專利名稱：從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法
技術領域：
本發明涉及植物中活性成分的提取方法，具體涉及從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法。
背景技術：
橄欖葉為木犀科木犀欖屬油橄欖樹(Olea europaea L)的葉子。油橄欖樹主要分布在歐洲地中海沿岸國家和美國加州地區，50年代少量傳入我國，我國西部和西北地區甘肅、陜西、四川、重慶、福建、廣西、廣東、湖南等省市有引種栽培。現代生物技術分析表明，油橄欖葉中含有大量的生物活性物質(油橄欖葉中主要含有裂環烯醚萜及其苷、黃酮及其 苷、雙黃酮及其苷、低分子單寧等成分，以裂環烯醚萜類為主要活性成分)，其抗氧化活性成分較橄欖果更為突出，尤其是裂環烯醚萜類(以橄欖苦甙(Oleuropein)為主要成分)主要存在于油橄欖葉中。橄欖苦甙可以保護皮膚細胞不受紫外線的傷害，防止紫外線對皮膚膜脂質的分解，促進纖維細胞生成膠元蛋白，減少纖維細胞膠元酶的分泌，阻止細胞膜的抗聚糖反應，從而高度保護纖維細胞，自然抵御由氧化而導致肌膚的破壞，更免受UV紫外線傷害，有效維持肌膚柔嫩與彈性，達到扶膚、嫩膚的功效。已有的橄欖葉提取物的公開報道中，橄欖苦甙的含量均不高。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種工藝簡單、生產周期短且所得產品純度高的從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法。為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法，包括以下步驟I)以橄欖葉為原料，加入pH=8 10的堿液于常溫下浸提，過濾，收集提取液；2)提取液進分子篩型大孔吸附樹脂柱層析，先用水洗柱，然后用體積濃度為50 80%的乙醇洗柱，薄層層析跟蹤檢測，收集含目標成分的洗脫液，洗脫液濃縮，干燥，得到低含量的橄欖苦甙；3)將所得的低含量的橄欖苦甙用極性值為3. 80 4. 20的極性溶劑溶解，抽濾，濾液濃縮，得到濃縮液；4)向濃縮液中加入有機溶劑調節其極性，然后置于低溫條件下放置析晶，分離出晶體，干燥，得到高純度的橄欖苦甙。上述方法中步驟I)中，浸提的時間通常為3 5h ;所述的堿液可以是氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉或碳酸氫鈉的水溶液；所述堿液的加入量通常為原料重量的3 10倍。該步驟中,進行浸提前，最好是將橄欖葉進行粉碎以提高后續浸提工序中的提取率；粉碎的粒度通常為10 30目。
步驟2)中，所述的分子篩型大孔吸附樹脂的型號為LX-20B、LX-2000、SP-850或SP-825。該步驟中，先用水洗柱直至流出液無色，然后再用乙醇洗柱；在用水和乙醇洗柱時，流速一般控制在0. 5 2BV/h。步驟3)中，所述的極性值為3. 80 4. 20的極性溶劑具體可以是乙酸乙酯、醋酸丁酯或正丁醇等。該步驟中，濾液一般是濃縮至7 10波美。步驟4)中，所述的有機溶劑為苯、甲苯或二乙醚等，所述有機溶劑的加入量為濃縮液體積的I 3倍。步驟4)中，所述的低溫為0 5°C ;放置的時間通常為12 72h。上述方法中，所述干燥的溫度與現有技術相同，通常不超過50°C，一般采用真空減壓干燥。與現有技術相比，本發明所述方法的特點在于I、將橄欖葉在常溫條件下用堿液浸泡提取，提取過程中不需加熱，生產能耗低；2、整個方法操作簡單易控，生產周期短且洗脫劑用量少，進一步降低生產成本；3、由本發明所述方法得到的橄欖苦甙純度高，可達95%(HLPC法)以上。
具體實施例方式下面以具體實施例對本發明作進一步說明，但本發明并不局限于這些實施例。實施例II)將橄欖葉粉碎至10目，取60kg置于提取罐中，室溫下加入300kg、PH=9的碳酸鈉水溶液浸泡提取5h，過濾，去除不溶物，收集提取液；2)提取液進LX-20B分子篩型大孔吸附樹脂(樹脂重量150kg，進柱流速I. 2BV/h)，水洗樹脂柱至流出液無色(流速為I. 5BV/h)，再用體積濃度為60%的乙醇(用量為350kg)洗柱(流速為I. OBV/h)，用TLC色譜法跟蹤檢測，收集含有目標成分的洗脫液；洗脫液濃縮至浸膏，干燥，得到低含量的橄欖苦甙；3)將所得的低含量的橄欖苦甙用25kg乙酸乙酯溶解，抽濾，濾液濃縮至6kg (濃縮液的波美度為7)；4)向濃縮液中加入18kg甲苯調節濃縮液的極性，然后置于2°C條件下放置20h析晶，抽濾，所得晶體在40°C條件下真空減壓干燥，得橄欖苦甙2. 8kg。產品外觀為淡黃色微小晶體，HPLC法檢測含量為95. 30%。實施例2I)將橄欖葉粉碎至20目，取IOOkg置于提取罐中，常溫下加入1000kg、PH=IO的碳酸氫鈉水溶液浸泡提取4h，過濾，去除不溶物，收集提取液；2)提取液進SP-850分子篩型大孔吸附樹脂(樹脂重量為350kg，進柱流速為
I.OBV/h)，水洗樹脂柱至流出液無色(流速為I. 5BV/h)，再用體積濃度為70%的乙醇(用量為100kg)洗柱(流速為I. OBV/h)，用TLC色譜法跟蹤檢測，收集含有目標成分的洗脫液；洗脫液濃縮至浸膏，干燥，得到低含量的橄欖苦甙； 3)將所得的低含量的橄欖苦甙用28kg正丁醇加熱溶解，冷卻，抽濾，濾液濃縮至IOkg (濃縮液的波美度為7)；4)向濃縮液中加入16kg 二乙醚調節濃縮液的極性，然后置于3°C條件下放置24h析晶，抽濾，所得晶體在40°C條件下真空減壓干燥，得橄欖苦甙4. 2kg。產品外觀為淡黃色微小晶體，HPLC法檢測含量為95. 50%。實施例3I)將橄欖葉粉碎至10目，取50kg置于提取罐中，常溫下加入400kg、PH=8的氫氧化鈉水溶液浸泡提取3h，過濾，去除不溶物，收集提取液；2)提取液進SP-825分子篩型大孔吸附樹脂(樹脂重量為150kg，進柱流速為
1.5BV/h)，水洗樹脂柱至流出液無色(流速為I. 5BV/h)，再用體積濃度為50%的乙醇(用量為350kg)洗柱(流速為0. 5BV/h)，用TLC色譜法跟蹤檢測，收集含有目標成分的洗脫液；洗脫液濃縮至浸膏，干燥，得到低含量的橄欖苦甙；3)將所得的低含量的橄欖苦甙用20kg醋酸丁酯加熱溶解，冷卻，抽濾，濾液濃縮 至4kg (濃縮液的波美度為8)；4)向濃縮液中加入苯7. 6kg調節濃縮液的極性，然后置于5°C條件下放置30h析晶，抽濾，所得晶體在35°C條件下真空減壓干燥，得橄欖苦甙2. 5kg。產品外觀為淡黃色微小晶體，HPLC法檢測含量為96. 10%。實施例4I)將橄欖葉粉碎至30目，取200kg置于提取罐中，常溫下加入1800kg、PH=9. 5的碳酸氫鈉水溶液浸泡提取4. 5h，過濾，去除不溶物，收集提取液；2)提取液進LX-2000分子篩型大孔吸附樹脂(樹脂重量為400kg，進柱流速為
2.OBV/h)，水洗樹脂柱至流出液無色(流速為I. OBV/h)，再用體積濃度為80%的乙醇(用量為900kg)洗柱(流速為I. OBV/h)，用TLC色譜法跟蹤檢測，收集含有目標成分的洗脫液；洗脫液濃縮至浸膏，干燥，得到低含量的橄欖苦甙；3)將所得的低含量的橄欖苦甙用90kg正丁醇加熱溶解，冷卻，抽濾，濾液濃縮至15kg (濃縮液的波美度為7. 6)；4)向濃縮液中加入27kg 二乙醚調節濃縮液的極性，然后置于1°C條件下放置60h析晶，抽濾，所得晶體在30°C條件下真空減壓干燥，得橄欖苦甙8. 5kg。產品外觀為淡黃色微小晶體，HPLC法檢測含量為95. 10%。實施例5I)取IOkg橄欖葉置于提取罐中，常溫下加入25kg、PH=9的氫氧化鉀水溶液浸泡提取4. 5h，過濾，去除不溶物，收集提取液；2)提取液進LX-20B分子篩型大孔吸附樹脂(樹脂重量為40kg，進柱流速為I. 2BV/h)，水洗樹脂柱至流出液無色(流速為I. 5BV/h)，再用體積濃度為60%的乙醇(用量為100kg)洗柱(流速為I. OBV/h)，用TLC色譜法跟蹤檢測，收集含有目標成分的洗脫液；洗脫液濃縮至浸膏，干燥，得到低含量的橄欖苦甙；3)將所得的低含量的橄欖苦甙用5kg乙酸乙酯加熱溶解，冷卻，抽濾，濾液濃縮至Ikg (濃縮液的波美度為7.2)；4)向濃縮液中加入Ikg 二乙醚調節濃縮液的極性，然后置于5°C條件下放置32h析晶，抽濾，所得晶體在40°C條件下真空減壓干燥，得橄欖苦甙0.3kg。產品外觀為淡黃色微小晶體，HPLC法檢測含量為96. 45%。
權利要求
1.從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法，其特征在于包括以下步驟 1)以橄欖葉為原料，加入PH=S 10的堿液于常溫下浸提，過濾，收集提取液； 2)提取液進分子篩型大孔吸附樹脂柱層析，先用水洗柱，然后用體積濃度為50 80%的乙醇洗柱，薄層層析跟蹤檢測，收集含目標成分的洗脫液，洗脫液濃縮，干燥，得到低含量的橄欖苦甙； 3)將所得的低含量的橄欖苦甙用極性值為3.80 4. 20的極性溶劑溶解，抽濾，濾液濃縮，得到濃縮液； 4)向濃縮液中加入有機溶劑調節其極性，然后置于低溫條件下放置析晶，分離出晶體，干燥，得到高純度的橄欖苦甙。
2.根據權利要求I所述的從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法，其特征在于步驟I)中，浸提的時間為3 5h。
3.根據權利要求I所述的從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法，其特征在于步驟I)中，所述的堿液為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉或碳酸氫鈉的水溶液。
4.根據權利要求I所述的從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法，其特征在于步驟I)中，所述堿液的加入量為原料重量的3 10倍。
5.根據權利要求I所述的從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法，其特征在于步驟2)中，所述的分子篩型大孔吸附樹脂的型號為LX-20B、LX-2000、SP-850或SP-825。
6.根據權利要求I所述的從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法，其特征在于步驟3)中，所述的極性溶劑為乙酸乙酯、醋酸丁酯或正丁醇。
7.根據權利要求I所述的從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法，其特征在于步驟4)中，所述的有機溶劑為苯、甲苯或二乙醚，所述有機溶劑的加入量為濃縮液體積的I 3倍。
8.根據權利要求I所述的從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法，其特征在于步驟4)中，所述的低溫為0 5°C。
全文摘要
本發明公開了一種從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙的方法，屬于植物活性成分提取技術領域。本發明所述方法為用pH=8～10的堿液對橄欖葉進行常溫浸提，所得提取液進分子篩型大孔吸附樹脂柱層析，用體積濃度為50～80%的乙醇洗柱，收集含目標成分的洗脫液，濃縮，干燥，得到低含量的橄欖苦甙；將低含量的橄欖苦甙用極性值為3.80～4.20的極性溶劑溶解，抽濾，濾液濃縮，得到濃縮液；向濃縮液中加入有機溶劑調節其極性，然后置于低溫條件下放置析晶，分離出晶體，干燥，得到高純度的橄欖苦甙。與現有技術相比，本發明所述方法操作簡單易控，生產周期短，生產成本低；由本發明所述方法得到的橄欖苦甙純度高。
文檔編號C07H17/04GK102702287SQ201210208148
公開日2012年10月3日 申請日期2012年6月21日 優先權日2012年6月21日
發明者盧昶年, 盧照凱, 謝冬養, 鐘德品, 陸美珍 申請人:桂林三寶藥業有限公司