硅膠4-120g Redis邱Rf或Sili巧cle柱，根據 柱尺寸Wl8-85mL/min的流速在254nm下通過Teledyne ISC0 Combiflash Rf系統純化。質 譜分析可W使用流動注射分析質譜分析法或由樣品組織器、PDA檢測器、柱管理器、樣品管 理器、二元溶劑管理器和SQ檢測器組成的Waters Acquity叫haperformance LC系統記 錄。
[0112]在微波條件下進行的反應在配備有用于小瓶操作的Robot Sixty的Biotage Initiator 2.0微波合成器中進行。溫度范圍為40-250°C。壓力范圍為0-20己并且功率范圍 為在2.45GHz下0-400瓦特。小瓶尺寸從0.5mL到20mL不等。溶劑吸收水平在默認狀態下是高 的。當適用時，具體反應時間和溫度在實驗部分給出。
[011引使用W下列舉的條件之一，使用Waters儀器進行制備HPLC-MS:
[0114] Sunfire Pr邱 C18柱，0抓，5μπι，30χ 75mm，:l2i)A，使用包含0.06%TFA的ACN/也0 梯度洗脫，60mL/min。
[0115] Sunfire Prep C18柱，0抓，5μπι，19χ 50mm，120 Λ，使用包含〇.〇6%TFA的ACN/此0 梯度洗脫，30mL/min。
[0116] Sunfire Prep C18柱，0抓，5μηι，19χ 50mm，在室溫或45°C下為 120A,使用MeOH或 ACN/lOmM甲酸錠的出0溶液梯度洗脫，pH 3.8，30血/min或45血/min。
[0117] X-Bridge Pr邱 C18柱，0抓，5皿，19x 50mm，在室溫下為 120 A，使用MeOH/lOmM碳 酸氨錠的出0溶液梯度洗脫，pH 10，30mL/min。
[011引使用W下列出的條件之一，使用Waters Prep-100儀器進行SFC-MS:
[0119] 2-乙基化晚柱，30xl50mm，使用 C〇2/MeOH 或 CCWiPrOH 洗脫，100 血/min。
[0120] 在標準條件下使用四根柱（Sunfire C18、CombiScreen 0DS-AQ、HSS C18或肥Η C18)中的一根進行分析HPLC和UPLC-MS，W下顯示具體條件：
[0121] 柱：Sunfire C18,3.5ym，4.6x 30mm
[0122] 洗脫劑A:出0+0.06 % 或0.1 % TFA
[0123] 洗脫劑B: ACN+0.06 % 或0.1 % TFA
[0124] 梯度：線性2%B洗脫0.6min，在4.9min內從2%到50%8，在1.8111111內從50%到 100%B，在100%B下等度洗脫0.6min
[0125] 柱：Combi Screen 0DS-AQ，S-5ym，12nm，4.6x 50mm
[0126] 洗脫劑 A:出0+0.1% TFA
[0127] 洗脫劑B: ACN+0.1% TFA
[012引梯度：線性5%B洗脫0.5min，在5.5min內從5%到50%B，在4.5min內從50%到 100%B，在100%B下等度洗脫l.Omin
[0129] 柱:HSSC18，1.8皿，2.1x30mm，在25°C或45°C下
[0130] 洗脫劑A: lOmM甲酸錠的出0溶液，pH 3.8
[0131] 洗脫劑 B:Me0H 或 ACN
[0132] 梯度:在2.3min內從5%到100%B，在100%B下等度洗脫0.7min [013；3]柱:HSS C18，1.8ym，2.1x 30mm
[0134] 洗脫劑 A:出0+0.06 % TFA
[0135] 洗脫劑B: ACN
[0136] 梯度:在2.2min內從5 %到100 % B，在100 % B下等度洗脫0.8min
[0137] 柱:B邸C18，1.7皿，2.1x30mm，在25°C或45°C下 [013引洗脫劑A :10mM碳酸氨錠的出0溶液，pH 10.0
[0139] 洗脫劑 B:Me0H 或 ACN
[0140] 梯度:在2.2min內從5 %到100 % B，在100 % B下等度洗脫0.8min
[0141] 在實施例中使用的縮寫包括：
[0142] ACN:乙臘;AcOH:乙酸;AmFor:甲酸錠水溶液;AmBicar:碳酸氨錠水溶液;肥Η:亞乙 基橋雜化;CDI:l，r-幾基二咪挫；DCM:二氯甲燒;DIPEA:二異丙基乙胺;DMA;N，N-二甲基- 乙酷胺;DMF: N，N-二甲基甲酯胺;DMS0:二甲基亞諷;DMEM:達爾伯克改良的伊格爾培養基； dppf:l，r-二苯基氧麟基二茂鐵;EC50:50%有效濃度;Et:乙基;EtOAc:乙酸乙醋;EtOH:乙 醇;Et2〇:乙酸山小時;HPLC:高效液相色譜;HSS:高強度硅膠；[M+町:質子化的分子離子； m-CPBA:間氯過氧苯甲酸;M0I:感染復數;MS:質譜分析法;0抓:最佳床密度;Me:甲基;MeOH: 甲醇;PCC:氯銘酸化晚;PSI:磅每平方英寸;RT:室溫（18至22°C ); RP-HPLC:反相高壓液相色 譜;TEA: Ξ乙胺;TFA:四氣乙酸;THF:四氨巧喃；sat:飽和;SFC:超臨界流體色譜法;tR:保留 時間；Ph:苯基;Ph3P:立苯基麟;DIAD:偶氮二甲酸二異丙醋;MS:質量；iPrOH:異丙醇;Et3N: Ξ乙胺;EtO化：乙醇鋼;min:分鐘;Μ:摩爾;W:瓦特;PPA:多聚憐酸；cone:濃縮的；WLC-MS: 超高效液相色譜質譜分析法 [0143]通用方案
[0145] 實施例1:(通用過程A):中間體1曰3的制備
[0146] 親核取代
[0147]
[0148] 向試劑lal(lal-l來自Syntech，lal-2在實施例22中合成）（例如1當量)在溶劑，如 異丙醇中的溶液添加在溶劑，如異丙醇中的胺la2(l當量），然后添加堿，如Ξ乙胺(2當量） 或DIPEA(2.2當量）。如果需要，添加一些另外的la2(高達0.2額外的當量）。在室溫下攬拌混 合物化至4天的不等的時間（例如，2化）。將產品
[0149] ?從反應混合物過濾出來
[0150] ?或溶于1-下醇并且然后使用MgS〇4干燥，過濾并蒸發。
[0151] ?或在減壓下濃縮溶劑。在溶劑蒸發的情況下，將獲得的殘留物直接用于下一步 或進行后處理。通常的后處理可WWW下方式進行:添加 NaH(X)3的水或飽和水溶液，然后使 用化OAc(兩次)或DCM萃取混合物。使用鹽水洗涂合并的有機層，然后使用MgS〇4干燥，過濾 并蒸發W得到化合物1曰3,其原樣用于下一步，或使用ACN和DCM或化OAc作為洗脫劑通過快 速色譜在硅膠上純化，或使用ClSSunFire柱和ACN和AmFOR的梯度通過質量指導的純化來純 化，或使用"2-乙基化晚"柱和C0沸MeOH的混合物作為洗脫劑通過SFC-MS純化。
[0152] ?使用試劑lal-1
[0153]
[0154]
[0155]
[0156] ?使用試劑lal-2
[0157]
[015引實施例2:(通用過程B):中間體2a3的制備
[0159] Mitsonobu 反應
[0160]
[0161] 將徑基哇挫嘟2al(l當量）（2al-l，Apollo)、醇2a2(l當量）和曲3PQ.5當量)放置 在THF中并冷卻至0°C。滴加 DIADQ.5至2.5當量)在1'邸中的溶液(0.05至0.1111〇1/1)并在01： 下繼續攬拌5min。將反應混合物升至室溫并攬拌1小時30分至過夜的不等的時間。添加娃 膠，在真空下蒸發溶劑并使用化OAc和己燒或ACN和DCM或MeOH和DCM作為洗脫劑通過快速色 譜在硅膠上純化獲得的殘留物，和/或使用"2-乙基化晚"柱和C〇2和iPrOH的混合物作為洗 脫劑通過SFC-MS純化獲得的殘留物和/或通過制備型HPLC純化獲得的殘留物。
[0167] 實施例3:(通用過程C):化合物3a2的制備：
[0168] 最終親核取代
[0169]
[0170] 向親核單體3al(l至1.5當量)在溶劑如DMA或DMF中的溶液(0.05mol/L至0.3mol/ L)添加堿如氨氧化鐘(在DMA的情況下）（4當量)或碳酸飽(在DMF的情況下）（2當量）的水溶 液和在DMA或DMF中的試劑1曰3或2a3(l當量）。在室溫下攬拌反應混合物4h至過夜的不等的 時間或更長或加熱(例如在80°C下）。將混合物 [0171 ] ?通過反相HPLC柱直接純化，接著凍干或不凍干
[0172] .或添加水，進行過濾并使用己燒洗涂產物。
[0173] 運得到了化合物3曰2。
[0174]
[0187] 實施例4:(通用過程D):中間體4a2的制備
[018 引
[0189] 向環脈 4al-l(409mg，2.35mmol)在DMA中的溶液(3mL)添加 K0H(0.18血，12.7N)。在 室溫下攬拌反應lOmin并向混合物添加固體氯化物lal-1 (Bioblocks，500mg，2.35mmol)。在 室溫下攬拌反應化。使用化OAc和水稀釋混合物。分離層并使用化OAc萃取水層兩次。合并有 機層，使用水、鹽水洗涂兩次，用MgS〇4干燥，過濾并濃縮。通過使用化OAc/己燒的快速色譜 純化得到化合物4a2-l。
[0190] 實施例5:(通用過程E):中間體5al的制備
[0191]
[0192] 向試劑4曰2-1(1 當量）在THF:iPrOH的混合物中（10:1,0.02-0.1 mmol)或在iPrOH (0.02-0.1mmol)中的懸浮液添加2a2巧當量），接著添加化3N巧當量）。在75°C下攬拌反應混 合物過夜，然后蒸發溶劑。通過在反相HPLC柱上的質量指導的純化來純化獲得的殘留物，并 凍干。
[0197] 步驟 1
[0198] 在密封的小瓶中，將氯甲酸異下醋（2mmol)添加到6a2(2mmol) (A1化ich)和N-甲基 嗎嘟(2mmol)在THF( lOmL)的冷溶液(-15°C )。在-15 °C下攬拌混合物30min。然后添加化合物 6al(2mmol) (A1化ich)并在微波中在120°C下福照密封的小瓶20min(100W)。冷卻至室溫后， 將2M EtO化在化0H(2mL)的溶液添加到混合物并在微波中在120°C下加熱lOmin(lOOW)。減 壓蒸發后，使用1M HCl(lOmL)水解得到的殘留物，直到形成沉淀。從化0H重結晶沉淀W得到 化合物6曰3。
[0199] 步驟 2
[0200] 將6曰3 (Immo 1)和TFA (2.5mL)在DCM (20mL)中的溶液回流化。溶劑在真空中濃縮，然 后添加化3N( 2mL)和甲酸乙醋（1 OmL)。得到的混合物回流過夜。在溶劑蒸發后使用水研磨殘 留物得到固體，從化0H重結晶所述固體W得到中間體6曰4。
[0201] 步驟 3
[0202] 在微波中在120°C下，福照中間體6a4(lmmol)和PPA(3g/mmol)在二甲苯(5mL)中的 混合物15min(20W)。倒出二甲苯并使用石油酸洗涂剩余的殘留物兩次，并溶于水。過濾水溶 液并滴加30 % NaOH使產物沉淀，通過過濾移出并從化0H重結晶W得到化合物3al -14。
[0203] 實施例7:中間體3al-28的制備
[0204]
[0205] 步驟 1
[0206] 將7曰1(260111旨，1.7111111〇1)(1曰付1義)在水合阱(2.21^)中的溶液在100°(：下加熱地。在 真空中蒸發后，將殘留物溶于水（~2.5mL)，然后使用濃HC1酸化至pH 2。過濾沉淀，使用 EtOH和酸洗涂得到中間體7a2。
[0207]步驟 2
[020引將中間體7曰2(160mg，Immo 1)懸浮在水（2血）中。將濃肥1 (0.2血)和酬臘7曰3 (86mg， 1 mmo 1) (J&W陸arma 1 ab)添加到該懸浮液。在室溫下攬拌混合物3Omiη，然后加熱至回流化。 過濾懸浮液中的固體，然后使用酸洗涂W得到一些7曰4。通過質量指導的純化在反相HPLC柱 上純化濾液，得到化合物7a4，與第一批合并。
[0209]步驟 3 惦1〇] 向中間體7a4(65mg，0.3mmol)在DMF(1.5mL)中的溶液添加4N HC1/二氧六環 (0.3mL，0.9mmol)。在130°C下加熱混合物過夜。冷卻并通過質量指導的純化在反相HPLC柱 上純化混合物W得到化合物3al-28。
[0211] 實施例8:中間體3al-13的制備
[0212]
[0別；3] 步驟1 惦14] 向Et0Na(5. lg，75.3mmol)在Et0H(60mL)中的溶液添加8曰1草酸二乙醋（lOg， 68.4mmol)，在60°C下攬拌混合物30min。將ACN(2.5mU添加到混合物并回流反應混合物化。 將反應混合物冷卻至室溫，通過過濾收集沉淀的產物并使用冷酸洗涂W得到中間體8a2，其 直接用于下一步。
[0別引步驟2
[0別6] 8日3(7邑，46111111〇1)和8日2(6.7邑，46111111〇1)在乙醇肥1(12〇1^;將肥1氣體鼓入化細中） 中的懸浮液回流過夜。將反應混合物冷卻至室溫并通過過濾收集沉淀的產物。固體從乙酸 乙醋和化0H中重結晶W得到化合物3曰1-13。
[0217]實施例9:中間體3al-7的制備 [021 引
[0219] 步驟 1
[0220] 向9al依托酸酢（10.0邑，61.3臟〇1)化日11。日316')在化地（100.0血）中的攬拌的溶液 添加化3N(8.48mL，61.3mmo)。W運樣的速率添加環丙胺(6.5ImL，61.3mmo 1)，使得反應溫度 不升高到30°CW上。在該添加后，將反應加熱到70°C達16h。將反應混合物冷卻至室溫，形成 沉淀。通過過濾收集固體并使用二乙酸洗涂。然后在二乙酸中攬拌固體比，過濾并使用二乙 酸洗涂，得到中間體9曰2。
[0221] 步驟 2
[0222] 在0°C下，向氨化侶裡(2.9g，76.7mmo 1)在THF(77mL)中的攬拌的溶液W運樣的速 率添加在THF(60血）中的中間體9曰2(5. Og，28.4mmo 1)，使得反應溫度不升高至10°C W上。在 該添加后，在60°C下加熱反應達16h。使用1N的化0H水溶液澤滅反應。通過娃藻±過濾混合 物，并使用化OAc和水洗涂濾液。分離水層并使用化OAc萃取。用硫酸鋼干燥合并的有機萃取 液，過濾并在真空中濃縮。通過快速色譜(50:50Et0Ac/石油酸)純化粗材料，W得到中間體 9a3〇
[0223] 步驟 3
[0224] 向中間體9曰3(2. Og，12.3mmol)在THF(22. OmL)中的攬拌的溶液添加幾基二咪挫 (3. Og，18.5mmo 1)，并在室溫下攬拌得到的混合物過夜。在真空中濃縮反應混合物。使用DCM 稀釋粗產物并使用水洗涂。使用1M HC1水溶液洗涂有機層，用硫酸鋼干燥，過濾并濃縮。通 過快速色譜純化粗材料，得到中間體3al-7。
[0225] 實施例10:中間體3al-3的制備
[0226]
[0227