專利名稱：一種從黃杞葉中提取落新婦甙的方法
技術領域：
本發明涉及一種黃杞葉提取物的制備方法，具體地說，涉及一種從黃杞葉中提取落新婦甙的方法。
背景技術：
黃杞葉為胡桃科植物黃杞的干燥葉，該植物分布于廣東、廣西、云南等省，資源豐富，具有清熱止痛之功效，用于治療感冒發熱、疝氣腹痛。民間常作茶飲，可預防高血壓、并有降血脂作用，從該植物或同屬植物中分離得到落新婦甙等化學成分，具有抗癌作用。研究還表明，落新婦甙在機體抗排斥方面也發揮著重大作用落新婦甙能使經植物血凝素激活的T淋巴細胞發生凋亡，并且能使肝炎肝臟周圍浸潤的活化T細胞發生凋亡，從而保護肝臟免受損害。落新婦甙誘導同種反應性T細胞凋亡，主要與其增強同種反應性T細胞Bax和Caspase-3的表達，降低Bcl-2表達誘導活化的T淋巴細胞凋亡而發揮抗排斥反應作用，隨著對其抗排斥機制的進一步研究，將對發揮其在器官移植方面的優勢有重大及深遠意義。
通過查詢資料，從黃杞葉中提取落新婦甙，一種方法是采用粉碎后的干葉，用60％乙醇回流提取3次，減壓回收乙醇，濃縮物分別用石油醚、乙酸乙脂、正丁醇萃取；石油醚部分上硅膠柱用石油醚-乙酸乙脂梯度洗脫得到化合物，乙酸乙脂部分經Sephadex-LH2O(甲醇-水梯度洗脫)，對所得流份用反相硅膠柱色譜分離(甲醇-水洗脫)，干燥后得到一種含落新婦甙的提取物。此種方法得到落新婦甙，收率低、且落新婦甙中的有效成分含量不高，含有較多的雜質，其工藝方法急待改進。
發明內容
本發明需要解決的技術問題就在于克服現有技術中從黃杞葉中提取落新婦甙收率低、且落新婦甙中的有效成分含量不高，含有較多雜質的缺陷，提供一種從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，本發明方法生產的落新婦甙含量高、避免了活性成分的損失、簡化了生產工藝、縮短了生產周期。
為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案本發明一種從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，它是一種以黃杞葉為原料，經提取溶媒提取、濃縮、分離純化、結晶、干燥提取落新婦甙的方法。
本發明方法中所述黃杞葉可以為鮮黃杞葉和/或干黃杞葉。
本發明方法可以在提取前先將黃杞葉進行破碎，黃杞葉經破碎后有利于各種成分的充分溶出。
本發明所述提取方法為加熱提取或超聲波提取或微波提取。
本發明方法為加熱提取時，提取次數是影響收率和含量的一個關鍵，一般提取次數為1～3次，根據試驗，綜合考慮提取設備使用空間的利用率及成品的有效物含量，提取次數最好為2次；溶媒用量為原料重量的3～15倍量，最佳為8倍；溫度為40～100℃，提取時間為溶媒沸騰后1～3小時。
本發明方法所述超聲波提取條件為工作頻率15～80kHz，時間5～120min；微波提取條件為工作頻率900～2500MHz，時間5～120min。
本發明所述黃杞葉醇提取后需要進行回收低碳醇處理，溫度控制在60℃以下，真空度控制在0.06Mpa以上，回收低碳醇的藥液與原料重量比應控制在1∶2～5之間。
本發明方法中所述提取溶媒為水或低碳醇。所述低碳醇為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇或戊醇，所述低碳醇的重量濃度為1％～95％。
本發明所述分離純化為柱層析分離純化。
本發明所述柱層析分離純化包括下列步驟1)提取液經濃縮(真空濃縮，溫度控制在60攝氏度以下，真空度0.08MPa以上，濃縮至原來提取液體積的1/4-1/2)、回收低碳醇、離心(臥式離心機4800r/min)后，直接進入大孔樹脂柱，流速控制在0.5～1.5BV/hr左右；2)用去離子水洗柱至流出液清澈，約3h；3)用低碳醇洗柱至洗脫液澄清、透明，流速略慢于吸附的速度；4)收集從大孔樹脂柱中的流出的澄清、透明，略帶醇味的洗脫液，用鹽酸--鎂粉作定性反應，收集洗脫液約是樹脂量的1～3倍左右；5)醇水洗脫液經濃縮(真空濃縮，溫度控制在60攝氏度以下，真空度0.06～0.1MPa，濃縮至原來提取液體積的1/4-1/2)；6)濃縮液放置24～72小時，析出大量的結晶，抽濾，用水洗至沉淀顏色為類白色，將沉淀物真空干燥，得落新婦甙。
其中所述低碳醇為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇或戊醇，低濃度醇水溶液的濃度最低為體積濃度30％，高濃度醇水溶液的濃度最高為體積濃度95％；其中所述大孔樹脂為以聚苯乙烯為骨架的材料，如DIAION品牌，型號為D101、D130、AB-8或HP-20。
本發明方法生產的落新婦甙含量高，其重量含量為60％以上(HPLC法測定High Performance Liquid Chromatography，高效液相色譜)，避免了活性成分的損失、提高了生產工藝、縮短了生產周期。
具體實施例方式
實施例11)前處理將鮮黃杞葉破碎；2)提取將原料與去離子水按1∶3比例混合裝入提取罐，加熱至沸騰后保持溫度2小時，收取第一次提取料液，第二次提取再加入3倍量的去離子水，加熱沸騰保溫2小時，收取第二次提取料液。
3)減壓濃縮將提取液導入濃縮器中進行減壓濃縮，溫度控制在60攝氏度以下，真空度控制在0.06MPa以上。
4)離心將濃縮后的提取液通過離心機離心。
5)濃縮、離心后的提取液直接進大孔樹脂柱；大孔樹脂柱為DIAION品牌，型號為D130。
6)用水洗柱至流出液清澈；7)用乙醇洗柱至流出液無味；8)收集從大孔樹脂柱中的流出液，用鹽酸--鎂粉作定性反應；9)洗脫液進行減壓濃縮，濃縮至原料的一倍量左右；10)濃縮液放置72小時，析出大量的結晶，抽濾，用水洗至沉淀顏色為類白色，將沉淀真空干燥，得落新婦甙。
實施例21)前處理將揀選、剔除雜質后的干黃杞葉破碎。
2)提取將合格的原料投入到潔凈的提取罐中，加入10倍量65％(v/v)乙醇，第一次回流提取2h，從溶媒沸騰計時，控制溫度80℃，保溫到時，壓出藥液，第二次再加入8倍量65％(v/v)的乙醇回流提取3h，合并濾液；3)回收乙醇將提取的藥液抽入濃縮罐中進行減壓濃縮、回收乙醇，溫度控制在60℃以下，真空度控制在0.06Mpa以上。回收至無醇味后，將藥液壓入儲液罐；4)加水，靜置，冷卻回收乙醇的藥液與原料比應控制在1∶4左右，不夠則加水，靜置，冷卻；5)離心將冷卻的藥液用離心機離心，藥液應是無任何沉淀物；6)柱吸附將離心后的藥液進大孔樹脂柱，樹脂柱為DIAION品牌，型號為D101。
7)水洗吸附完畢后，用去離子水進行水洗，水洗約3h左右。
8)洗脫用60％(v/v)乙醇進行洗脫，收集略帶醇味，且洗脫液澄清，透明，收集洗脫液約是樹脂量的3倍左右；9)濃縮洗脫液進行減壓濃縮，濃縮至原料的一倍量左右；10)濃縮液放置48小時，析出大量的結晶，抽濾，用水洗至沉淀顏色為類白色，將沉淀真空干燥，得落新婦甙。
實施例31)前處理將揀選、剔除雜質后的干黃杞葉和鮮黃杞葉破碎。
2)提取將合格的原料與重量濃度為70％的乙醇按1∶8比例混合，進行超聲波提取，提取條件為工作頻率60kHz，時間90min，提取2次；3)回收乙醇將提取的藥液抽入濃縮罐中進行減壓濃縮、回收乙醇，溫度控制在60℃以下，真空度控制在0.06Mpa以上。回收至無醇味后，將藥液壓入儲液罐；4)加水，靜置，冷卻回收乙醇的藥液與原料比應控制在1∶4左右，不夠則加水，靜置，冷卻；5)離心將冷卻的藥液用離心機離心，藥液應是無任何沉淀物；6)柱吸附將離心后的藥液進DIAION品牌，型號為AB-8的樹脂柱；7)水洗吸附完畢后，用去離子水進行水洗，水洗約3h左右。
8)洗脫用60％(v/v)乙醇進行洗脫，收集略帶醇味，且洗脫液澄清，透明，收集洗脫液約是樹脂量的3倍左右；9)濃縮洗脫液進行減壓濃縮，濃縮至原料的一倍量左右；10)濃縮液放置48小時，析出大量的結晶，抽濾，用水洗至沉淀顏色為類白色，將沉淀真空干燥，得落新婦甙。
實施例41)前處理將揀選、剔除雜質后的干黃杞葉和鮮黃杞葉破碎。
2)提取將合格的原料與重量濃度為70％的乙醇按1∶8比例混合，進行微波提取，微波提取條件為工作頻率900～2500MHz，時間5～120min，提取2次；
3)回收乙醇將提取的藥液抽入濃縮罐中進行減壓濃縮、回收乙醇，溫度控制在60℃以下，真空度控制在0.06Mpa以上。回收至無醇味后，將藥液壓入儲液罐；4)加水，靜置，冷卻回收乙醇的藥液與原料比應控制在1∶4左右，不夠則加水，靜置，冷卻；5)離心將冷卻的藥液用離心機離心，藥液應是無任何沉淀物；6)柱吸附將離心后的藥液進DIAION品牌，型號為HP-20的樹脂柱；7)水洗吸附完畢后，用去離子水進行水洗，水洗約3h左右。
8)洗脫用60％(v/v)乙醇進行洗脫，收集略帶醇味，且洗脫液澄清，透明，收集洗脫液約是樹脂量的3倍左右；9)濃縮洗脫液進行減壓濃縮，濃縮至原料的一倍量左右；10)濃縮液放置48小時，析出大量的結晶，抽濾，用水洗至沉淀顏色為類白色，將沉淀真空干燥，得落新婦甙。
權利要求
1.一種從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，其特征在于它是一種以黃杞葉為原料，經提取溶媒提取、濃縮、分離純化提取落新婦甙的方法，提取物中落新婦甙重量含量為60％以上。
2.如權利要求1所述從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，其特征在于所述黃杞葉為鮮黃杞葉和/或干黃杞葉。
3.如權利要求1所述從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，其特征在于所述提取方法為加熱提取或超聲波提取或微波提取。
4.如權利要求3所述從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，其特征在于加熱提取時提取溶媒為水或低碳醇，提取次數為1～3次，溶媒用量為原料重量的3～15倍量，溫度為40～100℃，提取時間為溶媒沸騰后1～3小時。
5.如權利要求3所述從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，其特征在于超聲波提取條件為工作頻率15～80kHz，時間5～120min。
6.如權利要求3所述從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，其特征在于微波提取條件為工作頻率900～2500MHz，時間5～120min。
7.如權利要求3-6之任一所述從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，其特征在于所述黃杞葉醇提取后進行回收低碳醇處理，溫度控制在60℃以下，真空度控制在0.06Mpa以上，回收低碳醇的藥液與原料重量比為1∶2～5。
8.如權利要求7所述從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，其特征在于所述低碳醇為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇或戊醇。
9.如權利要求1所述從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，其特征在于所述分離純化為柱層析分離純化。
10.如權利要求9所述從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，其特征在于柱層析分離純化包括下述步驟1)提取液經濃縮、回收低碳醇、離心后，直接進入大孔樹脂柱，流速控制在0.5～1.5BV/hr左右；所述濃縮為真空濃縮，溫度控制在60攝氏度以下，真空度0.08MPa以上，濃縮至原來提取液體積的1/4-1/2；所述離心采用臥式離心機，轉速為4800r/min；2)用去離子水洗柱至流出液清澈，時間為2.5-3.5h；3)用低碳醇洗柱至洗脫液澄清、透明，流速略慢于吸附的速度；4)收集從大孔樹脂柱中的流出的澄清、透明，略帶醇味的洗脫液，用鹽酸--鎂粉作定性反應，收集洗脫液約是樹脂量的1～3倍左右；5)醇水洗脫液濃縮，所述濃縮為真空濃縮，溫度控制在60℃以下，真空度為0.06～0.1MPa，濃縮至原來提取液體積的1/4-1/2；濃縮液放置24～72小時，析出大量的結晶，抽濾，用水洗至沉淀顏色為類白色，將沉淀物真空干燥。
11.如權利要求10所述的從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，其特征在于所述低碳醇為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇或戊醇，低濃度醇水溶液的濃度最低為體積濃度30％，高濃度醇水溶液的濃度最高為體積濃度95％。
12.如權利要求10所述的從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，其特征在于所述大孔樹脂為以聚苯乙烯為骨架的材料，型號為D101、D130、AB-8或HP-20。
全文摘要
本發明公開了一種從黃杞葉中提取落新婦甙的方法，它是一種以黃杞葉為原料，經提取溶媒提取、濃縮、分離純化、結晶、干燥提取落新婦甙的方法，它以水或低碳醇如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、戊醇等作為溶媒；提取的方法采用水或低碳醇加熱提取，也可以采用超聲波提取、或者微波提取；分離純化可以采用柱層析分離純化。提取物中落新婦甙重量含量為60％以上(HPLC法測定High Performance Liquid Chromatography，高效液相色譜)。本發明方法生產的落新婦甙含量高、避免了活性成分的損失、簡化了生產工藝、縮短了生產周期。
文檔編號C07J63/00GK1733795SQ20051009365
公開日2006年2月15日 申請日期2005年9月1日 優先權日2005年9月1日
發明者宋云飛, 季永賢, 孫步祥, 梁遠盛, 湯凌志, 李 杰 申請人:桂林萊茵生物科技股份有限公司