物。
[0116]采用高效液相色譜對本申請的中藥組合物進行檢測，以所述中藥組合物的質量百 分比計，銀杏總黃酮36 %，銀杏內酯11 %，銀杏酸Ippm，槲皮素-3-0-葡萄糖苷1.18 %的，槲 皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷2.96 %的，銀杏內酯Al. 8 %的，銀杏內酯Bl. 8 %的和 銀杏內酯Cl. 3 %的，還檢測有白果內酯和蘆丁等化學成分。
[0117] 實施例7
[0118] 槲皮素 -3-0-葡萄糖苷的制備
[0119]將銀杏葉提取物20g，溶于體積濃度45 %的乙醇一水溶液，制得銀杏葉提取物溶 液，濃度為400mg/mL，過0.45μπι微孔濾膜，進行一維液相色譜制備。一維液相色譜采用以硅 膠為基質的親水型色譜填料(50乂25〇111111，1(^111，華譜新創科技有限公司），流動相采用乙醇 為有機相，水為水相，有機相濃度為90 %等度，采用DAD紫外檢測器360nm選擇吸收波長，制 備溫度為40°C，進樣量為2500yL/針，流動相流速為70mL/min，收集15-20分鐘的組分和剩余 組分，將收集到的15~20分鐘的組分進行旋轉蒸發濃縮至干，為一維制備槲皮素-3-0-葡萄 糖苷粗品。用50%的甲醇一水溶液溶解槲皮素-3-0-葡萄糖苷粗品，濃度為70mg/mL，經微孔 濾膜過濾，進行二維液相色譜制備，色譜柱為以硅膠為基質鍵合C18反相填料(50 X 150mm， 1〇μπι，華譜新創科技有限公司），流動相選擇甲醇(含0.1%甲酸）為有機相，水(含0.1%甲 酸)為水相，采用等度洗脫方式，有機相濃度為20 %共60分鐘。采用DAD紫外檢測器360nm選 擇吸收波長，制備溫度為室溫，進樣量為2000此/針，流動相流速為80mL/min，收集保留時間 35-40min的組分，旋轉蒸發至干，得到槲皮素-3-0-葡萄糖苷化合物。
[0120] 同實施例1分別采用質譜、1H-NMR和13C-NMR(MeOD)對得到的終產物進行分析，最終 確認得到的為懈皮素 _3_0_匍萄糖苷。
[0121] 槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的制備
[0122] 將銀杏葉提取物20g，溶于體積濃度45 %的乙醇一水溶液，制得銀杏葉提取物溶 液，濃度為400mg/mL，過0.45μπι微孔濾膜，進行一維液相色譜制備。一維液相色譜采用以硅 膠為基質的親水型色譜填料(50乂25〇 111111，1(^111，華譜新創科技有限公司），流動相采用乙醇 為有機相，水為水相，有機相濃度為90 %等度，采用DAD紫外檢測器360nm選擇吸收波長，制 備溫度為40 °C，進樣量為2500yL/針，流動相流速為70mL/min，收集30-32分鐘的組分和殘余 組分，將收集到的30-32分鐘的組分進行旋轉蒸發濃縮至干，為一維制備槲皮素-3-0-2"， 6" -二鼠李糖基葡萄糖苷粗品。用50 %的甲醇一水溶液溶解槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基 葡萄糖苷粗品，濃度為70mg/mL，經微孔濾膜過濾，進行二維液相色譜制備，色譜柱為以硅膠 為基質鍵合C18反相填料(50 X 150mm，ΙΟμπι，華譜新創科技有限公司），流動相選擇乙腈(含 0.1 %甲酸)為有機相，水(含0.1%甲酸)為水相，采用等度洗脫方式，有機相濃度為25%共 60分鐘。采用DAD紫外檢測器360nm選擇吸收波長，制備溫度為室溫，進樣量為2000μ!7針，流 動相流速為80mL/min，收集保留時間40-45min的組分，旋轉蒸發至干，得到槲皮素-3-0-2"， 6" -二鼠李糖基葡萄糖苷化合物。
[0123] 同實施例1分別采用質譜、1H-NMR和13C-NMR(MeOD)對得到的終產物進行分析，最終 確認得到的為槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷。
[0124] S3由銀杏葉提取物形成的中藥組合物的制備方法
[0125] 將所述殘余組分和所述剩余組分旋轉蒸發去除容積后混合，并干燥得到輔助品， 將所述輔助品、所述槲皮素-3-0-葡萄糖苷和所述槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷 混合得到本實施例的由銀杏葉提取物形成的中藥組合物。
[0126] 采用高效液相色譜對本申請的中藥組合物進行檢測，以所述中藥組合物的質量百 分比計，銀杏總黃酮39%，銀杏內酯15%，銀杏酸Ippm，槲皮素-3-0-葡萄糖苷1.62%，槲皮 素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷3.43%，銀杏內酯A2.95%，銀杏內酯Bl. 6%和銀杏內 酯Cl. 3 %，還檢測有白果內酯和蘆丁等化學成分。
[0127] 實施例8
[0128] 槲皮素-3-0-葡萄糖苷的制備
[0129] 將銀杏葉提取物100g，溶于體積濃度70 %的乙醇一水溶液，制得銀杏葉提取物溶 液，濃度為150mg/mL，過0.45μπι微孔濾膜，進行一維液相色譜制備。一維液相色譜采用以硅 膠為基質的親水型色譜填料(50乂25〇 111111，1(^111，華譜新創科技有限公司），流動相采用乙醇 為有機相，水為水相，有機相濃度為95 %等度，采用DAD紫外檢測器360nm選擇吸收波長，制 備溫度為室溫，進樣量為800μ!7針，流動相流速為I lOmL/min，收集15-20分鐘的組分和剩余 組分，將收集到的15~20分鐘的組分進行旋轉蒸發濃縮至干，為一維制備槲皮素-3-0-葡萄 糖苷粗品。用60 %的乙醇一水溶液溶解槲皮素-3-0-葡萄糖苷粗品，濃度為200mg/mL，經微 孔濾膜過濾，進行二維液相色譜制備，色譜柱為以硅膠為基質鍵合C18反相填料（50 X 150mm，ΙΟμπι，華譜新創科技有限公司），流動相選擇乙醇（含0.1 %甲酸）為有機相，水（含 0.1%甲酸)為水相，采用等度洗脫方式，有機相濃度為15%共60分鐘。采用DAD紫外檢測器 360nm選擇吸收波長，制備溫度為室溫，進樣量為2500yL/針，流動相流速為lOOmL/min，收集 保留時間30-35min的組分，旋轉蒸發至干，得到槲皮素-3-0-葡萄糖苷化合物。
[0130] 同實施例1分別采用質譜、1H-NMR和13C-NMR(MeOD)對得到的終產物進行分析，最終 確認得到的為懈皮素 _3_0_匍萄糖苷。
[0131]槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的制備
[0132] 將銀杏葉提取物100g，溶于體積濃度70 %的乙醇一水溶液，制得銀杏葉提取物溶 液，濃度為150mg/mL，過0.45μπι微孔濾膜，進行一維液相色譜制備。一維液相色譜采用以硅 膠為基質的親水型色譜填料(50乂25〇 111111，1(^111，華譜新創科技有限公司），流動相采用乙醇 為有機相，水為水相，有機相濃度為95 %等度，采用DAD紫外檢測器360nm選擇吸收波長，制 備溫度為室溫，進樣量為800μ!7針，流動相流速為I lOmL/min，收集30-32分鐘的組分和殘余 組分，將收集到的30 - 32分鐘的組分進行旋轉蒸發濃縮至干，為一維制備槲皮素-3-0-2"， 6" -二鼠李糖基葡萄糖苷粗品。用60 %的乙醇一水溶液溶解槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基 葡萄糖苷粗品，濃度為200mg/mL，經微孔濾膜過濾，進行二維液相色譜制備，色譜柱為以硅 膠為基質鍵合C18反相填料（50 X 150mm，ΙΟμπι，華譜新創科技有限公司），流動相選擇乙腈 (含0.1%甲酸)為有機相，水(含0.1%甲酸)為水相，采用等度洗脫方式，有機相濃度為20% 共60分鐘。采用DAD紫外檢測器360nm選擇吸收波長，制備溫度為室溫，進樣量為2500μ!7針， 流動相流速為100mL/min，收集保留時間40-45min的組分，旋轉蒸發至干，得到槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷化合物。
[0133] 同實施例1分別采用質譜、1H-NMR和13C-NMR(MeOD)對得到的終產物進行分析，最終 確認得到的為槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷。
[0134] S3由銀杏葉提取物形成的中藥組合物的制備方法
[0135] 將所述殘余組分和所述剩余組分旋轉蒸發去除容積后混合，并干燥得到輔助品， 將所述輔助品、所述槲皮素-3-0-葡萄糖苷和所述槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷 混合得到本實施例的由銀杏葉提取物形成的中藥組合物。
[0136] 采用高效液相色譜對本申請的中藥組合物進行檢測，以所述中藥組合物的質量百 分比計，銀杏總黃酮37 %，銀杏內酯14%，銀杏酸Ippm，槲皮素-3-0-葡萄糖苷1.60 %的，槲 皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷3.45 %的，銀杏內酯A2.47 %的，銀杏內酯Bl. 4%的 和銀杏內酯Cl. 3 %的，還檢測有白果內酯和蘆丁等化學成分。
[0137] 實驗例
[0138] 對實驗性大鼠局灶性腦缺血保護作用的試驗
[0139] (一)動物:S .D，大鼠，雄性，200~300g。由中國人民解放軍總醫院醫學實驗動物中 心提供(醫動字第01-3077號）。
[0140] (二)藥物：
[0141] SI:實施例1制備得到的銀杏葉提取物3.85g溶于Iml質量分數是5%的葡萄糖水溶 液中配制形成銀杏葉注射液，
[0142] Dl:未經本申請方法處理的市售銀杏葉提取物3.85g溶于Iml質量分數是5%的葡 萄糖水溶液中配制形成銀杏葉注射液。
[0143] (三)方法：
[0144] 1、動物分組
[0145] 將大鼠隨機分為4組:假手術對照組、腦缺血模型組、Sl用藥組(20mg/kg，相當于人 用劑量的11倍）、D1用藥組(20mg/kg，相當于人用劑量的11倍）。每組20只。
[0146] 2、給藥
[0147] 各動物于手術前2分鐘及手術后12小時各靜脈注射藥物(假手術組及腦缺血模型 組動物注射同容量的溶媒），容量為〇. 2m V鼠。
[0148] 3、局灶性腦缺血模型(大腦中動脈阻斷法）
[0149] 將大鼠以水合氯醛(腹腔注射，0.35g/.kg)麻辟，左側臥位固定。參照Tamura等人 的方法，于眼外眥和外耳道連線中點作一弧形切口，長約1.5cm。逐層分離肌肉，除去顴弓， 于卵圓孔前外側鉆開一 3~4mm大小的小顏窗，暴露大腦中動脈近端，用細針挑起，電凝靠近 大腦下靜脈下緣處的大腦中動脈。然后逐層關閉切口，放于籠中喂養。
[0150] 4、腦梗死面積測定
[0151] 大鼠缺血模型手術24小時后，斷頭取腦，去除嗅球、小腦和低位腦干，其余部分冠 狀切成5片，置于5ml含60mgTTT及22.8mgK2HP04的染液中，避光，37°C溫孵30min。正常組織 呈紅色，梗死組織呈白色。將白色組織仔細挖下，稱重，以梗死組織重量占腦重量的％作為 梗死范圍。
[0152] 5、腦含水量測定
[0153] 大鼠缺血模型手術24小時后，斷頭開顱取整腦，在視交叉處橫切大腦，取視交叉前 左、右側大腦，用分析天平分別準確稱左、右側大腦濕重后，置于電熱恒溫箱烘烤24小時，稱 干重。計算左右側腦含水量％ [(濕重-干重)/濕重X 100]。
[0154] 6、行為障礙測定
[0155] 局灶性腦缺血模型手術后8小時對各組大鼠按改進的Bederson法進行行為評分：
[0156] 提鼠尾離開地面約1尺，觀察其前肢屈曲情況。雙前肢對稱伸向地面記0分;手術對 側前肢出現腕屈曲、肘屈曲、肩內旋或既有腕肘屈曲又有肩內旋，分別記1、2、3、4分。
[0157] 將動物置于平滑的地面上，分別推其雙肩向對側移動，檢測阻力。雙側阻力等同且 有力，記0分；向手術對側推動時阻力下降者，根據下降程度(輕、中、重不同）分別記1、2、3 分。
[0158]將動物雙前肢置一金屬網上，觀察兩前肢的肌張力。雙側肌張力等同且有力，記1 分;手術對側前肢肌張力下降者，根據下降程度分別記1-3分。
[0159]動物有不停地向一側轉圈者，記1分。
[0160] 上述評分滿分為11分，分數越高，表明行為障礙越嚴重。
[0161] (四）結果
[0162] 靜脈注射Sl對實驗性局灶性腦缺血大鼠行為障礙、腦梗死腦及腦含水量影響如表 1-1所示。
[0163] 表1-1
[0166] X土 S:與模型對照組比*P〈0 · 05;**p〈0 · 01;內數字為減少％ ;
[0167] 與左腦比較