ea2^)。在另一 個實施例中，破傷風神經毒素的衍生物包括位于SEQ ID NO. :3第168位的氨基酸的改變，所 述氨基酸由賴氨酸lysine化iss)改變為谷氨酸glutamate化I68)。在一個實施例中，破傷風神 經毒素衍生物[。3叫]包括SEQ ID N0.:4的序列。
[0029] 在另一個實施例中，破傷風神經毒素的衍生物包括W下改變:位于SEQ ID NO. :3 第230位的亮氨酸leucine(L23D)改變為異亮氨酸isoleucine(I23D)及位于沈Q ID NO. :3第 168位的賴氨酸lysine化iss)改變為谷氨酸glutamate化I68)。在一個實施例中，破傷風神經 毒素的衍生物比16化，。3叫]包括SEQ ID N0.:5的序列。
[0030] 肉毒桿菌神經毒素 B輕鏈的原型化C/BKSEQ ID N0.1): MPVTINNFNYNDPIDNNNIIMMEPPFARGTGRYYKAFIQTDRIWIWERYTFGYKP 邸 FNKSSGIFNRDVCEY YDPD化NTND邸NI化QTMIKLFNRIKSKPLG邸LLEMIINGIPYLGDRRVPLE邸NTNIASVTVNKLISNPGEVER KKGIFANLIIFGPGPVL 肥肥 TIDIGIQNHFASREGFGGIMQMKFCPEYV^VFNNV 犯 NKGASIFNRRGYFSDPAU LM 肥 LIHVL 服 LYGIKV 孤 LPIVP 肥 KKFFMQSTD^QAE 化 YTFGGQDPSIITPSTDKSIYDK 化 QNFRGIVDRLN KVLVCISDPNININIYKNKFKDKYKFV 邸沈 GKYSIDVES 抑 KLYKSLMFGFTETNIAENYKIKTRASYFSD 化 PPV KIK化LD肥IYTIEEGFNISD邸MEKEYRGQNKAINKQAYEEISKEHLAVYKIQMCKSV
[0031] 肉毒桿菌神經毒素 B輕鏈的衍生物化C/BKSEQ ID N0.2): MPVTINNFNYNDPIDNNNIIMMEPPFARGTGRYYKAFIQTDRIWIWERYTFGYKP 邸 FNKSSGIFNRDVCEY YDPD化NTND邸NI化QTMIKLFNRIKSKPLG邸LLEMIINGIPYLGDRRVPLE邸NTNIASVTVNKLISNPGEVER KKGIFANLIIFGPGPVL 肥肥 TIDIGIQNHFASREGFGGIMQMKFCPEYVgVFNNV 犯 NKGASIFNRRGYFSDPAU LM肥LIHVL服LYGIKV孤LPIVP肥KKFFMQSTDAIQAE化YTFGGQDPSIITPSTDKSIYDK化QNFRGIVDRLN KVLVCISDPNININIYKNKFKDKYKFV 邸沈 GKYSIDVES 抑 KLYKSLMFGFTETNIAENYKIKTRASYFSD 化 PPV ΚIK化LD肥IΥΤIEEGFNISD邸MEKEYRGQNKAINKQAYEEISKEHLAVYKIQMCKSV
[0032] 破傷風神經毒素輕鏈的原型化C/TKSEQ ID N0.3): MPITINNFRYSDPVNNDTIIMMEPPYCKGLDIYYKAFKITDRIWIVPERYEFGTKP邸FNPPS化lEGA沈ΥΥ DPNYLRTDSD邸RFLQTMVKLFNRIKNNVAGEALLDKIINAIPYLGNSY化LDKFDTNSNSVSFNLLE孤PSGATTK SAMLTNLIIFGPGPVL 雌肥 VRGIVLRVDNKNYFPC 畑 GFGSIMQMAFCPEYVPT 抑 NVIENITSLTIGKSKYF 孤 P ALyifflEUH 化服 LYGMQVSS 肥。PSK 犯 lYMQHTYPISAEELFTFGGQDAMJSIDIKNDLYEKTLNDYKAIAN KLSQVTSCNDPNIDIDSYKQIYQQKYQFDKDSNGQYIVNEDKFQILYNSIMYGFTEIELGKKFNIKT化SYFSMNHD PVKIP化 U)DTIYNDTEGFNIES邸LK沈YKGQNMRVNTNAFRNVDGSGLVSKLI
[0033] 破傷風神經毒素輕鏈的衍生物化C/TKSEQ ID N0.4): MPITINNFRYSDPVNNDTIIMMEPPYCKGLDIYYKAFKITDRIWIVPERYEFGTKP邸FNPPS化lEGA沈ΥΥ DPNYLRTDSD邸RFLQTMVKLFNRIKNNVAGEALLDKIINAIPYLGNSY化LDKFDTNSNSVSFNLLE孤PSGATTK SAMLTNLIIFGPGPVLNK肥VRGIVLRVDNKNYFPC畑GFGSIMQMAFCPEYVPT抑NVIENITSLTIGKSKYF孤P AL互 LM 肥 UH 化服 LYGMQVSS 肥。PSK 犯 lYMQHTYPISAEELFTFGGQDAMJSIDIKNDLYEKTLNDYKAIAN KLSQVTSCNDPNIDIDSYKQIYQQKYQFDKDSNGQYIVNEDKFQILYNSIMYGFTEIELGKKFNIKT化SYFSMNHD PVKIP化 U)DTIYNDTEGFNIES邸LK沈YKGQNMRVNTNAFRNVDGSGLVSKLI
[0034] 破傷風神經毒素輕鏈的衍生物化C/TKSEQ ID N0.5): MPITINNFRYSDPVNNDTIIMMEPPYCKGLDIYYKAFKITDRIWIVPERYEFGTKP邸FNPPS化lEGA沈ΥΥ DPNYLRTDSD邸RFLQTMVKLFNRIKNNVAGEALLDKIINAIPYLGNSY化LDKFDTNSNSVSFNLLE孤PSGATTK SAMLTNLIIFGPGPVLNg肥VRGIVLRVDNKNYFPC畑GFGSIMQMAFCPEYVPT抑NVIENITSLTIGKSKYF孤P AL互 LM 肥 UH 化服 LYGMQVSS 肥。PSK 犯 lYMQHTYPISAEELFTFGGQDAMJSIDIKNDLYEKTLNDYKAIAN KLSQVTSCNDPNIDIDSYKQIYQQKYQFDKDSNGQYIVNEDKFQILYNSIMYGFTEIELGKKFNIKT化SYFSMNHD PVKIP化 U)DTIYNDTEGFNIES邸LK沈YKGQNMRVNTNAFRNVDGSGLVSKLI
[0035] 在一個實施例中，本發明提供了包含肉毒桿菌神經毒素或破傷風神經毒素的衍生 物的藥物組合物。在一個實施例中，本發明所述的肉毒桿菌神經毒素或破傷風神經毒素及 其衍生物與一個或多個輔助多膚融合或偶合，所述輔助多膚來自肉毒桿菌神經毒素、破傷 風神經毒素或其他生物。在一個實施例中，與本發明所述的毒素融合或偶合的輔助多膚是 天然的或重組的多膚。在另一個實施例中，與本發明所述的毒素融合或偶合的輔助多膚是 人造多膚。
[0036] 在一個實施例中，本發明所述肉毒桿菌神經毒素或破傷風神經毒素的輕鏈化C)和 重鏈化C)及其衍生物的DNA被克隆到相同的表達載體中，從而表達包含輕鏈和重鏈的融合 蛋白。在一個實施例中，輕鏈和重鏈均源自于相同的毒素血清型。在另一個實施例中，輕鏈 和重鏈源自于不同的毒素血清型。
[0037] 在一個實施例中，本發明所述的肉毒桿菌神經毒素衍生物在藥物、臨床或美容過 程中使用。在一個實施例中，本發明所述的肉毒桿菌神經毒素衍生物用于治療或改善各種 療法或其它應用的疾病或狀況。在一個實施例中，本發明所述的肉毒桿菌神經毒素衍生物 用于新穎的治療，運些治療產生肉毒桿菌神經毒素免疫耐藥性的機會較低。
[0038] 在一個實施例中，本發明所述的肉毒桿菌神經毒素衍生物用于用于治療或改善斜 視、眼險疫李、半面疫李、頸部肌張力障礙、疫李、眉間面部線條、蔽窩多汗癥、下泌尿道毛 病、胃腸道毛病、疫李性發聲困難、顛下頌關節癥、流誕、慢性糖尿病性神經病、創傷愈合、陰 道疫李、肌肉骨骼疼痛、設及到不隨意骨骼肌活動障礙如不隨意肌疫李和收縮、或任何其他 適用的疾病或狀況。
[0039] 在一個實施例中，本發明提供使用本發明所述的肉毒桿菌神經毒素衍生物W改善 或治療疾病或狀況的方法，所述方法給受試者施用有效劑量的衍生物。在另一個實施例中， 本發明提供改善當前使用肉毒桿菌神經毒素的治療方法。
[0040] 在一個實施例中，本發明提供應用具有增強治療功效或藥性的肉毒桿菌神經毒素 的方法。在另一個實施例中，本發明提供減少各種設及肉毒桿菌神經毒素的治療和應用中 產生肉毒桿菌神經毒素免疫耐藥性的方法。
[0041] 在一個實施例中，本發明所述的破傷風神經毒素的衍生物可W用作分子標記或有 效工具W研究中央神經元的胞吐作用機制。
[0042] 本發明提供一種經改造的肉毒桿菌神經毒素輕鏈蛋白，該肉毒桿菌神經毒素的氨 基酸序列為SEQ ID NO.: 1，該輕鏈蛋白包含一個或多個如SEQ ID NO.: 1所示的氨基酸的變 異。
[0043] 在一個實施例中，本發明所述的經改造肉毒桿菌神經毒素輕鏈蛋白，其氨基酸變 異選自：Ser2〇i，Ala263和Ile264。
[0044] 在一個實施例中，本發明所述的經改造肉毒桿菌神經毒素輕鏈蛋白包含SEQ ID NO. :2的氨基酸序列。
[0045] 本發明提供一種包含本發明所述的經改造肉毒桿菌神經毒素輕鏈蛋白的組合物， 該輕鏈蛋白與一個或多個的第二種蛋白融合或偶合，該第二種蛋白為源自肉毒桿菌神經毒 素或其他生物的蛋白。
[0046] 在一個實施例中，本發明所述的第二種蛋白是天然蛋白或人工蛋白。
[0047] 本發明提供一種組合物，該組合物包含本發明所述的經改造肉毒桿菌神經毒素輕 鏈蛋白和一個藥學可接受的載體。
[0048] 本發明提供一種用于改善或治療受試者的疾病或狀況的方法，該方法包含給予受 試者有效份量的本發明所述的經改造肉毒桿菌神經毒素輕鏈蛋白。
[0049] 在一個實施例中，本發明所述的疾病或狀況選自：斜視，眼險疫李，半面疫李，頸部 肌張力障礙，疫李，眉間面部線條，蔽窩多汗癥，不隨意肌疫李，下泌尿道毛病，胃腸道毛病， 疫李性發聲困難，顛下頌關節癥，慢性糖尿病性神經病，創傷愈合，陰道疫李，肌肉骨骼疼痛 和不隨意肌收縮。
[0050] 在一個實施例中，本發明的改善或治療疾病或狀況的方法，該受試者產生較低的 免疫耐藥性。在另一個實施例中，該受試者相比接受原型肉毒桿菌神經毒素治療的受試者 產生較少的肉毒桿菌神經毒素的免疫耐藥性。
[0051] 本發明提供一種經改造的破傷風神經毒素輕鏈蛋白，該破傷風神經毒素的氨基酸 序列為SEQ ID NO. :3,該輕鏈蛋白包含一個或多個如SEQ ID NO. :3所示的氨基酸的變異。
[0052] 在一個實施例中，本發明所述所述的破傷風神經毒素輕鏈蛋白，其氨基酸變異選 自：Lysis 哺 Leu23〇。
[0053] 在一個實施例中，本發明所述的破傷風神經毒素輕鏈蛋白，包含SEQ ID NO. :4或5 的氨基酸序列。
[0054] 本發明提供一種包含本發明所述的經改造破傷風神經毒素輕鏈蛋白的組合物，該 輕鏈蛋白與一個或多個的第二種蛋白融合或偶合，該第二種蛋白為源自傷風神經毒素或其 他生物的蛋白。
[0055] 在一個實施例中，本發明所述的第二種蛋白是天然蛋白或人工蛋白。
[0056] 在一個實施例中，本發明提供一種包含本發明所述的經改造破傷風神經毒素輕鏈 蛋白的組合物，該組合物作為分子標記用于研究神經元的胞吐作用。
[0057] 本發明提供一種組合物，該組合物包含本發明所述的經改造破傷風神經毒素輕鏈 蛋白和一個藥學可接受的載體。
[0058] 本發明提供一種用于改善或治療受試者的疾病或狀況的方法，該方法包含給予受 試者有效份量的本發明所述的經改造破傷風神經毒素輕鏈蛋白。
[0059] 通過引用W下的實驗細節可W更好地理解本發明。然而，本領域的技術人員應理 解所提供的實施例僅作為說明作用，而非限制本發明的范圍。本發明的范圍將由隨后的權 利要求所界定。
[0060] 在本中請中的，過渡語"包含"與'包括'、'含有'或'W···為特征'是同義的，是包括 性或開放式的，當中并不排除有另外未列舉的元素或方法步驟。
【具體實施方式】 實施例1 肉毒桿菌神經毒素和破傷風神經毒素的改造 用于蛋白表達的質粒構建
[0061 ] 表達LC/T( 1-436)(破傷風神經毒素登陸號:X06214.1)丄C/B( 1-440)(肉毒桿菌神 經毒素登陸號:AB084152.1)和VAMP2(l-97)的質粒，及隨后的蛋白表達和純化根據文獻所 描述的來進行（30-32)。口