利用微觀動態離子流技術檢測水稻稻瘟病的方法及其應用的制作方法

專利名稱：利用微觀動態離子流技術檢測水稻稻瘟病的方法及其應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于農業技術領域，具體地說，涉及一種微觀動態離子流檢測技術在水稻稻瘟病的評價方面的應用。
背景技術：
稻瘟病是由真菌引起的水稻病害，是由異宗配合子囊菌的無性世代產生的分生孢子感染而引發的。稻瘟病的發生一般能使水稻減產10%-20%，甚至更高，以往的檢測稻瘟病的方法看發病率、分析病情指數、以及捕捉病原孢子等方法分析病情狀況(李瓊等， 應用TaqMan探針實時熒光定量PCR技術早期檢測稻瘟病，植物病理學報，2011,41 (2) 118-123)。王延鋒等Q011)從黑龍江省分離得到了 139個稻瘟病菌株(王延鋒等，黑龍江省稻瘟病菌生理小種的鑒定，黑龍江省農業科學，2011，3 :15-17)；吳雙清等O010)認為稻瘟病是威脅水稻生產的主要因素之一，選育抗稻瘟病的水稻品種是育種機構和個人的重要課題，而科學有效的檢測評價稻瘟病的發生能夠為稻瘟病提供檢測工具。(吳雙清，王林，建立稻瘟病自然誘發鑒定體系的關鍵技術，中國稻米，2010，16 (2) =47-48,66)。微觀動態離子流檢測技術是通過微電極和微傳感器獲取離子和分子的信號，基于Nernst方程和Fick' s第一擴散定律計算離子和分子的濃度和流速的技術，可獲得 pmol · cm-2 · s-1數量級的離子流信號，該技術能夠以對被測材料無損檢測的方式在細胞、 器官、組織外周測量進出的離子或分子的運動速率、方向及濃度等。這種技術主要應用在植物學、動物學、微生物學、醫學、環境科學、材料科學等領域。2011年澳大利亞的Smbala等人報道了用馬鈴薯病毒X(Potatc) virus X，PVX)侵染煙草，并暴露在氧化脅迫中，用非損傷性離子流檢測技術(non-invasive ion flux measuring technique，MIFE)測定了 Ca2+和 K+流速，結合藥理學和細胞學方法研究了植物整體的適應性反應，發現馬鈴薯病毒X對植物的抗逆性具有重要的作用(Plant, Cell and Environment，2011，34 :406-417)，非損傷性離子流檢測技術與本實驗所使用的微觀動態離子流檢測技術同屬一個技術。以往人們主要以防治水稻稻瘟病為主，如王維超Q011)詳細概括了稻瘟病的癥狀，提出了防治方法(王維超，稻瘟病的發生規律與防治技術，現代農業科技，2011，5: 165-166)；另外，利用分子生物學手段檢測稻瘟病也有報導利用熒光定量PCR技術檢測和評價稻瘟病的發病情況(李瓊等，應用TaqMan探針實時熒光定量PCR技術早期檢測稻瘟病，植物病理學報，2011,41 ) :118-123)；利用圖像處理技術判斷稻瘟病的發生也有報導馬德貴等O008)通過圖像處理技術檢測稻瘟病的發生(馬德貴等，水稻稻瘟病及水稻紋枯病病害程度圖像檢測，農業工程科學，2008，M(9) :485-489)；通過孢子識別檢測稻瘟病黃費元等(199 通過檢測葉片病斑孢子量的方法檢測稻瘟病(黃費元等，稻瘟病田間葉片病斑孢子量檢測方法研究初報，植物保護，1992，18(1) :36-37)。上述方法，對水稻稻瘟病的的評價一般為捕捉孢子、圖像的識別，以及分子生物學方法檢測，未能從植物與病害的互作機理上給以具體的解釋，不適合田間病害評價。上述方法存在成本高、鑒別周期長、對被測材料損壞等特點。2011年澳大利亞的Smbala等人報道了用馬鈴薯病毒X(Potatc) virus X，PVX)侵染煙草，用非損傷性離子流檢測技術(non-invasive ion flux measuring technique，Mira)測定了 Ca2+和 K+流速， 結合藥理學和細胞學方法研究了植物整體的適應性反應，發現馬鈴薯病毒X對植物的抗逆性具有一定的離子吸收規律(Plant,Cell and Environment,2011,34 :406-417)，因此利用離子流檢測來判別水稻稻瘟病的發生成為可能。利用微觀動態離子流檢測技術可測得水稻稻瘟病發病時的離子流信息，通過與正常生長的水稻比較，獲得稻瘟病發病時的離子流吸收或釋放規律，利用此規律評價水稻稻瘟病的發生。以往檢測離子流的方法為原子吸收分光光度法，如高葉等O008)研究NaCl 對甘薯試管苗影響時通過原子吸收分光光度法檢測離子含量判斷收脅迫的程度(高葉， 趙術珍，陳敏，宋曉征，王寶山NaCl脅迫對甘薯試管苗生長及離子含量影響安徽農業科學 [J]，2008，36 (35) :15333-15335)；郭小俊等(2008)研究ABA對NaCl脅迫下的黃瓜幼苗影響時，也利用原子吸收分光光度法檢測離子含量研究黃瓜幼苗耐鹽機理(郭小俊，謝成俊 外源ABA對NaCl脅迫下黃瓜幼苗不同離子含量的影響中國蔬菜[J]，2008 (9) 27-30)。然而，該方法不能實現活體生物材料的無損、動態檢測，破壞了植物的生活狀態。因此，開發新的檢測水稻稻瘟病的方法具有非常重要的意義。

發明內容
本發明旨在為水稻育苗和水稻育種提供一種快速、無損的檢測水稻稻瘟病的新方法。具體地，本發明提供一種利用微觀動態離子流技術檢測水稻稻瘟病的方法，采用 BI0-001B系統檢測。所述方法包括以下步驟1)向微電極灌入離子灌充液至充滿所述電極尖端，再將電極前端吸入相應測試離子交換劑；2)將經過步驟1)處理后的電極套入已氯化的Ag/AgCl電極線基座，并放入校正液中校正；3)取待測水稻苗，將其根部先放在測試緩沖液中平衡，再用校正后的電極對待測水稻苗進行檢測；4)對檢測結果進行處理和分析。進一步地，所述方法包括以下步驟1)向微電極灌入離子灌充液至充滿所述電極尖端1-1. 8cm，再將電極前端吸入相應測試離子交換劑；2)將經過步驟1)處理后的電極套入已氯化的Ag/AgCl電極線基座，并放入校正液中校正；3)取待測水稻苗，將其根部先放在測試緩沖液中平衡30-50min，再用校正后的電極對待測水稻苗進行檢測10 20min ；4)對檢測結果進行處理和分析。更進一步地，所述方法包括以下步驟1)向微電極灌入離子灌充液至充滿所述電極尖端1. 2cm，再將電極前端吸入相應測試離子交換劑；
2)將經過步驟1)處理后的電極套入已氯化的Ag/AgCl電極線基座，并放入校正液中校正；3)取待測水稻苗，將其根部先放在測試緩沖液中平衡40min，再用校正后的電極對待測水稻苗進行檢測12min ；4)對檢測結果進行處理和分析。在所述方法中檢測使用的水稻處于幼苗期。所述微觀動態離子流檢測技術中測試緩沖液中的測試離子濃度范圍為0. 05 0. 15mM，所述測試離子為K+和Ca2+中的一種或兩種，所述K+離子流的流速為0 68. 4pmol. cnT2· Ca2+ 離子流的流速為 0 4pmol. cnT2· s-1。檢測使用的水稻苗處于2葉1心期，測量位置為距所述水稻苗根尖100 500 μ m 的根尖分生區的外表面10 50 μ m處。所述步驟1)中的電極的前端吸入液體離子交換劑的長度為K+:100 160μπι ；Ca2+ 15 25 μ m。所述步驟1)中的灌充液為K+:80 140mM KCl ；Ca2+ 80 140mM CaCl2 ；所述步驟2)中的校正液為K+ 0. 05 0. 15mM KCl 和 0. 5 1. 5mM KCl ；Ca2+ 0. 05 0. 15mM CaCl2 和 0. 5 1. 5mM CaCl2 ；校正后電極的能斯特方程計算理想值為K+ 56 60mV ；Ca2+ 25 29mV。所述步驟3)中的測試緩沖液為K+或 Ca2+ 0. 05 0. 15mM KCl、0· 05 0. 15mM CaCl2,0. 05 0. 15mMMgCl2、0. 3 0. 6mM NaCl、0· 1 0. 3mM Na2SO4^O. 2 0. 5mM MES 脂肪酸甲酯磺酸鹽(MES)。本發明還提供一種所述利用微觀動態離子流技術檢測水稻稻瘟病的方法在檢測水稻稻瘟病方面的應用。水稻在發生稻瘟病的時候K+和Ca2+離子由正常的內流轉為外流，導致無機營養流失，造成生理機能的改變。由此，可以判斷，當水稻幼苗K+平均流速為0-68. 40pmol -^2 -s"1 時即可能發生稻瘟病；Ca2+平均流速為0-4. 00 pmol · cm_2 · s—1可能發生稻瘟病；K+和Ca2+ 離子的流速都處于外流狀態下也可判斷水稻幼苗稻瘟病的發生。本發明提供的利用微觀動態離子流技術檢測水稻稻瘟病的方法主要針對于水稻的稻瘟病的檢測方法，本發明利用微觀動態離子流檢測技術可測得稻瘟病發病時的離子流信息，通過與正常生長的水稻比較，獲得稻瘟病發病時的離子流吸收或釋放規律，利用此規律評價稻瘟病的發生，從而實現對水稻稻瘟病的快速、無損檢測，檢測后的植株材料還能夠正常生長，避免了珍貴水稻苗的損失，檢測結果對比明顯，方法可靠，為水稻育苗和水稻育種提供了一種快速、無損的檢測水稻稻瘟病的新方法。


圖1為本發明基于微觀動態離子流檢測技術檢測水稻稻瘟病的實驗過程圖。圖2為本發明實施例1中的水稻稻瘟病與正常水稻苗的K+離子流分析圖(實時流速)；圖3為本發明實施例1中的水稻稻瘟病與正常水稻苗的K+離子流分析圖(平均流速)；圖4為本發明實施例1中的水稻稻瘟病與正常水稻苗的Ca2+離子流分析圖(實時流速)；圖5為本發明實施例1中的水稻稻瘟病與正常水稻苗的Ca2+離子流分析圖(平均流速)；圖6為感染稻瘟病葉片與正常水稻苗葉片。其中，圖2、4中縱坐標為離子流速，單位為pmol. cm_2. 橫坐標為時間，單位為秒 (s)；圖3、5中縱坐標為離子平均流速，單位為pmol. cm—2. Γ1。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段，所用原料均為市售商品。其中，水稻品種水稻品種空育131購自黑龍江省農科院佳木斯水稻研究所。實施例11.實驗材料及培養條件水稻品種空育131(由黑龍江省農科院佳木斯水稻研究所提供)，將水稻品種空育131的種子經過10%次氯酸鈉消毒30min，蒸餾水沖洗后， 250C 士 1°C發芽，發芽后Hogland營養液培養至2葉1心時開展稻瘟病侵染，幼苗與稻瘟病菌共培養1周后，開始離子流檢測。培養地點在國家農業信息化工程技術研究中心溫室。2.實驗儀器及耗材離子流檢測用非損傷微測系統(BIO-OOlBJoungerUSA Sci. &Tech. Corp.，USA)， 系統軟件imFlux，微電極采用尖端直徑為3μπι的玻璃微電極。3.實驗試劑及溶液(1)液態離子交換劑包括K+ :Potassium ionophore I-cocktail A ；Sigma-Aldrich, Louis, M063103, USA ；Ca2+ Calcium ionophore I-cocktail A ;Sigma_Aldrich, Louis, M063103, USA。(2)測試緩沖液離子流測試時，測試不同的離子需要不同的測試液，如下K+離子0. ImM KC1、0. ImM CaCl2、0. ImM MgCl2、0. 5mM NaCl、0. 2mM Na2SO4^O. 3mM MESCa2+ 離子0. ImM KCl、0· ImM CaCl2,0. ImM MgCl2、0. 5mMNaCl、0. 2mM Na2SO4^O. 3mM MES(3)電極灌充液K+: IOOmM KClCa2+: IOOmM CaCl2(4)校正液
K+ 離子0. ImM 和 ImM KClCa2+ 離子0. ImM 和 ImM CaCl24.實驗內容及方法實驗過程如說明書附圖1所示。從電極末端灌入1. 2cm的相應測試離子的灌充液至電極尖端充滿，前端吸入適當長度(K+150 μ mXa2+20 μ m)的離子交換劑(LIX)。將電極套入已氯化的Ag/AgCl電極線基座。參比電極為固體低滲漏性電極(WPI)。電極在相應的校正液中校正，其校正后的能斯特理想值分別是K+ :58mV, Ca2+ J8mV。測試前將材料在相應的測試液中平衡40min。然后在距離水稻根尖分生區(距離根尖400 μ m)表面30 μ m的地方振動檢測，每個樣品檢測15min。5.數據處理離子流處理基于Fick' s擴散定律，并通過在線軟件MageFlux_3DIon Flux Plotting System(http://www. xuyue. net/mageflux/)計算得出。由 4 次獨立實驗所得到的數據做統計分析，利用EXcel2003分析作圖。6實驗結果由圖2和圖3可以看出，正常水稻幼苗K+處于內流狀態，平均流速為-18. 24pmol · cm—2 · s-1 ；發生稻瘟病的水稻苗K+外流，平均流速為73. 33pmol · cm—2 · s-1。由圖4和圖5可以看出，正常的水稻幼苗的Ca2+處于內流狀態，平均流速為-4. 14pmol · cm—2 · s—1，發生稻瘟病的水稻幼苗Ca2+處于外流狀態，平均流速為 5. 19pmol · cnT2 · s-1。由上述結果可知，正常水稻幼苗K+處于內流狀態，平均流速為-18. 24pmol · cm—2 · s-1 ；發生稻瘟病的水稻苗K+外流，平均流速為73. 33pmol · cm—2 · s-1。 K+在植物體內參與多種代謝途徑，參與離子運輸調控，因此正常水稻幼苗吸收K+，感染稻瘟病水稻幼苗K+明顯外排，因此，K+離子的吸收和外排可作為評價水稻發生稻瘟病的依據。正常的水稻幼苗的Ca2+處于內流狀態，平均流速為-4. 14pmol · cm_2 · s—1，發生稻瘟病的水稻幼苗Ca2+處于外流狀態，平均流速為5. 19pmol · cm_2 · s—1。鈣是植物必須的營養元素，同時也是植物體內信號轉導途徑的第二信使。因此，Ca2+的吸收和外排可以作為評價水稻稻瘟的的依據。圖6可以看出，感染稻瘟病的水稻苗葉片具有稻瘟病病斑，葉片發黃，葉尖卷曲干枯，最終導致葉片光合作用受到抑制；而正常水稻苗葉片呈現健康綠色，無病斑等稻瘟病病害現象。實施例21.實驗材料及培養條件同實施例1。2.實驗儀器及耗材微觀動態離子流檢測用非損傷微測系統(BI0-001B，hunger USA Sci. &Tech. Corp.，USA)，系統軟件imFlux，玻璃微電極尖端直徑為2 μ m。3.實驗試劑及溶液(1)液態離子交換劑包括K+ :Potassium ionophore I-cocktail A ；Sigma-Aldrich, Louis, M063103, USA ；
Ca2+ Calcium ionophore I-cocktail A ;Sigma_Aldrich, Louis, M063103, USA。(2)測試緩沖液離子流測試時，測試不同的離子需要不同的測試液，如下K+離子0.05mM KCl、0.05mM CaCl2,0. 05mM MgCl2、0. 05mMNaCl、0. ImM Na2SO4, 0.2mM MESCa2+ 離子0. 05mM KCl、0. 05mM CaCl2,0. 05mM MgCl2、0. 05mMNaCl、0. ImM Na2SO4, 0.2mM MES(3)電極灌充液K+: IOOmM KClCa2+: IOOmM CaCl2(4)校正液K+ 離子:0. 05mM 和 0. 5mM KClCa2+ 離子:0. 05mM 和 0. 5mM CaCl24.實驗內容及方法實驗過程如說明書附圖1所示。從電極末端灌入Icm的相應測試離子的灌充液至電極尖端充滿，前端吸入適當長度(K+100 μ mXa2+ 15 μ m)的離子交換劑(LIX)。將電極套入已氯化的Ag/AgCl電極線基座。參比電極為固體低滲漏性電極(WPI)。電極在相應的校正液中校正，其校正后的能斯特理想值分別是K+ :56mV, Ca2+ :25mV。測試前將材料在相應的測試液中平衡30min，然后在距離水稻根尖分生區(距離根尖400 μ m)表面30 μ m的地方振動檢測，每個樣品檢測15min。5.數據處理離子流處理基于Fick' s擴散定律，并通過在線軟件MageFlux_3DIon Flux Plotting System(http://www. xuyue. net/mageflux/)計算得出。由 4 次獨立實驗所得到的數據做統計分析，利用EXcel2003分析數據。6實驗結果正常水稻幼苗K+處于內流狀態，平均流速為-17. OOpmol · cm_2 · s—1 ；發生稻瘟病的水稻苗K+外流，平均流速為70. 20pmol · cm—2 · s-1。正常的水稻幼苗的Ca2+處于內流狀態，平均流速為-4. OOpmol · cm_2 · s—1，發生稻瘟病的水稻幼苗Ca2+處于外流狀態，平均流速為4. 50pmol · cm—2 · s—1。實施例31.實驗材料及培養條件同實施例1。2.實驗儀器及耗材微觀動態離子流檢測用非損傷微測系統(BI0-001B，hunger USA Sci. &Tech. Corp.，USA)，系統軟件imFlux，玻璃微電極尖端直徑為4 μ m。3.實驗試劑及溶液(1)液態離子交換劑包括K+ :Potassium ionophore I-cocktail A ；Sigma-Aldrich, Louis, M063103, USA ；Ca2+ Calcium ionophore I-cocktail A ;Sigma_Aldrich, Louis, M063103, USA。
(2)測試緩沖液離子流測試時，測試不同的離子需要不同的測試液，如下K+ 離子0. 15mM KCl、0· 15mM CaCl2,0. 15mM MgCl2、0. 15mMNaCl、0. 3mM Na2SO4, 0.5mM MESCa2+離子0. 15mM KCl、0. 15mM CaCl2,0. 15mM MgCl2、0. 15mMNaCl、0. 3mM Na2SO4, 0.5mM MES(3)電極灌充液K+: IOOmM KClCa2+: IOOmM CaCl2(4)校正液K+ 離子:0. 15mM 和 1. 5mM KClCa2+ 離子0. 15mM 和 1. 5mM CaCl24.實驗內容及方法實驗過程如說明書附圖1所示。從電極末端灌入Icm的相應測試離子的灌充液至電極尖端充滿，前端吸入適當長度(K+160 μ mXa2+25 μ m)的離子交換劑(LIX)。將電極套入已氯化的Ag/AgCl電極線基座。參比電極為固體低滲漏性電極(WPI)。電極在相應的校正液中校正，其校正后的能斯特理想值分別是:K+ :60mV, Ca2+』9mV。測試前將材料在相應的測試液中平衡50min，然后在距離水稻根尖分生區(距離根尖400 μ m)表面30 μ m的地方振動檢測，每個樣品檢測15min。5.數據處理離子流處理基于Fick' s擴散定律，并通過在線軟件MageFluX-3DI0n Flux Plotting System(http://www. xuyue. net/mageflux/)計算得出。由 4 次獨立實驗所得到的數據做統計分析，利用EXcel2003分析數據。6實驗結果正常水稻幼苗K+處于內流狀態，平均流速為-15. 45pmol · cm_2 · s—1 ；發生稻瘟病的水稻苗K+外流，平均流速為68. 40pmol · cm—2 · s-1。正常的水稻幼苗的Ca2+處于內流狀態，平均流速為-3. 98pmol · cm_2 · s—1，發生稻瘟病的水稻幼苗Ca2+處于外流狀態，平均流速為4. OOpmol · cm—2 · s—1。上述結果表明，水稻在發生稻瘟病的時候K+和Ca2+離子由正常的內流轉為外流，導致無機營養流失，造成生理機能的改變。由此，可以判斷，當水稻幼苗K+平均流速為 0-68. 40pmol · cm_2 · s—1時即可能發生稻瘟病；Ca2+平均流速為0-4. 00 pmol · cm_2 · s—1可能發生稻瘟病；K+和Ca2+離子的流速都處于外流狀態下也可判斷水稻幼苗稻瘟病的發生。 實施例結果證明，兩種無機離子的離子流向和流速可以判斷水稻是否感染了稻瘟病以及感染程度。雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發明要求保護的范圍。
權利要求
1.一種利用微觀動態離子流技術檢測水稻稻瘟病的方法，采用BI0-001B系統檢測，其特征在于，其包括以下步驟1)向微電極灌入離子灌充液至充滿所述電極尖端，再將電極前端吸入相應測試離子交換劑；2)將經過步驟1)處理后的電極套入已氯化的Ag/AgCl電極線基座，并放入校正液中校正；3)取待測水稻苗，將其根部先放在測試緩沖液中平衡，再用校正后的電極對待測水稻苗進行檢測；4)對檢測結果進行處理和分析。
2.根據權利要求1所述的利用微觀動態離子流技術檢測水稻稻瘟病的方法，其特征在于，所述步驟1)為向微電極灌入離子灌充液至充滿所述電極尖端1-1. 8cm，再將電極前端吸入相應測試離子交換劑；所述步驟幻為取待測水稻苗，將其根部先放在測試緩沖液中平衡30-50min，再用校正后的電極對待測水稻苗進行檢測10 20min。
3.根據權利要求2所述的利用微觀動態離子流技術檢測水稻稻瘟病的方法，其特征在于，所述步驟1)為向微電極灌入離子灌充液至充滿所述電極尖端1. 2cm，再將電極前端吸入相應測試離子交換劑；所述步驟幻為取待測水稻苗，將其根部先放在測試緩沖液中平衡 40min,再用校正后的電極對待測水稻苗進行檢測12min。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于，檢測使用的水稻處于幼苗期。
5.根據權利要求1-3中任一項所述的評價方法，其特征在于，所述微觀動態離子流檢測技術中測試緩沖液中的測試離子濃度范圍為0. 05 0. 15mM，所述測試離子為K+和Ca2+ 中的一種或兩種，所述K+離子流的流速為0 68. 4pmol. cm—2, s—1，Ca2+離子流的流速為0 4pmol. cm 2· s 1O
6.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，檢測使用的水稻苗處于2 葉1心期，測量位置為距所述水稻苗根尖100 500 μ m的根尖分生區的外表面10 50 μ m 處。
7.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于，步驟1)所述電極的前端吸入液體離子交換劑的長度為K+ 100 160μ ； Ca2+ 15 25 μ m。
8.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟1)中的灌充液為 K+ IOOmM KCl ；Ca2+ IOOmM CaCl2 ； 所述步驟2)中的校正液為 K+ 0. 05 0. 15mM KCl 和 0. 5 1. 5mM KCl ； Ca2+ 0. 05 0. 15mM CaCl2 和 0. 5 1. 5mM CaCl2 ； 校正后電極的能斯特方程計算理想值為 K+ 56 60mV ；Ca2+ 25 29mV。
9.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟；3)中的測試緩沖液為K+或Ca2+ 0. 05 0. 15mM KC1、0. 05 0. 15mM CaCl2,0. 05 0. 15mMMgCl2、0. 3 0. 6mM NaCl、0. 1 0. 3mM Na2SO4^O. 2 0. 5mM MES。
10.權利要求1-9中任一項所述的利用微觀動態離子流技術檢測水稻稻瘟病的方法在檢測水稻稻瘟病方面的應用。
全文摘要
本發明提供一種利用微觀動態離子流技術檢測水稻稻瘟病的方法及其應用，該方法包括以下步驟1)向微電極灌入離子灌充液至充滿所述電極尖端，再將電極前端吸入相應測試離子交換劑；2)將經過步驟1)處理后的電極套入已氯化的Ag/AgCl電極線基座，并放入校正液中校正；3)取待測水稻苗，將其根部先放在測試緩沖液中平衡，再用校正后的電極對待測水稻苗進行檢測；4)處理分析檢測結果。所述方法是主要針對于水稻的稻瘟病的檢測方法，實現了對水稻稻瘟病的快速、無損檢測，檢測后的植株材料還能夠正常生長，避免了珍貴水稻苗的損失，檢測結果對比明顯，方法可靠，為水稻育苗和水稻育種提供了一種快速、無損的檢測水稻稻瘟病的新方法。
文檔編號G01N27/416GK102565168SQ20111042728
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月19日 優先權日2011年12月19日
發明者侯佩臣, 侯瑞鋒, 朱大洲, 王成, 王曉冬, 高權 申請人:北京農業智能裝備技術研究中心