苦參堿在制備抗類風濕性關節炎藥物中的應用

苦參堿在制備抗類風濕性關節炎藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及是一種生物堿類化合物--苦參堿在預防或 治療類風濕性關節炎藥物中的應用。
【背景技術】
[0002] 類風濕性關節炎（RA)是當前危害人類健康的最重要疾病之一，被稱為"不死的癌 癥"。RA是一種以多關節受累、滑膜炎癥、骨與軟骨破壞等為主要特征的慢性全身性自身免 疫炎性疾病，其發病機理至今尚未完全闡明，普遍認為與遺傳、感染和免疫調節等因素紊亂 密切相關（ImbodenJB.Theimmunopathogenesisofrheumatoidarthritis.AnnuRev PatholMechDis2009,4:417-434.)。我國RA的患病率約 0.3%-0.4%，約有 400 萬患 者，病程5-10年致殘率為60 %，晚期90 %患者喪失社會勞動力和生活自理能力，是成人勞 動力喪生的主要原因之一OaiSM,HanXH,ZhaoDB,ShiYQ,LiuY，MengJM.Prevalence ofrheumaticsymptoms,rheumatoidarthritis,ankylosingspondylitis,andgoutin Shanghai,China:aCOPCORDstudy.JRheumatol2003, 30:2245-2251.)，因此造成了很多 家庭問題以及巨大的社會負擔。現行治療類風濕性關節炎的方法主要有手術治療、化學藥 物治療和細胞因子類生物制劑的治療。一般認為外科手術只適用于晚期畸形病例，且費用 昂貴，對機體創傷較大；化學藥物如非留體抗炎藥、抗風濕藥和糖皮質激素等的長期應用會 引起胃腸道不適、骨髓抑制、肝損傷、高血壓等嚴重的不良反應；生物制劑在干預病變細胞 的同時，對正常細胞也同樣會產生一定的作用，干擾機體的固有免疫和適應性免疫，從而產 生較大的毒性和破壞機體防御作用的風險（1.張義浜，劉志敏，熊凌霜.類風濕關節炎發 病機制及其治療方法研宄進展.細胞與分子免疫學雜志，2005, 21 (增刊）：88-94. 2.Doan T,MassarottiE.RheumatoidArthritis:AnOverviewofNewandEmergingTherapies. JClinPharmacol2005,45:751-762.)。因此，尋求高效低毒的防治RA的藥物仍是世界醫 學界面臨的一項艱巨任務和難題。
[0003] 苦參堿（matrine)是從中藥苦參中分離得到的生物堿類化合物，結構式如式（I) 所示，屬于喹諾里西啶類生物堿。
[0004]
[0005] 苦參中富含此類生物堿，主要有苦參堿、槐果堿、氧化槐果堿、槐定堿等多種成 分，以苦參堿、氧化苦參堿含量最高。該類成分具有利尿、抗病毒、抗病原體、抗腫瘤以及 防治肝纖維化等活性（劉梅，劉雪英，程建峰.苦參堿的藥理研宄進展.中國中藥雜 志，2003, 9:801-804;朱曉偉，寶金榮，布仁.苦參堿和氧化苦參堿抗腫瘤作用研宄進 展.2009,SI:82-84.)。此外，苦參堿作為一種新型生物農藥，具有低毒、低殘留和綠色環 保等特點以及良好的病蟲害防治效果（趙素華，劉育儉，徐謙.天然植物源殺蟲劑世 綠（苦參堿）對桃蚜的胃毒及觸殺試驗.黑龍江生態工程職業學院學報.2007,3:54-55 ; 鄭方強，劉忠德.無公害殺蟲劑防治韭蛆的藥效試驗及苦參堿殺蟲作用的研宄.農 藥，2002, 6:26-28.)。
[0006] 至今未見苦參堿用于治療類風濕性關節炎方面的報道。

【發明內容】

[0007] 本發明的目的在于提供一種生物堿類化合物一苦參堿新的醫藥用途。
[0008] 本發明提供了苦參堿在制備預防或治療類風濕性關節炎藥物或食品中的應用。
[0009] 所述的藥物為：化合物苦參堿作為唯一活性成份，或包含化合物苦參堿的藥物組 合物。
[0010] 所述藥物中，化合物苦參堿的含量為0.l_99wt%，優選含量為0. 5-90wt%。
[0011] 所述的藥物組合物可以和藥劑學上的常規藥用輔料制成藥物制劑。
[0012] 所述的藥物制劑可以是片劑、、顆粒劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、滴丸、注射劑、 粉針劑，或氣霧劑等。
[0013] 本發明采用類風濕性關節炎動物模型（TrenthamDE,TownesAS,Kang AH.AutoimmunitytotypeIIcollagenanexperimentalmodelofarthritis. JExpMedl977, 146:857 -868；VijiV,KavithaSK,HelenA.Bacopamonniera(L.) WettstinhibitstypeIIcollagen-inducedarthritisinrats.PhytotherRes 2010, 24:1377 - 1383)，觀察本發明提供的化合物苦參堿灌胃給藥的治療作用。
[0014] 實驗結果顯示，苦參堿（80mg/kg)灌胃給藥后，可顯著降低RA大鼠關節炎指數，抑 制踝關節腫脹程度；下調大鼠血清中腫瘤壞死因子（TNF-a)、白介素1 0 (IL-1 0 )、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、白介素17 (IL-17)和基質金屬蛋白酶-3 (MMP-3)和基質金屬蛋白 酶-9 (MMP-9)水平；病理切片顯示，苦參堿可顯著減少滑膜增生及炎性細胞浸潤。上述研宄 表明，苦參堿具有良好的抗RA活性。
[0015] 本發明尋找到了安全有效的防治RA藥物。
【附圖說明】
[0016] 圖1苦參堿對II型膠原誘導RA模型大鼠左后足關節炎指數的影響（*VS模型組， p〈0. 05;**vs模型組，p〈0. 01)。
[0017] 圖2苦參堿對II型膠原誘導RA模型大鼠左后足足腫脹的抑制作用（meanSD，n= 10)(*vs模型組，p〈0. 05;#vs模型組，p〈0. 01)。
[0018] 圖3苦參堿對II型膠原誘導RA模型大鼠關節組織病理切片的影響（X40)，其中 A為正常組，B模型組，C陽性藥組，D為苦參堿組。
【具體實施方式】
[0019] 現結合實施例，對本發明作詳細描述，但本發明的實施不僅限于此。
[0020] 實施例中所用苦參堿，購自上海詩丹德生物技術有限公司，經HPLC檢測純度 彡 98%〇
[0021] 實施例1:苦參堿的抗類風濕性關節炎藥效學實驗
[0022] 1.1實驗材料
[0023] 成年雄性180~220gSD大鼠（第二軍醫大學實驗動物中心提供）40只，大鼠血清 TNF-a、IL-1的ELISA試劑盒（美國Sigma公司）。主要儀器：足趾容積測量儀（YLS-7A，山 東省醫學科學院設備站）、酶標儀（BIO-RAD550)、離心機（Labofuge400R，Heraeus公司）、 電子天平（FA110A型，上海精密科學儀器有限公司）。
[0024] 1. 2實驗造模及給藥
[0025] 實驗前將40只大鼠稱重，按體質量隨機分為4組，每組10只，自由飲食、進水。分 為空白組、模型組、陽性藥組和苦參堿組。空白組：不予任何處理；模型組：將牛II型膠原 蛋白醋酸溶液與等容量的弗氏不完全佐劑混合，充分乳化。第〇天，SD大鼠尾根進行皮內 注射（lmg/ml)，每只0.lml;7日后，加強免疫，大鼠尾根用0.lml/只溶液注射作為激發注 射，第15日左右造成RA動物模型；陽性藥組：地塞米松，0.05mg/kg，灌胃給藥，每日1次； 苦參堿組：自造模成功之日起，給予大鼠苦參堿，灌胃給藥，每日1次，劑量為80mg/kg，連續 給藥30d。
[0026] 1. 3觀察指標
[0027] (1)對大鼠關節腫脹程度進行關節炎指數評分，每3天評分一次。
[0028] (2)用足趾容積測量儀測量大鼠足趾腫脹程度，每3天測量一次。
[0029] (3)在實驗結束次日，大鼠尾部靜脈取血，置冰浴30min后，以2000r/min離心 15min，取上清，用ELISA法測定兩組大鼠血清中TNF-a、IL-1、IL-6、IL-8、IL-17和MMP-2、 MMP-3、MMP-9水平，按試劑盒說明書進行操作。
[0030] (4)取大鼠踝關節骨組織進行病理切片檢查。
[0031] 1.4實驗結果
[0032] 采用SPSS14. 0對兩組數據進行兩樣本t檢驗統計學分析，P〈0. 05時認為差異有 統計學意義。
[0033] (1)大鼠關節炎指數評分
[0034] 如圖1所示，給藥第30天，苦參堿組左后足關節炎指數為0.6±0. 5,模型組左后足 關節炎指數為1.8±0.8,苦參堿可顯著降低II型膠原誘導的RA大鼠左后足關節炎指數，與 模型組相比存在顯著性差異，表明苦參堿對大鼠類風濕性關節炎模型有較好的治療作用。
[0035] (2)大鼠足趾腫脹度
[0036] 如圖2所示，空白組大鼠左后足趾無明顯改變，模型組有明顯的腫脹，與空白組存 在顯著性差異，提示造模成功；給藥第30天，苦參堿組左后足體積為1681. 7± 178.8,模型 組左后足體積為2037. 3±188.6,苦參堿給藥組大鼠在實驗后期左后足趾腫脹程度減輕，與 模型組相比存在顯著性差異，表明苦參堿對大鼠類風濕性關節炎模型有較好的治療作用。
[0037] (3)血清學指標
[0038] 如表1所示，與模型組相比，苦參堿能顯著降低血清中TNF-a、IL-1、IL-6、IL-8、 IL-17和MMP-3、MMP-9的水平，說明苦參堿（80mg/kg)灌胃給藥能顯著降低類風濕性關節 炎動物模型血清中的關鍵促炎細胞因子及骨質破壞相關因子的水平，可有效緩解RA大鼠 的炎癥反應及骨質破壞。
[0039] 表1苦參堿對II型膠原誘導RA模型大鼠血清中細胞因子水平的影響 (mean土SD,n=8)
[0041](注：*vs模型組，p〈0. 05 ;**vs模型組，p〈0. 01)
[0042] (4)病理切片
[0043] 如圖3所示，模型組大鼠病理組織切片顯示滑膜增生和炎性細胞浸潤嚴重，陽性 藥地塞米松和苦參堿給藥后均可顯著減少滑膜增生及炎性細胞浸潤，提示苦參堿可有效抑 制RA模型大鼠的炎癥損傷及關節骨質破壞。
[0044] 鑒于上述藥效實驗評價結果，本發明的生物堿類化合物苦參堿具有顯著抗類風濕 性關節炎活性，因此可用于制備抗類風濕性關節炎藥物。
[0045] 以上已對本發明創造的較佳實施例進行了具體說明，但本發明創造并不限于所述 實施例，熟悉本領域的技術人員在不違背本發明創造精神的前提下還可作出種種的等同的 變型或替換，這些等同的變型或替換均包含在本申請權利要求所限定的范圍內。
【主權項】
1. 苦參堿在制備預防或治療類風濕性關節炎藥物或食品中的應用。2. 根據權利要求1所述的苦參堿在制備預防或治療類風濕性關節炎藥物或食品中的 應用，其特征在于，所述的藥物為苦參堿作為唯一活性成份，或包含苦參堿的藥物組合物。3. 根據權利要求1所述的苦參堿在制備預防或治療類風濕性關節炎藥物或食品中的 應用，其特征在于，所述藥物中苦參堿的含量為〇. l_99wt%。4. 根據權利要求1所述的苦參堿在制備預防或治療類風濕性關節炎藥物或食品中的 應用，其特征在于，所述藥物中苦參堿的含量為〇. 5-90wt%。5. 根據權利要求2所述的苦參堿在制備預防或治療類風濕性關節炎藥物或食品中的 應用，其特征在于，所述的藥物組合物和藥劑學上的常規藥用輔料制成藥物制劑。6. 根據權利要求5所述的苦參堿在制備預防或治療類風濕性關節炎藥物或食品中的 應用，其特征在于，所述的藥物制劑是片劑、、顆粒劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、滴丸、注射 劑、粉針劑，或氣霧劑。
【專利摘要】本發明涉及醫藥技術領域，本發明涉及生物堿類化合物苦參堿在制備抗類風濕性關節炎藥物中的應用。本發明通過II型膠原誘導的大鼠類風濕性關節炎模型證實了苦參堿可顯著改善類風濕性關節炎大鼠癥狀，具有良好的抗類風濕性關節炎作用。本發明涉及的化合物苦參堿可用于制備抗類風濕性關節炎藥物，為尋求安全有效的抗類風濕性關節炎藥物提供了一種新的來源。
【IPC分類】A23L1/29, A61P19/02, A61K31/4375, A61P29/00
【公開號】CN104940198
【申請號】CN201510291942
【發明人】蒲江, 鄭承劍, 韓婷, 張巧艷, 蔣益萍
【申請人】中國人民解放軍第二軍醫大學
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2015年6月1日