之間、特別地7%與15%之間、特別地9%與20%之間、特別地12% 與25%之間、特別地18%與30%之間、特別地22%與35%之間、特別地28%與40%之間、 特別地32 %與45 %之間、特別地38 %與50 %之間、特別地42 %與55%之間、特別地48 % 與60%之間、特別地52%與60%之間、特別地52%與70%之間、特別地52%與75%之間、 特別地58 %與80 %之間、特別地62 %與85 %之間、特別地68 %與90 %之間、特別地72 %與 95%之間并且直至100%的應答率。在一個實施方案中，本發明涉及包含根據本發明和如本文中先前公開的免疫脂質 體和可藥用載體或賦形劑或稀釋劑的藥物組合物，其用于一線至多線治療、特別地用于二 線、特別地三線、特別地四線、特別地五線、特別地六線、特別地七線和更高線治療臨床設立 的人患者、特別地屬于非應答者群體的人患者、特別地屬于非應答者群體的已經顯現多藥 抗性的人患者中癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表的 癌癥。在一個實施方案中，本發明涉及一線至多線治療、特別地二線、特別地三線、特別 地四線、特別地五線、特別地六線、特別地七線和更高線治療臨床設立的人患者、特別地屬 于非應答者群體的人患者、特別地屬于非應答者群體的已經顯現多藥抗性的人患者中癌 癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表癌癥的方法，所述方 法為通過施用根據本發明和如本文中先前公開的免疫脂質體或藥物組合物至所述的人患 者o在一個實施方案中，本發明涉及用根據本發明和如本文中先前公開的免疫脂質體 或藥物組合物治療患有癌癥、特別地患有由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫 瘤所代表的癌癥并且未經歷過化學療法的人患者、特別地治療已經接受過、但不應答至少 一種標準療法、特別地至少二種標準療法、特別地至少三種標準療法，但是尤其地不應答所 有可使用的標準療法的患者的方法。特別地，本發明涉及治療已經顯現多藥抗性人患者的方法。
在一個實施方案中，本發明涉及使用根據本發明和如本文中先前公開的免疫脂質 體或藥物組合物以制備藥物的方法，所述的藥物用于一線至多線治療、特別地二線、特別地 三線、特別地四線、特別地五線、特別地六線、特別地七線和更高線治療臨床設立的人患者 中、特別地屬于非應答者群體的人患者中、特別地屬于非應答者群體的已經顯現多藥抗性 的人患者中癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表的癌 癥。在一個實施方案中，本發明涉及使用根據本發明和如本文中先前公開的免疫脂質 體或藥物組合物以制備藥物的方法，其中所述藥物用以治療患有癌癥、特別地由局部推進 的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表的癌癥并且未經歷過化學療法的人患者、特 別地治療已經接受過、但不應答至少一種標準療法、特別地至少二種標準療法、特別地至少 三種標準療法，但是特別地不應答所有可使用的標準療法的患者。特別地，本發明涉及使用根據本發明和如本文中先前公開的免疫脂質體或藥物組 合物以制備藥物的方法，其中所述藥物用以治療已經顯現多藥抗性的人患者。在一個實施方案中，提供了根據本發明和如本文中所述的包含識別并與實體瘤表 面上的EGF受體抗原結合的抗體或抗體片段并且還在脂質體中封裝抗腫瘤化合物的免疫 脂質體或包含這種免疫脂質體的藥物組合物，用于治療已經顯現多藥抗性的患者或患者群 體中的這種多藥抗性。在一個實施方案中，本發明涉及包含根據本發明和如本文中所述的免疫脂質體和 可藥用載體或賦形劑或稀釋劑的用于治療患者或患者群體中癌癥、特別地用于治療乳腺癌 或結腸直腸癌或這兩種癌癥的藥物組合物，其中所述的患者或患者群體已經顯現多藥抗 性、特別地顯現針對用一種或多種抗癌藥治療的多藥抗性，其中所述抗癌藥選自多西他賽、 米托蒽醌、吉西他濱、卡培他濱、奧沙利鉬、干擾素、舒尼替尼、索拉菲尼、順鉬或卡鉬、多柔 比星、氨甲蝶呤、長春新堿、長春瑞濱、培美曲塞、吉非替尼、依托泊苷、伊立替康、環磷酰胺、 托泊替康、環磷酰胺、紫杉醇、絲裂霉素、貝伐單抗、曲妥珠單抗、5-FU、西妥昔單抗、替莫唑 胺、貝伐單抗、丙卡巴胼、CCNU和BCNU。在一個實施方案中，所述的多藥抗性包含選自以下藥物中的一種或多種抗癌藥 物多西他賽、米托蒽醌、吉西他濱、卡培他濱、奧沙利鉬、舒尼替尼、索拉菲尼、順鉬、5-FU、 西妥昔單抗、貝伐單抗、奧沙利鉬和伊立替康。在一個實施方案中，提供了包含根據本發明和如本文中所述的免疫脂質體和可藥 用載體或賦形劑或稀釋劑的藥物組合物用于治療、特別地用于多線治療癌癥、特別地用于 治療乳腺癌或結腸直腸癌或這兩種癌癥，其中所述的免疫脂質體封裝了多柔比星并且還包 含抗體MAb C225或抗體EMD72000或其片段，其仍顯示所述抗體之一者或兩者的特異結合 特性。在一個實施方案中，提供了包含根據本發明和如本文中所述的免疫脂質體和可藥 用載體或賦形劑或稀釋劑的藥物組合物用于治療患者或患者群體中癌癥、特別地用于治療 乳腺癌或結腸直腸癌或這兩種癌癥，其中所述的患者或患者群體已經顯現多藥抗性、特別 地顯現針對用一種或多種抗癌藥治療的多藥抗性，其中所述抗癌藥選自多西他賽、米托蒽 醌、吉西他濱、卡培他濱、奧沙利鉬、干擾素、舒尼替尼、索拉菲尼、順鉬或卡鉬、多柔比星、氨 甲蝶呤、長春新堿、長春瑞濱、培美曲塞、吉非替尼、依托泊苷、伊立替康、環磷酰胺、托泊替
14康、環磷酰胺、紫杉醇、絲裂霉素、貝伐單抗、曲妥珠單抗、5-FU、西妥昔單抗、替莫唑胺、貝伐 單抗、丙卡巴胼、CCNU和BCNU，其中所述的免疫脂質體封裝了多柔比星并且還包含抗體MAb C225或抗體EMD72000或其片段，其仍顯示所述抗體之一者或兩者的特異結合特性。定義術語“包含”通常以包括的意思使用，也就是說允許一種或多種特征或組分存在。如本說明書和權利要求書中所用，單數形式“一個”、“一種”和“該”包括復數稱謂， 除非上下文另外清楚地說明。例如，術語“一位患者”包括多位患者。術語“一種免疫脂質 體”包括多種免疫脂質體，包括其混合物。術語“EGF受體”或“EGFR”、“ErbBl”、“HERl”是本領域認可的術語并且在本文 中同義地使用并理解為指作為受體酪氨酸激酶(RTK) I類家族成員的受體蛋白，其包括 EGFR(ErbBUHERl)、HER2(ErbB2)、HER3(ErbB3)和 HER4(ErbB4)。作為靶抗原，EGFR 是在多 種人實體瘤中過量表達的輕易可及的細胞表面受體。在這個定義中也包括EGFR的突變體， 特別地III類突變體，例如EGFRvIII，其在EOT內部的第2-7外顯子中含有缺失，導致符合 可讀框地缺失編碼序列的801bp和在融合接頭處生成新的甘氨酸殘基。如本文中所用的術語“一線治療”或“一線療法”是本領域認可的術語并理解為指 首次化學療法治療癌癥，它可以與手術和/或放射療法聯合，也稱初級治療或初級療法。如本文中所用的術語“二線治療”或“二線療法”是本領域認可的術語并理解為指 當初始或初級治療(一線或初級療法)不奏效或停止奏效時給予的化學療法治療。如本文中所用的術語“三線、四線、五線等治療”或三線、四線、五線等療法”是本領 域認可的術語并理解為指當初始治療和任意的后續治療(一線、二線、三線等療法)不奏效 或停止奏效時給予的化學療法治療。術語“多線”治療是通用術語并在本文中理解為指在不奏效或已經停止奏效的初 始或初級治療(一線或初級療法)之后的任意的更高線治療。如本文中所用的術語“基本上無副作用”或“基本上無不利副作用”是本領域認可 的術語并理解為指的輕微至中等藥物相關作用或毒性，它不是劑量限制的。如本文中所用的術語“EGFR陽性腫瘤”理解為指含有例如通過免疫組織化學試 驗(例如 FDA 批準的 EGFR pharmaDx 試劑盒(“DAK0” 試驗；DAKO Notrth America, Inc)、 Zymed EGFR試劑盒或Ventana EGFR 3C6抗體)檢測到的至少1 %、特別地至少2%、3%、 4%或5%、特別地至少10% EGFR陽性細胞的腫瘤，特別地，所述的EGFR陽性細胞過量表達 EGFR抗原和/或EGFR的突變體，特別地III類突變體，例如EGFRvIII。“藥學有效量”是指施用至人或動物生物時誘導可檢測的藥理學和/或生理學作用 的化學物質或化合物。相應的藥學有效量可以取決于待治療的特定患者、待治療的疾病和施用的方法。 另外，藥學有效量取決于所用的具體蛋白質，特別地該蛋白質是否額外地含有或不含有如 所述的藥物。治療通常包括藥物組合物的多次施用，通常間隔幾小時、幾日或幾周。本發明 免疫脂質體的劑量單位的藥學有效量通常在5mg/m2與100mg/m2待治療患者的身體表面之 間的范圍內。“可藥用”指生理上可耐受并且在施用至人時一般不產生變態反應或類似異常反 應如胃不適、眩暈等的分子實體和組合物。
如本文中所用的術語“抗體”或“諸抗體”是本領域認可的術語并且理解為指與已 知抗原結合的分子或分子活性片段，特別地術語“抗體”或“諸抗體”指免疫球蛋白分子并 指免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特異地結合抗原的結合位點的分子。本發 明的免疫球蛋白可以是任意型(IgG、IgM、IgD、IgE、IgA和IgY)或類(IgGl、IgG2、IgG3、 IgG4、IgAl和IgA2)或亞類的免疫球蛋白分子。“抗體”在本發明的范圍內意圖包括單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗 體、雙特異性抗體、猿猴源化抗體、人抗體和人源化抗體以及其活性片段。術語“片段”指抗 體或抗體鏈的一部分或區段，其比完整或完全抗體或抗體鏈包含更少的氨基酸殘基。與已 知抗原結合的分子活性片段的例子包括分開的輕鏈和重鏈、Fab、Fab/C、FV、Fab，和F(ab，)2 片段，包括Fab免疫球蛋白表達文庫的產物和上文所提及任意抗體和片段的表位結合片 段。片段可以通過化學處理或酶處理完整或完全抗體或抗體鏈獲得。片段也可以通過重組 手段獲得。示例性片段包括？油、？油，、？(油，)2、？油(3和/或？￥片段。術語“抗原結合片 段”指免疫球蛋白或抗體的多肽片段，其結合抗原或與完整抗體競爭(即與衍生這些片段的 完整抗體競爭)抗原結合(即特異結合)。抗體結合片段通過重組DNA技術產生或通過酶切割或化學切割完整免疫球蛋白 產生。結合片段包括Fab、Fab，、F(ab，)2、Fabc、Fv、單鏈和單鏈抗體。這些活性片段可以借助許多技術從給定抗體衍生。例如，純化的單克隆抗體可以 用酶如胃蛋白酶切割，并經過HPLC凝膠過濾處理。隨后可以通過膜過濾法和其他方法收集 并濃縮含有Fab片段的適宜級分。關于進一步描述用于分離抗體活性片段的一般技術，見 例如(14) ； (15)。“嵌合抗體”是這樣的抗體，其中該抗體的一個或多個區域來自一個動物物種并 且該抗體的一個或多個區域來自一個不同的動物物種。優選的嵌合抗體是包括來自靈長 動物免疫球蛋白的區域的嵌合抗體。用于人臨床用途的嵌合抗體一般理解為具有來自非 人動物例如嚙齒動物的可變區，同時恒定區來自人，相反，人源化抗體使用來自非人抗體 的CDR，同時大部分或全部可變構架區來自人免疫球蛋白并且全部恒定區來自人免疫球蛋 白。人嵌合抗體一般理解為具有來自嚙齒動物的可變區。常見的人嵌合抗體具有人重鏈 恒定區和人輕鏈恒定區，同時重鏈和輕鏈的可變區均來自嚙齒動物抗體。嵌合抗體可以包 括相對于人恒定區天然氨基酸序列和天然嚙齒動物可變區序列的一些變化。嵌合和人源化 抗體可以通過本領域熟知的方法制備，所述方法包括CDR移植方法(見，例如美國專利號 5，843，708 ；6, 180，370 ；5, 693, 762 ；5, 585, 089 ；5, 530，101)、鏈改組策略(見例如美國專 利號5，565，332) (16)、分子模建策略(美國專利號5，639，641)等。“人源化抗體”指摻入至少一種人源化免疫球蛋白或抗體鏈或其片段、特別地至少 一條人源化輕或重鏈的一類工程化抗體。所述人源化免疫球蛋白或抗體鏈或其片段，但是 特別地至少一條人源化輕或重鏈衍生自非人來源，特別地衍生自非人抗體，一般是嚙齒動 物起源。一般以至少一個CDR區的形式提供對人源化抗體的所述非人貢獻，所述的CDR區 分散在衍生自一種(或多種)人免疫球蛋白的構架區當中。此外，可以改變構架支持殘基 以保留結合親和性。人源化抗體可以進一步包含恒定區(例如在輕鏈的情況下，至少一個恒定區或其 部分，并且在重鏈的情況下，優選3個恒定區)。
獲得“人源化抗體”的方法是本領域技術人員熟知的。“人源化抗體”也可以通過能夠在大動物例如兔中產生親和力成熟的人樣多克隆 抗體的新基因工禾呈方法獲得(http://www. rctech. com/bioventures/-therapeutic. php)。術語“免疫脂質體劑量”或“免疫脂質體濃度”通常指截留于脂質體中的抗癌藥的 濃度。“脂質體”指由脂質、特別地形成小泡的脂質組成的球狀小泡，其能夠在水中自發 排列成脂質雙層結構，其中該脂質的疏水部分與雙層膜的內部疏水區接觸并且其首基部分 指向該膜的外部極性表面。形成小泡的脂質一般具有兩條烴鏈，特別地酰基鏈，和極性或非 極性的首基。形成小泡的脂質由天然存在或合成來源的脂質(包括磷脂如磷脂酰膽堿、磷 脂酰乙醇胺、磷脂酸、磷脂酰肌醇和鞘磷脂)組成，其中所述兩條烴鏈一般長約14-22個碳 原子并且具有可變的不飽和度。其酰基鏈具有可變飽和度的上述脂質和磷脂可以商業地獲 得或根據公開的方法制備。用于本發明組合物中的其它合適脂質包括糖脂和固醇，如膽固 醇及其也可以用于脂質體中的各種類似物。也可以在脂質體中適宜地使用一般具有親脂部分如固醇、酰基或二酰基鏈并且其 中脂質具有總體凈正電荷的陽離子脂質。該脂質的首基一般攜帶正電荷。示例性陽離子 脂質包括1，2_ 二油基氧基-3-(三甲基氨基)丙烷(D0TAP) ；N-[l-(2，3-雙十四烷氧基) 丙基]-N，N-二甲基-N-羥乙基溴化銨(DMRIE) ；N_[l_(2，3-二油基氧基)丙基]_N，N_ 二 甲基-N-羥乙基溴化銨(D0RIE) ；N-[l-(2，3-二油基氧基)丙基]_N，N, N-三甲基氯化 銨(D0TMA) ；3[N-(N，，N，- 二甲基氨基乙烷)氨基甲酰基]膽固醇(DC-Choi)和二甲基雙 十八烷基銨(DDAB)。形成小泡的陽離子脂質也可以是中性脂質如二油酰基磷脂酰乙醇胺 (DOPE)，或兩親性脂質如以陽離子脂質衍生化的磷脂，如聚賴氨酸或其他聚胺脂質。脂質體可以包括用親水聚合物衍生化的形成小泡的脂質以形成脂質體表面上的 親水聚合物鏈表面層。形成小泡的脂質、特別地磷脂，如二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)可 以共價地接合至親水聚合物，其在脂質體周圍形成親水聚合物鏈表面層。適合與形成小泡 的脂質衍生化的親水聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯甲醚、聚甲基噁唑啉、聚乙基噁唑 啉、聚羥丙基噁唑啉、聚羥丙基甲基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、聚羥丙 基甲基丙烯酸酯、聚羥乙基丙烯酸酯、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、聚乙二醇、聚天冬酰胺 (polyaspartamide)和親水肽序列。所述聚合物可以作為均聚物或作為嵌段或隨機共聚物 使用。優選的親水聚合物鏈是聚乙二醇(PEG)，優選地作為具有在200-20，000道爾頓之 間、更優選地在500-10，000道爾頓之間、仍更優選地在750-5000道爾頓之間分子量的PEG 鏈。甲氧基或乙氧基封端的PEG類似物也是以多種聚合物大小例如120-20，000道爾頓商 業可獲得的優選親水聚合物。在脂質體形成時添加至脂質混合物并處于脂質聚合物綴合物形式的額外聚合物 鏈產生從脂質體脂質雙層的內表面和外表面均伸出的聚合物鏈。一般通過包括0. 5-20摩 爾百分數之間的聚合物衍生化脂質與剩余的脂質體形成組分(例如形成小泡的脂質)實現 在脂質體形成時添加脂質聚合物綴合物。已經在例如美國專利號5，395，619、在美國專利號5，013，556、在美國專利號 5，631，018和在W0 98/07409中描述了制備用親水聚合物衍生化的形成小泡的脂質。將理解的是親水聚合物可以穩定偶聯至脂質或借助不穩定鍵偶聯，這允許包衣的脂質體在血流 中循環時或應答于刺激物時脫去聚合物鏈表層。“內化抗體”是與細胞表面上的受體或其他配體結合后被轉運至細胞內例如轉運 至溶酶體或其他細胞器或轉運至細胞漿內的抗體。本發明涉及用于一線至多線治療、特別地至二線、特別地至三線、特別地至四線、 特別地至五線、特別地至六線、特別地至七線和更高線治療臨床設立的人患者中癌癥、特別 地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表癌癥的免疫脂質體，其中所述 的免疫脂質體包含識別并與實體瘤表面上的EGF受體抗原結合的抗體或抗體片段并且包 含至少一種抗腫瘤藥。本發明的免疫脂質體組合物因而也包括特異性識別并與腫瘤衍生細胞的表面上 EGF受體結合的抗體或抗體片段，包括Fab、Fab，、F(ab，)2、Fabc, Fv、單鏈和單鏈抗體。在 另一個實施方案中，該抗體包含與腫瘤衍生細胞的表面上EGF受體特異性結合的至少一個 結合結構域。在另一個實施方案中，該抗體是包含與腫瘤衍生細胞的表面上EGF受體特異 性結合的至少一個結合結構域的單鏈抗體。抗體可以通過本領域已知的共價方法接合至脂質體。為了共價地接合抗體至脂質 體，將含有末端官能化聚乙二醇鏈的衍生化脂質摻入脂質體。在脂質體形成后，末端官能化 基團可以與抗體反應用于偶聯抗體至脂質體。 存在廣泛類型的用于接合所選親水性聚合物至所選脂質并活化聚合物的游離未 接合末端以與所選配體反應的技術，并且特別地已經廣泛研究了親水性聚合物聚乙二醇 (PEG) (18 ；19 ；20 ；21 ；22)。通常，將PEG鏈官能化以含有適于例如與多種類型配體中存在的巰基、氨基和醛 或酮(一般衍生自溫和氧化抗體的糖部分)偶聯的反應基。此類PEG末端反應基的例子包 括馬來酰亞胺(用于與巰基反應)、N-羥琥珀酰亞胺(NHS)或NHS碳酸酯(用于與伯胺反 應)、酰胼或胼(用于與醛或酮反應)、碘乙酰基(偏好地與巰基反應)和二硫代吡啶(硫 羥反應性)。通過這些方法中任意方法制備攜帶所截留物并承載表面結合的靶向性配體的 脂質體，即靶向的治療性脂質體。優選的制備方法是插入法，其中預制的脂質體與靶向性 綴合物孵育以實現靶向性綴合物插入脂質體雙層。在這種方法中，通過多種技術(如(23) 中詳述的那些技術)制備脂質體，并且下文將描述為支持本發明所制備的脂質體的具體例 子。一般而言，脂質體是可以由簡單的脂質膜水化技術形成的多層小泡(MLV)。在這種方 法中，在容器中蒸發溶解于適宜有機溶劑中的上文詳述類型的脂質體形成脂質的混合物以 形成薄膜，該薄膜隨后被含水介質覆蓋。該脂質膜水化以形成MLV，通常大小在約0. 1至10 微米之間。脂質體可以包括用親水聚合物衍生化的形成小泡的脂質以形成脂質體表面上的 親水聚合物鏈表面層。脂質-聚合物綴合物的添加是任選的，因為在插入步驟后，如下文所 述，脂質體將包括脂質_聚合物_靶向性配體。在脂質體形成時添加至脂質混合物并處于 脂質聚合物綴合物形式的額外聚合物鏈產生從脂質體脂質雙層的內表面和外表面均伸出 的聚合物鏈。一般通過包括0. 5-20摩爾百分數之間的聚合物衍生化脂質與剩余的脂質體 形成組分(例如形成小泡的脂質)實現在脂質體形成時添加脂質聚合物綴合物。制備聚合 物衍生化脂質的示例性方法和形成聚合物包衣的脂質體的示例性方法已經在美國專利號 5，013，556,5, 631，018和5，395，619中描述，所述專利通過引用的方式并入本文。將理解的是親水聚合物可以穩定偶聯至脂質或借助不穩定鍵偶聯，這允許包衣的脂質體在血流中循 環時或應答于刺激物時脫去聚合物鏈表層。備選地，抗體-脂質衍生物可以首先形成并隨后摻入脂質體。作為例子，將抗體偶 聯至游離DSPE-PEG分子的馬來酰亞胺基團。抗體偶聯的DSPE-PEG分子隨后用來形成小泡。 在形成脂質體后，摻入靶向性配體以獲得靶向細胞的治療性脂質體。通過孵育預 制的脂質體與如上文所述制備的脂質_聚合物_配體綴合物來摻入靶向性配體。將預制的 脂質體和綴合物在實現綴合物與脂質體締合的條件下孵育，所述的締合可以包括該綴合物 與外部脂質體雙層相互作用或綴合物插入脂質體雙層。更具體地，將這兩種組分在實現綴 合物與脂質體以如下方式締合的條件下孵育，使得靶向性配體從脂質體表面指向外部并因 而可用于與其相關受體相互作用，將理解的是基于幾種變量確定有效實現此種締合或插入 的條件，所述變量包括想要的插入速率(其中較高的孵育溫度可以實現較快的插入速率)、 可以安全加熱配體而不影響其活性的溫度和較小程度地包括脂質及脂質組合物的相變溫 度。還將理解的是插入過程可以因存在溶劑如兩親性溶劑(包括聚乙二醇和乙醇)或去污 劑而變化。當脂質-聚合物-配體綴合物形式的靶向性綴合物與含水溶劑混合時，該綴合物 一般將形成膠束溶液。綴合物的膠束溶液與預制脂質體的懸液混合以將綴合物與脂質體孵 育和締合或將綴合物插入脂質體的脂質雙層。孵育過程有效實現脂質_聚合物_抗體綴合 物與脂質體的外部雙層小葉締合或插入其中以形成免疫脂質體。在制備后，免疫脂質體優選地具有如通過例如動態光散射法在30 [度]或90 [度] 所測量的小于約200nm、優選在約85-120nm之間并更優選在90-110nm之間的尺寸。脂質體組合物一般用以下述摩爾比存在的脂質組分制備約30-75百分數形成小 泡的脂質、25-40百分數膽固醇、0. 5-20百分數聚合物衍生化脂質和0. 0001-10摩爾百分數 用于抗體偶聯的脂質衍生物。一般而言，如下文所述，通過在脂質體形成之前添加治療藥物至形成小泡的脂質 而將該藥物摻入脂質體以截留該藥物于形成的脂質體中。如果該藥物是疏水的，則直接添 加藥物至疏水混合物。如果該藥物是親水的，則可以添加該藥物至含水介質，其中所述含水 介質覆蓋蒸發的脂質的薄膜。在本發明中待使用的脂質體包含抗腫瘤藥。構思了用于本發明中的抗腫瘤化合 物，包括但不限于植物生物堿，如長春新堿、長春堿和依托泊苷；蒽環類藥抗生素包括多柔 比星、表柔比星、柔紅霉素；氟尿嘧啶；抗生素，包括博來霉素、絲裂霉素、光神霉素、放線菌 素D ；拓撲異構酶抑制劑，如喜樹堿及其類似物；和鉬化合物，包括順鉬及其類似物如卡鉬。 適合使用的其他常規化療藥是本領域技術人員已知的并且包括天冬酰胺酶、白消安、苯丁 酸氮芥、環磷酰胺、阿糖胞苷、達卡巴嗪、雌莫司汀磷酸鈉、氟尿苷、氟尿嘧啶(5-FU)、羥基 脲(羥脲)、異環磷酰胺、洛莫司汀(CCNU)、鹽酸氮芥(氮芥)、美法侖、巰基嘌呤、氨甲蝶 呤(MIX)、絲裂霉素、米托坦、米托蒽醌、丙卡巴胼、鏈脲佐菌素、硫鳥嘌呤、噻替派、安吖啶 (m-AMSA)、阿扎胞苷、六甲嘧胺(HMM)、米托胍腙(甲基GAG ；甲基乙二醛雙脒基腙；MGBG)、 司莫司汀(甲基CCNU)、替尼泊苷(VM-26)和硫酸長春地辛。在本發明的一個實施方案中，脂質體具有適于外滲入實體瘤的尺寸。在脂質體也 包含親水聚合物鏈表面層以延長脂質體的血液循環壽命時，這是特別有用的。保持循環持續較長時間段例如大于約2-5小時的脂質體能夠滲入顯示受損泄露性脈管系統或內皮屏 障的腫瘤和感染部位。此類脂質體一般是在約40-200nm之間，更優選是在50-150nm之間， 最優選是在70-120nm之間。將所選藥劑通過標準方法摻入脂質體，所述標準方法包括(i)通過用該藥物的水 溶液水化脂質薄膜被動截留水溶性化合物，(ii)通過水化含有該藥物的脂質薄膜被動截留 親脂化合物，和(iii)加載對抗內部/外部脂質體PH梯度的可離子化藥物。其他方法如反 向蒸發法也是合適的。備選地，藥物可以通過主動運輸機制摻入預制的脂質體。一般而言，在這種情況 下，藥物應答于差異性鉀離子或氫離子濃度而攝入脂質體中(Mayer，1986 ;Mayer 1989)。在脂質體形成后，可以篩分脂質體以獲得具有基本上均一大小范圍的、一般在約 0. 01至0. 5微米之間、更優選在0. 03-0. 40微米之間的脂質體群體。用于REV和MLV的一 種有效篩分方法包括經過一系列聚碳酸酯膜擠出脂質體的含水懸液，所述的聚碳酸酯膜具 有所選的范圍0. 03至0. 2微米、一般0. 05,0. 08,0. 1或0. 2微米的統一孔徑。膜的孔徑大 體對應于經該膜擠出所產生的脂質體的最大尺寸，特別地在經相同的膜擠出該制備物兩次 或多次的情況下。均化方法也用于減小脂質體大小至lOOnm或更小的尺寸(24)。可以通過這些方法中的任意方法制備攜帶所截留物并承載表面結合的靶向性配 體的脂質體，即靶向的治療性脂質體。優選的制備方法是插入法，其中預制的脂質體與靶 向性綴合物孵育以實現靶向性綴合物插入脂質體雙層。在這種方法中，通過多種技術(如 (23)中詳述的那些技術)制備脂質體，并且下文描述為支持本發明所制備的脂質體的具體 例子。一般而言，脂質體是多層小泡(MLV)或單層小泡(ULV)。MLV可以通過簡單的脂質膜水化技術形成。在這種方法中，在容器中蒸發溶解于適 宜有機溶劑中的上文詳述類型的脂質體形成脂質的混合物以形成薄膜，該薄膜隨后由含水 介質覆蓋。該脂質膜水化以形成MLV，通常大小在約0. 1至10微米之間。ULV可以通過反復凍融法形成。在這種方法中，1-2-油酰基-3-sn-甘油磷酸膽堿 和Choi或者DSPC和Choi (摩爾比3 2)與mPE⑶SPE(0. 5-5mol%磷脂)混合。隨后將脂 質體通過具有0. 1、0. 08和0.05 ym定義孔徑的聚碳酸酯濾器擠出幾次。這產生一般具有 直徑70-120nm大小的脂質體。脂質體的尺寸可以由動態光散射法確定。可以使用標準磷 酸鹽測定法測量脂質體濃度。通過上述任意方法能夠獲得的抗EGFR免疫脂質體具有臨床相關性并且可以用于 二線和更高線治療罹患癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤所代表癌癥的人患者中。 構思的用于本發明中的免疫脂質體包含識別并與實體瘤表面上的EGF受體抗原結合的抗 體或抗體片段。特別地，該免疫脂質體包含Fab、Fab，、F(ab，)2、Fabc、Fv片段或者是單鏈 抗體。構思的用于本發明中的免疫脂質體還包含抗腫瘤藥，特別地還包含選自多柔比 星、表柔比星和長春瑞濱中的抗腫瘤藥、特別地還包含多柔比星。本發明的免疫脂質體可以以包含所述免疫脂質體和可藥用載體和/或稀釋劑和/ 或賦形劑的藥物組合物的形式施用至人患者。本發明藥物組合物的配制可以根據本領域技術人員已知的標準方法學完成。本發明的免疫脂質體或包含所述免疫脂質體的藥物組合物可以在固體劑、液體
20劑、氣霧劑的形式以合適的藥學有效劑量施用至受試者。固體組合物的例子包括丸劑、膏 劑和可植入的劑量單元。丸劑可以經口施用。治療性膏劑可以局部施用。可植入的劑量單 元可以局部地施用，例如在腫瘤部位，或可以植入以全身性釋放治療性組合物，例如皮下植 入。液體組合物的例子包括適用于輸注的制劑、適用于肌內、皮下、靜脈內、動脈內注射的制 劑和用于局部和眼內施用的制劑。氣霧制劑的例子包括用于施用至肺部的吸入制劑。本發明的免疫脂質體或包含所述免疫脂質體的藥物組合物可以通過標準施用途 徑施用。一般而言，所述組合物可以通過局部、經口、直腸、鼻、皮內、腹膜內或腸胃外(例如 靜脈內、皮下或肌內)途徑施用。此外，該組合物可以摻入持續釋放基質如生物降解性聚合 物，所述聚合物植入想要遞送至的位置附近，如在腫瘤部位處。施用方法包括施用單次劑 量、以預定時間間隔施用重復劑量和持續施用預定的時間段。所屬領域的技術人員熟知藥物組合物的劑量將取決于多種因素，例如待治療的病 癥，所用的具體組合物和其他臨床因素，如患者的重量、尺寸、性別和總體健康狀況、身體表 面積、待施用的化合物或組合物、同時施用的其他藥物、和施用途徑。本發明的免疫脂質體或包含所述免疫脂質體的藥物組合物可以與生物活性物質 或化合物或其他組合物組合施用，所述的組合物包含所述生物活性物質或化合物，特別地 抗腫瘤化合物，特別地至少一種抑制細胞性化合物，特別地選自以下的化合物道諾霉素、 伊達比星、米托蒽醌、絲裂霉素、順鉬和其他鉬類似物、長春新堿、表柔比星、阿克拉霉素、氨 甲蝶呤、依托泊苷、多柔比星、阿糖胞苷、氟尿嘧啶和其他氟化嘧啶、嘌呤或核苷、特別地吉 西他濱、博來霉素、絲裂霉素、普卡霉素、放線菌素D、環磷酰胺和其衍生物、噻替派、BCNU、紫 杉醇、多西他賽和其他紫杉烷衍生物和分離物、喜樹堿、多肽、核酸、具有硫代磷酸酯核苷酸 間鍵的核酸和具有聚酰胺核苷酸間鍵的核酸，但尤其地多柔比星、表柔比星和長春瑞濱，以 及本發明的抗體和任選地可藥用載體和/或稀釋劑和/或賦形劑。藥學活性物質，特別地免疫脂質體中截留的抗腫瘤化合物，可以以0. lmg/m2和 2. 5g/m2身體表面和每次給藥之間的量存在。一般而言，施用方案應當在本發明抗腫瘤化合 物的0. 5mg/m2與1000mg/m2之間的范圍內，特別地在1. Omg/m2至500mg/m2之間的范圍內并 且特別地在5. Omg/m2與250mg/m2之間的范圍內、特別地在10. Omg/m2與150mg/m2之間的范 圍內，同時處于這些范圍內的全部各個數字也是本發明的部分。如果施用通過連續輸注進 行，更適宜的劑量可以是每小時在每公斤體重單位0. 01 y g和10mg之間的范圍，同時處于 這些范圍內的全部各個數字也是本發明的部分。免疫脂質體的抗體濃度在每微摩爾磷脂1 P g至150 y g抗體或抗體片段之間的范 圍內，特別地在每微摩爾磷脂5 i! g至100 i! g抗體或抗體片段之間的范圍內，特別地在每微 摩爾磷脂10 i! g至100 i! g抗體或抗體片段之間的范圍內，特別地在每微摩爾磷脂20 i! g至 50 i! g抗體或抗體片段之間的范圍內，特別地在每微摩爾磷脂30 i! g至40 i! g抗體或抗體片 段之間的范圍內。本發明的免疫脂質體制備物可以制備為藥物組合物的形式，用于例如通過靜脈 內、皮下或肌內注射或通過靜脈內滴注進行腸胃外施用，其中所述的藥物組合物含有溶解 于或分散在本領域技術人員熟知的可藥用載體中的分離和純化的免疫脂質體。就腸胃外施用的藥物組合物而言，可以使用任意的常規添加劑，如賦形劑、佐劑、 黏合劑、崩解劑、分散劑、潤滑劑、稀釋劑、吸收增強劑、緩沖劑、表面活性劑、增溶劑、防腐劑、乳化劑、等滲劑、穩定劑、注射用增溶劑、PH調節劑等。促進活性化合物加工成可以藥學方式使用的制備物的可接受載體、稀釋劑和佐 劑在所用的劑量和濃度對接受者無毒并且包括緩沖劑如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其他有機酸； 抗氧化劑(包括抗壞血酸和甲硫氨酸)；防腐劑(如十八烷基二甲基芐基氯化銨；六甲氯 銨；苯扎氯銨、苯扎溴銨；苯酚、丁醇或芐醇；對羥基苯甲酸烷基酯如對羥基苯甲酸甲酯或 丙酯；兒茶酚；雷瑣辛；環己醇；3-戊醇和間甲酚)；低分子量(少于約10個殘基)多肽； 蛋白質，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨 酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其他碳水化合物包括葡萄 糖、甘露糖或糊精；螯合劑如EDTA ；糖如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；形成鹽的反 離子如鈉；金屬復合物(例如Zn-蛋白質復合物)和/或非離子表面活性劑如TWEEN 、 PLUR0NICS 或聚乙二醇(PEG)。施用藥物組合物的形式可以是全身或局部的。例如，此類組合物的施用可以是各 種腸胃外途徑，如皮下、靜脈內、皮內、肌內、腹膜內、鼻內、經皮、頰途徑或借助植入裝置，并 且也可以通過蠕動手段遞送。施用通常以腸胃外例如靜脈內，特別地以輸注形式進行。用于腸胃外施用的制品 包括無菌的水溶液或非水溶液、混懸劑和乳劑。非水溶劑包括但不限于丙二醇、聚乙二醇、 植物油如橄欖油和可注射的有機酯如油酸乙酯。含水溶劑可以選自由水、醇/水溶液、乳濁 液或懸液組成的組，包括鹽水和緩沖的介質。腸胃外載體包括氯化鈉溶液、林格右旋糖、右 旋糖和氯化鈉、乳酸化林格液或固定油，靜脈內載體包括液體和養分補充物、電解質補充物 (如基于林格右旋糖的那些電解質補充物)和其他載體。也可以存在防腐劑(例如抗微生 物劑)、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。藥物組合物還可以包含蛋白質載體例如血清白蛋白或免疫球蛋白，特別地人來源 的蛋白質載體。根據藥物組合物的預期用途，其他生物活性物質可以在本發明的藥物組合 物中存在。在本發明的一個方面，產生了如本文中所述的免疫脂質體(ILs)，其結合EGFR以 提供抗體指導的抗癌藥有效胞內遞送入靶細胞，旨在研究通過這種方法是否可能克服抗藥 性機制，所述抗藥性機制仍是癌癥療法中更好結果的重大障礙。ILs可以按模塊方式用共接連接至含有多種藥物或探針的穩定化脂質體的多種 MAb或MAb片段構建，所述的MAb或MAb片段包括嵌合抗體例如來自C225(西妥昔單抗、愛 必妥 )的Fab’或人源化抗體例如EMD72000。隨后可以用如此產生的ILs治療也以mdr介導多藥抗性為特征的過量表達EGFR 的細胞，例如人乳腺癌細胞系MDA-MB-231/mdr或結腸直腸癌細胞系HT-29/mdr。在多藥抗 性細胞系中，載有多柔比星(dox)的ILs能顯示產生比游離多柔比星大15-86倍的細胞毒 性(例如HT-29/mdr細胞中ILs-dox的IC50 = 0. 37而游離多柔比星的IC50 = 6. 0 ( u g dox/ ml)。在非耐受性HT-29細胞中，多柔比星的免疫脂質體細胞毒性是與游離藥物的免疫脂質 體細胞毒性可比較的(IC5Q = 0. 23 ug dox/ml對0. 36 u g dox/ml)，而比非靶向的脂質體多 柔比星具有顯著更多的細胞毒性(IC5(1 > 27ug dox/ml)。令人感興趣的是，MDA-MB-231/ mdr細胞中的胞內分布研究揭示了游離多柔比星與免疫脂質體dox遞送之間的明顯差異。 雖然游離多柔比星被有效泵出這種多藥抗性腫瘤細胞之外，但在相同濃度上的免疫脂質體dox在胞漿中實現3. 5-8倍更高的dox累積并且在胞核中實現3. 5-4. 9倍更高的dox累積。最后，在MDA-MB-231/mdr異種移植物模型中的體內療法研究證實抗EGFR ILs-dox有效靶向多藥抗性細胞的能力。盡管游離多柔比星在這種高度多藥抗性腫瘤模型 中在其MTD上沒有顯示任何活性，然而抗EGFRILs-dox顯示令人印象深刻的明顯優于全部 其他療法的抗腫瘤作用。根據本發明和如本文中披露的免疫脂質體因而對過量表達EGFR的腫瘤細胞提供 有效和靶向的藥物遞送并且甚至對多藥抗性細胞顯示強烈活性。本領域技術人員會理解除了具體描述的那些內容之外，本文中所述的本發明易受 變化和改變。將理解的是本發明包括全部此類變化和改變，而不脫離本發明的精神和基本 特征。本發明也分別或總體地包括在本發明中提及或顯示的全部步驟、特征、組合物和化合 物，以及任意和全部組合或任意兩個或多個所述步驟或特征。本公開因而以全部所述方面 加以考慮并且不限于此，從而本發明的范圍由所附權利要求書指示，并且屬于等同性意思 和范圍內的全部變化意圖包含于本發明范圍內。在本說明書通篇范圍內援引多篇參考文獻，每份參考文獻通過全部引用的方式并 入本文。將參考以下實施例更充分地理解前面的描述。然而，此類實施例舉例說明實施本 發明的方法并且不意圖限制本發明的范圍。
實施例目標群體是已經接受過所有可使用的標準療法的具有過量表達EGFR的實體瘤的
^^ o特別地，所述患者罹患以下癌癥并且腫瘤在以下治療下已經進展前列腺癌，具有在激素、多西他賽、米托蒽醌治療時進展的腫瘤。胰腺癌和膽囊癌，具有在吉西他濱、卡培他濱、奧沙利鉬治療時進展的腫瘤。腎癌，具有在干擾素、卡培他濱、舒尼替尼、索拉菲尼治療時進展的腫瘤。膀胱上皮癌，具有在順鉬或卡鉬、吉西他濱、多柔比星、氨甲蝶呤、長春新堿治療時 進展的腫瘤。非小細胞肺癌，具有在順鉬或卡鉬、吉西他濱、長春瑞濱、培美曲塞、多西他賽、吉 非替尼治療時進展的腫瘤。小細胞肺癌，具有在順鉬或卡鉬、依托泊苷、伊立替康、多柔比星、長春新堿、環磷 酰胺、托泊替康治療時進展的腫瘤。間皮瘤，具有在順鉬或卡鉬、吉西他濱、培美曲塞治療時進展的腫瘤。乳腺癌，具有在順鉬或卡鉬、多柔比星、長春新堿、環磷酰胺、紫杉醇、多西他賽、吉 西他濱、長春瑞濱、卡培他濱、絲裂霉素、氨甲蝶呤、米托蒽醌、貝伐單抗、曲妥珠單抗治療時 進展的腫瘤。食管癌，具有在順鉬或卡鉬、5-FU、多西他賽治療時進展的腫瘤。頭頸癌，具有在順鉬或卡鉬、5-FU、多西他賽、西妥昔單抗治療時進展的腫瘤。腦腫瘤，具有在替莫唑胺、貝伐單抗、伊立替康、長春新堿、丙卡巴胼、CCNU、BCNU治 療時進展的腫瘤。
肝細胞癌，具有在舒尼替尼、索拉非尼治療時進展的腫瘤。結腸和直腸癌，具有在西妥昔單抗、貝伐單抗、奧沙利鉬、伊立替康、卡培他濱、 5-FU治療時進展的腫瘤。在試驗中測試的治療性化合物是C225-ILS-dox，是一種其中EGFR特異性抗體 C225與含有多柔比星的脂質體的脂質膜共價結合的構建體。使用這種化合物的基本理由是 這樣的事實多柔比星是許多種人腫瘤中最有效的藥物之一并且高百分數的這些惡性病確 實表達EGFR。A:I期研究CC1的方案1.選擇標準1. 1.患者總數大約30位患者。1.2.納入標準在登記參與本研究前，候選人必須達到全部以下標準1.組織學證明的局部推進的或轉移性實體瘤。2.EC0G 表現<2。3.沒有額外的標準療法可用于該患者。4.在最新近可評價的腫瘤組織中確定的EGFR過量表達(根據DAK0EGFR pharmDx-試驗)。5.無伴行的抗腫瘤療法(類固醇是允許的-在乳腺癌和前列腺癌中，需要類固醇 劑量在研究期間保持穩定)。6.自停止任何先前抗腫瘤治療以來至少4周(在亞硝基脲或絲裂霉素C的情況下 6周)。7.在具有先前蒽環類藥暴露史的患者中，要求正常的超聲心動圖(LVEF>50%)。8.年齡彡18歲。9.男性或女性。10.育齡女性和男性患者必須使用有效避孕措施。11.在參與本研究前，愿意并且能夠簽署知情同意書并且在本研究持續期間服從 本方案。1-3.排除標準如果符合以下任意標準，則必須從本研究排除候選人1.妊娠和/或哺乳。2.具有以下實驗室值的患者嗜中性粒細胞< 1. 5xl09個/L血小板<lOOxlO9 個/L血清肌酸> 3. Ox正常上限ALAT、ASAT > 3. Ox正常上限(在肝臟轉移作為酶改變的唯一可能原因的患者中 5. Ox)堿性磷酸酶> 3. Ox正常上限(在肝臟轉移或骨轉移作為酶改變的唯一可能原因 的患者中5. Ox)
24
膽紅素>3. Ox正常上限3.在治療開始前4周內參與任何調查性藥物研究。4.具有臨床明顯和失控的腎病或肝病的患者。5.臨床明顯的心臟病充血性心力衰竭(紐約心臟協會III或IV類)；有癥狀的 冠狀動脈病；用藥物療法沒有充分控制的心律不齊；在最近12個月內的心肌梗死。6.可能有損患者參與本試驗的能力的(由研究人員判定的)任何嚴重的基礎性醫 學病癥(例如活躍的自身免疫病、失控的糖尿病等)。7.根據瑞士治療產品署批準的產品信息施用愛必妥 或Caelyx 時禁忌的任何 伴行藥物。8.累積的多柔比星劑量> 300mg/m2BSA(或心臟毒性蒽環類藥等同物)。9.具有由研究人員判定為臨床明顯并妨礙知情同意或干擾順應性的失控性發作、 中樞神經系統疾病或精神病學失能的患者。10.腦轉移。2.安全性參數2. 1.不利事件(主要對象)臨床研究期間遭遇的全部不利事件將記錄于患者的歷史/文件中。臨床不利事件的強度將根據NCI CTC評級系統3. 0版(http //ctep. info. nih. gov/reporting/ctc. html)評級。2-2.實驗室參數在研究啟動之前，必須記錄參與實驗室的正常值。本研究期間必須實施以下實驗 室操作皿(根據需要在新施用研究藥物之前)血紅蛋白_白細胞計數，包括白細胞分類計數血小板計數每4周(在新施用研究藥物之前):ASAT-ALAT膽紅素堿性磷酸酶血清肌酸LDH 丐尿分析(“U-狀況”檢測紅細胞尿、白細胞尿和蛋白尿)僅在周期1期間的藥物代謝動力學研究在0、24、48、96小時和在第8日的血樣(2x7. 5ml血清管)2. 3.生命體征和體格檢杳在研究開始之前應當記錄以下生命體征和體格檢查結果體溫血壓心率
高度(一旦開始篩查)重量體力狀況(EC0G)2. 4.專門研究對于藥物代謝動力學研究，將在0、24、48、96小時以及在第8日抽取血樣(2x7. 5ml 血清管)。血漿將通過離心從全血分開并冷凍在-80°C以進一步分析。多柔比星濃度將由熒 光確定。由于游離多柔比星的快速清除率，這種簡單分析提供對循環性完整C225-ILS-dox 的優異測量。將使用 PK Solution 2. 0 軟件(Summit Research Serviced, Montrose, CO, 美國)，通過非區室藥物代謝動力學數據分析確定藥物代謝動力學參數。2. 5.針對毒件的劑量調整這是一個劑量逐步升高研究(I期)。對于細節，還參見10. 3. 2部分。在感受到毒性(DLT)但受益于療法的個體患者中，根據主要研究人員的臨床判斷 所確定，以降低的劑量繼續治療是可選項(撤出研究)。如果可能，應當對癥治療毒性。如果毒性出現，將使用適宜的治療來改善體征和癥 狀，包括針對惡心和嘔吐的止吐藥、針對腹瀉的止瀉藥、針對藥物發熱的退熱藥和抗組胺藥 和針對皮膚毒性的50% DMS0軟膏劑。2.6支持措施2.6.1惡心/嘔吐應當從第一周期開始給予患者預防性止吐治療。推薦使用5-HT3-受體-拮抗劑。 應當給予在前面周期中感受等級> 3惡心/嘔吐的任何患者更有侵入性的止吐預防措施。盡管給予適宜藥物，如果等級彡3惡心/嘔吐持續，則該患者必須從本研究退出。2.6.2 腹瀉對第一周期不推薦預防性抗腹瀉療法。然而，在腹瀉首次發生后，該患者應當在首 次發作后接受用洛哌丁胺4mg對癥治療，隨后在每次新發作用2mg洛哌丁胺對癥治療直至 腹瀉康復(每日不超過16mg)。盡管給予適宜藥物，如果等級彡3腹瀉持續，則該患者必須從本研究退出。2. 6. 3.掌跖紅斑(PPE =手足綜合征)應當從第一周期開始給予患者預防性治療。患者應當在第-1至4日經口接受8mg 地塞米松BID、在第5日接受4mg地塞米松BID并且在第6日接受4mg地塞米松。額外地， 患者應當在治療時間期間每日(經口)接受150mg吡哆醇(維生素B6) (20)。盡管給予適 宜藥物，如果2或3級PPE出現，則C225-ILS-dox的施用應當中斷最長14日。一旦PPE的 嚴重性降低至CTC等級1，則患者可以繼續治療(如果不因DLT放棄)。盡管給予預防性或對癥治療，如果等級2或3毒性持續，則該患者必須從本研究退 出o3.疾病評價(功效標準)3. 1.總體應答率(次要目標)雖然應答率不是本試驗的主要目的，但是將通過標準指標評價具有可測量疾病的 患者。腫瘤評估將在篩查期間和在2、4和6個治療周期后進行。在治療結束后，第一年每 隔3個月并隨后根據臨床需要開展評估。如果記錄到進展，則在本研究范圍內將不必開展
26進一步評估。在應答性患者中，應答必須在首次記錄該應答后最少4周進行證實。主要功效標準是將根據附錄1中給出的用于報告癌癥治療結果的RECIST標準評 估的總體應答率。必須在全部評價期間對每位患者確保連續CT掃描與X射線(例如利用反差等) 的一致性，同時相同技術在整個治療期間自始至終用于評價損害。3. 2.講展時間將從患者開始治療的時間至患者首次記錄為具有疾病進展的時間來測量進展時 間。必須充分記錄并根據RECIST標準評估疾病進展。4.研究流程4. 1.篩杳在進行任何研究特定篩查流程前必須提交知情同意書。篩查流程可以在兩個階段進行。第一組評估可以在第1日治療開始之前4周內的 任意時間進行。第二組評估必須在治療開始之前7日內進行。如果評估在第1日進行，它 們必須在研究藥物施用之前結束。第-28日至第1日(首日C225-ILS-dox，在藥物施用之前)評估
27 4. 2.在治療期間腫瘤評估將在篩查期間和在2、4和6個治療周期后進行。在治療結束后，第一年 每隔3個月并此后根據臨床需要開展評估。如果記錄到進展，則在本研究范圍內將不必開 展進一步評估。在應答性患者中，應答必須在首次記錄該應答后最少4周進行證實。實驗室安全性評估血紅蛋白、白細胞和血小板將在第一周期期間每周進行分析，并且如果沒有相反 的臨床指示，在后續周期期間每隔2周進行分析。
轉氨酶、膽紅素、堿性磷酸酶、肌酸酐、鈣、LDH和尿狀況將每隔4周進行分析。將在每次訪問時記錄不利事件。將在全部患者中在治療前和治療2和6個周期后(或在研究結束時)并且如果臨 床提示時開展超聲波心動描記法。5.研究設計這是一個單中心、開放研究。將以兩個階段進行患者召募。首先，患者根據10. 3. 2部分(劑量方案和劑量調 節)登記。第二階段允許根據如MTD所確定的劑量水平額外地召募至多6位額外患者。已經完成治療期(24周)并顯示完全或部分應答以及穩定疾病的患者將進入本研 究的觀察期。該期將在納入最后患者后12個月結束。在治療期或觀察期期間的任何時間，下述患者將離開研究并任由研究人員治療， 所述患者根據附錄1中給出的用于報告癌癥治療結果的RECIST標準具有疾病進展的體征 或因不可接受的毒性而中斷治療。6.研究藥物治療6. 1.藥物名稱、制劑、貯存將供應C225-IL-dox作為腸胃外施用的每20ml小藥瓶10mg多柔比星溶液劑 (0. 5mg多柔比星/ml)使用。C225-ILs-dox應當貯存在2-8°C。6. 1. 1.脂質體制備通過使用反復凍融以水化脂質膜的脂質膜水化-擠出法(23)制備脂質體。脂質體 包含1，2_ 二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DSPC)和膽固醇(摩爾比3 2)，具有甲氧基 聚乙二醇(mPEG)-l，2- 二硬脂酰-3-sn-甘油磷酸乙醇胺(DSPE ；0. 5-5mol%磷脂；Avanti Polar Lipids ；Alabaster, AL) 0水化后，將脂質體通過聚碳酸酯濾器(0. 1 P m孔徑)擠出 10次。脂質體大小由動態光散射法確定(一般80-100nm)。磷脂濃度由磷酸鹽測定法測量 (25)。對于載有ADS645WS (American Dye Source，魁北克，加拿大)的脂質體，將熒光染 料(5mmol/L)溶解于緩沖液中以再水化干燥的脂質。在被動加載后，使用S印hadex G-75 層析法除去未封裝的染料。為封裝化療藥物多柔比星(Bedford實驗室，Bedford，0H)和表柔比星 (Pharmacia, Kalamazoo, Ml)，使用硫酸銨進行標準的遠程加載方法(26，27)。為封裝長春 瑞濱，在蔗糖八硫酸酯三乙基銨的溶液(TEA8S0S ；0. 65mol/L TEA，pH 5. 2-5. 5)中水化后如 所述制備脂質體。在S印harose CL-4B大小排阻柱上除去未截留的TEA8S0S。以350g藥物 /mol磷脂的藥物對磷脂比添加長春瑞濱并且用IN HC1調節pH至6. 5，隨后在60°C啟動加 載過程持續30分鐘。所得脂質體長春瑞濱在S印hadex G_75柱上純化以除去未封裝的藥 物。6. 1. 2單克隆抗體片段和免疫脂質體的制備如之前所述切割并還原完整C225mAb (西妥昔單抗，愛必妥；ImCloneSystems， 在New York，NY) (11)。Fab，片段共價地綴合至PEG-DSPE鏈末端處的馬來酰亞胺基團 (Mal-PEG-DSPE ；Nektar, Huntsville, AL ；參考文獻 8)。對于 C225_Fab，，綴合效率一般 是30%至50%。為摻入進預制的脂質體或商品PLD(Doxil，Alza Pharmaceuticals, PaloAlto, CA)，通過在55°C以30iig Fab，/ y mol磷脂的蛋白質/脂質體比共孵育30分鐘，將 mAb綴合物摻入脂質體，產生70%至80%的摻入效率(11)。6. 1.3 制劑C225-ILs-dox University Hospital of Basel 白勺胃帛(Prof. C. Surber) M 備。C225-ILs-dox 將貯存在 pH 6-7 的 HEPES 緩沖鹽水(0. 9% NaCI ;HEPES 2mM)，以濃度 0.5mg多柔比星/ml。將C225-ILs-dox添加至250ml 5%葡萄糖中用于注射(500ml，對劑 量水平50mg/m2和以上)。這種制劑必須在葡萄糖中稀釋后24小時內使用。稀釋的C225-ILS-dox應當是清 亮和淺紅色的溶液，沒有任何聚集跡象。6. 1. 4貯存要求小瓶的C225-ILS-dox必須在冰箱內在2° _8°C范圍的溫度貯存以確保最佳保留 物理和生物化學完整性。重要的是不凍結該研究藥物，因為脂質體將被破壞。C225-ILs-dox 可能對剪切有誘導的應力(例如攪拌或從注射器快速推出)敏感。劇烈操作(如振搖) C225-ILs-dox溶液可能導致蛋白質聚集并可以產生云霧狀溶液。小瓶僅設計為單次使用。6. 2包裝和標灃本研究藥物C225-ILS-dox的小瓶如下標注僅用于臨床試驗使用研究CC1C225-ILs-dox總含量:20ml,0. 5mg多柔比星/ml = 10mg/小瓶貯存在2-8°C之間(勿凍結)失效日期批號研究員姓名患者標識6. 3研究治療6. 3. 1.劑量選擇的原理在眾多II期和III期試驗中并還在例行腫瘤學實踐中使用的Caelyx標準劑量是 40-50mg/m2，作為短時輸注每4周給予。以這個劑量給予的該藥物的主要毒性之一是掌跖紅 斑(PPE =手足綜合征)。類似地，西妥昔單抗的重要可能的副作用是皮膚毒性，通常本身表 現為面部和軀干的痤瘡樣疹。此種副作用可能是表皮以相對高的水平表達EGFR這一事實 的后果。因而，這項研究的主要安全性顧慮是借助抗EGFR抗體西妥昔單抗引導Caelyx至 過量表達EGFR的細胞也可能增加該藥物的皮膚毒性。在這項I期研究范圍內的治療以非常低劑量的Caelyx即十分之一標準劑量的藥 物(與建立的臨床方案中250mg/m2 (加載劑量400mg/m2)相比，對應于大約0. 9mg/m2的抗 體(西妥昔單抗)劑量)進行并且計劃以小的增量提高劑量。6. 3. 2劑量方案和劑量調節患者將三位患者成組分別以下述劑量水平治療(C225-ILs-doX的定量和劑量水 平以mg多柔比星定義)
水平 1 = 5mg/m2 水平 2 = 10mg/m2水平 3 = 20mg/m2水平 4 = 30mg/m2水平 5 = 40mg/m2水平 6 = 50mg/m2水平 7 = 60mg/m2水平 8 = 70mg/m27jC平 9 = 80mg/m2在每個劑量水平上，3位患者可以同時登記參與。在給定劑量水平的3位患者已經 接受至少一個完整治療周期后，如果在給定劑量水平沒有劑量限制性毒性(DLT)出現，將 允許升高至下一個較高的劑量。將由團隊在審閱前面組的全部可用毒性數據后作出進入下 一個劑量水平的決定。DLT定義為任意的4級毒性、持續超過1周的任意3級毒性或/和3 級熱性嗜中性白細胞減少癥(定義為嗜中性粒細胞< 1.(^10的/1和發熱>38.5°0。排 除惡心、嘔吐、厭食和脫發(2級)是劑量限制性毒性。類似地，與原發腫瘤顯然相關的不利 事件如疾病進展將不視為DLT。此外，當定義并分析DLT時，必須考慮預先存在的毒性。視為DLT的3級毒性的例子 在PPD (手足綜合征)的情況下，3級毒性定義為潰瘍性皮炎或皮膚改變，伴有干 擾功能的疼痛，并因而視為DLT。 在腹瀉的情況下，3級毒性定義為超過基線的每日大于7次排便；失禁；靜脈內補 液大于24小時和/或住院，并因而視為DLT。 在左心室功能的情況下，3級毒性定義為應答于介入治療的有癥狀心機能障礙和 /或射血分數下降低于40%，并因而視為DLT。如果DLT在任何劑量水平上出現，則以下原則將適用 將允許依次劑量逐步升高直至在相同劑量水平上治療的3-6位患者中對3位患者 觀察到DLT。在此刻，將不允許進一步劑量逐步升高。未來可能研究的最大耐受劑量(MTD) 隨后將定義為比不得不停止劑量逐步升高的劑量水平低的劑量水平。在經歷了毒性的個體患者中，根據主要研究人員的臨床判斷所確定并且按照第 6. 5章中詳述的規則，以降低的劑量繼續治療是可選項。6.3.3.治療持續期患者將進行治療直至疾病進展，但持續最多6個周期。6.4.伴行治療必須以病例報告形式匯報全部并行藥物。7.過早退出患者可以在任何時間并因任何原因退出本研究，而不影響他們的恰當治療權利。 研究人員有權利因最有利于患者的任何原因請患者退出，所述原因包括間發疾病、不利事 件、治療失敗或違反方案。在本研究期間懷孕的患者將退出。退出的原因應當標記為違反方案并且應當將妊 娠報告為嚴重不利事件。盡管應當盡可能避免退出，然而應理解退出可以在研究期間出現。無論何時患者 出于任何原因退出研究，必須對該患者完成最終研究評價，無論退出原因是什么。關于該患 者的全部文件記錄必須盡可能完整。8.警告和注意事項視為嚴重的任何不利事件必須立即(在一個工作日內)報告給Ghristoph Mamot 博士或Christoph Rochlitz教授(二者均來自巴塞爾大學醫院腫瘤學系；聯系方式見本方 案的標題頁)。C225-ILS-dox療法僅應當在治療癌癥患者方面有經驗的醫師監督下啟動。由于這 是在瑞士巴塞爾大學腫瘤學系實施的一個單中心研究，僅該系的醫師與研究人員密切合作 實施該治療。關于皮膚毒性，請參考10. 3. 1 (劑量選擇的原理)
9.統計方法和考慮事項9. 1總體考虎事項
這是評價C225-ILS-dox在患有晚期實體瘤的患者中安全性的I期研究。功 效是該項研究的次要目的，因而在治療之前、期間和之后的腫瘤量值會提供關于針對 C225-ILs-dox的腫瘤應答的一些初步數據。然而，功效分析將是純粹描述性的并且沒有開 展正式的統計學檢驗。9. 2樣本量本試驗的樣本量基于這樣的研究設計，其中使用所述研究設計來提供試驗期間遭 遇劑量限制性毒性(DLT)時的安全性終止規則。研究計劃是在每個劑量水平上召募3位患 者，同時取決于毒性，在這些劑量水平的每一劑量水平上隨后納入最多另外的3位額外患 者。當3至6位患者中3位患者在特定劑量水平(DLT劑量)感受到DLT時，將終止試驗。如果在某一劑量水平的真實毒性率是“P”，則宣布該劑量為毒性(DLT劑量)的概 率如下 9. 3.主要和次要分析9. 3.1.主要變量患者針對每一劑量水平的不利事件譜將就事件的頻率和數目進行概括。類似地， 也概括了感受到DLT的患者的數目和比例。將提供全部不利事件和實驗室數據的清單。9. 3. 2.次要變量將列表說明屬于每種應答類別(見7. 2. 1.)的患者的比例。10.倫理學考慮事項本方案已經書寫成文，并且試驗將根據赫爾辛基宣言、ICH頒布良好臨床實踐指南 (Guidelines of Good Clinical Practice)和瑞士管理機關要求進行。在將任何患者納入本試驗之前，研究人員必須確保該試驗已經由當地倫理委員會 批準并且瑞士治療產品署已經開放該中心。10. 1知情同意書和患者信息
知情同意書應當以地倫理委員會批準的書面形式獲得并且由患者簽名。兩份知情 同意書應當簽名，其中一份遞交給該患者。在尋求知情同意書時，應當使用附件中提供的患者信息(根據當地倫理委員會的 要求修訂)并且應當遞交一份副本給該患者。知情同意流程必須遵守ICH和瑞士治療產品署頒布的良好臨床實踐指南。全部患者將被告知試驗目的、可能的不利感受、在不利事件出現時如何反應和他/ 她可能遭遇的流程及可能危害。他們將被告知對患者數據嚴格保密，但是他們需要知道他 們的醫學紀錄可以由除治療醫師之外的授權個人審閱。研究人員必須向患者提供考慮是否參與的足夠機會并且使被迫或過度影響的概 率最小化。提供的信息應當以患者可理解的語言書寫并且不可以包括可能放棄患者任何合 法權利或可能豁免研究人員、贊助商或研究機構過失責任的任何內容。將強調的是參與是自愿的并且允許患者在他或她愿意的任何時候拒絕進一步參 與該方案。這不損害患者的后續護理。在轉變損益比的新數據可獲得的情況下，患者應當再次同意。11.附件11. 1. Recist 標準實體腫瘤應答評價標準(RECIST) (29)對具有可測量疾病的全部患者評價應答。可測量的疾病-存在至少一種可測量的損害。如果這種可測量疾病限于孤立損 害，其腫瘤特征應當由細胞學/組織學證實。 可測量的損害可以在至少一個維度上精確測量的損害，所述損害具有使用常規 技術時20mm的最長直徑3或用螺旋CT掃描時10mm的最長直徑3。 不可測量的損害全部其他損害，包括小損害(用常規技術時最長直徑< 20mm或 用螺旋CT掃描時最長直徑< 10mm)，S卩，骨損害、柔腦脊膜疾病、腹水、胸膜/心包膜滲出、炎 性乳腺疾病、皮膚/肺淋巴管炎、囊性損害并且還包括未證實并隨后由成像技術證實的腹 部包塊。損害的評價靶損害的評價A 完全應答(CR)全部靶損害消失 部分應答(PR)以基線總和LD為參考，靶損害的最長直徑(LD)的總和下降至少 30%。 進展(PD)參考自開始治療或出現一種或多種新損害以來所記錄的最小總和 LD，靶損害的LD總和增加至少20%。 穩定的疾病(SD)參考自開始治療以來的最小總和LD，既沒有足夠地縮小至定 性PR，也沒有足夠地增加至定性PD。非靶損害的評價B 完全應答(CR)全部非靶損害消失和腫瘤標記水平正常化。 不完全應答一種或多種非靶損害持續(非CR)或/和腫瘤標記水平維持高于 正常限。
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·進展(PD)—種或多種新損害出現和/或現有非靶損害毫無疑義地進展。C注 腫瘤標記單獨不能用來評估應答。如果腫瘤標記初始高于正常上限，它們必須對全部損害已消失時視為處于完全臨床應答的患者歸一化。 細胞學和組織學如果這種可測量疾病限于孤立損害，則其腫瘤特征應當由細胞 學/組織學證實。這些技術可以用來區分罕有病例(例如，其中已知的殘余良性腫瘤可能仍保留的 腫瘤類型如生殖細胞腫瘤中的殘余損害)中的I3R和CR。當可測量的腫瘤已經符合應答或穩定性疾病的標準時，細胞學證實治療期間出現 或惡化的任何滲出物的腫瘤來源對于區分應答或穩定性疾病與進展性疾病是必須遵循的 (滲出可以是該治療的副作用)。最好總體應答的評價最好總體應答是從治療開始直至疾病進展/復發所記錄的最好應答(以開始治療 以來所記錄的最小量值作為進展性疾病的參考)。患者的最好應答指定將取決于量值和證 實標準的實現。A代表全部所涉及器官的全部可測量損害直至最多10處損害應當被鑒定為靶損害 并且在基線處記錄和測量。應當基于靶損害的大小(具有最長直徑的損害)及它們對精確 反復測量(通過成像技術或臨床測量)的適用性選擇靶損害。將計算全部靶損害的長直徑 (LD)的總和并且報道為基線總和LD。該基線總和LD將作為參考用來進一步表征疾病的可 測量維度的客觀腫瘤應答。β全部其他損害(或疾病部位)應當被鑒定為非靶損害并也應當在基線處記錄。不 要求量值，不過在整個隨訪期間應當指出這些損害中每一種損害的存在或不存在。e盡管“非靶”損害的清晰進展僅是例外，然而在這種環境下，治療醫師的選擇應當 為主導并且進展狀況應當在稍后時間由評審專家組(或試驗主持人)證實。 注
應當將健康狀況全面惡化的要求中斷治療而當時沒有疾病進展客觀證據的患者 報道為“有癥狀的惡化”。應當全力記錄客觀進展，即便在中斷治療后。 在一些情況下，可能難以區分殘留疾病與正常組織。當完全應答的評價取決于這 種決定因素時，推薦應當在證實完全應答狀況之前研究殘余損害(細針頭抽吸/活組織檢 查)。評價可測量疾病的指南全部量值應當使用尺子或卡尺記錄以米制符號記錄。全部基線評價應當在根據評 估計劃注冊之前14日內進行。注在以往輻射過的區域內的腫瘤損害最佳地不視為可測量的疾病。應當在基線處和隨訪期間使用相同的評估方法和相同技術來表征每種所鑒定和 報告的損害。CT和MRI是測量為應答評估所選擇的靶損害的目前可用性和重復性最好的方 法。當使用兩種方法來評估療法的抗腫瘤作用時，優選基于成像的評價法來通過臨床檢查 評價。 僅當臨床損害為淺表時(例如，皮膚小結，可觸及性淋巴結)，才會認為它們是可 測量的。在皮膚損害的情況下，推薦通過彩色照相記錄，包括尺子以估計損害的尺寸。 可接受胸部X射線片上的損害為可測量的損害，當這些損傷是清晰限定的并被 充氣肺包圍時。然而，優選CT。 常規CT和MRI應當以10mm或更小截距切片厚度連續地進行。螺旋CT應當使 用5mm連續的重構算法進行。這適用于胸部、腹部和骨盆。頭和頸部端部通常需要特殊的 方法。 當本試驗的主要目的是客觀性應答評價時，超聲術(US)不應當用來測量臨床上 不容易接近的腫瘤損害。它是臨床測量淺表可觸及性小結、皮下損害和胸腺小結的可能替 代。超聲術也可能用來證實通常由臨床檢查評估的淺表性損傷的徹底消失。證實性量值/應答持續期證實為了向一種狀況指定冊或CR，必須通過重復研究證實腫瘤量值的改變，其中所述 的重復研究應當在首次滿足應答標準4周后進行。在SD的情況下，隨訪量值必須在試驗7 周后符合SD標準至少一次(見評估安排，附件23. 18)。總體應答的持續期從對CR/HU無論先記錄到哪種)符合測量標準的時間直至客觀記錄到復發性或 進展性疾病的首個日期，測量總體應答的持續期(以開始治療以來所記錄的最小量值作為 進展性疾病的參考)。從CR首先符合測量標準的時間直至客觀記錄到復發性疾病的首個日期，測量總 體完全應答的持續期。穩定疾病的持續期以開始治療以來所記錄的最小量值作為參考，從開始治療直至符合進展標準，測 量穩定性疾病。11.2.合格形式納入標準
在登記參與本研究前，候選人必須達到全部以下標準(如果是的話，勾選每個空 格)1.組織學證明的局部推進的或轉移性實體瘤。2.EC0G 表現<2。3.沒有額外的標準療法可用于該患者。4.在最新近可評價的腫瘤組織中確定的EGFR過量表達(根據DAK0EGFR pharmDx-試驗)。5.無伴行的抗腫瘤療法(類固醇是允許的_在乳腺癌和前列腺癌中，需要類固醇 在研究期間保持穩定)。6.自停止任何先前抗腫瘤治療以來至少4周(在亞硝基脲或絲裂霉素C的情況下 6周)。7.在具有先前蒽環類藥暴露史的患者中，要求正常的超聲心動圖(LVEF>50%)。8.年齡彡18歲。9.男性或女性。10.育齡女性和男性患者必須使用有效避孕措施。11.在參與本研究前，愿意并且能夠簽署知情同意書并且在本研究持續期間服從 本方案。排除標準如果符合以下任意標準，則必須從本研究排除候選人(如果是的話，勾選每個空 格)1.妊娠和/或哺乳。2.具有以下實驗室值的患者嗜中性粒細胞< 1. 5xl09個/L血小板<lOOxlO9 個/L血清肌酸> 3. Ox正常上限ALAT、ASAT > 3. Ox正常上限(在肝臟轉移作為酶改變的唯一可能原因的患者中 5. Ox)堿性磷酸酶> 3. Ox正常上限(在肝臟轉移或骨轉移作為酶改變的唯一可能原因 的患者中5. Ox)膽紅素>3. Ox正常上限3.在治療開始前4周內參與任何調查性藥物研究。4.具有臨床明顯和失控的腎病或肝病的患者。5.臨床明顯的心臟病充血性心力衰竭(紐約心臟協會III或IV類)；有癥狀冠 狀動脈病；用藥物療法沒有充分控制的心律不齊；在最近12個月內的心肌梗死。6.可能有損患者參與本試驗的能力的(由研究人員判定的)任何嚴重的基礎性醫 學病癥(例如活躍自身免疫病、失控的糖尿病等)。7.根據瑞士治療產品署批準的產品信息施用愛必妥 或Caelyx 時禁忌的任何 伴行藥物。8.累積的多柔比星劑量> 300mg/m2BSA(或心臟毒性蒽環類藥等同物)。
9.具有由研究人員判定為臨床明顯并妨礙知情同意或干擾順應性的失控性發作、 中樞神經系統疾病或精神病學失能的患者。10.腦轉移。12.結果在下表中包括I期試驗的初步結果。這些結果顯示直至50mg/m2濃度不能或很少 能夠觀察到藥物相關的毒性作用。特別地，在甚至更高的劑量上沒有發現皮膚毒性、特別地 沒有掌跖紅斑，而與此同時，觀察到清晰的功效信號，甚至在所用的最低劑量上也是如此。表1 :1期試驗的初步結果
(*2周期后最小腫瘤進展。回溯地，PSA下降和肺轉移緩和持續18個月)。 (在迄今治療的所有16位患者中根本沒有皮膚毒性) PD進展
穩定性疾病
穩定性疾病(最小應答) 部分應答 未評價
(MR)
SD SD PR n. e
B多藥抗性研究 1.材料 1. 1細
用于脂質體制備的試劑包括:DilC18(3)-DS(Molecular Probes ；Leiden, Netherlands) ；DSPC，膽固醇，和 mPEG-DSPE (Avanfi Polar Lipids ；Alabaster, AL, USA)； Mal-PEG(2000/3400)-DSPE(Nektar ；Huntsville, AL，美國)；有機溶劑和其他試劑純化學 品(SIgma-Aldrich AG ；Buchs,瑞士 )。多柔比星(Adriblastin RD ；Pfizer AG，Ziirich，瑞士)和聚乙二醇化的脂質體 多柔比星(Caelyx ，Essex Chemie AG，Luzern，瑞士)商業地從藥房獲得。免疫脂質體含有衍生自C225(西妥昔單抗，愛必妥)或EMD72000(馬妥珠單抗) (均為Merck KGaA，達姆施塔特，德國)的Fab’。兩種單克隆抗體均是與EGFR胞外結構域 (ECD)結合并因而阻斷EGFR配體如EGF和TGF-a (36)激活作用的重組IgGlt) MAb C225是 嵌合MAb，而EMD72000是從轉基因小鼠衍生的人源化MAb (37)。MAb EMD72000由德國達姆施塔特Merck KGaA友好提供。L2.細胞系MDA-MB-231人乳腺癌和結腸直腸癌細胞系HT-29癌細胞系從巴塞爾大學 研究系或美國典型培養物保藏中心(ATCC)獲得。這些細胞系的抗性形式由Susan Bates (MDA-MB-231 VblOO ；NIH，Bethesda，美國)和由SchSfer博士 (HT-29RDB ；Charite, 柏林，德國)提供。在加濕氣氛95 %空氣和5 % C02在37 °C將MDA-MB-231細胞維持 于“改良MEM鋅選項”培養基(Invitrogen AG，巴塞爾，瑞士)中和將HT-29維持在 RPMI-1640(Sigma-Aldrich AG，布克斯，瑞士)，所述培養基補充有10%胎牛血清，100IU/ml 青霉素和100iig/ml鏈霉素。2.脂質體制備、加載和抗體摻入2. 1脂質體制備根據反復凍融法(23)，使用DSPC和膽固醇(摩爾比3 2)與mPEG-DSPE (0. 5-5mol %磷脂)制備單層脂質體。簡而言之，隨后將脂質體通過具有0. 1 P m 定義孔徑的聚碳酸酯濾器擠出10次，產生如動態光散射法所確定的90-120nm直徑的脂質 體。使用標準磷酸鹽測定法測量脂質體濃度。對于攝取和內化研究，用0. 1-0. 3mol% DilC18(3)_DS (—種可以穩定摻入脂質體 膜的熒光脂質)((38) (39))標記脂質體。為封裝多柔比星，利用硫酸銨進行遠程加載法(remote-loadingmethod) ((27) (26))。首先，將干燥脂質在250mM硫酸銨中于pH 5. 5再水化，隨后如上文所述擠出。使用 Sephadex G_75柱/HEPES緩沖鹽水(pH7. 0)，通過大小排阻層析法除去游離硫酸銨。脂質 體隨后在60°C與多柔比星孵育30分鐘。在這些條件下，當使用每微摩爾磷脂150 u g藥物 時，加載效率一般在95-100%范圍內。使用S印hadex G_75柱，通過大小排阻層析法除去 所有未封裝的多柔比星。此外，商業地獲得聚乙二醇化的脂質體多柔比星(PLD/Caelyx /Doxil :)。2. 2 MAb片段制備、綴合和脂質體摻入對于C225-和EMD72000-Fab，，將完整MAb與0. 1M乙酸鈉(pH 3.7)中的胃蛋白酶 (重量比1 20)在37°C孵育3小時，隨后對HEPES緩沖鹽水(pH 6.0)透析。所得F(ab)2 用2-巰基乙胺或2-巰基乙醇在37°C于氬氣下還原15分鐘，然后通過使用S印hadex G-25 的凝膠過濾法回收。還原效率一般是70-90%。Fab，如以往所述綴合至Mal_PEG_DSPE((11) (12))。通過SDS-PAGE評價綴合效 率，從而允許比較游離MAb片段與綴合物；綴合效率一般對于C225是30-50%并且對于 EMD72000是40-60%。為摻入包含制備的脂質體藥物和探針或商品聚乙二醇化的脂質體 多柔比星的預制脂質體，通過在55°C共孵育30分鐘將形成膠束溶液的MAb片段綴合物 (Fab，-Mal-PEG-DSPE)摻入脂質體。作為結果，綴合物通過疏水DSPE結構域與脂質體的 脂質外層接合。通過S印harose CL-4B凝膠過濾法將未摻入的綴合物和游離藥物與免疫 脂質體分開。當使用DilC18(3)-DS標記的脂質體時，小于5%的熒光與膠束級分共締合， 這顯示該標記的最小轉移。如所述地使用一系列蛋白質標準品和凝膠掃描與定量法，通過 SDS-PAGE評估綴合MAb片段的摻入效率。對于C225和EMD72000，一般而言，75-85%添加 的MAb綴合物摻入免疫脂質體，這對應于每個脂質體30-40個Fab’片段。3.研究設計3. 1結合和內化研究對于流式細胞術研究，將250，000個細胞在37°C與12孔板中的鹽水(對照)、脂 質體或以DilC18(3)-DS標記的靶向EGFR的免疫脂質體共孵育2小時，用PBS充分洗滌，隨 后分開并貯存在冰上直至進行流式細胞術。因而進行熒光顯微鏡術研究，除了從12孔平板 移出細胞之外。含有C225_Fab，的免疫脂質體比對照脂質體在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231中顯 示高大約2個數量級的累積，所述對照脂質體在這些細胞中僅產生背景熒光水平。在多藥 抗性次級細胞系MDA-MB-231 VblOO中存在相似的模式。也在過量表達EGFR的結腸癌HT-29細胞及其多藥抗性次級細胞系HT_29 RDB中 評價了含有C225-Fab’的免疫脂質體的結合和攝取。這里，免疫脂質體在過量表達EGFR的 HT-29細胞中顯示超過1個數量級的更多攝取并且在mdr細胞系HT-29 RDB中顯示可比較的研究結果。在無EGFR過量表達的對照細胞系MCF-7中，非靶向的脂質體與抗EGFR免疫 脂質體之間不存在攝取/結合的差異(數據未顯示)。這些結果表明兩個同基因細胞系中 對免疫脂質體攝取的高度選擇性，與這兩個細胞系的mdr特征無關。與對照脂質體孵育后靶細胞中最小熒光攝取的觀察結果與聚乙二醇化脂質體的 非反應特性一致((12) (40))，并且還證實DilC18(3)-DS可以用作基于脂質體的穩定標記， 而沒有明顯交換至細胞膜中。細胞毒性研究在靶細胞中評價含有多柔比星的EGFR-靶向的免疫脂質體的特異性細胞毒性，其 中所述的靶細胞以密度每孔8，000個細胞接種于96孔平板內并且使其生長過夜。在37°C 應用免疫脂質體或對照治療2小時，隨后用PBS洗滌并重新添加生長培養基。細胞進一步 在37°C孵育3日并使用3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四唑鐺(MTT)染色 法(41)分析細胞成活力。對于使用排出泵抑制劑維拉帕米的細胞毒性研究，在整個實驗期 間這種化合物以100 u M濃度添加至培養基。在過量表達EGFR的HT-29野生型結腸癌細胞，處理2小時后，靶向EGFR的免疫脂 質體多柔比星顯示實質的體外細胞毒性(IC5Q = 0. 25 u g/ml)，這接近于游離多柔比星的體 外細胞毒性(ICM = 0. 3 y g/ml)(表2)。因而，多柔比星的EGFR靶向免疫脂質體遞送如游 離多柔比星(一種在體外輕易橫穿細胞膜的兩親性小分子)的快速擴散一樣有效。另一方 面，通過將C225-Fab，綴合至PLD所衍生的靶向EGFR的免疫脂質體多柔比星在HT-29細胞 中比非靶向的PLD本身(未達到IC5(I)顯示大得多的細胞毒性，表明遞送過程是抗體依賴的 (表2)。值得注意地，僅用抗體C225持續2小時的相似處理在這種測定法中不顯示細胞毒 性，這證實免疫脂質體活性歸因于定向藥物遞送并且與C225在這個短暫孵育時間期間的 潛在抗增殖作用不相關。另外，含有C225-Fab’但缺少所封裝藥物的免疫脂質體(“空的免 疫脂質體”)在這些測試條件下類似地不顯示細胞毒性。在缺少EGF受體的MCF-7細胞中 也未見到C225-免疫脂質體-dox的作用(陰性對照；數據未顯示)。在多藥抗性次級細胞系HT-29RDB中進行相同實驗。值得注意地，在這種細胞系 中，多柔比星的免疫脂質體遞送(ICM = 0.5ug/ml)優于游離藥物(ICM = 9. 5 u g/ml ；= 19倍)并且還優于脂質體藥物(未達到IC5(I)。匯總我們的這部分研究，盡管游離多柔比星 在HT-29細胞系的多藥抗性變體中與野生型細胞系相比具有低得多的細胞毒性，然而對于 免疫脂質體化合物而言幾乎不存在差異，與這種細胞系中的不同mdr特征無關，這表明免 疫脂質體能夠在這種環境下回避多藥抗性機制。也在以多藥抗性為特征的過量表達EGFR的人乳腺癌細胞系MDA-MB-231 VblOO中 評價了使用多柔比星的免疫脂質體介導的細胞毒性并且與使用缺少mdr的其親本細胞系 MDA-MB-231的結果比較。在親本野生型MDA-MB-231中，含有C225_Fab’的ILs與游離多柔 比星本身一樣有效地遞送多柔比星，其也可以輕易穿透細胞膜并且比非靶向的脂質體多柔 比星/PLD明顯具有更強細胞毒性(IC50 = 0.31^/1111，相對于0.61^/1111，相對于120 ug/ ml) 0令人感興趣地，在高度藥物抗性MDA-MB-231 VblOO細胞系中，載有多柔比星 (dox)的ILs產生比游離多柔比星高216倍的細胞毒性，并且也比非靶向的脂質體多柔比星 具有明顯更高的細胞毒性(IC50 = 0. 6ii g/ml，相對于130 y g/ml，相對于大于900 u g/m)。
41
在維拉帕米的存在下重復抗性MDA-MB-231 VblOO細胞中的相同實驗。維拉帕米 能夠抑制排出泵并因而逆轉多藥抗性的特定機制。實際上，通過添加維拉帕米至這個實驗， 能有效地轉變多藥抗性機制，并且因而游離多柔比星如在野生型MDA-MB-231細胞系中那 樣有效(IC5(I = 0.9u g/ml)。相反，維拉帕米的添加沒有進一步提高由抗EGFR免疫脂質體 遞送的多柔比星的效力(IC5(I = 0.5u g/ml)，因而證實了我們的研究結果ILs能夠克服多 藥抗性機制并且該遞送系統不受排出泵存在的影響。表2 細胞毒性研究的匯總結果 PLD非靶向的脂質體多柔比星C225-ILs-dox C225抗體靶向的脂質體多柔比星3.3 ^bmtF.mmmmM^mmm對于比較性累積研究，腫瘤細胞(HT-29、HT-29RDB、MDA-MB-231 或 MDA-MB-231 VblOO)以每孔200，000個細胞的密度接種在12孔板中。游離多柔比星、非靶向的脂質體多 柔比星(PLD)和免疫脂質體多柔比星已經以3 ii g/ml多柔比星濃度在37°C應用了 2小時， 隨后用培養基進行2輪洗滌。維拉帕米以0、10或100 yM濃度添加至實驗。在無任何處理 下孵育另外2小時后，如下分析細胞在移去培養基后，細胞用1ml含有FCS的培養基洗滌一次，隨后用1ml含鈣和鎂的 PBS在室溫(RT) 3分鐘。將PBS用400 ill C100T溶液(100ml含有2. lg檸檬酸和0. 5ml Tween 20)替換。以300轉/分鐘振搖10-15分鐘引起細胞膜溶解和釋放細胞核，如顯微 鏡術所證實。將每孔的全部內容物轉移至0. 5ml透明PCR管并在室溫和1200rcf離心5分 鐘。以這種方式，胞核將沉積在管底尖處，這對后續加工是重要的。為確定細胞漿中的多柔 比星，取出350 ill上清液并與350 ill酸性甲醇(含有1M正磷酸的甲醇)混合。對于多 柔比星的胞核累積，含有胞核的沉淀物用500 yl含有C100T的PBS洗滌兩次并且利用 如前所述的后續離心法離心。在仔細移去最終上清液后，來自沉淀物的多柔比星由400 yl 50%酸性甲醇過夜提取。從細胞漿提取物和胞核提取物轉移300iU至96孔平板并通過“SpertraMax Gemini Fluorimeter，，(Molecular Devices)測量。3. 4腫瘤異種移棺物樽型在MDA-MB-231野生型和抗性乳腺癌異種移植物腫瘤模型中研究非靶向的脂質體 相對于抗EGFR免疫脂質體的效力。Swiss nu/nu小鼠(5-6周；Charles River，法國)以 過量表達EGFR的MDA-MB-231腫瘤細胞(lxlO7個細胞，野生型或抗性)皮下(s. c.)注射至動物背部。一旦腫瘤異種移植物已經建立并且和腫瘤測量為150-250mm3，將小鼠隨機分 配至不同處理組(根據研究，8-10只動物/組)。全部靜脈內治療通過尾靜脈注射，一般以 100-200 μ 1體積進行。脂質體和抗EGFR免疫脂質體(C225-和EMD72000-)以劑量IOmg多 柔比星/kg/劑靜脈內施用3周，每周1次，總劑量30mg dox/kg。游離藥物按照與脂質體 或免疫脂質體相同的時間進度表以30mg dox/kg多柔比星MTD進行靜脈內注射。在對照組 中，鹽水以相同注射體積和時間進度表靜脈內施與。腫瘤植入后監測腫瘤生長55-100日。小鼠一周三次稱重并就毒性進行檢查。使 用卡 尺每周2-3次進行腫瘤測量，并且使用等式(長度X寬度2) /2計算腫瘤體積。在缺少mdr特征的野生型MDA-MB-231異種移植物模型中，以分成10mg/kg的周劑 量三次的30mg dox/kg總劑量靜脈內施用抗EGFR免疫脂質體-dox。從抗EGFR MAb C225 或從EMD 72000制備抗EGFR免疫脂質體。對照治療包括劑量和時間進度表與免疫脂質體 相同的鹽水；游離多柔比星和非靶向的脂質體多柔比星(商業聚乙二醇化的脂質體多柔比 星；PLD)。與鹽水治療相比時，游離多柔比星產生一些腫瘤生長抑制。通過PLD實施的多柔 比星非靶向脂質體遞送在這個高劑量上誘導腫瘤消退和勝過游離藥物的明顯提高的效力。 用抗EGFR免疫脂質體-dox的治療，無論使用C225或EMD72000，引起實質的腫瘤消退并且 總體上是最有效的治療。直到第77日，對于PLD組、G225-ILs-dox組和EMD72000-ILs_dox 組而言腫瘤消退是相似的。然而，在追蹤期間，用非靶向PLD治療的腫瘤均開始重新生長而 用免疫脂質體多柔比星即C225-ILS-dox和EMD72000-ILS-dox治療的腫瘤不顯示生長活動 直至觀察結束(第100日)，表明了如以往在其他異種移植物腫瘤模型中報道的抗EGFR免 疫脂質體的治愈性潛力。在以非常相似的EGFR過量表達(數據未顯示)、但額外地以多藥抗性為特征的 MDA-MB-231 VblOO異種移植物模型中重復相同實驗。再次，以分成10mg/kg三次周劑量的 30mg dox/kg總劑量靜脈內施用從C225或EMD72000衍生的抗EGFR免疫脂質體-dox。比 較物包括劑量和時間進度表與免疫脂質體相同的鹽水；游離多柔比星和非靶向的脂質體 多柔比星(商業聚乙二醇化的脂質體多柔比星；PLD)。在這個高度多藥抗性模型中，與鹽水治療相比，游離多柔比星不顯示任何腫瘤生 長抑制作用。通過PLD實施的多柔比星的非靶向脂質體遞送在這個高劑量上顯示一些腫 瘤生長抑制作用。有趣并且重要地，用抗EGFR免疫脂質體-dox的治療，無論使用C225或 EMD72000，引起實質的腫瘤消退并且總體上是最有效的治療。與EMD72000-ILS-dox相比， C225-ILs-doX似乎是適度地更有效。然而，這僅是一種趨勢并且不是統計顯著的。總之，本 試驗的結果說明抗EGFR免疫脂質體甚至對多藥抗性腫瘤是有效的并且可以克服mdr機制 (見表3)。在兩種模型中，抗EGFR免疫脂質體-dox被小鼠充分耐受。用抗EGFR免疫脂質 體-dox的治療與沒有大的體重損失相關表3 腫瘤異種移植物研究的結果 3. 5統計分析為評價結果的統計顯著性，分析了腫瘤體積并對每個時間點使用Student t檢驗 (2樣本單獨的t檢驗)比較不同治療組。此外，基于每只小鼠的秩總數進行多變量(秩) 檢驗。在最后的治療后的每個時間點上的腫瘤尺寸在該日的全部小鼠內進行秩評定并將秩 加總。在每種情況下對兩個治療組通過2樣本t檢驗比較秩總數(42)。參考文獻(l)Sridhar SS，Seymour L，Shepherd FA.表皮生長因子受體抑制劑以非小細 胞月市癌為焦點的臨床研究綜述(Inhibitors of epidermal-growth-factor receptors :a review of clinical research with afocus on non-small-celi lung cancer). 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權利要求
免疫脂質體，其包含識別并結合至實體瘤表面上的EGF受體抗原的抗體或抗體片段并且還在脂質體中封裝了抗腫瘤化合物，用于多線治療臨床設立的人患者中的癌癥，特別地由局部推進的或轉移性腫瘤所代表的癌癥。
2.根據權利要求1的免疫脂質體，其中所述腫瘤是EGFR陽性腫瘤。
3.根據權利要求1或2的免疫脂質體，其中脂質體封裝了抑制細胞性化合物。
4.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中抗腫瘤化合物是選自以下的化合 物道諾霉素、伊達比星、米托蒽醌、絲裂霉素、順鉬和其他鉬類似物、長春新堿、表柔比星、 阿克拉霉素、氨甲蝶呤、依托泊苷、多柔比星、阿糖胞苷、氟尿嘧啶和其他氟化嘧啶、嘌呤或 核苷、尤其地吉西他濱、博來霉素、絲裂霉素、普卡霉素、放線菌素D、環磷酰胺和其衍生物、 噻替派、BCNU、紫杉醇、多西他賽和其他紫杉烷衍生物和分離物、喜樹堿、多肽、核酸、具有硫 代磷酸酯核苷酸間鍵的核酸、和具有聚酰胺核苷酸間鍵的核酸。
5.根據權利要求4的免疫脂質體，其中細胞毒化合物是選自多柔比星、表柔比星和長 春瑞濱的化合物。
6.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于二線治療人患者。
7.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于三線治療人患者。
8.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于四線治療人患者。
9.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于五線治療人患者。
10.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于六線治療人患者。
11.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于七線治療人患者。
12.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于多線治療已經接受、但不應答所 有可使用的標準療法的患者群體。
13.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中腫瘤仍然正在進展。
14.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中患者已經發展了多藥抗性。
15.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中治療導致疾病的穩定化。
16.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中治療導致部分應答。
17.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中治療導致完全應答。
18.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中治療顯示沒有或基本上沒有毒 性副作用。
19.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中治療不顯示皮膚毒性。
20.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中治療不顯示掌跖紅斑(PPE=手 足綜合征)。
21.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中治療在5mg/m2和80mg/m2之間 的濃度顯示沒有或基本上沒有毒性副作用。
22.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中治療在直到40mg/m2的濃度顯示 沒有或基本上沒有毒性副作用。
23.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中抗體或抗體片段共價地結合至 脂質體膜。
24.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中抗體共價地綴合至與脂質體錨 接的接頭分子的末端。
25.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中接頭分子是聚乙二醇。
26.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中抗體是針對EGF受體的結合配 體的胞外結構域的單克隆抗體。
27.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于治療臨床設立的人患者中選自 由卡波奇氏肉瘤、復發性卵巢癌、軟組織肉瘤、神經膠質瘤、黑素瘤、間皮瘤、泌尿道移行細 胞癌、子宮內膜癌、胰腺癌、小細胞和非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、食管癌、結腸直腸 癌、肛門癌、陰道癌、外陰癌、前列腺癌、皮膚的基底細胞癌、頭頸癌和膽管癌組成的組中的 癌癥，所述癌癥特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤代表。
28.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于治療臨床設立的人患者中選自 由前列腺癌、胰腺癌、腎癌、膀胱上皮癌、食管癌、頭頸癌、結腸直腸癌、肝細胞癌和間皮瘤組 成的組中的癌癥，所述癌癥特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤代 表。
29.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于多線治療臨床設立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患前列腺癌，具有在激素和/或多西他賽和/或米托蒽醌治療下已 經進展的腫瘤。
30.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于多線治療臨床設立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患胰腺癌，具有在吉西他濱和/或卡培他濱和/或奧沙利鉬治療下 已經進展的腫瘤。
31.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于多線治療臨床設立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患腎癌，具有在干擾素和/或卡培他濱和/或舒尼替尼和/或索拉 菲尼治療下已經進展的腫瘤。
32.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于多線治療臨床設立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患食管癌，具有在順鉬和/或5-FU和/或多西他賽和/或西妥昔 單抗治療下已經進展的腫瘤。
33.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于多線治療臨床設立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患結腸癌和/或直腸癌，具有在西妥昔單抗和/或貝伐單抗和/或 奧沙利鉬和/或伊立替康和/或卡培他濱和/或5-FU治療下已經進展的腫瘤。
34.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于多線治療臨床設立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患膀胱上皮癌，具有在順鉬或卡鉬和/或吉西他濱和/或多柔比星 和/或氨甲蝶呤和/或長春新堿治療下已經進展的腫瘤。
35.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于多線治療臨床設立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患間皮瘤，具有在順鉬或卡鉬和/或吉西他濱和/或培美曲塞治療 下已經進展的腫瘤。
36.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于多線治療臨床設立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患肝細胞癌，具有在舒尼替尼和/或索拉非尼治療下已經進展的 腫瘤。
37.根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，用于治療臨床設立的患有癌癥、特別 地患有由局部推進的或轉移性腫瘤所代表的癌癥的人患者，其中實現5%和95%之間的應答率。
38.藥物組合物，其包含根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體和可藥用載體或 賦形劑或稀釋劑，用于一線至多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、特別地 五線、特別地六線、特別地七線和更高線治療臨床設立的人患者中的癌癥、特別地由局部推 進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表的癌癥。
39.一線至多線治療、特別地二線、特別地三線、特別地四線、特別地五線、特別地六線、 特別地七線和更高線治療臨床設立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫 瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表的癌癥的方法，所述方法通過施用根據前述權利要求任一 項所述的免疫脂質體或藥物組合物至所述人患者而實施。
40.治療患有癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表 的癌癥并且未經歷過化學療法的人患者、特別地治療已經接受過、但不應答至少一種標準 療法、特別地至少二種標準療法、特別地至少三種標準療法，但是尤其地不應答所有可使用 的標準療法的患者的方法，所述方法通過施用根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體 或藥物組合物至所述人患者而實施。
41.使用根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體或藥物組合物用來制備藥物的方 法，所述藥物用于一線至多線治療，特別地二線、特別地三線、特別地四線、特別地五線、特 別地六線、特別地七線和更高線治療臨床設立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進的或 轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫瘤所代表的癌癥。
42.使用根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體或藥物組合物用來制備藥物的方 法，所述藥物用于治療患有癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤、特別地EGFR陽性腫 瘤所代表的癌癥并且未經歷過化學療法的人患者、特別地治療已經接受過、但不應答至少 一種標準療法、特別地至少二種標準療法、特別地至少三種標準療法，但是尤其地不應答所 有可使用的標準療法的患者。
43.免疫脂質體，其包含識別并結合至實體瘤表面上的EGF受體抗原的抗體或抗體片 段并且還在脂質體中封裝了抗腫瘤化合物，用于治療已經顯現多藥抗性的患者或患者群體 中的多藥抗性。
44.藥物組合物，其包含根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體和可藥用載體或 賦形劑或稀釋劑，用于治療已經顯現多藥抗性的患者或患者群體中的癌癥。
45.根據權利要求44的藥物組合物，用于治療乳腺癌。
46.根據權利要求44的藥物組合物，用于治療結腸直腸癌。
47.根據權利要求44的藥物組合物，其中所述的多藥抗性包含選自由以下藥物組成的 組中的一種或多種抗癌藥物多西他賽、米托蒽醌、吉西他濱、卡培他濱、奧沙利鉬、干擾素、 舒尼替尼、索拉菲尼、順鉬或卡鉬、多柔比星、氨甲蝶呤、長春新堿、長春瑞濱、培美曲塞、吉 非替尼、依托泊苷、伊立替康、環磷酰胺、托泊替康、環磷酰胺、紫杉醇、絲裂霉素、貝伐單抗、 曲妥珠單抗、5-FU、西妥昔單抗、替莫唑胺、貝伐單抗、丙卡巴胼、CCNU和BCNU。
48.根據權利要求47的藥物組合物，其中所述的多藥抗性包含選自由以下藥物組成的 組中的一種或多種抗癌藥物多西他賽、米托蒽醌、吉西他濱、卡培他濱、奧沙利鉬、舒尼替 尼、索拉菲尼、順鉬、5-FU、西妥昔單抗、貝伐單抗、奧沙利鉬和伊立替康。
49.藥物組合物，其包含根據前述權利要求任一項所述的免疫脂質體，其中所述的免疫 脂質體封裝了多柔比星并且還包含抗體MAb C225或抗體EMD72000或其片段，其仍顯示所述抗體之一者或兩者的特異結合特性。
全文摘要
本發明涉及用于多重治療罹患癌癥、特別地由局部推進的或轉移性腫瘤所代表癌癥的人患者的免疫脂質體，并涉及在所述方法中使用的組合物。本發明還涉及免疫脂質體用于在癌癥療法中治療多藥抗性的用途。
文檔編號A61K39/395GK101878229SQ200880118058
公開日2010年11月3日 申請日期2008年9月26日 優先權日2007年9月28日
發明者C·羅赫利茨, C·馬莫特 申請人:巴塞爾大學醫院