一種具有抗類風濕關節炎作用的鐵包金多糖制劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于中藥制藥工程領域，涉及一種具有抗類風濕關節炎作用的多糖制劑， 特別是以鐵包金為原料，提取出鐵包金多糖并制成的中藥制劑方法。
【背景技術】
[0002] 類風濕關節炎（RheumatoidArthritis，RA)是一種常見的以關節滑膜炎為特征的 慢性全身性自身免疫性疾病，滑膜炎持久反復發作，導致關節內軟骨及骨的破壞，關節功能 障礙，終致殘廢。
[0003] 本病發病率很高，流行病學調查結果顯示，國外類風濕關節炎的患病率約為1%，個 別地區甚至高達5%，國內則為0. 32-0. 38%。RA病因復雜多樣，尚不明確，目前臨床上所使用 的各種藥物或方案療法有的毒副作用大，有的治療療效效果差。因此，開發一種安全、有效 的用于治療RA和改善癥狀的新藥具有積極意義。
[0004] 鐵包金Berchemialineate(L.)DC?是鼠李科植物老鼠耳的干燥根。生于低海拔 的山野、矮林、路旁、坡地及丘陵，分布于我國福建、臺灣、湖南、廣東、廣西等地。多以莖根和 根入藥，具有清熱利濕、止咳等功效。已經有人對鐵包金進行過相關的藥理研究，發明人在 前期研究基礎上，不斷探索鐵包金治療類風濕關節炎的有效部分或有效成份，并將其制備 成治療類風濕關節炎的中藥制劑，經查新，未見用鐵包金多糖研制治療類風濕關節炎藥物 的報道。
【發明內容】
[0005] 本發明人根據現代藥理研究方法，依據類風濕關節炎相關的藥效學研究指導原 貝1J，開展了一系列的治療類風濕關節炎的研究工作，研究表明鐵包金多糖具有抗類風濕關 節炎的作用。發明人將鐵包金多糖制成多種制劑，并優化了多糖的制備方法。
[0006] 一、鐵包金多糖的提取方法： 鐵包金粗粉，加8-20倍水煎煮，濾液過濾，加聚酰胺脫色后濾過，濾液加澄清劑除雜， 濾液過S-8樹脂，流出液濃縮，醇沉，收取沉淀物，即得。
[0007] 實施例一： 鐵包金粗粉，加8倍量水煎煮2次，煎液過濾，加入聚酰胺脫色，過濾，濾液加入ZTC1+1 澄清劑除去雜質，取濾液過S-8樹脂柱，將流出液濃縮，加入質量比為95%的酒精醇沉至含 醇量為60%，收取沉淀即得鐵包金多糖。
[0008] 實施例二： 取鐵包金粗粉，加20倍水，煎煮2小時，提取2次，提取液過濾，聚酰胺脫色2小時，過 濾，濾液加入ZTC1+1澄清劑除去雜質，濾液過S-8樹脂，流出液濃縮，加入95%酒精至含醇 量為60%，收取沉淀物，即得含量>66%的鐵包金多糖。
[0009] 二、鐵包金多糖制劑的制備 具有抗類風濕關節炎(治療類風濕關節炎）作用的鐵包金多糖制劑的特征在于：以重量 計，鐵包金多糖在中藥制劑中所占的比例為0. 1%~99. 9%，余量為藥劑輔料。
[0010] 鐵包金多糖按常見的制劑制備方法，加入藥劑輔料混勻，制成常見中藥制劑。
[0011] 實施例一： 取鐵包金多糖0.lg，置于混合器中，加入藥用淀粉至l〇〇g，混勻，制成顆粒，裝袋，即得 鐵包金多糖顆粒劑。
[0012] 實施例二： 取鐵包金多糖55g，置于混合器中，加入蔗糖粉至100g，混勻，制成顆粒，壓片，即得鐵 包金多糖片劑。
[0013] 實施例三： 取鐵包金多糖99. 9g，置于混合器中，加入潤滑劑至100g，混勻，分裝，即得鐵包金多糖 散劑。
[0014] 三、鐵包金多糖的藥理學試驗 (一） 動物藥理實驗 對大鼠佐劑性關節炎的影響 取雄性大鼠5 0只，隨機分成空白對照組（10ml蒸餾水/kg)，鐵包金多糖高中低（0.5、 0. 25、0. 125g/kg)劑量組，陽性對照阿斯匹林（0. 2g/kg)組，每組10只。口服灌胃給藥每天 1次，連續6d，末次給藥后45min，測量左右后肢踝關節周長，于右后足內注射弗氏完全佐劑 致炎，致炎后第3天測量致炎右后足體積，以腫脹度（致炎前、后足體積差值）為指標，結果 見表1。
[0015] 表1對大鼠佐劑性關節炎的影響
與空白對照組比較：*K〇. 05; 01 結果表明，與白對照組比較，鐵包金多糖大中小劑量組均可顯著抑制右后足跖的腫 脹。顯示較強的對抗佐劑性關節炎作用。
[0016] (二） 體外細胞實驗 成纖維樣滑膜細胞（fibroblast-likesynoviocytes,FLS)增殖是類風濕關節炎（RA) 的主要病理特征，過度增殖的FLS分泌細胞因子、趨化因子、粘附分子和蛋白酶等，在關節 破壞的發病機制中發揮重要作用。另外，FLS是炎性滑膜組織中數量最多的細胞類型，在炎 性條件下FLS類似腫瘤細胞樣瘋狂增長促進滑膜組織異常增生是RA炎癥最重要的病理表 現，因此，FLS成為了近年來RA治療研究的新熱點，從滑膜組織中分離培養FLS成為研究藥 物治療及作用機制理想的體外細胞模型。
[0017] 1.佐劑性關節炎大鼠（AA)滑膜細胞的準備 模型的建立及細胞的分離： 取180-200g雄性Wistar大鼠，于右后足底注射0. 3ml弗氏完全佐劑，于造模后26天 取造模成功大鼠，處死后浸于75%乙醇液約8分鐘后取出于超凈工作臺，局部碘伏及75%乙 醇消毒膝關節.從正中縱行切開皮膚.暴露膝關節，打開關節腔，繼續向下分離，取位于關 節囊內層的滑膜組織。將滑膜組織在PBS中漂洗后，于小燒杯中剪成1_3左右大小，再以 含20%胎牛血清的DMEM培養液充分漂洗，至洗液清透后，吸取數小塊均勻排列在培養瓶的 底壁上后翻轉培養瓶，使瓶底朝上，置含5%C02的培養箱中37°C培養12-24h，使其貼壁，再 加入含20%胎牛血清的DMEM培養液，加入量為液體剛覆蓋組織塊，繼續培養，每2天左右換 1次培養液，待有大量成纖維樣細胞（FLS)長出組織塊后去除組織塊繼續培養，取3-5代細 胞用于實驗。
[0018] 2.MTT比色法檢測藥物對細胞增殖的作用 (1)實驗方法：取處于對數生長期的滑膜細胞，經0. 25%胰酶消化后，反復吹吸使成單 細胞懸液，調整細胞濃度1X104個/ml，接種于96孔細胞培養板，每孔200y1，于37°C、 5%C02條件下培養48小時，各組加入20y1各濃度藥物，每組8個孔，空白組加同體積含增 溶劑的PBS液，繼續培養，分別于加藥12h、24h、48h后加入MTT溶液（5mg/ml)20y1/孔，繼 續培養4小時，棄上清液，加入二甲基亞砜（150y1/孔）室溫震蕩10分鐘使結晶充分溶解 后，用酶標儀測于490nm波長處的0D值，記錄實驗結果。采用SPSS17. 0統計軟件分析數據， 所得實驗數據以均數土標準差（)表示，采用t檢驗作組間比較差異顯著性。根據0D 值，代入公式：細胞抑制率（%) =1-細胞存活率=(1-用藥組0D值/對照組0D值）X100%， 計算滑膜細胞存活率與細胞抑制率（IR)。
[0019] (2)實驗結果 藥物處理FLS不同時間細胞增殖活性的變化（n=8)
與空白對照組比較：*K〇. 05; 01 結果表明，與空白對照組相比，在藥物干預12h、24h、48h時，鐵包金多糖低劑量、 鐵包金總黃酮低中劑量雖有抑制FLS增殖的趨勢，但不明顯，沒有顯示出統計學顯著性 差異（/M). 05);鐵包金多糖中高劑量和鐵包金總黃酮的高劑量可明顯抑制FLS的增殖 (K0. 05)，說明鐵包金多糖及鐵包金總黃酮組分均有抑制FLS增殖的作用。
【主權項】
1. 一種具有抗類風濕關節炎作用的鐵包金多糖制劑，其特征在于：以重量計，鐵包金 多糖在中藥制劑中所占的比例為0. 1%~99. 9%，余量為藥劑輔料，按常規制劑方法制成常 見藥物劑型。2. 如權利要求項1所述的具有抗風濕關節炎作用的鐵包金多糖制劑的原料鐵包金多 糖的制備方法，其特征為：取鐵包金粗粉，加8-20倍水煎煮，濾液過濾，加聚酰胺脫色后濾 過，濾液加澄清劑除雜，濾液過S-8樹脂，流出液濃縮，醇沉，收取沉淀物，即得。3. 如權利要求項1所述的具有抗風濕關節炎作用的鐵包金多糖制劑其特征在于：原料 鐵包金多糖優化后的制備方法是取鐵包金粗粉，加20倍水，煎煮2小時，提取2次，提取液 過濾，聚酰胺脫色2小時，過濾，濾液加入ZTC1+1澄清劑除去雜質，濾液過S-8樹脂，流出液 濃縮，加入95%酒精至含醇量為60%，收取沉淀物，即得含量>66%的鐵包金多糖。4. 如權利要求項1所述的具有抗風濕關節炎作用的鐵包金多糖制劑，其特征在于該制 劑應用于治療類風濕關節炎疾病。
【專利摘要】本發明涉及一種具有抗類風濕關節炎作用的鐵包金多糖制劑的制備方法。該多糖系從藥材鐵包金中提取獲得。以鐵包金多糖為原料，然后采用藥物制劑成型的常用方法，制備成臨床使用的藥物。藥理實驗結果表明，該制劑具有抗類風濕關節炎作用。
【IPC分類】A61K31/715, A61P29/00, A61P19/02, A61K36/72
【公開號】CN105055437
【申請號】CN201510418714
【發明人】吳玉強, 羅軼, 熊易
【申請人】廣西中醫藥大學
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年7月16日