血滿草提取物的制備方法及其在類風濕性關節炎中的應用
【專利摘要】本發明公開了血滿草提取物的制備方法及其在類風濕性關節炎中的應用，涉及植物提取物及其制備方法和應用技術領域，本發明通過將血滿草粉粹后、加入5～10倍量的溶劑，在35?100℃下，反復萃取4次，再加熱濃縮溶液、干燥冷凍，得到血滿草提取物，將所制得的血滿草提取物應用于治療Ⅱ型膠原蛋白誘導的大鼠類風濕性關節炎，結果表明，本發明的血滿草提取物能夠顯著改善弗氏佐劑誘發的類風濕性關節炎導致的大鼠的足腫脹水平，并能顯著降低血清中炎癥因子IL?6水平，且對大鼠進食量沒有產生影響。
【專利說明】
血滿草提取物的制備方法及其在類風濕性關節炎中的應用
技術領域
[0001] 本發明設及植物提取物及其制備方法和應用技術領域，具體設及血滿草提取物的 制備方法及其在類風濕性關節炎中的應用。
【背景技術】
[0002] 類風濕性關節炎是一種慢性、炎性、系統性、累及多關節滑膜炎病變的自身免疫性 疾病，W關節和關節組織非化脈性炎癥為主要特征，主要表現為關節滑膜炎，終致關節的軟 骨、初帶、肌腫等各種組織W及多臟器損害。類風濕性關節炎多侵犯肢體小關節，如手、足及 腕關節等，未經系統治療的類風濕性關節炎可反復遷延多年，最終導致關節崎形、功能喪 失，中醫認為肝腎虧損，外邪深侵入肝腎，濕與風寒、風熱、疲疲相夾，阻于經絡，耗損肝腎， 傷骨損筋是其突出的病因病機特點。類風濕性關節炎在我國發病率約0.4%，且女性高于男 性。由于類風濕性關節炎致殘率較高，嚴重影響病人及其家屬的生活質量。目前該病沒有特 效藥物，臨床上主要W非醬體抗炎藥、糖皮質激素類藥物W及改善病情的抗風濕藥(DMARD) 進行維持治療，但從長期來看并不能有效控制病程的發展。此外，化學藥物具有很大的不良 反應，許多患者無法承受，且存在由于不當的化學藥物治療所致藥源性關節炎的風險，中醫 治療風濕性關節炎的傳統方法主要是通過將活血行氣的藥物外敷在患處，進行治療，運種 方哇雖然安全性高，但是它的作用效果緩慢，只能起到緩解病癥的癥狀，而無法根治類風濕 關節炎。
[0003] 本發明將血滿草應用于治療和緩解類風濕關節炎，血滿草性溫、味甘、辛、歸脾、腎 經，具有活血行氣，桂疲通絡，通搏止痛的功效，能標本兼顧，扶正桂邪，桂除外邪，歲治療跌 打損傷、骨折、風濕疼痛、扭傷疲痛，急慢性腎炎等癥狀由顯著的療效。
【發明內容】
[0004] 針對現有技術的不足，本發明提供了一種血滿草提取物的制備方法，它具有簡單， 溫度控制容易，等優點，特別適于工業化大生產，本發明還提供一種血滿草提取物在類風濕 性關節炎中的應用，它能夠有效地治療和緩解類風濕性關節炎，降低血清中炎癥因子IL-6 水平。
[0005] 為實現W上目的，本發明通過W下技術方案予W實現：
[0006] -種血滿草提取物的制備方法，包括W下步驟：
[0007] 將血滿草洗凈去根，經粉碎后，加入5~10倍量的溶劑，提取0.5-2地，提取溫度為 35-100°C，然后過濾，得到濾液和濾渣，W相同的方法反復萃取濾渣4次，然后將4次得到的 濾液合并，然后濃縮，濃縮過程中回收溶劑，將濃縮物冷凍干燥得血滿草提取物。
[000引所述萃取血滿草的方法為溶劑溫浸法、加熱回流法、超聲波提取法或微波提取法。
[0009] 優選的，所述的溶劑為水、乙醇或水和乙醇的任意比混合物。
[0010] 本發明還提供一種血滿草提取物在類風濕性關節炎中的應用，所述血滿草提取物 用于制備治療和緩解類風濕性關節炎的藥物或食品。
[0011] 優選的，所述用于治療和緩解類風濕性關節炎的藥物的劑型為顆粒劑、片劑、膠囊 劑、丸劑、滴丸劑、日服液、泡騰片、浸膏劑、糖漿劑、注射劑、緩釋劑、控釋劑或祀向制劑。
[0012] 優選的，所述治療和緩解類風濕性關節炎的藥物中還含有防腐劑、賦形劑、潤滑 劑、抗氧化劑、著色劑、甜味劑、有機溶劑等添加劑的一種或多種。
[0013] 優選的，所述血滿草提取物賦形劑，為乳糖、白糖、D-甘露醇、淀粉、結晶纖維素中 一種或多種。
[0014] 優選的，所述潤滑劑為硬脂酸儀、硬脂酸巧、滑石粉中的一種或多種。
[0015] 優選的，所述有機溶劑為水、乙醇、丙二醇中的一種或多種。
[0016] 優選的，所述防腐劑為氯下醇、二徑基乙酸中一種或兩種。
[0017] 優選的，所述抗氧化劑為亞硫酸鹽、抗壞血酸中一種或兩種。
[0018] 本發明的有益效果，本發明通過簡單的萃取法對血滿草進行提取，它的溫度控制 容易，萃取效果好，材料的利用率高，且方法簡單易行，沒有繁瑣復雜的操作，特別適于工業 化大生產;本發明的血滿草提取物的處理方法簡單，可W制成多種中藥劑型，能滿足不同患 者的需求，通過動物實驗證明，本發明的血滿草提取物能夠顯著改善弗氏佐劑誘發類風濕 性關節炎大鼠的足腫脹水平，并能顯著降低血清中炎癥因子IL-6水平，且對大鼠進食量沒 有產生影響，因而能夠有效地治療和緩解類風濕性關節炎，且不會對機體產生副作用。
【具體實施方式】
[0019] 為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合本發明實施例， 對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例是本發明一部 分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出 創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
[0020] 實施例1:
[0021] -種血滿草提取物的制備方法，其包括W下步驟：
[0022] 將250g去根血滿草粉末洗凈，加水2500ml，在80°C下浸泡化，過濾，收集濾液，將濾 渣用上述方法反復提取四次，合并濾液，然后濃縮，濃縮過程中回收溶劑，經冷凍干燥得血 滿草提取物。
[0023] 在血滿草提取物中加入乳糖、結晶纖維、硬脂酸儀、二徑基乙酸、抗壞血酸，混合均 勻后，制成用于治療類風濕性關節炎的顆粒劑藥物。
[0024] 實施例2:
[0025] -種血滿草提取物的制備方法，其包括W下步驟：
[0026] 將250g去根血滿草粉末洗凈，加入1250ml乙醇，在80°C下加熱回流30min，然后過 濾，收集濾液，將濾渣用上述方法反復提取四次，合并濾液，然后濃縮，濃縮過程中回收溶劑 乙醇，經冷凍干燥得血滿草提取物。
[0027] 在血滿草提取物中加入乳糖、D-甘露醇、硬脂酸儀、二徑基乙酸、抗壞血酸、水，混 合均勻后，制成治療類風濕性關節炎的糖漿劑藥物。
[002引實施例3:
[0029] -種血滿草提取物的制備方法，其包括W下步驟：
[0030] 將250g去根血滿草粉末洗凈，1500血水和乙醇的混合物(V水:V雄二1:1)，在微波環 境中萃取30-45min，微波頻率為1000~2400MHz，萃取溫度為60°C，過濾，收集濾液，將濾渣 用上述方法反復提取四次，合并濾液，然后濃縮，濃縮過程中回收溶劑，經冷凍干燥得血滿 草提取物。
[0031] 在血滿草提取物中加入乙醇、丙二醇、水、二徑基乙酸、抗壞血酸混合，制成顆粒劑 藥物，制成治療類風濕性關節炎的注射劑藥物。
[0032] 實施例4:
[0033] -種血滿草提取物的制備方法，其包括W下步驟：
[0034] 將250g去根血滿草粉末洗凈，加水2500ml，在100°C下浸泡2地，過濾，收集濾液，將 濾渣用上述方法反復提取四次，合并濾液，然后濃縮，濃縮過程中回收溶劑，經冷凍干燥得 血滿草提取物。
[0035] 在血滿草提取物中加入乳糖、淀粉、結晶纖維、氯下醇、抗壞血酸混合，制成治療類 風濕性關節炎的片劑藥物。
[0036] 實施例5:
[0037] -種血滿草提取物的制備方法，其包括W下步驟：
[003引將250g去根血滿草粉末洗凈，加入2000ml水和乙醇的混合物(V水:V雄二2:1)，超聲 萃取化，萃取溫度為30-35°C，超聲的頻率為2800-3000W，過濾，收集濾液，將濾渣用上述方 法反復提取四次，合并濾液，然后濃縮，濃縮過程中回收溶劑，經冷凍干燥得血滿草提取物。
[0039] 在血滿草提取物中加入硬脂酸硬脂酸儀、滑石粉儀、二徑基乙酸、乙醇、氯下醇混 合，制成治療類風濕性關節炎的浸膏。
[0040] 本發明中血滿草提取物藥效學研究
[0041 ] 1、動物模型：實驗動物采用雄性大鼠，體重180-220g的Wistar大鼠，購自成都達碩 生物科技有限公司；大鼠飼料購自成都達碩生物科技有限公司；實驗大鼠在清潔級層流架 中飼養，環境溫度控制為23 ± 2 °C，相對濕度為75 ± 10 %，照明時間12h/d(7:00-19:00)。 [0042] 2、分組及給藥:將實驗大鼠隨機分為4組，每組10值，分別為正常組、模型組、陽性 藥物組、血滿草提取物低劑量組。各組分分別給予下屬治療藥物:正常組為正常飼養，不注 射任何藥物;模型組只注射Π 型膠原蛋白；陽性藥物組注射嗎I噪美辛，注射量為200mg/kg/ day;血滿草提取物低劑量組注射血滿草提取物，注射量為1 OOmg/kg/day。
[00創 3、測試方法：
[0044] (1)血滿草提取物對Π 型膠原蛋白誘導的大鼠類風濕性關節炎后足腫脹及模型進 食量的影響
[0045] 給予各組大鼠連續灌胃相應受試物54天，第25天測各組大鼠進食量，第26天測各 組大鼠左右后足體積，然后向模型組和給藥組大鼠右后足注射含牛Π 型膠原的完全弗氏佐 劑，注射計量為O.lmL/只。第32天測各組大鼠進食量，第33天測各組大鼠左右后足體積，再 分別向模型組和給藥組大鼠右后足注射含牛Π 型膠原不完全弗氏佐劑，注射計量為O.lmL/ 只，進行二次免疫。然后每隔7天測一次進食量和左右后足體積。
[0046] 表一血滿草提取物對Π 型膠原蛋白誘導的大鼠類風濕性關節炎后足腫脹的影響 (與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01)
[0047]
[0050] 結果如表一和表二所示，二次免疫14天后實驗動物后足發生明顯腫脹，且右足腫 脹程度超過左足，血滿草提取物和陽性藥均能顯著緩解炎癥造成的足腫脹，且血滿草提取 物對大鼠進食量沒有明顯影響。
[0051] (2)血滿草提取物對Π 型膠原蛋白誘導的大鼠類風濕性關節炎模型血清中炎癥因 子水平的影響
[0052] 給藥方案同（1)，實驗第54天，末次給藥化后，向大鼠腹腔注射麻醉劑，取大鼠腹主 動脈血液，然后離屯、取血清，采用化ISA試劑盒檢測血清中IL-6水平。
[0053] 表Ξ血滿草提取物對Π 型膠原蛋白誘導的大鼠類風濕性關節炎模型血清中炎癥 因子含量的影響（與正常組比較，A P<0.05，與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01)
[0化4]
血滿草組 I 100 I 22.24±5.35**
[0化日]結果如表Ξ所示，與正常組相比，模型組血清IL-6水平升高，血滿草提取物與陽性 藥均可顯著降低IL-6水平。
[0056] 實驗數據WMean±SD表示，應用SPSS 19.0軟件進行數據處理，符合正態分布且方 差齊的數據進行單因素方差分析;方差不齊的數據則用非參數檢驗，P<〇.05有統計學意義。
[0057] 綜上，本發明實施例具有如下有益效果:本發明所述的研究內容提示血滿草提取 物能夠明顯緩解類風濕性關節炎造成的足腫脹，并顯著降低炎癥因子水平，它能夠改善類 風濕性關節炎造成的諸多臨床癥狀，且不會對機體產生副作用;此外，本發明的血滿草提取 物的制備方法簡單，溫度控制容易，性狀好，特別適于工業化大生產。
[0058] 需要說明的是，在本文中，諸如第一和第二等之類的關系術語僅僅用來將一個實 體或者操作與另一個實體或操作區分開來，而不一定要求或者暗示運些實體或操作之間存 在任何運種實際的關系或者順序。而且，術語"包括"、"包含"或者其任何其他變體意在涵蓋 非排他性的包含，從而使得包括一系列要素的過程、方法、物品或者設備不僅包括那些要 素，而且還包括沒有明確列出的其他要素，或者是還包括為運種過程、方法、物品或者設備 所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句"包括一個……"限定的要素，并不排除在 包括所述要素的過程、方法、物品或者設備中還存在另外的相同要素。
[0059] W上實施例僅用W說明本發明的技術方案，而非對其限制；盡管參照前述實施例 對本發明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解:其依然可W對前述各實施 例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換;而運些修改或者 替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發明各實施例技術方案的精神和范圍。
【主權項】
1. 一種血滿草提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 將血滿草洗凈去根，經粉碎后，加入5~10倍量的溶劑，提取O . 5-24h，提取溫度為35-100 °C，然后過濾，得到濾液和濾渣，以相同的方法反復萃取濾渣4次，然后將4次得到的濾液 合并，濃縮濾液，濃縮過程中回收溶劑，將濃縮產物冷凍干燥得血滿草提取物。 所述提取血滿草的方法為溶劑溫浸法、加熱回流法、超聲波提取法或微波提取法。2. 如權利要求1所述的血滿草提取物的制備方法，其特征在于，所述溶劑為水、乙醇或 水和乙醇的任意比混合物。3. -種如權利要求1或2所述的血滿草提取物在類風濕性關節炎中的應用，其特征在 于，所述血滿草提取物用于制備治療和緩解類風濕性關節炎的藥物或食品。4. 如權利要求3所述的血滿草提取物在類風濕性關節炎中的應用，其特征在于，所述用 于治療和緩解類風濕性關節炎的藥物的劑型為顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、滴丸劑、口服 液、泡騰片、浸膏劑、糖漿劑、注射劑、緩釋劑、控釋劑或靶向制劑。5. 如權利要求4所述的血滿草提取物在類風濕性關節炎中的應用，其特征在于，所述治 療和緩解類風濕性關節炎的藥物中還含有防腐劑、賦形劑、潤滑劑、抗氧化劑、著色劑、甜味 劑、有機溶劑等添加劑的一種或多種。6. 如權利要求5所述的血滿草提取物在類風濕性關節炎中的應用，其特征在于，所述血 滿草提取物賦形劑，為乳糖、白糖、D-甘露醇、淀粉、結晶纖維素中一種或多種。7. 如權利要求6所述的血滿草提取物在類風濕性關節炎中的應用，其特征在于，所述潤 滑劑為硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石粉中的一種或多種。8. 如權利要求7所述的血滿草提取物在類風濕性關節炎中的應用，其特征在于，所述有 機溶劑為水、乙醇、丙二醇中的一種或多種。9. 如權利要求8所述的血滿草提取物在類風濕性關節炎中的應用，其特征在于，所述防 腐劑為氯丁醇、二羥基乙酸中一種或兩種。10. 如權利要求9所述的血滿草提取物在類風濕性關節炎中的應用，其特征在于，所述 抗氧化劑為亞硫酸鹽、抗壞血酸中一種或兩種。
【文檔編號】A61K36/35GK105920077SQ201610421757
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年6月15日
【發明人】王文靜, 李維熙, 王葳, 呂小滿, 陳飛龍, 劉冬麗, 況秀平, 張美
【申請人】云南中醫學院