專利名稱：酶育牛黃的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種酶育牛黃的制備方法，具體地說是一種根據牛黃成因，在 體外培養大腸桿菌，從菌體中提取大腸桿菌e-GA酶，植入牛、羊、豬等動物 膽汁中，催化牛、羊、豬等動物膽汁牛黃的有效成份俱沉，制備牛黃的方法。
二背景技術：
牛黃為名貴中藥，其療效神奇但又奇怪，有"黃金易得，牛黃難求"之說。
據悉我國中醫藥每年需要5噸牛黃，作為中成藥，如安宮牛黃丸等600多種中 成藥的主要成份；而實際需求量約200噸左右。據估計，我國年產牛黃400 700公斤，遠遠不能滿足需求，依靠進口不過是杯水車薪。所以自牛黃運用于 中藥以來， 一直處于奇缺狀態。為此，長期以來科研人員一直在研究牛黃的代 用品，雖然取得了一定的成果，但效果不夠理想。如:①人工牛黃組成中含的 是有害物質膽紅素，而不是有效成份膽紅素鈣，故療效不佳。②在牛膽囊內直 接接種牛黃，尚未成功。③2004年2月全國大力宣傳的"體外培育牛黃"，可 替代天然牛黃；實則不然，是膽紅素鈣等7種成份加入牛膽汁的混合物，是配 方；因缺乏牛黃的有效成份，根本不能替代天然牛黃；因而在當年的下半年就 放棄了該配方，抄襲酶法，所以所述的"體外培育牛黃"早已名存實亡。 酶 法生產的牛黃，是仿生學，經山東省藥檢所檢測，其成份、性質與天然牛黃一 致，可望替代天然牛黃。
三
發明內容
本發明的目的是提供在體外模擬牛黃成因酶法生產牛黃的酶育牛黃的制 備方法，其生產的牛黃可替代天然牛黃，滿足廣大群眾健康的需要；工藝簡單， 操作簡便；可實現工業^:生產，設備投資少，成本低，經濟效益和社會效益高。
為達到上述目的，本實用新型采取的技術方案是根據牛黃的成因，在體 外，利用大腸桿菌產出e-GA酶，結合祖傳秘方加硼砂，以牛、或羊、或豬等 動物膽汁為原料，通過酶促反應，便可大量生產牛黃。即在體外，培養大腸 桿菌，從大腸桿菌菌體中提取P-GA酶，再將^-GA酶加入到牛、或羊、或豬 等動物膽汁中，通過酶促反應，催化牛、羊、豬等動物膽汁牛黃的有效成份俱 沉，制備牛黃。本發明的工藝過程為-
1、 培養大腸桿菌將大腸桿菌培養于3.6 4.0%蛋白肉湯培養基中，35 38-C恒溫24小時后，以5000r/min離心沉淀18 22分鐘，棄去上清液，沉淀 后以pH6.8的三羥甲基氨基甲垸一鹽酸緩沖液洗滌，再離心沉淀，其沉淀物即 為大腸桿菌。
2、 提取3 -GA酶將上述大腸桿菌沉淀物10 15g加入400mlpH6. 8的三 羥甲基氨基甲烷一鹽酸緩沖液中混合均勻，置于超聲波槽中震蕩15 20分鐘， 再以4000r/min離心，取上清液，該清液即為大腸桿菌P-GA酶溶液。
3、 酶促反應將上述提取的大腸桿菌e-GA酶溶液28 32ml加入到新鮮 的3000ml牛、或羊、或豬等動物膽汁中，然后加入硼砂20 30g，攪拌均勻， 進行酶促反應，35 38。C恒溫24小時，該酶即催化牛、或羊、或豬等動物膽 汁中的牛黃有效份俱沉生成牛黃，即為本發明的牛黃。
本發明的特點①原料極為豐富；②工藝簡單，操作簡便；③設備少，投 資小，成本低，產出大；④由于本發明在生產的牛黃中加入了硼砂，硼與牛黃 的有效成分有機地結合，而不是簡單的混合，本發明生產的含硼的牛黃在傳統 的含牛黃的中成藥中，其治療效果等同于、有的甚至超過天然牛黃，且在治療 帶狀病毒所引起的神經疼、牙疼、皮膚過敏、口腔潰瘍等疾病有特效。⑤可實 現工業化生產，市場廣闊，經濟效益和社會效益大。具體實施例方式
本發明是一種酶育牛黃的制備方法，根據牛黃的成因，在體外，利用大腸 桿菌產出e-GA酶，結合祖傳秘方加硼砂，以牛、或羊、或豬等動物膽汁為原 料，通過酶促反應，便可大量生產牛黃。S卩在體外，培養大腸桿菌，從大腸 桿菌菌體中提取e-GA酶，再將3-GA酶加入到牛、或羊、或豬等動物膽汁中， 通過酶促反應，催化牛、羊、豬等動物膽汁牛黃的有效成份俱沉，制備牛黃。
本發明的工藝過程為
1、 培養大腸桿菌將大腸桿菌培養于3. 6 4. 0%蛋白肉湯培養基中，35 38。C恒溫24小時后，以5000r/min離心沉淀18 22分鐘，棄去上清液，沉淀 后以pH6.8的三羥甲基氨基甲烷一鹽酸緩沖液洗滌，再離心沉淀，其沉淀物即 為大腸桿菌。
2、 提取0 -GA酶將上述大腸桿菌沉淀物10 15g加入400mlpH6. 8的三羥甲基氨基甲烷一鹽酸緩沖液中混合均勻，置于超聲波槽中震蕩15 20分鐘， 再以4000r/min離心，取上清液，該清液即為大腸桿菌P-GA酶溶液。
3、酶促反應將上述提取的大腸桿菌e-GA酶溶液28 32ml加入到新鮮 的3000ml牛、或羊、或豬等動物膽汁中，然后加入硼砂20 30g，攪拌均勻， 進行酶促反應，35 38。C恒溫24小時，該酶即催化牛、或羊、或豬等動物膽 汁中的牛黃有效份俱沉生成牛黃，即為本發明的牛黃。
本發明的最佳實施方案其工藝過程為
1、 培養大腸桿菌將大腸桿菌培養于3. 7 3.8%蛋白肉湯培養基中，36 37。C恒溫24小時后，以5000r/min離心沉淀20分鐘，棄去上清液，沉淀后以 pH6.8的三羥甲基氨基甲烷一鹽酸緩沖液洗滌，再離心沉淀，其沉淀物即為大
腸桿菌o
2、 提取3 -GA酶將上述大腸桿菌沉淀物10 15g加入400mlpH6. 8的三 羥甲基氨基甲烷一鹽酸緩沖液中混合均勻，置于超聲波槽中震蕩15分鐘，再 以4000r/min離心，取上清液，該清液即為大腸桿菌P-GA酶溶液。
3、 酶促反應將上述提取的大腸桿菌e-GA酶溶液29 30ml加入到新鮮 的3000ml牛、或羊、或豬等動物膽汁中，然后加入硼砂26 28g，攪拌均勻， 進行酶促反應，36 37"C恒溫24小時，該酶即催化牛、或羊、或豬等動物膽 汁中的牛黃有效份俱沉生成牛黃，即為本發明的牛黃。
本發明的特點①原料極為豐富；②工藝簡單，操作簡便；③設備少，投 資小，成本低，產出大；④由于本發明在生產的牛黃中加入了硼砂，硼與牛黃 的有效成分有機的結合，而不是簡單的混合，本發明生產的含硼的牛黃在傳統 的含牛黃的中成藥中，其治療效果等同于、有的甚至超過天然牛黃，且在治療 帶狀病毒所引起的神經疼、牙疼、皮膚過敏、口腔潰瘍等疾病有特效。⑤可實 現工業化生產，市場廣闊，經濟效益和社會效益大。
權利要求
1、一種酶育牛黃的制備方法，其特征是在體外，培養大腸桿菌，從大腸桿菌菌體中提取β-GA酶，再將β-GA酶加入到牛、或羊、或豬膽汁中，通過酶促反應，催化牛、羊、豬膽汁牛黃的有效成份俱沉，制備牛黃；其工藝過程為①、培養大腸桿菌將大腸桿菌培養于3.6～4.0％蛋白肉湯培養基中，35～38℃恒溫24小時后，以5000r/min離心沉淀18～22分鐘，棄去上清液，沉淀后以pH6.8的三羥甲基氨基甲烷—鹽酸緩沖液洗滌，再離心沉淀，其沉淀物即為大腸桿菌；②、提取β-GA酶將上述大腸桿菌沉淀物10～15g加入400mlpH6.8的三羥甲基氨基甲烷—鹽酸緩沖液中混合均勻，置于超聲波槽中震蕩15～20分鐘，再以4000r/min離心，取上清液，該清液即為大腸桿菌β-GA酶溶液；③、酶促反應將上述提取的大腸桿菌β-GA酶溶液28～32ml加入到新鮮的3000ml牛、或羊、或豬膽汁中，然后加入硼砂20～30g，攪拌均勻，進行酶促反應，35～38℃恒溫24小時，該酶即催化牛、或羊、或豬膽汁中的牛黃有效份俱沉生成牛黃，即為本發明的牛黃。
2、根據權利要求1所述的酶育牛黃的制備方法，其特征是其工藝過程為① 、培養大腸桿菌:將大腸桿菌培養于3. 7 3. 8%蛋白肉湯培養基中，36 37。C恒溫24小時后，以5000r/min離心沉淀20分鐘，棄去上清液，沉淀后以 pH6.8的三羥甲基氨基甲烷一鹽酸緩沖液洗滌，再離心沉淀，其沉淀物即為大 腸桿菌；② 、提取P -GA酶將上述大腸桿菌沉淀物10 15g加入400mlpH6. 8的 三羥甲基氨基甲烷一鹽酸緩沖液中混合均勻，置于超聲波槽中震蕩15分鐘， 再以4000r/min離心，取上清液，該清液即為大腸桿菌P-GA酶溶^^;③ 、酶促反應將上述提取的大腸桿菌e-GA酶溶液29 30ml加入到新 鮮的3000ml牛、或羊、或豬膽汁中，然后加入硼砂26 28g,攪拌均勻，進 行酶促反應，36 37"C恒溫24小時，該酶即催化牛、或羊、或豬膽汁中的牛 黃有效份俱沉生成牛黃，即為本發明的牛黃。
全文摘要
一種酶育牛黃的制備方法。在體外，培養大腸桿菌，提取大腸桿菌β-GA酶，植入牛、羊、豬等動物膽汁中，催化膽汁牛黃的有效成份俱沉，制備牛黃的方法。即將大腸桿菌培養于3.6～4.0％蛋白肉湯培養基中，35～38℃恒溫24小時，離心沉淀后制取大腸桿菌沉淀物；再將該沉淀物10～15g加入400mlpH6.8的三羥甲基氨基甲烷—鹽酸緩沖液中，于超聲波槽中震蕩15～20分鐘，離心后取大腸桿菌β-GA酶溶液；將該溶液28～32ml加入到3000ml牛、羊、豬等動物膽汁中，加硼砂20～30g，進行酶促反應，35～38℃恒溫24小時，便制取本發明的牛黃。具有原料豐富；工藝簡單，操作簡便；設備少，投資小，成本低，效益高；治療效果等同于或超過天然牛黃；可實現工業化生產等特點。
文檔編號A61K35/413GK101474209SQ20091001398
公開日2009年7月8日 申請日期2009年1月23日 優先權日2009年1月23日
發明者劉化俠, 周和亭, 周春國, 孫兆會, 趙曉民, 高允生 申請人:劉化俠